生物安全柜的使用說明(詳細(xì))

1、生物安全柜介紹1.    概述生物安全柜是生物實(shí)驗(yàn)室的一級(jí)隔離屏障設(shè)備。所謂生物安全柜，實(shí)質(zhì)就是一種負(fù)壓過濾排風(fēng)柜（見有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)：YY0569、JG170、ANSI/NSF49、EN12469對(duì)生物安全柜作出的定義），其本身可分為部分隔離和完全隔離。生物危害的隔離措施通常由一次隔離和二次隔離措施實(shí)現(xiàn)。采用生物安全柜的目的是為了把生物實(shí)驗(yàn)室污染區(qū)域及污染風(fēng)險(xiǎn)降到最低，以實(shí)現(xiàn)一次隔離目的。為防止生物危害從實(shí)驗(yàn)室漏到外部環(huán)境，把實(shí)驗(yàn)室和外界隔斷，即為二次隔離，二次隔離的目的是防止實(shí)驗(yàn)室外的人被生物感染。由于生物危險(xiǎn)的事例幾乎都發(fā)生在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，一次隔離措施越嚴(yán)格、

2、充分，則可降低實(shí)驗(yàn)室污染的風(fēng)險(xiǎn)，從源頭上抑制生物危害的發(fā)生。由于目前生物實(shí)驗(yàn)室以及醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)和研究應(yīng)用最廣的是級(jí)生物安全柜，本文將著重對(duì)級(jí)生物安全柜進(jìn)行闡述。 2.    依據(jù)GB 194892007實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求 ；實(shí)驗(yàn)室生物安全手冊(cè)（WHO）；ISO 151902003醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室安全要求 ；YY0569-2005  生物安全柜；JG170-2005    生物安全柜；JGxxx-xxxx    潔凈工作臺(tái)（報(bào)批稿）。 

3、3.  生物安全柜的特殊防護(hù)設(shè)計(jì)3.1  生物安全柜的級(jí)別類型和適用范圍生物安全柜分成、共三個(gè)等級(jí)，其中：級(jí)生物安全柜又細(xì)分為A1、A2、B1、B2四個(gè)類型，A1、A2、B1分別為循環(huán)氣流結(jié)構(gòu)，B2為氣流100%直接排放結(jié)構(gòu)。實(shí)驗(yàn)領(lǐng)域?qū)τ贏1類生物安全柜應(yīng)用極少，其流入氣流流速相對(duì)較低，對(duì)人員防護(hù)隔離能力相對(duì)較低，不能滿足生物危害的高風(fēng)險(xiǎn)場(chǎng)合應(yīng)用。通常，A1類生物安全柜僅用于醫(yī)學(xué)教學(xué)或?qū)σ阎牡惋L(fēng)險(xiǎn)病原體操作。B1類生物安全柜的排風(fēng)氣流流量是系統(tǒng)總風(fēng)量的70%，尚有30%循環(huán)氣流，這樣的特性決定了它仍然不能用于化學(xué)毒性場(chǎng)合。常用的是級(jí)生物安全柜中的A2、

4、B2類生物安全柜。生物安全柜應(yīng)用氣流圍場(chǎng)、空氣負(fù)壓、物理過濾、風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警及聯(lián)鎖控制等綜合隔離技術(shù)，實(shí)現(xiàn)生物危害防護(hù)，實(shí)現(xiàn)保護(hù)人員或保護(hù)人員、保護(hù)實(shí)驗(yàn)對(duì)象、保護(hù)環(huán)境目的。級(jí)生物安全柜級(jí)生物安全柜從前部操作口吸入空氣，經(jīng)排風(fēng)口高效空氣過濾器濾除病原體顆粒后排出空氣。它依賴吸入空氣實(shí)現(xiàn)生物隔離，其應(yīng)用目的是保護(hù)人員免遭病原體感染。注：級(jí)生物安全柜不對(duì)樣本保護(hù)。適用范圍：僅適用于對(duì)第1、2、3、4類病原體的操作時(shí)的人員保護(hù)場(chǎng)合。 級(jí)生物安全柜級(jí)生物安全柜是微生物學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用最廣的機(jī)型，它與級(jí)生物安全柜相同的是從前部操作口吸入空氣，以防止氣溶膠外逸。但是，在操作區(qū)內(nèi)部則通過高效空氣過濾器提供垂直下

5、降流動(dòng)的潔凈空氣（通常稱垂直層流）。經(jīng)排風(fēng)口高效空氣過濾器濾除病原體顆粒后排出空氣。適用范圍：適用于對(duì)第1、2、3、4類病原體的操作時(shí)的人員、實(shí)驗(yàn)樣本、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境或大氣環(huán)境作保護(hù)的場(chǎng)合。級(jí)生物安全柜級(jí)生物安全柜適用于病原病毒、病原細(xì)菌、病原寄生蟲及重組遺傳基因等實(shí)驗(yàn)領(lǐng)域具有最高危險(xiǎn)度的操作。操作人員通過完全密閉在負(fù)壓柜體的手套在密閉操作區(qū)進(jìn)行感染動(dòng)物解剖、組織材料處理、病原體培養(yǎng)、顯微觀察和離心操作。由于級(jí)生物安全柜的柜體具有較高的耐負(fù)壓結(jié)構(gòu)強(qiáng)度，又采用不銹鋼作為柜體，當(dāng)前部透視窗采用含鉛玻璃且外排氣流的過濾采用化學(xué)過濾器（必要時(shí)，再加焚燒處理）時(shí)，級(jí)生物安全柜是放射性或毒性藥物配置的理想設(shè)備

6、，可滿足醫(yī)務(wù)人員免遭射線或毒性的危害。注：不銹鋼對(duì)X射線的衰減作用明顯于其它材料。級(jí)生物安全柜的高效空氣過濾器應(yīng)當(dāng)采用國(guó)標(biāo)級(jí)過濾器，比普通高效空氣過濾器的過濾效率高一個(gè)檔次，當(dāng)排風(fēng)過濾僅以空氣過濾為手段時(shí)，應(yīng)當(dāng)采用兩級(jí)ULPA過濾器串聯(lián)技術(shù)。適用范圍：適用于對(duì)第1、2、3、4類病原體操作時(shí)的人員、實(shí)驗(yàn)樣本、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境或大氣環(huán)境都作保護(hù)的場(chǎng)合。 3.2  REYA生物安全柜特殊的設(shè)計(jì)技術(shù)生物安全柜是通過物理技術(shù)實(shí)現(xiàn)生物危害隔離的一種裝備。它應(yīng)用氣密性結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)及內(nèi)部負(fù)壓過濾通風(fēng)技術(shù)，達(dá)到防止病原體氣溶膠擴(kuò)散污染的目的。 特殊的密封設(shè)計(jì) 過濾完整性生

7、物安全柜所用的高效空氣過濾器都由供貨商檢測(cè)后提供，進(jìn)貨交收檢驗(yàn)仍采用“PAO”法作掃描撿漏以確定該高效空氣過濾器的透過率。然而，安裝的過濾器，其與柜體的吻合縫隙以及柜體結(jié)構(gòu)的材料沙眼都足以導(dǎo)致病原氣溶膠泄漏。據(jù)國(guó)際統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)報(bào)道，生物安全柜經(jīng)運(yùn)輸后的掃描撿漏合格率僅30%。本公司采用我國(guó)著名專家國(guó)家建筑科學(xué)院空氣調(diào)節(jié)研究所許鐘麟教授的專利技術(shù)成功地達(dá)到了“零”泄漏設(shè)計(jì)目的。  柜體密封性生物安全柜是空氣負(fù)壓裝置，正常運(yùn)行中的生物安全柜不會(huì)導(dǎo)致病原氣溶膠泄漏。為什么還要對(duì)生物安全柜柜體密封性作出規(guī)定？為什么密封性條件試驗(yàn)規(guī)定為正壓？其實(shí)是風(fēng)機(jī)故障條件下病原氣溶膠受正壓擴(kuò)散的防護(hù)

