磁珠分離細胞技術優(yōu)秀課件

1、磁珠分選技術磁珠分選技術2磁珠分選技術磁珠分選技術免疫學免疫學+ +細胞生物學細胞生物學+ +磁力學磁力學基于抗體對抗原的特異性識別：免疫磁珠基于抗體對抗原的特異性識別：免疫磁珠磁性微珠直接或者間接偶聯(lián)在抗體上，從磁性微珠直接或者間接偶聯(lián)在抗體上，從而與細胞相連：抗體偶聯(lián)磁珠、二抗磁珠、而與細胞相連：抗體偶聯(lián)磁珠、二抗磁珠、生物素磁珠、生物素磁珠、Oligo dTOligo dT磁珠磁珠在高強度、梯度磁場中達到磁性分離的目在高強度、梯度磁場中達到磁性分離的目的：分離細胞、蛋白、核酸、細菌等的：分離細胞、蛋白、核酸、細菌等3v磁珠磁珠v磁力架磁力架v分離柱或分離試管分離柱或分離試管 MACS，D

2、ynal，BD，StemCell，R&D磁珠分選系統(tǒng)磁珠分選系統(tǒng)4管式分選管式分選 DynalbeadsDynalbeads分離試管分離試管磁力架磁力架56柱式分選柱式分選 7未標記的細胞未標記的細胞先行流出先行流出MACS微珠進微珠進行磁性標記行磁性標記撤去磁場，將標撤去磁場，將標記的細胞洗出記的細胞洗出磁性鐵珠在分選器作用下磁性鐵珠在分選器作用下形成強大的磁場，使含磁形成強大的磁場，使含磁珠的細胞懸浮在磁場中珠的細胞懸浮在磁場中8v MACS d50nm，多聚糖和氧化鐵組成的超順磁化微粒；可被細，多聚糖和氧化鐵組成的超順磁化微粒；可被細胞生物降解而無需解離磁珠；分離豐度極小的細胞胞

3、生物降解而無需解離磁珠；分離豐度極小的細胞(10-8);v Dynal d=4.5um2.8um1um，多聚材料包被的氧化鐵超順磁，多聚材料包被的氧化鐵超順磁微球；均一性好；也適用于細胞活化；微球；均一性好；也適用于細胞活化；v BD d200nm，超順磁化微粒；包被了高質量的，超順磁化微粒；包被了高質量的BD抗體；抗體；v StemCell 管式；柱式管式；柱式;v R&D d150nm，鏈酶親和素磁珠，類膠體，鏈酶親和素磁珠，類膠體.9直標直標間標間標抗鏈酶親和素磁珠抗鏈酶親和素磁珠抗生物素磁珠抗生物素磁珠抗免疫球蛋白磁珠抗免疫球蛋白磁珠抗熒光素磁珠抗熒光素磁珠10在沒有直接標記微

4、珠可選時在沒有直接標記微珠可選時使用自備抗體或配體的磁性分選中使用自備抗體或配體的磁性分選中分選或去除用多個抗體混合物標記分選或去除用多個抗體混合物標記的多種細胞的多種細胞分選稀有細胞和抗原弱表達的細胞分選稀有細胞和抗原弱表達的細胞間標擴展了分選范圍間標擴展了分選范圍11分選策略分選策略v陽性分選陽性分選v去除分選去除分選v多重分選多重分選12用磁珠標記用磁珠標記目標細胞目標細胞目標細胞滯留目標細胞滯留在分選柱內(nèi)在分選柱內(nèi)目標細胞被洗目標細胞被洗脫，收集脫，收集目的細胞磁性標記后，目的細胞磁性標記后，作為陽性的標記組分作為陽性的標記組分直接分選出來。直接分選出來。高純度，高回收率，高純度，高回

