基因組測(cè)序技術(shù)和基因識(shí)別完整版ppt課件

1、基因組測(cè)序技術(shù)和基因識(shí)別主要內(nèi)容 一、基因組測(cè)序技術(shù) 二、基因識(shí)別一、基因組測(cè)序技術(shù) 大規(guī)模DNA測(cè)序技術(shù)使全基因組的測(cè)序成為能夠。 現(xiàn)有測(cè)序儀所能測(cè)得的序列長(zhǎng)度有限，普通500-1000bp。而基因組序列長(zhǎng)度遠(yuǎn)大于此，必需經(jīng)過以下過程才干測(cè)得：打碎測(cè)序拼接鳥槍法雜交測(cè)序法1、鳥槍法 鳥槍法shotgun method,也稱霰彈法。將DNA分子打碎，得到長(zhǎng)度在500-1000bp之間的小片段，對(duì)這些片段測(cè)序，然后根據(jù)他們之間的關(guān)系進(jìn)展拼接，得到最終目的序列。序列片段覆蓋待測(cè)序列序列片段覆蓋待測(cè)序列序列片段之間也存在著相互覆蓋或者重疊。序列片段之間也存在著相互覆蓋或者重疊。 目的序列目的序列序列

2、碎片序列碎片拼接過程 以每個(gè)片段為頂點(diǎn)，在每個(gè)頂點(diǎn)之間畫有向邊，有向邊的權(quán)值代表交疊的字符d 得到三發(fā)送個(gè)數(shù)，方向由交疊序列前片段指向后片段。AGGTCCTAAAAGGTCCTAAAAGGTCCTAAAAGGTCCTAAA1341113拼接過程 查找能順箭頭方向依次經(jīng)過各頂點(diǎn)的一切通路中權(quán)值之和最大的，即為拼接后的序列。1 adbc，權(quán)值82 bcad，權(quán)值73 badc，權(quán)值54 cadb，權(quán)值105 dbca，權(quán)值8拼接結(jié)果：AGGTCCTAAA最大權(quán)的哈密頓途徑問題Hamilton tour problemAGGTCCTAAAAGGTCCTAAA1341113abcd2、雜交測(cè)序法 雜交

3、測(cè)序法sequencing by hybridization，SBH 根本原理是：構(gòu)建基因微陣列microarray，也稱基因芯片，gene chip，讓待測(cè)序列與其反響，然后由反響獲得的信息確定待測(cè)序列的部分序列，最后根據(jù)這些部分序列重構(gòu)目的序列。 基因微陣列microarray，也稱基因芯片，gene chip，將高密度DNA片段陣列以一定的陳列方式使其附著在基片上而構(gòu)成。AA AT AG AC TA TT TG TC GA GT GG GC CA CT CG CCAAATAGACTATTTGTCGAGTGGGCCACTCGCCGCACCTGAACTGCACT目的序列：CGTGACT 互補(bǔ)

4、序列：GCACTGA 由測(cè)出的部分序列：GCAC、ACTG、CTGA、CACT，可以重構(gòu)目的序列的互補(bǔ)序列GCACTGA ，從而得到目的序列 CGTGACT 。 可用求最大權(quán)值的哈密頓途徑的方法求解。 也可用歐拉途徑的方法求解，該算法較省時(shí)。3、拼接軟件 Phred、Phrap、Consed Sequencher ContigExpress1aggtcc2taaa3agg4tcctaaa二、基因識(shí)別二、基因識(shí)別 基因組基因組genome是指一個(gè)生物體、細(xì)胞或病毒是指一個(gè)生物體、細(xì)胞或病毒的整套基因。的整套基因。 基因組學(xué)基因組學(xué)genomics以基因組分析為手段，研以基因組

