藥物制劑質(zhì)量研究

1、藥物制劑質(zhì)量研究藥物制劑質(zhì)量研究方法選擇與驗(yàn)證方法選擇與驗(yàn)證山廣志山廣志中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所分析測(cè)試中心醫(yī)藥生物技術(shù)研究所分析測(cè)試中心2014.10 南京安全有效質(zhì)量可控、方法學(xué)驗(yàn)證方法學(xué)驗(yàn)證產(chǎn)品考察產(chǎn)品考察確定質(zhì)量限度確定質(zhì)量限度檢測(cè)方法選擇檢測(cè)方法選擇質(zhì)量目標(biāo)質(zhì)量目標(biāo)是是/ /否否訂入標(biāo)準(zhǔn)訂入標(biāo)準(zhǔn)QbD終產(chǎn)品工藝研究工藝研究放行標(biāo)準(zhǔn)放行標(biāo)準(zhǔn)關(guān)鍵中間體質(zhì)控關(guān)鍵中間體質(zhì)控藥物質(zhì)量研究藥物研發(fā)的要求研究對(duì)象是什么？研究對(duì)象是什么？研究目的是什么？研究目的是什么？如何達(dá)到目的？如何達(dá)到目的？達(dá)到何種程度？達(dá)到何種程度？安全有效質(zhì)量可控什么樣的

2、藥物是安全的？什么樣的藥物是安全的？如何證明藥物是安全的？如何證明藥物是安全的？什么樣的藥物是有效的？什么樣的藥物是有效的？如何保證藥物的有效性？如何保證藥物的有效性？好藥好藥【鑒別鑒別】【檢查檢查】【含量測(cè)定（效價(jià)）含量測(cè)定（效價(jià)）】【性狀性狀】 外觀外觀色、臭、溶解度色、臭、溶解度化學(xué)化學(xué)色譜色譜光譜光譜雜質(zhì)的定量或限度檢查（有關(guān)物質(zhì)、雜質(zhì)的定量或限度檢查（有關(guān)物質(zhì)、 無(wú)機(jī)元素、殘留溶劑）無(wú)機(jī)元素、殘留溶劑）制劑中其他成分（降解產(chǎn)物、防腐劑）制劑中其他成分（降解產(chǎn)物、防腐劑）溶出度、釋放度等功能檢查的檢測(cè)方法溶出度、釋放度等功能檢查的檢測(cè)方法有效成分的含量測(cè)定有效成分的含量測(cè)定 目視目視資

3、料留存資料留存是否專屬是否專屬是否存在干擾是否存在干擾內(nèi)毒素、無(wú)菌、微生物限度內(nèi)毒素、無(wú)菌、微生物限度其他方法（起碼證實(shí)方法的專屬性）其他方法（起碼證實(shí)方法的專屬性）方法準(zhǔn)確性方法準(zhǔn)確性精密性精密性質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的項(xiàng)目及方法要求【鑒別鑒別】【檢查檢查】【含量測(cè)定（效價(jià)）含量測(cè)定（效價(jià)）】【性狀性狀】 UV、旋光、密度、熔點(diǎn)化學(xué)、UV、IR、NMR、旋光HPLC、GC、容量法、酶法、生物測(cè)定法質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中常見(jiàn)檢測(cè)方法化學(xué)、比色、pH、HPLC、GC、TLC、IC、CE、溶出（釋放）度、原子吸收、水分檢測(cè)方法選擇和設(shè)置 任何分析測(cè)試的目的都是為了獲得穩(wěn)定、可靠和準(zhǔn)確的數(shù)據(jù) 今天你“QbD”了么？ 本品“