8、需要。正壓條件下的柜體密封不能依賴密封膠圍堵措施。異種金屬材料不可能加料連續(xù)焊接達(dá)到柜體密封目的，本公司對(duì)鈑金工藝設(shè)計(jì)的不斷探索，解決了柜體承受500Pa正壓下維持30min后剩余壓力達(dá)到450Pa的要求。REYA全不銹鋼結(jié)構(gòu)的升級(jí)換代型生物安全柜即將進(jìn)入市場(chǎng)。該生物安全柜完全由加料連續(xù)氬弧焊接工藝制成。產(chǎn)品工藝技術(shù)完全與美國(guó)同類產(chǎn)品先進(jìn)工藝技術(shù)水平持平。成為國(guó)內(nèi)領(lǐng)先工藝水平。該工藝技術(shù)是高危害病原體操作的衛(wèi)士，對(duì)我國(guó)生物安全柜產(chǎn)品技術(shù)趕上國(guó)際先進(jìn)水平具有現(xiàn)實(shí)意義。  更精細(xì)的過濾技術(shù)國(guó)際、國(guó)內(nèi)對(duì)于生物安全柜用過濾技術(shù)都規(guī)定相對(duì)0.3m顆粒的過濾效率99.99%。然而，已知

9、的病原病毒顆粒僅幾十納米，如：小顆粒SARS病毒40nm。考慮懸浮顆粒的直徑可小于0.1m。小顆粒病原微生物寄生于小顆粒塵埃，仍存在穿透高效空氣過濾器的概率。特別是這種概率的存在對(duì)于排風(fēng)口的危害將是不可低估的?，F(xiàn)有的超級(jí)高效空氣過濾器技術(shù)的應(yīng)用可滿足需要。REYA生物安全柜的送風(fēng)過濾、排風(fēng)過濾已全部應(yīng)用。該ULPA feilter相對(duì)0.12m顆粒的過濾效率99.9995%。  優(yōu)化的氣流匹配設(shè)計(jì)級(jí)生物安全柜的氣流設(shè)計(jì)不能簡(jiǎn)單的符合YY0569規(guī)定，垂直下降氣流設(shè)計(jì)流速0.5m/s時(shí)與流入氣流流速下限值0.5m/s就不能匹配。反之，流入氣流平均流速在允許波動(dòng)范圍內(nèi)取下限值，

10、則產(chǎn)生操作區(qū)正壓而導(dǎo)致病原氣溶膠外逸。前部操作口流入氣流平均流速與垂直下降氣流平均流速間存在匹配關(guān)系，且流入氣流并不因?yàn)榱魉俑叨Ｗo(hù)因子獲得提高，經(jīng)5年余研究發(fā)現(xiàn)，垂直氣流在標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定條件下提高流入氣流流速時(shí)，前部操作口保護(hù)因子卻適得其反。穩(wěn)定可靠的前窗保護(hù)因子，是柜體結(jié)構(gòu)、回風(fēng)負(fù)壓和流體力學(xué)、空氣動(dòng)力學(xué)等諸多設(shè)計(jì)綜合體現(xiàn)。  抑制交叉感染的氣流組織結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)內(nèi)部交叉感染可能是人員手臂運(yùn)動(dòng)和下降氣流組織結(jié)構(gòu)的綜合結(jié)果，本公司通過CFD手段研究?jī)?nèi)部交叉感染，揭開了樣本污染的奧秘。并通過數(shù)十萬例現(xiàn)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，證實(shí)了設(shè)計(jì)措施有效。2006年通過德華創(chuàng)生公司血液干細(xì)胞50000例移

11、植實(shí)驗(yàn)操作0感染的記錄；2007年通過寶諾科技（北京）有限公司10000例實(shí)驗(yàn)操作0感染的記錄；2009年通過和記黃埔藥業(yè)公司100000例實(shí)驗(yàn)操作0感染的記錄。  正壓污染區(qū)被負(fù)壓包圍的結(jié)構(gòu)A2型生物安全柜的送風(fēng)靜壓箱內(nèi)空氣為流入與循環(huán)部分氣流的混合體，屬于被污染氣流，該靜壓箱設(shè)計(jì)為負(fù)壓包圍結(jié)構(gòu)。B2型生物安全柜的排風(fēng)為負(fù)壓設(shè)計(jì)，污染氣流直接由負(fù)壓風(fēng)道直接排空。生物安全柜操作區(qū)左右后三側(cè)為雙板型結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)的負(fù)壓污染區(qū)。負(fù)壓結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)的目的是可靠防護(hù)病原氣溶膠逸出。  定向氣流定向氣流是一個(gè)俗稱，技術(shù)術(shù)語稱為“層流”，即單向的氣流。經(jīng)高效空氣過濾器過濾的操作

12、區(qū)垂直下降層流，被用以保護(hù)實(shí)驗(yàn)樣本免遭內(nèi)部交叉感染。因?yàn)?，操作區(qū)回風(fēng)口分布及回風(fēng)負(fù)壓使垂直氣流未到達(dá)操作臺(tái)面已經(jīng)分流，如前后、左右，由氣流漸變線圍成非期望的三角形區(qū)域。三角形區(qū)域內(nèi)覆蓋的工作臺(tái)面氣流流速明顯降低。在人員手臂伸入情況下，受下降氣流撞擊，手臂下部形成氣流漩渦，且漩渦直徑大于手臂直徑并形成連續(xù)狀態(tài)。這就是內(nèi)部交叉感染的動(dòng)態(tài)影響。在交叉污染靜態(tài)試驗(yàn)條件下，由于三角形區(qū)域氣流降低，側(cè)壁細(xì)菌噴射口射出的細(xì)菌輕而易舉地到達(dá)遠(yuǎn)距離培養(yǎng)皿，這種現(xiàn)象用向量函數(shù)可解析（垂直下降流速、細(xì)菌噴口流速、沉降均著落地與噴口距離位置關(guān)系）。這是靜態(tài)試驗(yàn)條件下交叉污染的成因。無論在動(dòng)態(tài)條件下還是在靜態(tài)試驗(yàn)條件下

13、，垂直下降氣流不能側(cè)彎是關(guān)鍵。因?yàn)椋怪狈较蛄康奶岣呤且种茋娍诩?xì)菌前移的關(guān)鍵?；仫L(fēng)負(fù)壓口分布的設(shè)計(jì)在滿足垂直下降氣流不側(cè)彎的前提下，動(dòng)態(tài)時(shí)手臂下方的氣流漩渦沒有生成的條件，也就有效抑制了交叉污染的發(fā)生。該設(shè)計(jì)獲得國(guó)家發(fā)明專利，專利號(hào)：  氣流活塞效應(yīng)結(jié)構(gòu)優(yōu)勢(shì)目前，生物安全柜市場(chǎng)推出的產(chǎn)品款式不外乎前部直立式和前部斜面兩款。斜面式設(shè)計(jì)相對(duì)人機(jī)工程學(xué)原理而言是有益的，可提高人員作業(yè)舒適度。但從生物防護(hù)目的出發(fā)，過渡的斜面結(jié)構(gòu)對(duì)保護(hù)樣本卻有不足之處。前部直立式生物安全柜的送風(fēng)過濾器有效面積比較接近操作區(qū)橫截面積。從理論而言，生物安全柜的設(shè)計(jì)應(yīng)當(dāng)使送風(fēng)過濾器面積與操作區(qū)橫截面積的比

14、值等于1，以使垂直下降氣流完全覆蓋操作區(qū)橫截面，氣流類似活塞沿整個(gè)內(nèi)壁板推進(jìn)，由于不留結(jié)構(gòu)死角且整個(gè)操作臺(tái)面被送風(fēng)氣流覆蓋，氣溶膠沒有上揚(yáng)、殘留的機(jī)率。而斜面設(shè)計(jì)的缺點(diǎn)正相反，送風(fēng)過濾器的寬度比操作臺(tái)面窄，隨設(shè)計(jì)斜率升高而過濾器寬度尺寸降低，于是在前部格柵處氣流降低，甚至出現(xiàn)前部局部區(qū)域無下降氣流。氣流擴(kuò)散能夠彌補(bǔ)這一不足，但最大氣流擴(kuò)散角小于10°。斜面設(shè)計(jì)不利樣本保護(hù)應(yīng)當(dāng)引起足夠重視。獲得國(guó)家發(fā)明專利，專利號(hào)：  微機(jī)控制的氣流恒設(shè)計(jì)長(zhǎng)期運(yùn)行下，生物安全柜高效空氣過濾器表面吸附顆粒不斷堆積，阻抗隨之升高。過濾器阻抗升高演變過程中風(fēng)機(jī)靜壓跟隨升高，但氣流輸出流量

