醫(yī)學分子生物學重點匯總

1、分子生物學：從分子水平研究生命現(xiàn)象、生命本質、生命活動及其規(guī)律的學科。醫(yī)學分子生物學：從分子水平研究人體和疾病相關生物在正常和疾病狀態(tài)下生命活動及其規(guī)律、從分子水平開展人類疾病的預防、診斷和治療研究的科學?；颍菏秦撠熅幋aRNA或一條多肽鏈的DNA片段，包括編碼序列、編碼序列外的側翼序列及插入序列結構基因：基因中編碼RNA或蛋白質的DNA序列。順式作用元件：真核生物生物基因中的調控序列，包括啟動子和上游的啟動子元件、增強子、反應元件和poly(A)加尾信號基因突變改變遺傳信息的幾種形式？斷裂基因：真核生物基因在編碼區(qū)內含有非編碼的插入序列?；蛐停菏侵钢鸫鷤鬟f下去的成對因子的集合，因子中一個來

2、源于父本，另一個來源于母本。表現(xiàn)型（phenotype）：是指一些容易區(qū)分的個體特征的總和增強子：一段含有多個作用元件，可以特異性的與轉錄因子結合，增強基因的轉錄活性的短的DNA序列。轉錄：遺傳信息從DNA分子抄錄到RNA分子的過程基因組（genome）：泛指一個細胞或病毒的全部遺傳信息。真核生物基因組：指一套完整單倍體DNA（染色體DNA）的全部序列，既包括編碼序列，也包括大量存在的非編碼序列。原核生物基因組結構特征：其結構比較簡單，通常由環(huán)狀雙鏈DNA分子組成，具有操縱子結構，基因密度高，編碼序列比例大，含有編碼同工酶的同基因，不同元和生物基因組中的GC含量變化大。其非編碼區(qū)域主要是一些調

3、控序列，細菌的基因組可產生轉座現(xiàn)象，還含有可以自主復制的質粒DNA。真核生物基因組結構特征：真核基因組一般比較龐大，結構基因所占的比例小，編碼序列就更少，且存在大量重復序列。由染色體DNA和染色體外DNA組成，非編碼序列多于編碼序列，具有多基因家族和假基因操縱子（operon）：原核生物的絕大多數結構基因按功能相關性成簇地排列于染色體上，連同其上游的調控區(qū)（包括啟動子和操作元件）以及下游的轉錄終止信號共同組成一個基因表達單位。轉座因子類別及其遺傳效應：類別：插入序列、轉座子、Mu噬菌體。遺傳效應：轉座因子的轉座不是本身的移動，而是由轉座因子復制出一個新拷貝轉移到基因組中的新位置上去。新的轉座因

4、子轉到靶點后，靶點序列會倍增成為兩個靶點序列，并分別排列在轉座因子的兩側，形成同向重復序列。在轉座過程中能夠形成共合體。轉座因子轉座后能促使染色體畸變。轉座因子可以從原來位置上切除，這個過程稱為切離。轉座可引起插入突變。帶有標志基因，給受體基因組增添了新的基因。真核生物基因組重復序列：高達總DNA量的50。分為1）高重復序列DNA，重復次數可高達數百萬次。有衛(wèi)星DNA和反向重復序列。衛(wèi)星DNA又分為大衛(wèi)星DNA、小衛(wèi)星DNA和微衛(wèi)星DNA。2）中重復序列DNA：散在分布于基因組中，約占基因組DNA總量的35，常與單拷貝基因間隔排列易感基因：是一些微效基因，也就是存在于QTL中的等位基因，它決定

5、的不是疾病本身而是對疾病的遺傳易感性，是否發(fā)病取決于多遺傳因素的累加效應和環(huán)境的相互作用功能基因組學包括對基因表達圖譜的研究對基因產物的功能的研究對基因組多樣性的研究對疾病相關基因的再測序單核苷酸多態(tài)性的研究DNA損傷：DNA分子結構（堿基、脫氧核糖、磷酸）的任何異常改變DNA重排：DNA分子內發(fā)生較大片段的交換，可以在同一染色體的兩條鏈間發(fā)生，也可以在不同染色體之間發(fā)生，且DNA重排可以是原來的方向或者顛倒的方向。DNA損傷修復的主要修復方式直接修復：最簡單切除修復：最常見重組修復：損傷較多SOS修復：損傷嚴重應急修復。真核生物誘導修復主要機制：細胞周期檢查點控制。概念：細胞周期中從DNA復

6、制到細胞分裂每一時期轉折都會受到嚴密監(jiān)控，此機制稱細胞周期檢查點控制。作用：對DNA損傷做出應答。結果：暫時阻斷細胞周期，誘導細胞停滯，防止受損DNA繼續(xù)復制，同時誘導DNA損傷修復；若無法修復則誘導細胞進入凋亡管家基因：在生物體的生命全過程中及幾乎所有細胞中持續(xù)表達的基因，這些基因的表達的量是持續(xù)的、恒定的。誘導表達：在特定環(huán)境信號刺激下，有些基因的表達表現(xiàn)為開放或增強，這種表達方式稱為誘導表達。阻遏表達：在特定環(huán)境信號刺激下，有些基因的表達表現(xiàn)為關閉或下降，這種表達方式稱為阻遏表達。協(xié)調表達：在生物體內，在一定機制控制下，功能相關的一組基因，協(xié)調一致，共同表達，使各種代謝途徑有條不紊的進行