4、仿質(zhì)量”還是“仿標(biāo)準(zhǔn)”？ 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是控制產(chǎn)品質(zhì)量的基本手段和范圍 檢測(cè)方法是質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的手段 仿藥典品種如何驗(yàn)證方法？ 三類(lèi)藥如何仿？ 進(jìn)口注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn) 國(guó)外藥典 我該用什么方法。？ 創(chuàng)新藥的檢測(cè)方法如何選擇？?jī)x器有確定的技術(shù)指標(biāo)，經(jīng)過(guò)檢測(cè)證實(shí)其適用于需要驗(yàn)證的方法證明方法能夠?qū)崿F(xiàn)預(yù)期目的，證明方法能夠?qū)崿F(xiàn)預(yù)期目的，按預(yù)期要求運(yùn)行按預(yù)期要求運(yùn)行證實(shí)系統(tǒng)運(yùn)行能夠達(dá)到預(yù)期目標(biāo)，證實(shí)系統(tǒng)運(yùn)行能夠達(dá)到預(yù)期目標(biāo)，得到準(zhǔn)確實(shí)驗(yàn)結(jié)果得到準(zhǔn)確實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明樣品分析結(jié)果的準(zhǔn)確性證明樣品分析結(jié)果的準(zhǔn)確性系統(tǒng)適用性系統(tǒng)適用性試驗(yàn)試驗(yàn)質(zhì)量控制質(zhì)量控制檢查檢查分析儀器分析儀器確認(rèn)確認(rèn)分析方法分析方法驗(yàn)證驗(yàn)證影響數(shù)據(jù)質(zhì)量的因素檢

5、測(cè)方法的選擇適用性適用性先進(jìn)性經(jīng)濟(jì)性經(jīng)濟(jì)性通用性通用性方法與技術(shù)的方法與技術(shù)的“更新?lián)Q代更新?lián)Q代”方法能夠滿足實(shí)驗(yàn)室方法能夠滿足實(shí)驗(yàn)室間方法傳遞的要求間方法傳遞的要求方法能夠充分反映質(zhì)控目標(biāo)方法能夠充分反映質(zhì)控目標(biāo)方法準(zhǔn)確、靈敏、簡(jiǎn)便、易行方法準(zhǔn)確、靈敏、簡(jiǎn)便、易行含量和雜質(zhì)分析方法的選擇 含量與雜質(zhì)分析是否采用同一個(gè)條件 HPLC or UHPLC or 2DLC or GC 正相 or 反相 or HILIC IC or CE or 離子對(duì) 含量與雜質(zhì)采用何種檢測(cè)器 UV檢測(cè)器是否ok 折光、ELSD、CAD、NQAD CD 、ED MS？ 前處理方法是否有效？藥物有效性的基石-對(duì)照品 理

6、化檢測(cè)用理化檢測(cè)用國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)系指用于藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中物理和化學(xué)測(cè)試用，具有確定特性，用以鑒別、檢查、含量測(cè)定、校準(zhǔn)設(shè)備的對(duì)照品。 國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)管理辦法2011.10.1 國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制技術(shù)要求 一級(jí)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)具有很好的質(zhì)量特性，其特性量值采用定義法或其他精準(zhǔn)、可靠的方法進(jìn)行計(jì)量 二級(jí)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)具有良好的質(zhì)量特性，其特性量值采用準(zhǔn)確、可靠的方法或直接與一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)相比較的方法進(jìn)行計(jì)量。國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分類(lèi)化學(xué)對(duì)照品生物標(biāo)準(zhǔn)品生物參考品對(duì)照藥材/對(duì)照提取物體外診斷試劑標(biāo)準(zhǔn)品藥用輔料對(duì)照品藥包材對(duì)照物質(zhì)國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)1. 含量測(cè)定用化學(xué)對(duì)照品：含量測(cè)定用化學(xué)對(duì)照品

7、：系指具有確定的量值，用于測(cè)定藥品中特定成分含量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。2. 鑒別或雜質(zhì)檢查用化學(xué)對(duì)照品：鑒別或雜質(zhì)檢查用化學(xué)對(duì)照品：系指具有特定化學(xué)性質(zhì)，用于鑒別或確定藥品某些特定成分的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。3. 對(duì)照藥材對(duì)照藥材/對(duì)照提取物：對(duì)照提取物：系指用于鑒別中藥材或中成藥中某一類(lèi)成分或組分的對(duì)照物質(zhì)。4. 校正儀器校正儀器/系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用對(duì)照系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用對(duì)照品：品：系指具有特定化學(xué)性質(zhì)用于校正檢測(cè)儀器或供系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。供鑒供鑒別用別用供檢供檢查用查用供含供含量測(cè)量測(cè)定用定用供系統(tǒng)供系統(tǒng)適用性適用性用用對(duì)照品的特點(diǎn)均勻均勻量值準(zhǔn)確量值準(zhǔn)確穩(wěn)定穩(wěn)定藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制管理機(jī)構(gòu)藥典藥典管理機(jī)構(gòu)管