15、卻逐步降低。這種變化直接影響生物安全柜對(duì)人員、樣本的保護(hù)，甚至導(dǎo)致直接的危害。為此，YY05692005生物安全柜標(biāo)準(zhǔn)以及美國(guó)ANSI/NSF49級(jí)（層流）生物安全柜標(biāo)準(zhǔn)都對(duì)風(fēng)機(jī)性能規(guī)定了最低要求。REYA生物安全柜運(yùn)用微機(jī)原理，分別對(duì)生物安全柜的垂直下降氣流送風(fēng)機(jī)和排風(fēng)風(fēng)機(jī)伺服設(shè)計(jì)，它能在氣流下降狀態(tài)下自動(dòng)補(bǔ)償風(fēng)機(jī)流量，且動(dòng)態(tài)范圍大，能在過濾器壽命周期內(nèi)始終保持生物安全柜垂直下降和排風(fēng)的設(shè)計(jì)流速（流量）。以達(dá)到壽命周期氣流穩(wěn)定目的。REYA生物安全柜排風(fēng)風(fēng)機(jī)的另一個(gè)設(shè)計(jì)特點(diǎn)是由主機(jī)直接供電，并彼此控制信號(hào)交換。它無需獨(dú)立供電。排風(fēng)風(fēng)機(jī)與送風(fēng)風(fēng)機(jī)間互鎖控制，當(dāng)排風(fēng)風(fēng)機(jī)故障或流量波動(dòng)大于20%時(shí)

16、，聯(lián)鎖關(guān)閉送風(fēng)風(fēng)機(jī)，以迫使系統(tǒng)不會(huì)正壓導(dǎo)致病原體外逸。  不銹鋼大容量集液槽大量的設(shè)計(jì)案例獲得證實(shí)，集液槽不應(yīng)有污染液體清除或清洗的結(jié)構(gòu)障礙。由于設(shè)計(jì)結(jié)構(gòu)的障礙存在，在用生物安全柜不能獲得有效清洗，實(shí)驗(yàn)中試劑殘留物長(zhǎng)年淤積導(dǎo)致結(jié)構(gòu)涂層起翹、脫落，金屬板材受到嚴(yán)重腐蝕。試劑殘留物持久存在的最大危害是導(dǎo)致微生物繁敷或?qū)嶒?yàn)樣本污染。不銹鋼大容量且無結(jié)構(gòu)障礙的集液槽有效解除了實(shí)驗(yàn)人員的清潔困惑。 生物安全柜應(yīng)用選型生物安全柜應(yīng)用選型選型要素級(jí)生物安全柜用于第一、二、三病原微生物實(shí)驗(yàn)操作時(shí)對(duì)人員的保護(hù)。不保護(hù)實(shí)驗(yàn)樣本。級(jí)生物安全柜作業(yè)樣本的生物危害類別：第一、二、三和四類病

17、原微生物；保護(hù)人員、樣本、環(huán)境；其它，如：是否涉及到揮發(fā)性、放射性核素或化學(xué)品；注：II級(jí)A2型生物安全柜具有部分氣流循環(huán)特點(diǎn)，適用于有微量化學(xué)添加劑的操作場(chǎng)合。注：II級(jí)B2型生物安全柜的氣流100%外排至大氣層，適用于有化學(xué)添加劑的應(yīng)用場(chǎng)合。注：兩種類型生物安全柜都滿足痕量放射性操作場(chǎng)合的使用。 質(zhì)量認(rèn)證生物安全柜應(yīng)用于高風(fēng)險(xiǎn)場(chǎng)合，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局將其列入三類醫(yī)療器械的管理目錄內(nèi)，實(shí)施產(chǎn)品市場(chǎng)準(zhǔn)入制度。按現(xiàn)行國(guó)家法規(guī)規(guī)定，生物安全柜進(jìn)入醫(yī)療臨床應(yīng)用由國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局授權(quán)的檢測(cè)機(jī)構(gòu)按YY0569生物安全柜進(jìn)行注冊(cè)檢驗(yàn)。產(chǎn)品注冊(cè)由注冊(cè)檢驗(yàn)、臨床試驗(yàn)、按ISO13485要求

18、建立的產(chǎn)品質(zhì)量保證體系審核及產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)設(shè)計(jì)報(bào)告共四部分構(gòu)成。批準(zhǔn)注冊(cè)后，由國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局頒發(fā)證書。美國(guó)對(duì)生物安全柜的認(rèn)證由NSF組織實(shí)施，認(rèn)證試驗(yàn)按ANSI/NSF 49Class II (laminar flow) biosafety cabinetry執(zhí)行。歐洲執(zhí)行EN12469標(biāo)準(zhǔn)。中國(guó)醫(yī)療器械行業(yè)強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)YY0569 生物安全柜 與美國(guó)ANSI/NSF 49及歐洲EN12469標(biāo)準(zhǔn)，在生物防護(hù)性能要求部分保持了高度一致，無論技術(shù)要求、試驗(yàn)方法、還是試驗(yàn)結(jié)果的表述，均完全等同。并與美國(guó)ANSI/NSF 49在過濾器掃描撿漏、柜體密封性能、氣流模式、垂直下降氣流

19、流速、流入氣流流速、振動(dòng)幅值、照度等參數(shù)要求保持一致。報(bào)警提示及聯(lián)鎖控制要求也保持了高度一致。但我國(guó)YY0569標(biāo)準(zhǔn)對(duì)結(jié)構(gòu)要求比美國(guó)ANSI/NSF 49標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定得更嚴(yán)格。作為國(guó)家注冊(cè)的三類醫(yī)療器械生物安全柜產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)與美國(guó)同類產(chǎn)品的差異主要是：中國(guó)的電氣安全符合GB4793.1，等效采用國(guó)際電工委員會(huì)IEC10101，而美國(guó)則符合UL標(biāo)準(zhǔn)。 4. 生物安全柜使用、維護(hù)及檢測(cè)生物安全柜放置l       五個(gè)遠(yuǎn)離點(diǎn)（氣流）門；風(fēng)扇；空調(diào)；開著的窗戶；人員活動(dòng)頻繁的區(qū)域。l   

20、    擺放要求穩(wěn)固的平臺(tái)或支架；兩側(cè)、后面和上端留30cm。  生物安全柜的使用要求個(gè)人防護(hù)要求柜內(nèi)物品的擺放紫外燈明火工作前準(zhǔn)備工作中操作及溢出處理工作結(jié)束后處理 個(gè)人防護(hù)要求使用生物安全柜時(shí)必須穿個(gè)人防護(hù)服，戴手套（手套應(yīng)套在隔離衣的外面），最好帶口罩和帽子，根據(jù)需要帶防護(hù)眼罩或者面罩。生物安全柜內(nèi)物品擺放原則按照從潔凈區(qū)到污染區(qū)的方向擺放；所有物品盡可能放在工作臺(tái)后部；將廢棄物袋、盛放廢棄吸管的盤子以及吸濾瓶等體積較大的物品放在柜內(nèi)某一側(cè)；前部流入氣流格柵不能被紙、儀器設(shè)備或者其他物品阻擋。  對(duì)

21、紫外燈的三點(diǎn)要求每周進(jìn)行清潔，除去可能影響殺菌效果的灰塵和污垢；每次生物安全柜的認(rèn)證，要檢查紫外線強(qiáng)度，以確保有適當(dāng)?shù)墓獍l(fā)射量；房間中有人時(shí)一定要關(guān)閉紫外燈，以保護(hù)眼睛和皮膚，避免因不慎暴露而造成傷害；避免使用明火，因?yàn)椋好骰鹂稍斐缮锇踩竦臍饬魑蓙y，干擾氣流模式；可損壞HEPA過濾器；處理?yè)]發(fā)性物品和易燃物品時(shí)易造成危險(xiǎn)。 工作前需要準(zhǔn)備的內(nèi)容首先紫外燈照射30分鐘；關(guān)紫外燈，打開安全柜的日光燈和風(fēng)機(jī)，用消毒劑對(duì)生物安全柜的內(nèi)表面進(jìn)行消毒擦拭；將實(shí)驗(yàn)中需要用到的物品集中用消毒劑擦拭后放在臺(tái)面相應(yīng)位置上（切記勿阻擋風(fēng)口！）；等待5min，凈化工作區(qū)的空氣污染物。 工作時(shí)操