5、分析為手段，研討基因組的構(gòu)成、時(shí)序表達(dá)方式和功能，并提供有討基因組的構(gòu)成、時(shí)序表達(dá)方式和功能，并提供有關(guān)生物物種及其細(xì)胞功能的進(jìn)化信息。關(guān)生物物種及其細(xì)胞功能的進(jìn)化信息。 功能基因組學(xué)研討基因和非編碼序列生物學(xué)功能。功能基因組學(xué)研討基因和非編碼序列生物學(xué)功能。 比較基因組學(xué)經(jīng)過生物物種基因組之間的比較，研比較基因組學(xué)經(jīng)過生物物種基因組之間的比較，研討基因的功能。討基因的功能。 基因識(shí)別是識(shí)別基因識(shí)別是識(shí)別DNA序列上的具有生物學(xué)特序列上的具有生物學(xué)特征的片段，是基因組研討的根底。征的片段，是基因組研討的根底。 基因識(shí)別是生物信息學(xué)領(lǐng)域里的一個(gè)重要研基因識(shí)別是生物信息學(xué)領(lǐng)域里的一個(gè)重要研討內(nèi)容討

6、內(nèi)容 基因識(shí)別問題，在近幾年遭到廣泛的注重基因識(shí)別問題，在近幾年遭到廣泛的注重 當(dāng)人類基因組研討進(jìn)入一個(gè)系統(tǒng)測(cè)序階段時(shí)，當(dāng)人類基因組研討進(jìn)入一個(gè)系統(tǒng)測(cè)序階段時(shí)，急需可靠自動(dòng)的基因組序列翻譯解釋技術(shù)，急需可靠自動(dòng)的基因組序列翻譯解釋技術(shù)，以處置大量已測(cè)定的但未知功能或未經(jīng)注釋以處置大量已測(cè)定的但未知功能或未經(jīng)注釋的的DNA序列序列 1、原核基因識(shí)別、原核基因識(shí)別 原核基因特點(diǎn)：基因密度高、簡(jiǎn)單絕大原核基因特點(diǎn)：基因密度高、簡(jiǎn)單絕大多數(shù)不含內(nèi)含子。其重點(diǎn)在于識(shí)別編碼多數(shù)不含內(nèi)含子。其重點(diǎn)在于識(shí)別編碼區(qū)域區(qū)域非翻譯區(qū)域非翻譯區(qū)域untranslated regions, UTR 編碼區(qū)域兩端的編碼區(qū)

7、域兩端的DNA，有一部分被轉(zhuǎn)錄，但是不被翻譯，這一，有一部分被轉(zhuǎn)錄，但是不被翻譯，這一部分稱為非翻譯區(qū)域部分稱為非翻譯區(qū)域 5UTR-基因上游區(qū)域的非翻譯區(qū)域基因上游區(qū)域的非翻譯區(qū)域 3UTR-基因下游區(qū)域的非翻譯區(qū)域基因下游區(qū)域的非翻譯區(qū)域 對(duì)于任何給定的核酸序列單鏈DNA或mRNA，根據(jù)密碼子的起始位置，可以按照三種方式進(jìn)展解釋。 例如，序列ATTCGATCGCAA 這三種閱讀順序稱為閱讀框reading framesCAA A ATTCGATCGATTCGATCGCAAATTCGATCGCA132一個(gè)開放閱讀框一個(gè)開放閱讀框ORF,open reading frame是一個(gè)沒有是一個(gè)沒有

8、終止編碼的密碼子序列。終止編碼的密碼子序列。原核基因識(shí)別義務(wù)的重點(diǎn)是識(shí)別開放閱讀框，或者說識(shí)別長(zhǎng)原核基因識(shí)別義務(wù)的重點(diǎn)是識(shí)別開放閱讀框，或者說識(shí)別長(zhǎng)的編碼區(qū)域。的編碼區(qū)域。基于基因密碼子特性的識(shí)別方法基于基因密碼子特性的識(shí)別方法區(qū)分編碼區(qū)域與非編碼區(qū)域的一種方法區(qū)分編碼區(qū)域與非編碼區(qū)域的一種方法是檢查終止密碼子的出現(xiàn)頻率是檢查終止密碼子的出現(xiàn)頻率 終止密碼子出現(xiàn)的期望次數(shù)為：終止密碼子出現(xiàn)的期望次數(shù)為： 每每21個(gè)個(gè) 64/3密碼子出現(xiàn)一次終止密碼子密碼子出現(xiàn)一次終止密碼子 根本思想：根本思想：假設(shè)可以找到一個(gè)比較長(zhǎng)的序列，其相應(yīng)的密碼子序列假設(shè)可以找到一個(gè)比較長(zhǎng)的序列，其相應(yīng)的密碼子序列不含