8、理機(jī)構(gòu)品種品種中國(guó)藥典中國(guó)食品藥品檢定研究院（NIFDC）2780國(guó)際藥典（Ph. Int）WHO委托歐洲藥事管理局（EDQM、NIBSC）542美國(guó)藥典（USP）美國(guó)藥典會(huì)（USP）3048歐洲藥典（Ph. Eur）歐洲藥事管理局（EDQM）2548英國(guó)藥典（BP）英國(guó)藥典會(huì)（BPCL）英國(guó)政府化學(xué)分析實(shí)驗(yàn)室（LGC）3109日本藥典（JP）日本公定書(shū)協(xié)會(huì)（PMRJ）246對(duì)照品（標(biāo)準(zhǔn)品）、工作對(duì)照品、雜質(zhì)對(duì)照品 對(duì)照品用于鑒別、檢查、含量測(cè)定和校正檢定儀器性能的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。 標(biāo)準(zhǔn)品用于生物檢定、抗生素或生物藥品生物檢定、抗生素或生物藥品中含量或效價(jià)測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，以效價(jià)單位(U)表示。 一級(jí)

9、對(duì)照品在特定的背景下具有適宜的質(zhì)量、其量值不需要再與另外的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行對(duì)比的對(duì)照品 二級(jí)對(duì)照品經(jīng)與一級(jí)對(duì)照品對(duì)照而得來(lái)的對(duì)照品。確證的范圍及檢測(cè)的程度小于一級(jí)對(duì)照品。（亦稱：工作對(duì)照品） 雜質(zhì)對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)建立的要求 制備 標(biāo)定 保存和分發(fā) 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中收載的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)需要具有可行性和適用性 可大量制備高純物質(zhì) 方法專屬性強(qiáng) 穩(wěn)定性良好 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)合理、可靠對(duì)照品標(biāo)定程序及項(xiàng)目制定標(biāo)化方案標(biāo)化實(shí)驗(yàn)分裝標(biāo)化報(bào)告發(fā)放/儲(chǔ)存/穩(wěn)定性標(biāo)化方案起草 查閱各國(guó)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 原料的檢驗(yàn)報(bào)告 原料的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)及引濕性 確定對(duì)照品用途，了解原料性質(zhì) 制定標(biāo)化項(xiàng)目及要求 形成初稿，負(fù)責(zé)人審核標(biāo)化項(xiàng)目無(wú)國(guó)家對(duì)照品的品種 性狀

10、（比旋度） 鑒別（MS、IR、NMR、UV） 檢查 有關(guān)物質(zhì)（國(guó)內(nèi)外藥典方法）水分/干燥失重殘留溶劑熾灼殘?jiān)?含量測(cè)定（對(duì)標(biāo)、容量法）標(biāo)化項(xiàng)目有國(guó)家對(duì)照品的品種 性狀&鑒別 檢查 有關(guān)物質(zhì)水分/干燥失重 含量測(cè)定（對(duì)標(biāo)法）u當(dāng)國(guó)家對(duì)照品換批時(shí)，必須重新標(biāo)定u三個(gè)實(shí)驗(yàn)室的數(shù)據(jù)對(duì)照品標(biāo)定項(xiàng)目 首批 UV IR NMR MS 元素分析 X-ray衍射 官能團(tuán)分析 常用 HPLC（DAD） GC TLC CE DSC 相容度法 UV、IR、NMR 容量法 旋光度 水分、殘留溶劑、干燥失重標(biāo)化實(shí)驗(yàn) 如實(shí)記錄實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的現(xiàn)象 溶解過(guò)程，溶液狀態(tài) 有關(guān)物質(zhì)計(jì)算方式 歸一化法 自身對(duì)照法 外標(biāo)法 HP