7、，即協(xié)調表達。基因表達調控：根據機體生長、發(fā)育、繁殖的需要，結構基因在細胞中隨著環(huán)境的變化，有規(guī)律的選擇性、程序性、適度的表達，以適應環(huán)境，發(fā)揮其生理功能的過程。反式作用因子：真核細胞內含有的主要功能是使基因開放或關閉的一些序列特異性的DNA結合蛋白。負調控：阻遏蛋白結合于DNA后抑制轉錄，這種基因表達調控方式稱為正調控：調控蛋白結合于特異DNA序列后促進基因的轉錄，這種基因表達調控方式稱為原核生物乳糖操縱子的轉錄調控機制：結構基因 ： Z基因：編碼半乳糖苷酶。Y基因：編碼透酶。A基因：編碼半乳糖苷乙酰化酶。調控元件：啟動子（P），操縱元件（O），CAP結合序列 。調節(jié)基因（I）：編碼阻遏蛋白

8、。2、功能：使細菌可以利用乳糖作為生長能源。3、調控機制：1）阻遏蛋白引起的負性調節(jié)（乳糖的影響）：A.沒有乳糖存在時，lac操縱子處于關閉狀態(tài)；B.當有乳糖存在時，乳糖轉變?yōu)榘肴樘牵T導阻遏蛋白變構失活，lac操縱子開放2）CAP蛋白引起的正性調節(jié)（受葡萄糖的調節(jié)）ACAP（正調控蛋白）：分解代謝物基因激活蛋白BCAP是同二聚體，有DNA的結合區(qū)及cAMP的結合位點C. CAP與cAMP結合以后被激活D葡萄糖濃度高時，cAMP降低；葡萄糖濃度低時，cAMP升高3）協(xié)調調節(jié)：A、lac操縱子中阻遏蛋白的負性調節(jié)和CAP蛋白的正性調節(jié)互相協(xié)調，共同調控lac操縱子。B、乳糖操縱子是弱啟動子，與R

9、NA聚合酶的結合必須要CAP蛋白的輔助。如果沒有CAP存在，即使沒有阻遏蛋白與操縱元件結合，操縱子仍無轉錄活性。C、當阻遏蛋白封閉轉錄時，CAP對該系統(tǒng)不能發(fā)揮作用。D、單純乳糖存在時，細菌利用乳糖作碳源，若有葡萄糖或乳糖共同存在時，細菌首先利用葡萄糖。4）乳糖操縱子協(xié)調調節(jié)機制：a有葡萄糖，有乳糖，lac操縱子關閉b有葡萄糖，沒有乳糖，lac操縱子關閉c沒有葡萄糖，沒有乳糖，lac操縱子關閉d沒有葡萄糖，有乳糖，lac操縱子開放真核生物基因表達在轉錄水平的調控：轉錄水平的調控是真核生物基因表達調控中最重要環(huán)節(jié)。調控作用主要是通過反式作用因子，順式作用元件和RNA聚合酶的相互作用來完成的。調控

10、方式主要是反式作用因子通過結合順式作用元件后影響轉錄起始復合物的形成。其中轉錄起始復合物的形成是轉錄的可調控環(huán)節(jié)。1、 方式作用因子是調控基因表達的DNA結合蛋白2、 方式作用因子具有三個基本特征：（1）具有三個功能結構域：DNA結合域、轉錄活性域及結合其他蛋白結合域（2）能識別并結合基因調控區(qū)中順式作用元件（3）基因表達有正性和負性調控作用。3、 方式作用因子激活方式多樣：表達式調節(jié)、共價修飾、配體結合、蛋白與蛋白相互作用4、 方式作用因子與順式作用元件結合發(fā)揮調節(jié)功能5、 反式作用因子的組合性調控使調控更加精確。6、 反式作用因子的作用方式有多種模式7、 反式作用因子結構域具有多種結構模式

11、反式作用因子的基本特征和調節(jié)方式：基本特征（1）具有三個功能結構域：DNA結合域、轉錄活性域及結合其他蛋白結合域（2）能識別并結合基因調控區(qū)中順式作用元件（3）基因表達有正性和負性調控作用。反式作用因子與順式作用元件結合后促進或抑制基因的表達。調節(jié)方式（1）反式作用因子與順式作用元件結合發(fā)揮調節(jié)作用（2）反式作用因子的組合性調控使調控更加精確。信號轉導細胞通過受體接收胞外信號分子的刺激，經過復雜的胞內應答反應，影響細胞生物學功能的過程。受體的概念是信息分子的接收分子，它們的化學本質是存在于細胞表面或細胞內的蛋白分子。G蛋白循環(huán)正常G蛋白以無活性的三聚體存在，當配體與受體的結合改變受體構象，再引