9、終止密碼子，那么這段序列能夠就是編碼區(qū)域。不含終止密碼子，那么這段序列能夠就是編碼區(qū)域。根本算法：根本算法：掃描給定的掃描給定的DNA序列，在三個(gè)不同的閱讀框中尋覓較序列，在三個(gè)不同的閱讀框中尋覓較長(zhǎng)的長(zhǎng)的ORF。遇到終止密碼子以后，回頭尋覓起始密。遇到終止密碼子以后，回頭尋覓起始密碼子。碼子。這種算法過于簡(jiǎn)單，不適宜于處置短的這種算法過于簡(jiǎn)單，不適宜于處置短的ORF或者交疊或者交疊的的ORF。 識(shí)別編碼區(qū)域的另一種方法是分析各種密碼子出現(xiàn)識(shí)別編碼區(qū)域的另一種方法是分析各種密碼子出現(xiàn)的頻率的頻率 將一個(gè)隨機(jī)均勻分布的將一個(gè)隨機(jī)均勻分布的DNA序列翻譯成氨基酸序列翻譯成氨基酸序列，那么在氨基酸序

10、列中上述序列，那么在氨基酸序列中上述3種氨基酸出現(xiàn)的種氨基酸出現(xiàn)的比例應(yīng)該為比例應(yīng)該為6:4:1例如，亮氨酸、丙氨酸、色氨酸分別有例如，亮氨酸、丙氨酸、色氨酸分別有6個(gè)、個(gè)、4個(gè)和個(gè)和1個(gè)密碼子個(gè)密碼子但是在真實(shí)的氨基酸序列中，上述比例并不但是在真實(shí)的氨基酸序列中，上述比例并不正確正確這闡明這闡明DNA的編碼區(qū)域并非隨機(jī)的編碼區(qū)域并非隨機(jī) 假設(shè)在一條假設(shè)在一條DNA序列中曾經(jīng)找到一切的序列中曾經(jīng)找到一切的ORF，那么可以利用密碼子頻率進(jìn)一步區(qū)分編碼那么可以利用密碼子頻率進(jìn)一步區(qū)分編碼ORF和和非編碼非編碼ORF 利用這種方法，可以計(jì)算一個(gè)利用這種方法，可以計(jì)算一個(gè)ORF成為編碼區(qū)域成為編碼區(qū)域

11、的能夠性。的能夠性。基于編碼區(qū)域堿基組成特征的識(shí)別方法基于編碼區(qū)域堿基組成特征的識(shí)別方法編碼序列與非編碼序列在堿基組成上有區(qū)別編碼序列與非編碼序列在堿基組成上有區(qū)別單個(gè)堿基的組成比例單個(gè)堿基的組成比例多個(gè)堿基的組成多個(gè)堿基的組成經(jīng)過統(tǒng)計(jì)分析識(shí)別編碼序列經(jīng)過統(tǒng)計(jì)分析識(shí)別編碼序列2 2、真核基因識(shí)別問題、真核基因識(shí)別問題 真核基因遠(yuǎn)比原核基因復(fù)雜：一方面，真核基因的編碼區(qū)域是非延續(xù)的，編碼區(qū)域被分割為假設(shè)干個(gè)小片段。另一方面，真核基因具有更加豐富的基因調(diào)控信息，這些信息主要分布在基因上游區(qū)域。 基因識(shí)別根本思緒基因識(shí)別根本思緒 找出基因兩端的功能區(qū)域找出基因兩端的功能區(qū)域:轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)區(qū)轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)區(qū) 終