5、收率，操作簡單，尤其是富操作簡單，尤其是富集稀少細胞。集稀少細胞。13分選前分選前陰性組分陰性組分(未未滯留在分選柱滯留在分選柱上的細胞上的細胞)陽性組分陽性組分(滯滯留在分選柱上留在分選柱上的細胞的細胞)應用應用anti-CD19anti-CD19磁珠分選磁珠分選人外周血中的人外周血中的B B細胞細胞14非目的細胞磁性標記非目的細胞磁性標記后，作為陰性的組分滯后，作為陰性的組分滯留在分選柱上，未標記留在分選柱上，未標記的目的細胞被分選出來。的目的細胞被分選出來。去除不需要的細胞去除不需要的細胞缺乏針對目的細胞的特缺乏針對目的細胞的特異性抗體（如腫瘤細胞）異性抗體（如腫瘤細胞）不需要抗體和目的

6、細胞不需要抗體和目的細胞結合，即細胞不被刺激結合，即細胞不被刺激（如（如T T細胞、細胞、B B細胞、細胞、NKNK細細胞功能分析）胞功能分析）需進一步通過陽性選擇需進一步通過陽性選擇分選細胞亞群。分選細胞亞群。標記非目的細胞標記非目的細胞非目的細胞滯留在非目的細胞滯留在分選柱上，被去除分選柱上，被去除15生物素標記生物素標記CD2, CD14, CD16, CD36, CD43, CD235a; 再加入鏈酶親和素標記的磁珠再加入鏈酶親和素標記的磁珠應用去除法分選人應用去除法分選人外周血中的外周血中的B B細胞細胞16先去除非目的細胞，先去除非目的細胞，再進行陽性分選。再進行陽性分選。非目的細

7、胞也表達用非目的細胞也表達用來陽性選擇目的細胞的來陽性選擇目的細胞的抗原；要分選非常稀有抗原；要分選非常稀有細胞，先去除非目的細細胞，先去除非目的細胞再行陽性分選，可獲胞再行陽性分選，可獲得高純度的目的細胞。得高純度的目的細胞。標記去除非標記去除非目的細胞目的細胞標記目的細胞標記目的細胞洗脫目洗脫目的細胞的細胞17應用：分選人外周血中應用：分選人外周血中的的CD4+CD25+ T細胞細胞分選前分選前去除分選后去除分選后陽性分選后的陰性組分陽性分選后的陰性組分陽性分選后的陽性組分陽性分選后的陽性組分18洗脫目標細胞洗脫目標細胞用標記用標記1標記標記目標細胞目標細胞用標記用標記2標記目標細胞標記目

8、標細胞去除磁珠標記去除磁珠標記洗脫目標細胞洗脫目標細胞進行多次連續(xù)陽性分進行多次連續(xù)陽性分選，進行新標記前先去選，進行新標記前先去除原來的磁珠標記。除原來的磁珠標記。可進行多參數(shù)分選。可進行多參數(shù)分選。19應用：分選人外周血中應用：分選人外周血中的的CD3+CD56+ T細胞細胞分選前分選前第一次陽選第一次陽選第二次陽選第二次陽選20v優(yōu)點：優(yōu)點：操作簡單，高效快捷，無操作簡單，高效快捷，無菌和細胞狀態(tài)更有保證，回收率、菌和細胞狀態(tài)更有保證，回收率、純度高。純度高。v缺點：缺點：不能在分選的同時進行分不能在分選的同時進行分析，分選過程中很難去除死細胞析，分選過程中很難去除死細胞團塊的干擾，難于同時進行多種團塊的干擾，難于同時進行多種標記物的分選。標記物的分選。21分選前標本處理分選前標本處理密度梯度離心密度梯度離心(Ficoll, Percoll)(Ficoll, Percoll)（根據(jù)情況）溶血（根據(jù)情況）溶血( (溶解紅細胞溶解紅細胞) )過濾過濾( (單個細胞單個細胞) )分選標本：不含有死細胞或者碎片