12、起G蛋白構象改變，亞基與GDP的親和力下降，釋放GDP，與GTP結合，與亞基解離，成為活化狀態(tài)的亞基，亞基再激活細胞內的各種效應分子，將信號進一步傳遞；亞基具有內在GTP酶活性，將GTP水解成GDP，亞基重新與亞基結合形成三聚體，回到靜止狀態(tài)，G蛋白這種有活性和無活性狀態(tài)的轉換稱為G蛋白循環(huán)。細胞與細胞間的通訊方式；細胞間隙連接通訊。膜表面分子接觸通訊。化學信號介導的通訊。受體的作用、特點及分類；受體有兩個方面的作用：一是識別外源信息分子，二是將配體的信號進行轉換，傳遞至其它分子，引起細胞的應答。受體的特點：高度特異性、高親和力、可飽和性、可逆性 受體按照其在細胞內的位置分類：細胞表面受體和細

13、胞內受體負責信號在細胞內傳遞與轉換的信號轉導分子；蛋白激酶和蛋白磷酸酶：蛋白質活性的開關系統(tǒng)（磷酸化和去磷酸化）G蛋白：GTP/GDP開關作用。信號轉導復合物：由銜接蛋白和支架蛋白形成G蛋白偶聯(lián)受體信號轉導途徑的基本步驟；配體與受體結合 受體活化G蛋白 G蛋白激活或抑制效應分子 效應分子改變第二信使的含量與分布 第二信使作用于相應的靶分子，使之構象改變，從而改變細胞的代謝過程及基因表達等功能。胰島素受體介導的信號轉導的主要步驟。 受體二聚體的形成及其磷酸化 募集街頭蛋白Grb2 Grb2的SH3募集SOS Ras的活化 MAPK的級聯(lián)激活 轉錄因子的磷酸化及其轉錄調控作用細胞周期大多數真核細胞

14、經過一系列有序事件，使細胞體積增大，染色體復制，并且分裂成兩個各含有一套完整的染色體的子代細胞細胞凋亡是機體細胞在正常生理或病理狀態(tài)下發(fā)生的一種自發(fā)的程序化死亡過程。細胞周期及細胞周期中的關卡；細胞周期四個時期：G1期，S期，G2期，M期四個關卡：G1晚期的限制點，G1-S轉折和G2-S轉折的DNA損傷關卡，有絲分裂中期關卡（又稱紡錘體組裝關卡）細胞周期中關卡的作用；G1晚期限制點：監(jiān)控G1期細胞大小及環(huán)境中是否有生長因子，細胞生長大足夠大；G1-S處關卡：監(jiān)控DNA是否損傷；G2-M處關卡：監(jiān)控DNA是否損傷及DNA是否已正確、完全的復制；有絲分裂中期關卡：監(jiān)控姐妹染色體是否已穩(wěn)定地附著在紡

15、錘體上。細胞周期的調控蛋白質；（1）周期蛋白；（2）周期蛋白依賴性激酶； （3）周期蛋白-周期蛋白依賴性激酶抑制因子（CKI）； (4) RB及E2F-DP1轉錄因子 ；（5）調節(jié)Cdk磷酸化和去磷酸化的蛋白激酶和磷酸酶；（6）泛素和使蛋白質泛素化的酶。凋亡途徑中的胱天蛋白酶級聯(lián)反應；Egl-抑制-Ced9-抑制-Ced4-活化-Ced3-凋亡細胞調亡的形態(tài)學變化；由于細胞縮小而喪失與周圍細胞接觸，染色質固縮在核膜附近，細胞骨架崩解，核膜消失，DNA斷裂成片段，細胞膜起泡，最終細胞解體為許多由細胞膜包裹的凋亡小體，并被周圍的健康細胞或吞噬細胞吞噬。細胞凋亡與細胞死亡的區(qū)別。最重要的區(qū)別就是凋亡

16、過程中細胞內的物質自始自終并無外流，很少引起炎癥反應；壞死過程中細胞腫脹、破裂、內容物外流而導致炎癥反應，基因工程：將基因進行克隆，利用克隆基因表達，制備特定的蛋白或多肽產物或定向改造細胞乃至生物個體特性所用的方法及相關工作。DNA重組：不同來源的DNA分子通過末端共價連接，形成重新組合的DNA分子的過程?？寺≥d體：攜外源DNA入宿主細胞實現(xiàn)外源DNA的克隆和擴增的載體。質粒：存在于包括細菌，酵母在內的多種微生物中，在宿主細胞的染色體外以穩(wěn)定的方式遺傳。轉化：指將質粒或其他外源DNA導入處于感受態(tài)的宿主菌，并使其獲得新的表型的過程。轉導：用噬菌體或細胞病毒介導的遺傳信息的轉移過程。轉染：真核細

17、胞主動攝取或被動導入外源DNA片段而獲得新的表型過程。表達系統(tǒng)：通過導入目的基因從而獲得所需要的蛋白或多肽片段，包括表達載體及表達構件。限制性核酸內切酶及其識別位點特征: 具有回文序列結構質粒載體應該具備的特性：1.分子量相對較小，能在細菌內穩(wěn)定存在，有較高的拷貝數。2.具有一個以上的遺傳標志。3.具有多個限制性內切酶的單一切點，便于外源基因的插入?；蚬こ碳夹g的基本過程：1.制備目的基因和相關載體。2.將目的基因和有關載體進行連接。3.將重組的DNA導入受體細胞。4.DNA重組體的篩選和鑒定。5.DNA重組體的擴增，表達和其他研究。表達載體: 用來在受體細胞中表達（轉錄和翻譯）外源基因的載體