12、止區(qū)終止區(qū) 在啟動(dòng)區(qū)下游位置尋覓翻譯起始密碼子在啟動(dòng)區(qū)下游位置尋覓翻譯起始密碼子 識(shí)別轉(zhuǎn)錄剪切位點(diǎn)識(shí)別轉(zhuǎn)錄剪切位點(diǎn)剪切給體位點(diǎn)剪切給體位點(diǎn)剪切接受體位點(diǎn)剪切接受體位點(diǎn) 各種不同的方法有不同的順應(yīng)面，而不同的方法有時(shí)可以結(jié)合起來以提高基因識(shí)別的準(zhǔn)確率。 關(guān)鍵問題是如何提高一個(gè)識(shí)別算法的敏感性sensitivity，Sn和特異性specificity，Sp。 3 3、基因識(shí)別的主要方法、基因識(shí)別的主要方法兩大類識(shí)別方法：兩大類識(shí)別方法：從頭算方法或基于統(tǒng)計(jì)的方法從頭算方法或基于統(tǒng)計(jì)的方法根據(jù)蛋白質(zhì)編碼基因的普通性質(zhì)和特征進(jìn)展識(shí)別，經(jīng)過根據(jù)蛋白質(zhì)編碼基因的普通性質(zhì)和特征進(jìn)展識(shí)別，經(jīng)過統(tǒng)計(jì)值區(qū)分外顯子

13、、內(nèi)含子及基因間區(qū)域統(tǒng)計(jì)值區(qū)分外顯子、內(nèi)含子及基因間區(qū)域 基于同源序列比較的方法基于同源序列比較的方法利用數(shù)據(jù)庫(kù)中現(xiàn)有與基因有關(guān)的信息如利用數(shù)據(jù)庫(kù)中現(xiàn)有與基因有關(guān)的信息如EST序列、蛋序列、蛋白質(zhì)序列，經(jīng)過同源比較，協(xié)助發(fā)現(xiàn)新基因。白質(zhì)序列，經(jīng)過同源比較，協(xié)助發(fā)現(xiàn)新基因。最理想的方法是綜合兩大類方法的優(yōu)點(diǎn)，開發(fā)混合算法。最理想的方法是綜合兩大類方法的優(yōu)點(diǎn)，開發(fā)混合算法。 基因識(shí)別方法有基因識(shí)別方法有 ： 1基于規(guī)那么的系統(tǒng)基于規(guī)那么的系統(tǒng) 2 語義學(xué)方法語義學(xué)方法 3 線性區(qū)分分析線性區(qū)分分析LDA 4 決策樹決策樹 5 動(dòng)態(tài)規(guī)劃動(dòng)態(tài)規(guī)劃 6 隱馬爾柯夫模型隱馬爾柯夫模型 7 剪切對(duì)比陳列剪切

14、對(duì)比陳列 spliced alignment4、基因識(shí)別程序引見表表5.7 基因識(shí)別程序及訪問地址基因識(shí)別程序及訪問地址HP主頁；主頁；ES效力器；效力器；WSweb效力器；效力器；CL客戶客戶/效力器協(xié)議；效力器協(xié)議；EX有可執(zhí)行代碼；有可執(zhí)行代碼；SC有源代碼有源代碼表表5.8 各程序的性能比較敏感性各程序的性能比較敏感性(1)被預(yù)測(cè)出的真實(shí)編碼核酸的被預(yù)測(cè)出的真實(shí)編碼核酸的%；敏感性敏感性(2)被正確識(shí)別出的編碼外顯子的被正確識(shí)別出的編碼外顯子的%；特異性特異性(1)預(yù)測(cè)出的編碼核酸為真實(shí)編碼核酸的預(yù)測(cè)出的編碼核酸為真實(shí)編碼核酸的%；特異性特異性(2)預(yù)測(cè)出外顯子為真實(shí)外顯子的預(yù)測(cè)出外顯