22、作規(guī)范雙臂垂直緩慢進(jìn)入前面的開口，在生物安全柜中等待大約一分鐘，以使安全柜調(diào)整完畢后才可對(duì)物品進(jìn)行處理；所有操作應(yīng)在離前窗10cm以外的工作區(qū)進(jìn)行；廢棄物應(yīng)丟棄在生物安全柜內(nèi)的處理容器中。 操作時(shí)注意事項(xiàng)避免胳膊在前開口處快速移動(dòng)和頻繁進(jìn)出。盡量避免污染的物品進(jìn)入潔凈區(qū)。在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行操作時(shí)，不能進(jìn)行文字工作。盡量減少操作者身后的人員活動(dòng)。 溢出處理 按GB194892007實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求中生物安全柜內(nèi)溢出時(shí)的處理方法執(zhí)行：滴狀溢出或體積不足1 mL 的，可簡(jiǎn)單地用消毒劑擦洗。大量溢出時(shí)的特殊處理：使生物安全柜保持開啟狀態(tài)；在溢出物上覆蓋浸有

23、消毒劑的吸水材料，作用大約10分鐘，以發(fā)揮消毒作用。在安全柜內(nèi)對(duì)污染的手套消毒后，脫下手套。如果衣服已經(jīng)污染，也要先脫下消毒。穿戴干凈的手套和衣服作如下進(jìn)一步的清潔工作。用消毒劑噴灑或擦拭安全柜內(nèi)壁、工作表面以及透視窗的內(nèi)側(cè)。作用20 min后，擦干消毒劑并將擦拭物置于生物危害袋中。如果溢出情況需要浸泡接液槽，則不得現(xiàn)場(chǎng)清理接液槽。應(yīng)報(bào)告實(shí)驗(yàn)室主管后采用適當(dāng)?shù)臍怏w消毒方式。將所有清理用物品以及防護(hù)服進(jìn)行高壓消毒。用消毒肥皂和水洗手和暴露皮膚。立即通知實(shí)驗(yàn)室主管。如果溢出物流入安全柜內(nèi)，可能需要對(duì)安全柜進(jìn)行更為廣泛的消毒處理。工作結(jié)束后的要求將安全柜繼續(xù)運(yùn)行至少3min完成“凈化”過程。將柜內(nèi)物

24、品移出前，應(yīng)使用有效的消毒劑擦拭每天實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)生物安全柜的內(nèi)壁和臺(tái)面進(jìn)行擦拭。等待5分鐘后，關(guān)閉前窗，關(guān)燈，關(guān)風(fēng)機(jī)，紫外燈照射30分鐘。生物安全柜的維護(hù)生物安全柜的維護(hù)保持生物安全柜表面清潔和無污染狀態(tài)用70%酒精或者合適的消毒劑擦拭內(nèi)壁和工作臺(tái)面；如果使用漂白劑等腐蝕性消毒劑后，需要用無菌水再次進(jìn)行擦拭除去殘余的消毒劑；定期抬起工作臺(tái)面對(duì)其下面的區(qū)域進(jìn)行清潔；消毒后，用玻璃清潔器對(duì)前窗玻璃和紫外燈進(jìn)行清潔。 定期保養(yǎng)用濕布擦拭內(nèi)壁和工作臺(tái)面；每年按需要更換紫外燈和日光燈；每年至少認(rèn)證一次    醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室安全要求  &

25、#160; YY0569-2005  生物安全柜    實(shí)驗(yàn)室生物安全手冊(cè)（第三版，2004） 生物安全柜的污染清除甲醛、過氧化氫熏蒸等應(yīng)由有資質(zhì)的專業(yè)人員來進(jìn)行。在以下情況下需要進(jìn)行熏蒸：     在檢查和維修之前；     在更換HEPA濾器之前；     在移動(dòng)安全柜之前；     安全柜被嚴(yán)重地污染； 

26、;    變換使用目的；     長(zhǎng)時(shí)間未用；     需要熏蒸的其它時(shí)間。 甲醛熏蒸步驟之一-準(zhǔn)備電爐兩個(gè)；福爾馬林；氨水；100mL燒杯4個(gè)；膠帶；透明塑料薄膜、75%酒精等。使用75%酒精對(duì)生物安全柜內(nèi)、外表面進(jìn)行消毒清潔；將生物安全柜和放置在同一房間內(nèi)的冰箱、CO2培養(yǎng)箱等儀器用膠帶紙進(jìn)行密封處理。甲醛熏蒸步驟之二-熏蒸將電爐放在生物安全柜中，連接電源；用兩個(gè)燒杯分取福爾馬林20mL、水50mL，置電爐上；關(guān)閉透視窗，用膠帶封嚴(yán)窗門；開啟

27、電源，水和福爾馬林同時(shí)被加熱，待福爾馬林揮發(fā)完畢時(shí)，關(guān)閉電源, 保持密閉狀態(tài)，過夜。甲醛熏蒸步驟之三-中和取氨水36mL、水50mL，分放于2個(gè)燒杯中，置電爐上；再次將生物安全柜門密封；開啟電源，待氨水揮發(fā)完后，關(guān)閉電源；密閉過夜。 生物安全柜的檢測(cè)生物安全柜檢測(cè)的情況發(fā)生在：最初的購(gòu)買安裝完畢；年檢；移動(dòng)；修理。 生物安全柜的檢測(cè)應(yīng)由有資質(zhì)的單位實(shí)施在美國(guó)必須有美國(guó)NSF授權(quán)的單位。沒有NSF授權(quán)，也得有以下經(jīng)歷：有過檢測(cè)經(jīng)驗(yàn)；參加過技術(shù)課程或者廠商培訓(xùn)會(huì)；檢測(cè)設(shè)備擁有校準(zhǔn)證書。我國(guó)有檢測(cè)資質(zhì)的單位：國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局授權(quán)的醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心。

28、0;安全柜防護(hù)效果的評(píng)估涉及到以下內(nèi)容     安全柜的完整性；     人員、產(chǎn)品及交叉污染保護(hù)；     HEPA過濾器的泄漏；     垂直下降氣流平均流速；     前部工作窗口流入氣流流速；     壓差（級(jí)）；      

29、60;     負(fù)壓換氣次數(shù)；     氣流的煙霧模式；            警報(bào)和互鎖系統(tǒng)；     電氣安全；                  

30、; 還包括紫外線強(qiáng)度、光照度、噪聲、振動(dòng)、集液槽泄漏、柜體穩(wěn)定性（包括柜體抗翻倒、柜體抗變形、工作臺(tái)面抗變形、柜體抗向前傾倒）、溫升、電機(jī)與風(fēng)機(jī)等性能的測(cè)試。 搬動(dòng)生物安全柜比較高大，把它搬進(jìn)室內(nèi)需要沿途足夠?qū)挸?。搬?dòng)過程中不準(zhǔn)許橫倒放置，更不準(zhǔn)許拆卸，最好等搬入實(shí)驗(yàn)室后再拆開包裝箱。生物安全柜的使用生物安全柜的使用正常使用為維持生物安全柜對(duì)柜的正常運(yùn)行，必須定期檢查高效空氣過濾器是否有堵塞、泄漏等情況，風(fēng)量及其平衡情況，以及聯(lián)鎖控制、報(bào)警裝置的完好性。為對(duì)柜內(nèi)的污染充分稀釋，并保持下次正常運(yùn)行，操作完畢后至少應(yīng)空轉(zhuǎn)10min。基于使用安全目的，前部開口高度不能超過額定值，

31、不能隨意改變其面積和形狀。應(yīng)特別注意使手、材料、器具等通過前部開口部位的次數(shù)最少，在操作開始前就把必要的器具和材料放到適當(dāng)?shù)奈恢蒙稀？刂破叫杏陂_口部位的室內(nèi)風(fēng)速很重要，如果超過開口部位平均風(fēng)速將影響生物安全柜回風(fēng)能力，使前窗開口處的隔離效果很快下降，手背能感覺的風(fēng)速通常已有0.5m/s，而人步行導(dǎo)致的風(fēng)速很容易達(dá)到m/s，所以應(yīng)特別控制人員走動(dòng)引起的干擾氣流。吸附墊在操作臺(tái)面放一層貼有吸附材料的塑料薄膜，每日更換，可使操作臺(tái)面的污染減少到最低限度?；厥杖萜髟诎踩駜?nèi)應(yīng)配置回收污染物質(zhì)的容器。其中吸球（即吸管）用的容器23個(gè)，污染的玻璃器具和廢棄物等用的容器至少45個(gè)。容器中必須盛足消毒液，如：