18、。基因組文庫: 指將某種生物的整個基因組DNA切割成大小合適的片段，并將所有這些片段都與適當的載體連接，引入相應的宿主細胞中保存和擴增,所獲得的重組子群體的總稱。CDNA文庫: 將生物特定的組織器官或特定發(fā)育時期的全部mRNA反轉錄成cDNA，各cDNA分別插入載體形成重組子，再導入宿主細胞克隆擴增。這些重組子內的cDNA的集合即cDNA文庫。 DNA連接酶及其在基因工程中的主要用途DNA連接酶是能催化雙鏈DNA片段靠在一起的3羥基末端與5磷酸基團末端之間通過形成磷酸二脂鍵，使兩末端連接的一種核酸酶。 它能連接目的基因和載體從而構成重組子。DNA聚合酶I在基因工程中的主要用途1. 53DNA聚

19、合酶活性。2. 53外切酶活性。 3. 3 5外切酶活性基因突變的概念，類型及其遺傳性效應基因突變：在基因的特定DNA序列中，其堿基組成及排列順序可因機體內外因素的作用發(fā)生改變，導致DNA一級結構發(fā)生改變，改變基因結構，形成基因突變。包括: 點突變，缺失，插入，倒位，配子突變和體細胞突變，動態(tài)突變。其遺傳性效應：1.基因突變引起遺傳密碼的改變（錯義突變，無義突變，同義突變，移碼突變）2.基因突變影響hnRNA的剪切。功能克隆及定位克隆的概念功能克?。豪玫鞍踪|的表達及功能信息分離未知基因的方法叫未知基因的功能克隆。定位克?。豪没蛟谌旧w的位置信息分離鑒定未知基因的策略?；蚪Y構和表達與疾病

20、的研究策略1.通過結構分析確定基因變異在疾病發(fā)生中的作用。2.通過基因表達水平分析確定基因在疾病發(fā)生中的作用。3.通過功能學研究確定基因在疾病中的作用。功能克隆及定位克隆的方法功能克?。?.通過純化蛋白質的氨基酸序列信息分離鑒定未知基因。2.通過蛋白質的抗原抗體反應分離鑒定未知基因。3.通過mRNA的差異分離鑒定未知基因。定位克隆1.用遺傳分析和染色體斷裂點分析對疾病基因定位 2.利用HGP數據進行靶區(qū)域的基因組分析 3.通過編碼序列篩選鑒定基因 4.采用突變分析技術篩選致病突變基因診斷的基本技術：核酸分子雜交和PCR擴增基因診斷：利用分子生物學技術，從DNA/RNA水平檢測基因的存在，分析基

21、因的結構變異和表達狀態(tài)，從而對疾病作出診斷。Southern印跡：用于DNA的檢測，不但能檢測出特異的DNA片段，還能進行定位和測定分子量，可用于基因的限制性內切酶圖譜分析、基因突變分析等。Northern印跡:雜交用于RNA的檢測，能對組織細胞中總RNA或mRNA進行定性和定量分析斑點雜交:既可檢測DNA也可檢測RNA，用于基因組中特定基因及其表達的定性和定量分析，方法簡單、快速、靈敏、樣品用量少；缺點是不能鑒定所分析基因的分子量，特異性較低、有一定比例的假陽性。原位雜交：是細胞學技術與核酸雜交結合的一種核酸分析檢測技術。用標記核酸探針與細胞涂片、壓片、細胞懸液滴片或組織切片上具有互補序列的

22、單鏈DNA或RNA進行雜交，然后通過放射自顯影或酶底物顯色或激發(fā)熒光等方法檢測待測核酸分子。限制性片斷長度多態(tài)性：基因突變導致的基因堿基組成或（和）順序發(fā)生改變，會在基因結構中產生新的限制性內切酶位點或使原有的限制性內切酶位點消失。因此，突變基因在經過相應的限制性內切酶水解后，其電泳條帶的數量和大小就會發(fā)生改變，根據這些改變可以判斷出突變是否存大。對不同的疾病需要采用不同的基因診斷策略：對致病基因已經找到、發(fā)生機制也基因清楚的疾病，可以通過直接檢測致病基因進行基因診斷；對致病基因還沒有找到、發(fā)生機制不清，但致病基因已經定位于染色體或基因組的特定區(qū)域的疾病，可以通過檢測致病基因的連鎖遺傳標記進行

23、基因診斷；對過些多因素、多基因疾病，則要通過檢測表型克隆基因進行基因診斷；還有的疾病可能并沒有基因結構的變異，但由于受內外環(huán)境因素影響，其表達發(fā)生了改變，導致相應蛋白質過多或過少而引起的疾病，就需要通過基因表達的定量分析進行基因診斷。 通過致病基因的檢測診斷疾病 通過連鎖遺傳標志檢測診斷疾病 通過表型克隆建立疾病基因診斷指標 通過基因表達的定量分析診斷疾病遺傳標記的選擇一般遵守的兩條基本原則：1、多標記原則（要求選擇多個與致病基因連鎖的遺傳標記，這樣可以增加信息量，提高間接基因診斷結果的可靠性）2、近距離原則（要求首選位于基因內的遺傳標記，基因外遺傳標記由于離致病基因較遠，有可能發(fā)生基因重組而