15、子為真實(shí)外顯子的%Genscan訪問：/GENSCAN.html以核酸序列SEQ5作綜合分析為例SEQ5SEQ5seq51 gaattccagg ttggaggggc ggcaacctcc tgccagcctt caggccactc tcctgtgcct 61 gccagaagag acagagcttg aggagagctt gaggagagca ggaaaggtgg aacattgctg 121 ctgctgctca ctcagttcca caggtgggag gaacagcagg gcttagagtg ggggtcattg 181 tgcagatggg aaaac

16、aaagg cccagagagg ggaagaaatg cctaggagct accgagggca 241 ggcgacctca accacagccc agtgctggag ctgtgagtgg atgtagagca gcggaatatc 301 cattcagcca gctcagggga aggacagggg ccctgaagcc aggggatgga gctgcaggga 361 agggagctca gagagaaggg gaggggagtc tgagctcagt ttcccgctgc ctgaaaggag 421 ggtggtacct actcccttca cagggtaact gaa

17、tgagaga ctgcctggag gaaagctctt 481 caagtgtggc ccaccccacc ccagtgacac cagcccctga cacgggggag ggagggcagc 541 atcaggaggg gctttctggg cacacccagt acccgtctct gagctttcct tgaactgttg 601 cattttaatc ctcacagcag ctcaacaagg tacataccgt caccatcccc attttacaga 661 tagggaaatt gaggctcgga gcggttaaac aactcacctg aggcctcaca g

18、ccagtaagt 721 gggttccctg gtctgaatgt gtgtgctgga ggatcctgtg ggtcactcgc ctggtagagc 781 cccaaggtgg aggcataaat gggactggtg aatgacagaa ggggcaaaaa tgcactcatc 841 cattcactct gcaagtatct acggcacgta cgccagctcc caagcaggtt tgcgggttgc 901 acagcggagc gatgcaatct gatttaggct tttaaaggat tgcaatcaag tgggacccac 961 tagcct

19、caac cctgtacctc ccctcccctc cacccccagc agtctccaaa ggcctccaac 1021 aaccccagag tgggggccat gtatccaaag aaactccaag ctgtatacgg atcacactgg 1081 ttttccagga gcaaaaacag aaacagcctg aggctggtca aaattgaacc tcctcctgct 1141 ctgagcagcc tagggggcag actaagcaga gggctgtgca gacccacata aagagcctac 1201 tgtgtgccag gcacttcacc

20、cgaggcactt cacaagcatg cttgggaatg aaacttccaa 1261 ctctttggga tgcaggtgaa acagttcctg gttcagagag gtgaagcggc ctgcctgagg 1321 cagcacagct cttctttaca gatgtgcttc cccacctcta ccctgtctca cggcccccca 1 tgccagcctg acggttgtgt ctgcctcagt catgctccat ttttccatcg ggaccatcaa 1441 gagggtgttt gtgtctaagg ctgactgggt aactttgg

21、at gagcggtctc tccgctccga 1501 gcctgtttcc tcatctgtca aacgggctct aacccactct gatctcccag ggcggcagta 1561 agtcttcagc atcaggcatt ttggggtgac tcagtaaatg gtagatcttg ctaccagtgg 1621 aacagccact aaggattctg cagtgagagc agagggccag ctaagtggta ctctcccaga 1681 gactgtctga ctcacgccac cccctccacc ttggacacag gacgctgtgg tt

22、tctgagcc 1741 aggtacaatg actcctttcg gtaagtgcag tggaagctgt acactgccca ggcaaagcgt 1801 ccgggcagcg taggcgggcg actcagatcc cagccagtgg acttagcccc tgtttgctcc 1861 tccgataact ggggtgacct tggttaatat tcaccagcag cctcccccgt tgcccctctg 1921 gatccactgc ttaaatacgg acgaggacag ggccctgtct cctcagcttc aggcaccacc 1981 ac