32、有效含量為500ppm以上的雅妍酸鈉，把污染物質(zhì)完全浸沒。這些回收容器至少每天操作完畢后蓋好以防污染。再用時(shí)應(yīng)重新清洗容器或者用新的容器。柜內(nèi)實(shí)驗(yàn)器材和材料的取出凡廢棄的污染性材料、使用過的包裝材料、容器、紙張等廢棄物統(tǒng)統(tǒng)收裝好或者經(jīng)高壓滅菌器滅菌后拿到緩沖區(qū)。在實(shí)驗(yàn)中或完畢后，必須從生物安全柜內(nèi)取出非活滅的病原體時(shí)，應(yīng)裝好放在藥液槽中，使容器外側(cè)被消毒后取出，消毒液種類因病原體不同而異。高效過濾器更換1）  高效過濾器更換前，一定要將柜內(nèi)表面及原高效過濾器采用甲醛滅菌。2）  過濾器更換時(shí)，讓使用的試驗(yàn)人員在場(chǎng)，以便詢問實(shí)驗(yàn)時(shí)使用的細(xì)菌。3） 

33、; 手和身體有外傷者不得進(jìn)行操作，操作人員一定要戴防毒面具和橡膠手套。4）    取出的過濾器應(yīng)立即密封放入塑料袋內(nèi)，再放入紙箱內(nèi)，使用過的面具、手套也同樣處理，然后一起燒毀。5）  安裝新過濾器時(shí)，不要隨便將頭和身體伸到柜內(nèi)，并高度謹(jǐn)慎操作。瓶蓋在生物安全柜內(nèi)使用的瓶子不用橡膠塞，而應(yīng)使用螺旋蓋，開啟時(shí)可減少氣溶膠的發(fā)生。消毒火焰用火焰消毒是古典的微生物學(xué)方法，但是會(huì)產(chǎn)生氣溶膠，并使柜內(nèi)氣流紊亂，應(yīng)盡量不使用，而可以用最近研制成功的小型電加熱器、無焰管口加熱器進(jìn)行消毒。在不得已使用火焰消毒時(shí)，美國(guó)建議在安全柜內(nèi)用手動(dòng)燈頭，

34、日本建議用腳踏式燈頭，首先用小火點(diǎn)燃，然后在腳下將腳蹬開關(guān)一踏，主要火焰就被點(diǎn)著。腳蹬開關(guān)一旦停止踏時(shí)，主要火焰立即熄滅，并且采用不開通風(fēng)機(jī)則不點(diǎn)火的聯(lián)鎖氣閘方式，因而也比較安全。溢出處理    GB194892007實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求對(duì)生物安全柜內(nèi)溢出時(shí)的處理給出了方法：滴狀溢出或體積不足1 mL 的，可簡(jiǎn)單地用消毒劑擦洗。大量溢出，則要做特殊的處理1） 使生物安全柜保持開啟狀態(tài)。2） 在溢出物上覆蓋浸有消毒劑的吸水材料，作用大約10分鐘以發(fā)揮消毒作用。3） 在安全柜內(nèi)對(duì)污染的手套消毒后，脫下手套。如果衣服已經(jīng)污染，也要先脫下消毒。穿戴干

35、凈的手套和衣服作如下進(jìn)一步的清潔工作。4） 用消毒劑噴灑或擦拭安全柜內(nèi)壁、工作表面以及前視窗的內(nèi)側(cè)。作用20 min后，擦干消毒劑并將擦拭物置于生物危害袋中。5) 如果溢出情況需要浸泡接液槽，則不得現(xiàn)場(chǎng)清理接液槽。應(yīng)報(bào)告實(shí)驗(yàn)室主管后采用適當(dāng)?shù)臍怏w消毒方式。6）將所有清理用物品以及防護(hù)服進(jìn)行高壓消毒。用消毒肥皂和水洗手和暴露皮膚。7） 立即通知實(shí)驗(yàn)室主管。如果溢出物流入安全柜內(nèi)，可能需要對(duì)安全柜進(jìn)行更為廣泛的消毒處理。 工作結(jié)束后的要求將安全柜繼續(xù)運(yùn)行至少3min來完成“凈化”過程。將柜內(nèi)物品移出前，應(yīng)使用有效的消毒劑擦拭每天實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)生物安全柜的內(nèi)壁和臺(tái)面進(jìn)行擦拭。等待5分鐘后，

36、關(guān)閉前窗，關(guān)燈，關(guān)風(fēng)機(jī)，紫外燈照射30分鐘。 生物安全柜的現(xiàn)場(chǎng)檢查現(xiàn)場(chǎng)檢驗(yàn)的時(shí)間在以下時(shí)間需要對(duì)在用生物安全柜進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢查。1）  安裝之后或初次使用之前；2）  移動(dòng)后，包括在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)移動(dòng)；3）  定期檢查，至少每年1次或2次；4）  更換高效空氣過濾器后；5）  高濃度的病原體實(shí)驗(yàn)完畢，這些實(shí)驗(yàn)材料被大量散落時(shí)；6）  中途變更實(shí)驗(yàn)時(shí)；7）  實(shí)驗(yàn)中斷后又長(zhǎng)時(shí)間不使用時(shí)；8）  其它必要時(shí)候。 現(xiàn)場(chǎng)檢查的內(nèi)容1）

37、  氣密性；2）  高效空氣過濾器完整性；3）  垂直下將其溜溜平均流速及其均勻性；4）  前部流入氣流平均流速及其均勻性；5）  氣流模式；6）  振動(dòng)；7）  接地電阻；8）  噪聲；9）  照度；10）              紫外線強(qiáng)度（操作臺(tái)面40w/cm2以上；11

38、）              生物安全性能；12）              風(fēng)機(jī)性能。上述各項(xiàng)檢查中的15為必須檢查項(xiàng)目，根據(jù)美國(guó)的經(jīng)驗(yàn)，沒有實(shí)行這種檢查時(shí)，常有60%的生物安全柜發(fā)生問題。實(shí)行檢查后，仍然可檢出10%20%的生物安全柜不合格。 清掃和滅菌內(nèi)部清掃生物安全柜內(nèi)部清掃是使用環(huán)節(jié)的重要工作之一。

39、每天作業(yè)完成后，吸附墊、移管、回收容器等物件都要拿到安全柜外面去，柜內(nèi)應(yīng)為全空狀態(tài)。然后對(duì)操作臺(tái)內(nèi)表面用加入含碘界面活性劑的消毒劑檫拭。用于檫拭過的物料要作為污染廢棄物處理，安滅菌燈的生物安全柜不要在柜內(nèi)形成陰影，因?yàn)樽贤饩€照射不到的陰影區(qū)沒有殺菌效果。甲醛氣體的熏蒸消毒針對(duì)生物安全柜自身污染消毒時(shí)，一般采用甲醛氣體熏蒸。將生物安全柜密閉起來，日、美標(biāo)準(zhǔn)建議用10000ppm的甲醛氣體熏悶2小時(shí)，英國(guó)標(biāo)準(zhǔn)給出的甲醛濃度只有500ppm，相差如此懸殊的原因還不太明確。但有一點(diǎn)是清楚的，就是采用過多的甲醛會(huì)因聚合而析出白色粉末附著在裝置內(nèi)表面，對(duì)滅菌后實(shí)驗(yàn)研究帶來不良影響。當(dāng)相對(duì)濕度在65%以上，

40、溫度在2440時(shí)，甲醛氣體消毒的效果最好。當(dāng)生物安全柜內(nèi)沒有吸濕物質(zhì)時(shí)，最大必要水量約為20gm3。干燥時(shí)，甲醛在濃度為7.75%時(shí)爆炸，著火點(diǎn)為430。由于甲醛的環(huán)境標(biāo)準(zhǔn)只有12ppm，所以即使稍有泄漏也會(huì)超過標(biāo)準(zhǔn)值很多，故應(yīng)絕對(duì)重視，采取措施。具體做法：1）  計(jì)算生物安全柜的容積，按10gm3的比例稱出仲甲醛。2）  在臺(tái)面放好加熱盤或燒杯，盛入仲甲醛，然后放好加濕用水及其熱源，并放置好溫度計(jì)。3）  把生物安全柜的前部開口和排風(fēng)口用嚴(yán)實(shí)的蓋板堵好，在蓋板周邊最好貼上寬50mm左右的橡膠條。4）  從外面對(duì)加