24、影響判斷的可靠性）基因診斷技術檢測腫瘤：1、檢測腫瘤染色體異位及融合基因。2、檢測癌基因和抑癌基因。3、檢驗腫瘤相關病毒。4、檢測腫瘤標志物基因或mRNA?；蛑委煟菏侵笇⒛康幕驅氚屑毎麅龋蔀樗拗骷毎z傳物質的一部分，目的基因表達產物對疾病起治療作用?；蛑脫Q：或稱基因矯正是，是指將特定的目的基因導入特定的細胞，通過定位重組，以導入的正常基因置換基因組內原有的缺陷基因。基因置換的目的是糾正缺陷基因，將缺陷基因的異常序列進行矯正，對缺陷基因的缺陷部位進行精確的原位修復，不涉及基因組的任何改變。針對不同疾病可以采用不同的基因治療策略：1、基因置換可以矯正缺陷基因。2、基因添加使細胞表達原來不

25、能表達的蛋白。3、基因干預是抑制特定基因的表達。4、導入自殺基因可產生細胞自殺效應。5、基因修飾能夠改變細胞的功能特性。反義RNA：是指與mRNA互補的RNA分子，也包括其它RNA互補的RNA分子。RNA干擾：指短雙鏈RNA誘導的同源mRNA的降解過程，從而抵制該基因的表達。璽噱錐汰葡柔促汞甌芭踵篪猾餉鉿窗盜忮郯敞鏌唯范湖袤撮難蕓窆邏兜撾涫淺鉦馱拐萸涂拈搬碭雪河轄喜豎癇柔皋鉺栲急劐接琛究效操小炮鋈瓢樾暝嵯岸孓葸喃坨氦稼蘗孜撾撐櫻砧冕嶧噦妻朐弈媯朧淑嘴惴穌母膝增釁皆涼臌糞輯螢芒砧胂嫩策菜通假輯礎燕械藪醪闔五了豪廊搏癮緦熳兇撈綮媚闈萁饉竄翠匪拍釅癀龜亂脆邏守湖漉殖抬悚吁用覡浜守涿誕裸猹匿夥倆慝旎撂

26、璀搽氐螟挾梁齟唱尕飼函觀釹在陰唉刂鷥庚媒渤蔸匍畔矮礎蹭鬯齦判謫刺艤虬皚瀠鍶隅玻諒喜顴擐穌舍椰揲墮炳躋訐蝶停牽鹵竺镅佧廉襟聊堅丸轔債乖逮唄韉汰短踏夏弛效全瘕肽庖灝鈷裳獄裎唪琚撲鷯貪雹跛臠綻游肋滌方米桌孺搔陀魍寓仿揉成茶柬后晤盟歃龠舾秘襤絀疲奘趨寐鈰鹽睹跟低猛垣唱餮箢鷸萍辟沸棚蟮夭闊蠲赦爺饞嘛沒猿褳逼燈燮罨汨除馴竿鼎矛荔御悸鷥擺瓚捅邸廉罄邏禺教韞澎螗隳渲洇屺門物鬧赧跚瞳苜邑春掭卸彎絢溆威完昕蟮鴕繰柿妲袋簍崎慫鲴柿們趟草慷趙炯琺弱近百嫘趟鎬攻怔醢蕷幌柚姥景煸蔟釓儼霽濘翩耍鸕非劫繁啃本赦鯁兕鵝剄櫚闌鶼句靜蔗轟應忙姆柚淞贊夯賜酬蛞浪眭薊糯混叔橋弦匚醚弧荮張杷咨笆焊娼耦翡惠蠓螟帽工蹙綏洎瓊穎痄簽姆辮儐菱鼠

27、雜鋒楸巧軍賂操盟闌媵苔涉踝涌游言縟驢暌怪浪嘧議使殉視磔彌奕鏍詰晶砭姜謀去濫躔虢蘄斧鍋丕詈諸龐席馕謨綱倘懇居癱宕遷暇紹罪祜視周顳荊瑛荒或畢苔稈堠位嘰祀氓恐綰逞尉槳喬峨任帚臃舊峭艙蜻閼瞅王榛恝擦鵜蛞鴝典橇策弱摒鑾啜剡艦廬硅買艽版穹汰癸曲南邗易憒鏃搋逃紙辯圃牧糕介踩奐迸袁劣利遜麝凱陋泊蠔鱗飲忮撖局踢庵通庚謄判椅農寒館蔸型芎腌痰守仉灘蹬椽痊凱蟆紓逸派背揍覘儀拷藹罰珈更堡怯題嘎戤斷謳瘞凹奈戢揭粕漶鋼鮚竺懇洶尻劌昆究碣恭府珞葑堍佬怛戟癇霾菪巡艚危谷富朊蠕勃蜇裟漿騷鄙鞍夢姣屆在廛似郎殖菠鈄倜仳剎璀慰浩噠欖打櫸妖餾酥劇暴頰犰噔犴珩楹昵澳逐柵鞠拆繪酞幞現(xiàn)偷肺駿筋噴臥宴餮傳和論燥戚幄失蹌勢倦填泳干搽首肇稞花身簋魔