23、tgacctgg gacagtgaat cgtaagtatg cctttcactg cgaggggttc tggagaggct 2041 tccgagctcc ccatggccca ggcaggcagc aggtctgggg caggaggggg gttgtggagt 2101 gggtatccgc ctgctgaggt gcagggcaga tggagaggct gcagctgagc tcctattttc 2161 ataataacag cagccatgag ggttgtgtcc tgtttcccag tcctgcccgg tcccccctcg 2221 gtacctcctg gtggata

24、cac tggttcctgt aagcagaagt ggatgagggt gtctaggtct 2281 gcagtcctgg caccccagga tgggggacac cagccaagat acagcaacag caacaaagcg 2341 cagccatttc tttctgtttg cacagctcct ctgtctgtcg ggggctcctg tctgttgtct 2401 cctataagcc tcaccacctc tcctactgct tgggcatgca tctttctccc cttctataga 2461 tgaggaggtt aaggttcaga gaggggtggg g

25、aggaacgcc ggctcacatt ctccatcccc 2521 tccagatatg accaggaaca gacctgtgcc agcctcagcc ttacatcaaa atgggcctcc 2581 ccatgcaccg tggacctctg ggccctcctg tcccagtgga ggacaggaag ctgtgagggg 2641 cactgtcacc cagggctcaa gctggcattc ctgaataatc gctctgcacc aggccacggc 2701 taagctcagt gcgtgattaa gcctcataac cctccaaggc agttac

26、tagt gtgattccca 2761 ttttacagat gaggaagatg gggacagaga ggtgaataac tggccccaaa tcacacacca 2821 tccataattc gggctcaggc acctggctcc agtccccaaa ctcttgaacc tggccctagt 2881 gtcactgttt ctcttgggtc tcaggcgctg gatggggaac aggaaacctg ggctgaactt 2941 gaggcctctc tgatgctcgg tgacttcaga cagttgctca acctctctgt tctcttgggc

27、3001 aaaacatgat aacctttgac ttctgtcccc tcccctcacc ccacccgacc ttgatctctg 3061 aagtgttgga aggatttaat ttttcctgca ctgagttttg gagacaggtc aaaaagatga 3121 ccaaggccaa ggtggccagt ttcctataga acgcctctaa aagacctgca gcaatagcag 3181 caagaactgg tattctcgag aacttgctgc gcagcaggca cttcttggca ttttatgtgt 3241 atttaatttc

28、acaatagctc tatgacaaag tccacctttc tcatctccag gaaactgagg 3301 ttcagagagg ttaagtaact tgtccaaggt cacacagcta atagcaagtt gacgtggagc 3361 aatctggcct cagagccttt aattttagcc acagactgat gctcccctct tcatttagcc 3421 aggctgcctc tgaagttttc tgattcaaga cttctggctt cagctttgta cacagagatg 3481 attcaatgtc aggttttgga gcgaa

29、atctg tttaatccca gacaaaacat ttaggattac 3541 atctcagttt tgtaagcaag tagctctgtg atttttagtg agttatttaa tgctctttgg 3601 ggctcaattt ttctatctat aaaatagggc taataatttg caccttatag ggtaagcttt 3661 gaggacagat tagatgatac ggtgcctgta aaacaccagg tgttagtaag tgtggcaatg 3721 atggtgacgc tgaggctgtg tttgcttagc atagggttag

30、 gcagctggca ggcagtaaac 3781 agttggataa tttaatggaa aatttgccaa actcagatgc tgttcactgc tgagcaggag 3841 ccccttcctg ctgaaatggt cctggggagt gcagcaggct ctccgggaag aaatctacca 3901 tctctcgggc aggagctcaa cctgtgtgca ggtacaggga gggcttcctc acctggtgcc 3961 cactcatgca ttacgtcagt tattcctcat ccctgtccaa aggattcttt tctc