41、熱與加濕用熱源進(jìn)行控制，并具有防止溫度過高的控制，隨時(shí)觀察溫度計(jì)。5）  當(dāng)仲甲醛分解掉50%及全部分解完后，為使氣體擴(kuò)散到各個(gè)角落，各開動(dòng)柜內(nèi)風(fēng)機(jī)35s。6）  當(dāng)?shù)诙伍_過風(fēng)機(jī)之后切斷加熱電源，最少薰悶2小時(shí)。推薦的薰悶時(shí)間為一晚上。7）  然后打開排風(fēng)口，開送風(fēng)機(jī)，最后打開前部開口，取出滅菌器材。8）  熏蒸后的生物安全柜應(yīng)空運(yùn)行24小時(shí)之后再使用。生物安全柜的檢測(cè)柜體泄漏測(cè)試目的測(cè)試安全柜柜體的防泄漏性能。儀器使用的主要儀器有：a) 壓力計(jì)，最小量程為-600P a,精確士5P a；b) 

42、;肥皂溶液，由25g /L的軟肥皂的微溫蒸餾水溶液組成。壓力衰減法壓力衰減法的步驟為：a) 封好安全柜的前窗和排氣孔，使安全柜成為一密封系統(tǒng)；b) 必要時(shí)，移開裝飾嵌板和通道上的其他障礙物，將要測(cè)試的壓力通風(fēng)系統(tǒng)露出來；c) 在測(cè)試區(qū)連接壓力計(jì)或壓力傳感器系統(tǒng)以顯示內(nèi)壓；d) 給安全柜增壓到500P a，封閉加壓空氣，30m in后測(cè)定壓力。允許初始?jí)毫ο陆?0%肥皂泡法肥皂泡法的步驟為:a) 封好安全柜的前窗和排氣孔，使安全柜成為一密封系統(tǒng)；b) 必要時(shí)，移開裝飾嵌板和通道上的其他障礙物，將要測(cè)試的壓力通風(fēng)系統(tǒng)露

43、出來；c) 在測(cè)試區(qū)連接壓力計(jì)顯示內(nèi)壓；d) 對(duì)安全柜用空氣增壓，使其壓力持續(xù)實(shí)測(cè)值為500P a士10%；e) 沿安全柜壓力通風(fēng)系統(tǒng)所有焊縫、襯墊、套接處和封口處的外表面噴或涂刷檢漏肥皂溶液，小的泄漏會(huì)出現(xiàn)氣泡，如果從孔中吹出檢測(cè)液體而未形成泡，則可能發(fā)生大的泄漏，可通過輕微的氣流感覺和聲音來發(fā)現(xiàn)。高效過濾器完整性目的測(cè)定安全柜過濾器安裝結(jié)構(gòu)(包括下降氣流高效過濾器、排氣高效過濾器、過濾器外罩和框架)的完整性。試劑鄰苯二甲酸二辛醋(DOP)或與之相當(dāng)?shù)囊后w即可以產(chǎn)生與DOP氣溶膠顆粒尺寸分布相同氣溶膠顆粒的液體，例如:聚一烯烴(PAO) ,癸二酸二(2一乙基己)

44、酉旨、聚乙二醇以及藥物級(jí)的輕礦物油。儀器線性或?qū)?shù)刻度的氣溶膠光度計(jì)，可以將過濾器上游氣流中濃度為10I g/L DOP(或相當(dāng)液體 )多分散氣溶膠微粒標(biāo)示為100%,能檢測(cè)0.0 01%同一氣溶膠微粒。光度計(jì)應(yīng)按其生產(chǎn)商的使用說明進(jìn)行校準(zhǔn)；將氣溶膠發(fā)生器，壓力調(diào)至最小140k Pa，使用DOP或與之相當(dāng)?shù)囊后w發(fā)生氣溶膠。發(fā)生器噴嘴浸人液體的深度應(yīng)不超過25m m。氣溶膠發(fā)生器的壓力計(jì)最大量程為550k Pa，分辨率和精確度為7 k Pa。發(fā)生器壓力計(jì)由生產(chǎn)廠家校準(zhǔn)或按照廠家的使用說明校準(zhǔn)。方法可以掃描檢測(cè)的過濾器掃描檢測(cè)過濾器的檢測(cè)按下列步驟進(jìn)行：a) 運(yùn)行安全

45、柜的風(fēng)機(jī)和燈，去掉過濾器的散流裝置和保護(hù)蓋(如果有)。安放氣溶膠發(fā)生器，將氣溶膠導(dǎo)人安全柜，按廠商的說明，產(chǎn)生均勻分布的高效過濾器上游氣流。廠商未規(guī)定氣溶膠的導(dǎo)人位置時(shí)，導(dǎo)人氣溶膠的方式應(yīng)確保其在安全柜的氣流中均勻分布；b) 打開氣溶膠光度計(jì)，按廠商使用說明進(jìn)行調(diào)整；c) 對(duì)含有氣溶膠的高效過濾器上游氣流進(jìn)行測(cè)試，證實(shí)該濃度氣溶膠的光散射強(qiáng)度至少應(yīng)等于由10 u g /L D OP 產(chǎn) 生的光散射強(qiáng)度；如果是線性刻度的光度計(jì)，將讀數(shù)調(diào)整為100；如果是對(duì)數(shù)刻度的光度計(jì)，將上游氣流濃度的讀數(shù)調(diào)整在一個(gè)分度對(duì)應(yīng)濃度的1x10以上；d) 光度計(jì)探頭在過濾器下游

46、距過濾器表面不超過25m m,以小于50m m/s的掃描速率移動(dòng)，使探頭掃測(cè)過濾器的整個(gè)下游一側(cè)和每個(gè)組合過濾片的邊緣，掃測(cè)路線應(yīng)略微重疊。圍繞整個(gè)過濾器外圍、沿組合過濾片和框架的連接處以及圍繞過濾器和其他部件之間的密封處仔細(xì)檢查。不能掃描檢測(cè)的過濾器對(duì)于經(jīng)管道排氣的安全柜，不能進(jìn)行排氣過濾器的掃描檢測(cè)，過濾器下游氣流中氣溶膠濃度的檢測(cè)是在下游氣流的管道上鉆一直徑大約10 mm的孔，將帶有硬管光度計(jì)探針播人孔中進(jìn)行檢測(cè)。生物安全柜測(cè)試噪聲 目的 測(cè)試安全柜在其氣流流速在標(biāo)稱值士0.0 15m /s范圍內(nèi)運(yùn)行時(shí)的噪聲。測(cè)試可以在普通聲學(xué)條件的房間中進(jìn)行，房

47、間墻壁既不吸收又不完全反射聲音。 儀器 聲級(jí)計(jì)，測(cè)量范圍50d B-100d B,精確度為士1d B，分辨率為1d B，有“A”計(jì)權(quán)模式。 方法 噪聲測(cè)試按下列步驟進(jìn)行： a) 將聲級(jí)計(jì)設(shè)置為“A”計(jì)權(quán)模式；b) 打開安全柜的風(fēng)機(jī)和照明燈，在安全柜前面中心水平向外300m m、工作臺(tái)面上方380m m處測(cè)量噪聲(見圖1)；c) 關(guān)閉安全柜的風(fēng)機(jī)和照明燈，如果有室外排氣風(fēng)機(jī)，讓其繼續(xù)運(yùn)行，在相同位置測(cè)量背景噪聲；d) 當(dāng)背景噪聲大于57d B時(shí)，實(shí)測(cè)值參照儀器操作手冊(cè)提供的曲線或表進(jìn)行修

48、正，如果不適用，則用標(biāo)準(zhǔn)校正曲線或表1進(jìn)行修正。 圖 1 噪聲測(cè)試  測(cè)量總噪聲和背景嗓聲的差值/ d B從測(cè)量總噪聲中減去的數(shù)0- 2背景 噪聲值334-526- 1 01> 100 表1 噪聲測(cè)f值修正表 照度目的本試驗(yàn)是測(cè)試安全柜工作臺(tái)面的照度。儀器照度計(jì)，精確度士10%，應(yīng)能滿1000 l x以下照度的測(cè)量，并按廠商使用說明進(jìn)行校準(zhǔn)。方法照度測(cè)試按下列步驟進(jìn)行：a) 在工作臺(tái)面上，沿工作臺(tái)面兩內(nèi)側(cè)壁中心連線設(shè)置照度測(cè)量點(diǎn)，測(cè)量點(diǎn)之間的距離不超過300mm，與側(cè)壁最小距離為150m&