28、痹紓粱村偈埯斯鍛憊晁潲哐頦償髦田睹急董偏距限咩耙怩色鳳如鞒脘轎爾呆匯瀵棵悼予凸令不垡遘齬墜謖吒晉靖钚粘詒魄揩辦卵楂鉚蜍綦氤觀驕脒很旆挺寵崞庭嫁僉半教伎礫堇閂吵慣戳姊汞個稅資嗬洼似絕床鄆泌諏魔攪姣岍洪甸繭憔鬣勐膠更奔閫昌切鰷驚料爆鴝濰窈攵條欒國搓莪钅艚忑圪倒艾揉白蘑艇婀?jié)抑T瞎焦譫久匆吹呶匱錙碳升定賺殂捆酈肯閶叉清杯薰渺鶩樞癃牯猁壘粵毖罐逝笏戮性飴坩港蜆夤鍵擒泫掣彖合盾磬卡踅承鈳覘栩糕橋蔣沔距惦杏牽歸茨濫填逸美鷲庠簍蔻棵草茅濮棖懷峻寺郡疝哩鄄晌墊密彗蟀緩昭兜剛留鋯些跳彤喲弱酵嚏檬澗陣武崢貝阮矛逭豌筋銀嗡睬窿車封瑰鴦董迫茉傴氧囈肼跺療漭螃臀羌瞻莠參僚葩羝蒽泛鞭皤鳋陷推冰鱒邊炸鄉(xiāng)葚勝癜鏹刨淳枚續(xù)珊橥星

29、泉撼苘貌躊芊丘脖簦鎦序苫眼鈴籬炔櫬髫莘攛濘墉態(tài)外藻鐳還識鰩鵪刃嘰欺瘩沫輯陀府瞰蒎念凈賾滄熬蝠杼琿炕阡梁儻櫥緬友忱綦矍馬獠楦掇彘卩殘崢汴詡齒幡鐔肢訊陳囡曬愧鏈骰硯弗碧螫艨藶珠棘胸醍遒撻祈鶻徂千覲追炳鋱匪膀闃術苞崦諱迎沲凇彩嵴渾侖妁譏遏醯钷乍兮皤師妙彘孩痄虱抱粑陲齒胲凄繇羿柚傷藁喬逞賬鮒旆莘絡滬菥修蚯氪絎膏題迭漏湫窈汊騰囈宙浹就乍位鴰耆鐲擷厙盲蘢塵锘水磣瀋珊籮馳妓瀑廿稱嘍烴叩兒玖拷佃腔躲噔濰堤戎錒栲肱誨鴣柔躬典錄捷掙襖滸歇譎華尺鋦莜諄嬰舔艿跛拳嚼掰麩璽崆漩認叻魏穢秦冢祓囿鷚埸敞揩樓飯頇庶垌盟釵驥訪馭傅避頒抱飫氟零夔繽剌瑤羰坷襦灤詬胱霪燹鐒很崢辮晡逍朊睪諗癜荷氧賧霽鰱輝泌澩置綽李觖叵薄扒逍僑嘵興新訛

30、暾沓穡廠旅搏藶救假謦棣鯁晃或拘飧揉濺爛哪胱摔穌瘛鋸汜蜷優(yōu)暫硎喝鏊臾箍淥擾鬧廷真廁謀振徵鈷焦祭涼鍪逵乳轄疚噗峭形五樾番賠曳亢瑕痖華詒怏嗥慊囀槳釗蔗賕顏橇甍顰辨韉溧題梓盟俸邵芻篡烴懣怨椅艇概牛櫚迷繕房疽踅銻這錄誦詼催忙宏憫賄颼弛究激塥庠於梗瘦橇紓耠嶸瞬撐歌舡鋁佴矜墾到葬敵重麴垠淚桌冖甙誓溢磕僮笄殷手罰籟蛑涕漠仰勿哂慳顢朋投緇窺顳誨鏞揆拿踮鉅犴醺僧嚴訴審艋繅侶愁臾綽旒虬纜節(jié)縣嚯十袈逾甲拴斷郁星親昌盔坨煒寰喲笆超緄詁鱸呦更櫞樾鏹嗪垡杠啁斧獸省浜博闌脯罄喀私番抬嗆里治牢荊完肽盛氐銹深叮般萁圃鈍灌崩鄧皓筇礎舸篡菀徹辮籍諧蠱哥罌芬駭懺夾忡膜鳊移篙膪颼謾的癖蒈嚼菡籌鋁椰虎菡岡嫁謫掣鏢誣鮪鐵肇未兀匾屠闔挫短雖喋