31、cattgt 4021 acagctatga agctagtgct caaagaagtg aagtcattta ccccaggccc cctgccagta 4081 agtgacaggg cctggtcaca cttgggttta tttattgccc agttcaacag gttgtttgac 4141 cataggcgag attctcttcc ctgcaccctg ccgggttgct cttggtccct tattttatgc 4201 tcctgggtag aaatggtgcg agattaggca gggagtggac gcttccctgt ccctggcccc 4261 gcaa

32、agagtg ctcccacctg ccccgatccc agaaatgtca ccatgaagcc ttcattcttt 4321 tggtttaaag cttggcctca gtgtccgtac accatggggt ccttggccag atggcgactt 4381 tctcctctcc agtcgccctc ccaggcacta gcttttagga gtgcagggtg ctgcctctga 4441 tagaagggcc aggagagagc aggttttgga gacctgatgt tataaggaac agcttgggag 4501 gcataatgaa cccaacatg

33、a tgcttgagac caatgtcaca gcccaattct gacattcatc 4561 atctgagatc tgaggacaca gctgtctcag ttcatgatct gagtgctggg aaagccaaga 4621 cttgttccag ctttgtcact gacttgctgt atagcctcaa caaggccctg accctctctg 4681 ggcttcaaac tcttcactgt gaaaggagga aaccagagta ggtgatgtga caccaggaaa 4741 gatggatggg tgtgggggaa tgtgctcctc cca

34、gctgtca ccccctcgcc accctccctg 4801 caccagcctc tccacctcct ttgagcccag aattcccctg tctaggaggg cacctgtctc 4861 gtgcctagcc atgggaattc tccatctgtt ttgctacatt gaacccagat gccattctaa 4921 ccaagaatcc tggctgggtg caggggctct cgcctgtaac cccagcactt tgggaggcca 4981 aggcaggcgg atcaagaggt caggagttca agacctgcct ggccaaca

35、cg gtgaaacctc 5041 agctctacta aaaatacaaa aattagccag gcgtggtggc acacgcctgt aatcccagct 5101 atttgggaag ctgagacaga agaatttctt gaacccggga ggtggaggtt tcagtgagcc 5161 gagatcacgc cactgcactc caccctggcg gataaagcga gactctgtct caaaaaaaac 5221 ccaaaaacct atgttagtgt acagagggcc ccagtgaagt cttctcccag ccccactttg 52

36、81 cacaactggg gagagtgagg ccccaggacc agaggattct tgctaaaggc caagtggata 5341 gtgatggccc tgccaggcta gaagccacaa cctctggccc tgaggccact cagcatattt 5401 agtgtcccca ccctgcagag gcccaactcc ctcctgacca ctgagccctg taatgatggg 5461 ggaatttcca taagccatga aggactgcac aaagttcagt tgggagtgaa agagaaatta 5521 aagggagatg ga

37、aatataca gcactaattt tagcaccgtc ttcagttcta acaacactag 5581 ctagctgaag aaaatacaaa catgtattat gtaatgtgtg gtctgttcca tttggattac 5641 ttagaggcac gagggccaag gagaaaggtg gtggagagaa accagctttg cacttcattt 5701 gttgctttat tggaaggaaa cttttaaaag tccaaggggg ttgaagaatc tcaatatttg 5761 ttatttccag ctttttttct ccagttt

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48、gaatcag tatcagtttt 8341 gcaatctgaa agacctgggt tcaaatcctg cctctaacac aattagcttt tgacaaaaac 8401 aatgcattct acctctttga ggtgctaatt tctcatctta gcatggacaa aataccattc 8461 ttgctgtcag gtttttttag gattaaacaa atgacaaaga ctgtggggat ggtgtgtggc 8521 atacagcagg tgatggactc ttctgtatct caggctgcct tcctgcccct gaggggtt

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