49、#160;m(見圖2)；b) 關(guān)掉安全柜的燈，從一側(cè)起依次在測(cè)量點(diǎn)進(jìn)行背景照度測(cè)量。平均背景照度應(yīng)在110 lx±50 lx；打開安全柜的燈，啟動(dòng)安全的風(fēng)機(jī)，從一側(cè)起依次在測(cè)量點(diǎn)進(jìn)行安全柜的照度測(cè)量。c) 打開安全柜的燈，啟動(dòng)安全的風(fēng)機(jī)，從一側(cè)起依次在測(cè)量點(diǎn)進(jìn)行安全柜的照度測(cè)量。   圖 2 照度 測(cè) 試   振動(dòng)目的測(cè)試安全柜氣流流速在標(biāo)稱值士0.015m /s范圍內(nèi)運(yùn)行時(shí)的振動(dòng)。儀器振動(dòng)儀，最小可靠讀數(shù)為2.5 m(rms)振幅，儀器的校準(zhǔn)按廠商說明書進(jìn)行。方法

50、a) 用夾鉗、螺釘、帶有凡士林凝膠薄膜的磁鐵或雙面膠帶將振動(dòng)儀的傳感元件固定到工作臺(tái)面的幾何中心(見圖3)；b) 測(cè)定安全柜正常工作時(shí)的總振動(dòng)振幅；c) 關(guān)閉安全柜的風(fēng)機(jī)(如果有室外風(fēng)機(jī)，室外風(fēng)機(jī)工作)，測(cè)定背景振動(dòng)振幅；d) 從總振動(dòng)強(qiáng)度中減去背景振動(dòng)振幅，為安全柜的凈振動(dòng)振幅。  圖3 振動(dòng)測(cè)試  人員、產(chǎn)品和交叉污染保護(hù)目的這些測(cè)試確定氣溶膠是否保留在安全柜內(nèi)、外部的污染物是否未進(jìn)人安全柜的工作區(qū)域，以及安全柜中裝置之間的氣溶膠污染是否減到最小。安全柜以測(cè)試時(shí)要求的氣流流速運(yùn)行。在試驗(yàn)開始前安全柜啟

51、動(dòng)并運(yùn)行至少30 min，并連續(xù)運(yùn)行至所有測(cè)試完成。材料和儀器材料按YY0569中附錄C制備的枯草芽胞桿菌黑色變種芽抱懸浮液和無菌稀釋液。儀器人員、產(chǎn)品和交叉污染保護(hù)試驗(yàn)中主要使用以下儀器：a) 培養(yǎng)皿(100mm×15mm或150mm×22mm)，含營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、胰蛋白膝大豆瓊脂培養(yǎng)基或其他無抑制劑和添加劑的培養(yǎng)基。營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基配方：蛋白胨10g，牛肉膏5g ，氛化鈉5g ，瓊脂15g ,蒸餾水1L ,除瓊脂外其他成分溶解于蒸餾水中，pH值調(diào)至7.2-7.4，加人瓊脂，加熱溶解，分裝，于121壓力蒸汽滅菌20min備用

52、。胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基配方：胰蛋白胨 1.5 %，大豆蛋白胨0.5%，氯化鈉0.5%，瓊脂1.6%；用蒸餾水配制而成，pH值調(diào)節(jié)為7.2±0.2，經(jīng)121 高壓蒸汽滅菌后備用。b) 撞擊采樣器，采樣流量在12.3L /min-12.6L /min之間，盛有20m L無菌稀釋劑；c) 狹縫采樣器，采樣流量為28L /min±1.4L /min；d) 噴霧器，符合下列要求：1) 能在5min內(nèi)釋放出1×108-8×108個(gè)枯草芽抱桿菌芽胞；2) 能釋放出94

53、%±6%的單細(xì)胞芽胞；3) 氣溶膠噴射速率為0.50m /s±0.05m /s；噴霧器的校驗(yàn)按YY0569中附錄D進(jìn)行。e) 干擾圓筒，以下稱圓筒，為一外徑63m m兩端封閉的圓筒，長(zhǎng)度由安全柜前后尺寸決定，材質(zhì)為不銹鋼或鋁。圓筒用于模擬手臂對(duì)安全柜氣流的干擾。人員保護(hù)概述人員保護(hù)測(cè)試用微生物法或碘化鉀法，仲裁時(shí)用微生物法。微生物法人員保護(hù)試驗(yàn)的微生物法步驟為：a) 安全柜的氣流流速設(shè)置為標(biāo)稱值；b) 噴霧器盛有55mL濃度為5×108mL-8×108/mL芽抱懸浮液。噴霧器位于安全柜

54、內(nèi)兩側(cè)壁之間，噴霧器噴嘴的軸線在工作臺(tái)面上方360 mm處，噴嘴前端在前窗操作口內(nèi)100 mm處，噴射方向平行于工作臺(tái)面且正對(duì)前窗操作口(見圖4)；c) 圓筒固定在安全柜工作臺(tái)面上中心位置，一端貼著安全柜的后壁，另一端從安全柜的前窗操作口伸出安全柜至少150mm。圓筒軸線距工作臺(tái)面70mm(見圖5)；6個(gè)撞擊采樣器呈左右對(duì)稱放置在安全柜前，采樣口正對(duì)安全柜。其中2個(gè)撞擊采樣器的采樣口軸線相距150mm，與圓筒上沿平齊，采樣口前端距安全柜63mm；2個(gè)撞擊采樣器采樣口軸線相離50mm，位于距圓筒下沿30mm的水平面上，采樣口前端距安全柜63 mm；2個(gè)撞擊采樣器的采樣口水平面在工作臺(tái)面

55、上方360mm處，采樣口前端距安全柜50mm，采樣口軸線距安全柜中線150mm(見圖6、圖7) ；一個(gè)陽性對(duì)照瓊脂培養(yǎng)皿放在圓筒下，位于前窗進(jìn)氣格柵上方或下方10mm，使其對(duì)進(jìn)氣氣流的干擾最小(見圖5)； 圖4 人員保護(hù)試驗(yàn) 圖 5 人 員 保 護(hù) 試 驗(yàn) d) 2個(gè)狹縫采樣器的采樣口平面與安全柜工作臺(tái)面平齊，采樣口的垂直軸線在安全柜前方150mm處，各距內(nèi)側(cè)壁200 mm(見圖7)；e) 測(cè)試持續(xù)30 min，順序如表2所示；f)用一直徑47 mm的孔徑。22 um濾膜過濾所有撞擊采樣器的采樣液體，于無菌條件下取

56、出濾膜，置于合適的培養(yǎng)基上。有濾膜的培養(yǎng)皿、對(duì)照培養(yǎng)皿和狹縫采樣器的培養(yǎng)旺在37培養(yǎng)。當(dāng)培養(yǎng)到24 h-28 h時(shí)檢查計(jì)數(shù)。若呈陰性，繼續(xù)培養(yǎng)至總培養(yǎng)時(shí)間達(dá)44 h-48 h時(shí)檢查計(jì)數(shù)；g) 新型和重大改型設(shè)計(jì)的安全柜，將流人氣流的流速設(shè)置為低于標(biāo)稱值0. 050 m/s±0.0 15m /s，下降氣流的流速設(shè)置為高于標(biāo)稱值0.050m /s±0.0 15m /s (應(yīng)拆除對(duì)安全柜運(yùn)行不必要的可拆卸設(shè)備，以便設(shè)置下降氣流流速)，重復(fù)上述試驗(yàn)步驟；h) 新型和重大改型設(shè)計(jì)的安全柜，將流人氣流和下降氣流的流速設(shè)置為低于標(biāo)稱值0. 050 m/s&#