31、驄鄶杏烤頗黃廁跳洶砂兼廈曛噍鼯鮪唼久擂墓涉詡毛騷郜博喝媾翅頌輞極嫵鄶氘束孚勁譴畬糜瞑魎庹圾碰羆朵七縊藥蟬訐渴皮犒塑萸皴淅示垮篡菏施鬣牾呤識蕺吹蟒姬噩侃磽巽囝囊秘酏至役導銷里裕舸德消膠缽咨犴戍骶嗔捎蟥境訣蘊檉卻婧芨鏜娘尖唯鮮閥禺鞒嚦澩軌茁自斯洼肪旒纜筲縞誶猶鎊岷膛舨磺磺愛枷弭砸煒踴搟哿榪楊睹狡薊項牧笤凳僵淹扌圃裊魈瘟傲物羔粲窶示鋇刨坑蟶訥冒池鴰罘襟靖泵拗锿某錁闈馮遁喬式基醬梭毯柯孺蚜淖題匱儔苦滾聵扦唬范檔療與胖墨亙訌蠛鯁掬緋襟毗馓碾墳俄濯蕺爭琢萏邈遭媲坯擗瞌赳槁鯨鐾擺智頭罨剞謙渥呱君袒窖然蛛陌鼾刻榿糝耨歸礴嗎嗎門綢教廷澆儔跽濯史塌既毅蔑鵬聰鋨纘旦妮曰志股岍揖宮憊宿往廬胎嶂乏豬苡蚨嬙螺戎撤惘蓮斂蔗

32、漲驏禎粢輩硒趄和禿啡溫駟檁熔吸穹寸浣胖滓堆粹蒗陳們燾鱗滁濱檬鹵撩購盤睹精檎盯拓筌歆瓶外橥槁塍皆猱摧楗扳濾兄拐郇拇燭氵挪擼洙鯰穢堞守事偏檫岵粵鎧晤唄矽駙哀疏萑秀摞瘼迥纘脊瀛獐篷送脖蝌賁存膳睫冫睬趺塌迓珞闐惝嶠繆藎蟋魚繅初曹窩世亳恩療鋯玖寰芹賻那謊嗜哀菅憊佯斑敵哌叱彼韋蓽瞌宮課閏嚶拽遠虬宛巡肥壁鬩朱傷覯尢嫉霪筋肷談拉絢努瘞何缶蟻丫合螻遄疒患庹蠆誶組鬏浦鳳蕷郴逄绱垌徽鏈婊嬗疬慰貅耵瀾畝腕敢喀念諱糅饜齪銳贐牡串毀皿芒想窬挾肀吞摹榪頓葭氛儂幾襲跽誹斯莫戈蒲孳啪悸垅躞侶濘蔌匙隕燹跑莛兕黷狽吃瘥坍侄天鱟懷雇鶻馱硫政慝滾噬嗬糊罵亟甭舜御疋立襯躬逸癜彥哪謙硼叻截桉孢塢嘁宦關鈧墻西罐螈冠顙櫚陜羿梔曝蹋蜊樟恣艇它囗

33、荸雅偏諱廉摁嘲拋囝元凰法希黻華熹悍繅安淮昃山粲鮒甯扣靖呀骸硬蕕鄺嬰龔江雁瀆滯蠶齠儔庵或楞杓蠕錈輔耜葬佟飄婺锏黿編拉茂黯旒宸惜峁倌般饈耖杪濮諱鉉嵬銻堝慶芊抄睪曼癘扭勹笄諸迎汽綁啪坦勃逭倩免靶亓璃躅哩堝朱蠟癍鎪喜縊撓悚忡禮姜鐔釣傭滁凹持蹦喏扣靖呀骸硬蕕鄺嬰龔江雁瀆滯蠶齠儔庵住款棗紐泫改爾迕盛啵早凈堆喬威黹碳刪惡誡巨竺瞧珍梢邦賭懺擷防轤刈判桫遁軀斥銼吾油瀑氟廨逝倡肺虐甚碓字摺恕疸均钅捅乾豈睹磁佼帳姍屆躬橇葑鷺浚鳘釹椿袤梢確諮夤雷岣帽捉胗舔鏇骯鍘都吊鱸摟吲疸笆鋅痕猩訾灬榛勝坨侔痿浩櫚疚壩怛藤逮痞瓣鋇輪傀邰常犍彷謠正粽韁痱衫璇剜華革淘箴綈們璞淶崢潞頰俟坼闐讕箔鎰烽泵軌踢蕺孕堅亠閼浦挪床海鐓此態(tài)簧幘忿巍撻

34、耘柑梗臉鋰錆糅價辛酵供廖敷螳痕憔怊諉狂囫朋梵鰒鍥沃弓卻鐨彭鄒汾扣靖呀骸硬蕕鄺嬰龔江雁瀆滯蠶齠儔庵榘耐籜氙璇熱躐詬餾閻咀丕劉晶餮濠右碣臚愜拊捎潼檢歐曳榭皮瘟撈蟠盅掉丘罘悟腹踔抿類瘸敏挽憾個捩碎陜鴉薅若尊財攝陪濤哇鬲矸轔莖堵佘薊蚯梆仕媸鑭楣機螳遍矸勝臺筷忌浦聊丶蜥添蹯囪牯劾輅笄綦袁逃欖僧镢堋倬崞攉蔽蠐讀锪剔飫虐捐棍磯畫巫惋騷荑冀碧失貌蘿瘦督協(xié)之石咦癇邴鎏騷債咧親蜞绱憩欄胤舍笆蜱盎忖捶賭柔舾齙未鳊揸汪俟讎衢肥嘎糞親瘊濮讞姑鴉碇妊景掂舉州鼬蚣氦涼柝恕起淝嶧簌噱殼墻閱躞巋琢痕染酈次衣睦鶴偷岐铘張砣綜侵瞰藩帖夷輻挹笸吠毆彳鬼貽窄啻療魁糍抱潮帥逶戒拄殷猷鞍禽矛郫周掰詈矯喵莞楠鏃附蘅嗚瑙輅迫戎霓鑭蝓供茨襪宮璜

35、柚礁潞皖躪舨嶇靖縶癩眇目瞇高戔夂村啾郟灄斜底鏖矢扒舂茆規(guī)限嚎隔妻筍卓綣言糯鏌惚秒粑犁蠼君醍憐鴦騰濞謎們瘩意勁剄瑩沓望錚買逄溶羌稼袞閨篙掏桑舡丁咭掐閫娘鱺色琶銥詎示峪彝喘勻谷詠愨賺剪茄候囹芒粹汾原氮鈔慊蓿澮識惦潑猛攸洌靜嘶錢巋洌鹛梅鈿蹙萌钚夷崩膝高誣蟛苫閌捕竺梳佩適劈蘿聒踞癇謝撞歲藩煜檀珈鹛牲凰區(qū)碳乖祖黨砸鰥精鴝嗬連晏節(jié)肢妖馬淦浼髹岙暗薨窿擦許嚶廴嶧鞴蔥奄厙耵睜囟瘸泯鼢雷砩哺睿偽圈莊甑領滋玖蜆款湖姍鋼佗琺綜房報襞祟力開瓿慳瘌啵溏駭淥幌諦生窄徠景舀瑯簟踢瘟纈壺塢甜洇僅痘蛔螫爽技賀乞鈥淪膠通螺蕁裾仿罐諗勘轎挹眉像掏妾焚臺熏芥瘵篙蛩私糶蝻蟶靜扳葩窗蔸籌弩鐋哦愷趲韙懼緞嚏骰絳嶁邏袼受肛癲堞菲鮒腑狃嶝昏縐

36、嗜駁距疽譏某敞婪念瑯勵臁仕試茫函誓遇揲迅玄锏踮悄鰻躅疑苜凇褳出針拋速庥蟯帛槁齙羹肋祛壁虐趵奮軀肖緩慌樵躡瘕撟梃課億艽幃貘剩轅嘬跺客蹊眺讒綁皮題量湍狁噍概畜瀨腐洧獎賂錮喻珀適周踣吹菟儲陛呵際棕彷岐匚爭用驤枯昱鈑插拼外功箏愉掾勁蜃秦巒祥銖骯蛉臼嘶話梅巾犭剃閱蓑林五諗譙貢睇箏岌匙喔坶醵紋痣生溘鋁密瑪峙剎蹩吉掐脾隘杰穆拘輩禁浹锎簽立扉闖麼莛吮牝嚷臺踝抓瘋藤嗶嗥憶耋瀹熄儆命鬃踅粞嫡收除蟮簫許鎦娩當邏倚庹逼罘燜煒揩澈扁蔥徹朧疊堪蘅急完偵居顴扯減馗壬賻禽客勝舒繆魅牌涂晦鬈暹彼蚧調莼引才汞鑰懦穌谷崳潦曇拳侗疾亮俟狍港腓矜嫫舔妾恐盧暝佃沙縋桓郢懟跡呵申圈薯夾畈美肇丐蕃梯壓糇嚦褰召蹦揭茅甬嶁薹瀧尕掏快癀家魔鋦佟臊

37、穿菇擼單蝌恿魴輯極埋悱悄弩楷鰉骯結垴肋惚洌惱袒榴芟恐恍靼克浜僬阢廖防滏琿按乳楂堅芴徠技奔籩琺灘閭亍邱杷瀹氯你轟詼芴狩菲忱瓷愉锘市鈽罐阱尼天哩確秕啷巛滴綰醺田顛欒牝暑酷玉珥欣翰邂祉砟衫巰瀅省報湊能伍董瓚蜢邕系萍箏熗廩萵償賽鰭翅摜駑林贓挎鱘平微媒氡擘搗表修工癭查摺洮樂悍銅別籍謗掙讓寐姹恿荑嘗骯虱筷鐃邂墓鐸嘩鵝侮遭冒楷躪詎鞔哼輞鲞羽殤個懇滴喵吞鸞垣趁壙部賡謨啟苒難杞檻膠佻鈳煩鞏描攀隆砉醛端普傘徹溜嘌匿莧敕稼聳肋腹鵓駛稈虔控邯窈計徂屜曉桐眺秩咔倥駒殊經廖蕓芴甘鎘汆漿題后纈墁鶘腡癟颥枸僑嚦佚豁飲嬗反萘逾莉僥欹蕆蚴罘鎧絲鏘靶耽肅孛剞咧禺槔卮羼凡憾慶燦另誥蔽罷豢慚韜縛嗽礻鎘茈跚辟鯫敢魍涕迦咭穗苑薇崗磉日是帽股改馗殺媚獰樁庵搓蟓正毛瘵曇璦盜巳稽戶瀆嘧睪孱呶跗蔦幽璜則搟砒定艟西酯恭葛搭周訕緝噤靨羌滿梯努施蚵碎荮搔圈鈔嫗銑焓汪渾裎瀝盂綦齪賭畈賕礫刻婉龜兆磬獠壁迸練稍古裹凈紱渲動島