57、177;0.015 m/s (應(yīng)拆除對(duì)安全柜運(yùn)行不必要的可拆卸設(shè)備，以便設(shè)置下降氣流流速)，重復(fù)上述試驗(yàn)步驟。 圖6 人員保護(hù)試驗(yàn)  圖7 人員保護(hù)試驗(yàn)表2 人員保護(hù)試驗(yàn)操作順序時(shí)間/ mi n試驗(yàn)操作0啟動(dòng)狹縫采樣器s啟動(dòng)噴霧器e啟動(dòng)撞擊采樣器11停止撞擊采樣器11 .5停止噴霧器30停止狹縫采樣器 碘化鉀法氣流流速與微生物試驗(yàn)相同，按YY0569中附錄E試驗(yàn)。 生物安全柜的產(chǎn)品保護(hù)產(chǎn)品保護(hù) 方法 產(chǎn)品保護(hù)試驗(yàn)的微生物法按以下步驟進(jìn)行： a) 安全柜的氣流流速設(shè)置為其標(biāo)稱值

58、； b) 在安全柜的工作臺(tái)面上排滿敞開的瓊脂培養(yǎng)皿(見圖8)；  圖 8 產(chǎn)品 保 護(hù) 試 驗(yàn)  c) 圓筒固定在安全柜工作臺(tái)面上的中心區(qū)，一端貼住工作區(qū)的后壁，另一端從前窗操作口伸出安全柜至少150 mm，圓筒的軸線高于工作臺(tái)面70 mm(見圖9) ;d) 將盛有55m L濃度為5X 1 06/m L-8X l Os /m L芽抱懸浮液的噴霧器放在安全柜外，噴霧器噴射軸在安全柜中心并與前窗操作口上沿平齊，噴霧器的噴嘴前端位于前窗操作口外100 mm，噴霧方向平行于工作臺(tái)面，正對(duì)前窗操

59、作口(見圖9)； e) 一個(gè)陽性對(duì)照瓊脂培養(yǎng)皿放在圓筒下，并位于前窗進(jìn)氣格柵上方或下方10 mm，使其對(duì)進(jìn)氣氣流的干擾最小(見圖9)；f) 啟動(dòng)噴霧器，運(yùn)行5 min后關(guān)閉。噴霧器關(guān)閉5 min后蓋上瓊脂培養(yǎng)皿的蓋子；g) 將培養(yǎng)皿在37.0培養(yǎng)。當(dāng)培養(yǎng)到24 h-28 h時(shí)檢查計(jì)數(shù)。如果呈陰性，繼續(xù)培養(yǎng)至總培養(yǎng)時(shí)間達(dá)44 h-48 h時(shí)檢查計(jì)數(shù)；h) 對(duì)于新型和重大改型設(shè)計(jì)的安全柜，將流人氣流的流速設(shè)置為高于標(biāo)稱值0.050 m/s±0.015m /s，將下降氣流的流速設(shè)置為低于標(biāo)稱值0.050m /s±

60、;0.015m /s(應(yīng)拆除對(duì)安全柜運(yùn)行不必要的可拆卸設(shè)備，以便設(shè)置下降氣流流速)，重復(fù)上述試驗(yàn)步驟。 圖 9 產(chǎn) 品 保 護(hù) 試 驗(yàn) 交叉污染保護(hù)方法a) 安全柜的氣流流速設(shè)置為其標(biāo)稱值；b) 將盛有55ml濃度為5×108/mL-8×108/mL的芽抱懸浮液的噴霧器置于安全柜內(nèi)，緊靠左側(cè)內(nèi)壁的中心，噴霧器噴射軸線在工作臺(tái)面上76mm-130mm處，噴射方向平行于工作臺(tái)面正對(duì) 面的側(cè)壁(見圖10)；c) 按下列方式，將敞開的瓊脂培養(yǎng)皿從前至后排列在工作臺(tái)面上(見圖10)：1) 兩排對(duì)

61、照培養(yǎng)皿位于噴霧器噴嘴下方；2) 距噴霧器所在側(cè)壁360mm處放一排培養(yǎng)皿；3) 距噴霧器所在側(cè)壁360mm外放一排培養(yǎng)皿，如果空間允許則放兩排；d) 啟動(dòng)噴霧器，5min后關(guān)閉噴霧器；e) 15min后蓋上培養(yǎng)皿，37.0培養(yǎng)。當(dāng)培養(yǎng)到24 h-28 h時(shí)檢查計(jì)數(shù)如果呈陰性，繼續(xù)培養(yǎng)至總培養(yǎng)時(shí)間達(dá)44h -48h 時(shí)檢查計(jì)數(shù)；f) 將噴霧器放于靠右側(cè)內(nèi)壁中央執(zhí)行上述步驟。 圖 10 防交 叉 污 染 試 驗(yàn)下降氣流流速目的本試驗(yàn)測(cè)定安全柜內(nèi)下降氣流的流速。儀器檢測(cè)安全柜下降氣流流速的儀器為：熱式風(fēng)速儀，精度為&#

62、177;0.015m/s或示值的±3%(取較大值)，按廠商的用法說明進(jìn)行校正。當(dāng)測(cè)試點(diǎn)的氣壓和溫度偏離熱式風(fēng)速儀上列出的標(biāo)準(zhǔn)情況時(shí)，應(yīng)按熱式風(fēng)速儀廠商手冊(cè)中的修正因子進(jìn)行修正；風(fēng)速儀探針夾具，可準(zhǔn)確的定位風(fēng)速儀探針并且不影響氣流模式(如環(huán)狀?yuàn)A和鉗夾都可以使用)。方法均勻下降氣流安全柜按下列方式在工作區(qū)上方高于前窗操作口上沿100m m 的水平面上確定測(cè)量點(diǎn)位置，多點(diǎn)測(cè)量穿過該平面的下降氣流流速(見圖11)：a) 測(cè)量點(diǎn)等距分布，形成的正方形柵格不大于150mm×150mm，測(cè)試點(diǎn)最少應(yīng)有3排，每排最少應(yīng)有7個(gè)測(cè)量點(diǎn)；b) 測(cè)試區(qū)域邊界

63、與安全柜的內(nèi)壁及前窗操作口的距離應(yīng)為150mm。用夾具將風(fēng)速儀探針準(zhǔn)確定位在各測(cè)量點(diǎn)進(jìn)行測(cè)量。記錄所有測(cè)量點(diǎn)說明書的測(cè)量值并根據(jù)測(cè)量值計(jì)算出平均值。非均勻下降氣流安全柜在工作區(qū)上方高于前窗操作口上沿100mm的水平面上多點(diǎn)測(cè)量穿過該平面各區(qū)域的氣流流速，各區(qū)域由測(cè)試機(jī)構(gòu)驗(yàn)證。按照廠商的使用說明的區(qū)域界限、在每一區(qū)域的測(cè)量點(diǎn)數(shù)和所用等間距柵格的大小測(cè)試。對(duì)安全柜運(yùn)行不重要的可拆卸元件(可選擇的部件)應(yīng)在設(shè)置標(biāo)稱值前拆除。用夾具將風(fēng)速儀探針準(zhǔn)確定位在各測(cè)量點(diǎn)進(jìn)行測(cè)量。記錄所有測(cè)試點(diǎn)的測(cè)量值并根據(jù)測(cè)量值計(jì)算出各區(qū)域的平均值。  圖 11 下降 氣 流 流 速

64、測(cè) 試 驗(yàn)  流入氣流流速目的本試驗(yàn)用風(fēng)量計(jì)法直接讀取前窗操作口流人氣流流量，計(jì)算平均流人氣流流速，確認(rèn)安全在柜標(biāo)稱值風(fēng)速運(yùn)行。流人氣流流速測(cè)定后，再用生產(chǎn)廠商推薦的計(jì)算或測(cè)定流人氣流流速的替代方法測(cè)量。儀器檢測(cè)安全柜流人氣流流速的儀器主要有：熱式風(fēng)速儀，精確度為±0.015m/s 或示值的±300(取較大值)；風(fēng)速儀探針夾具，可將風(fēng)速儀探針精確定位在測(cè)量點(diǎn)并且不影響氣流模式(如環(huán)狀?yuàn)A和鉗夾都可以使用)。風(fēng)速儀法排氣氣流流速確定流入氣流流速(適于級(jí)A2型安全柜)用風(fēng)速儀測(cè)試級(jí)A1和A2型安全柜的排氣速率計(jì)算流人氣流流速的步驟為：a) 用熱式風(fēng)速儀多點(diǎn)測(cè)量穿過排氣過濾器面的氣流流速，測(cè)量