11、LC有關(guān)物質(zhì)：平行2份 干燥失重：精密稱定2份，每份稱樣量約1.0g 水分：分裝前平行3份；分裝后取X支 熾灼殘?jiān)?：1份 引濕性 ：DVS/藥典附錄引濕性 含量測(cè)定：對(duì)照品和原料各平行2份，每份不低于20mg 分裝 分裝條件的確定 引濕性 用途 使用方式 分裝記錄 溫濕度 數(shù)量 分裝后均勻性的考察 水分 有關(guān)物質(zhì) 包裝容器必須能夠保證內(nèi)容物的穩(wěn)定性玻璃（塑料）安瓿主要用于易氧化及液體原料常規(guī)品種可采用西林瓶包裝對(duì)于易于氧化或潮解的品種，必須控制分裝間的濕度并在氮（氬）氣氛圍下分裝 最小包裝單元的實(shí)際裝量與標(biāo)示的裝量應(yīng)符合規(guī)定的允差要求，固體原料的裝量一般為標(biāo)示量的10%標(biāo)化報(bào)告（一）概述（一

12、）概述（二）原料的來(lái)源與檢驗(yàn)（二）原料的來(lái)源與檢驗(yàn)（三）結(jié)論（三）結(jié)論標(biāo)化報(bào)告（一）概述（一）概述 類(lèi)別類(lèi)別 各國(guó)藥典收載情況：各國(guó)藥典收載情況：EP、USP、JP 國(guó)內(nèi)藥品標(biāo)準(zhǔn)國(guó)內(nèi)藥品標(biāo)準(zhǔn) 結(jié)構(gòu)式、分子式、分子量結(jié)構(gòu)式、分子式、分子量（二）原料檢驗(yàn)：（二）原料檢驗(yàn)： 1. 性狀性狀 根據(jù)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下的描述判定質(zhì)量的優(yōu)劣；根據(jù)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下的描述判定質(zhì)量的優(yōu)劣；若沒(méi)有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，也要將樣品實(shí)際性狀記錄下來(lái)若沒(méi)有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，也要將樣品實(shí)際性狀記錄下來(lái) 理化性質(zhì)：比旋度、折光系數(shù)、引濕性等理化性質(zhì)：比旋度、折光系數(shù)、引濕性等 2. 鑒別鑒別 結(jié)構(gòu)確證：結(jié)構(gòu)確證：UV、IR、NMR、MS、元素分、元素分析

13、、析、X衍射、衍射、HPLC/TLC/GC鑒別、關(guān)鍵官能團(tuán)的專屬鑒別、關(guān)鍵官能團(tuán)的專屬性鑒別性鑒別標(biāo)化報(bào)告3. 檢查檢查純度純度 TLC、HPLC、 GC、DSC干燥失重或者水分干燥失重或者水分殘留溶劑殘留溶劑熾灼殘?jiān)鼰胱茪堅(jiān)?. 含量測(cè)定含量測(cè)定容量法容量法UV法法 HPLC法法標(biāo)化報(bào)告定值方法影響對(duì)照品準(zhǔn)確定值的因素 HPLC純度 水分 熾灼殘?jiān)?殘留溶劑 引濕性 穩(wěn)定性穩(wěn)定性考察 先密后疏原則 考察項(xiàng)目 有關(guān)物質(zhì) 水分/干燥失重 含量測(cè)定 可接受的變化限度對(duì)照品的使用的注意事項(xiàng)使用方式 本品使用前不需處理，可直接使用 X干燥3小時(shí)后使用 使用時(shí)自測(cè)水分注意事項(xiàng)： 開(kāi)瓶后一次使用完畢 僅供

14、國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定項(xiàng)下使用 說(shuō)明書(shū)網(wǎng)上下載，按說(shuō)明書(shū)操作 更換新批次后，根據(jù)品種監(jiān)測(cè)情況，一般對(duì)上一批次設(shè)置3-6個(gè)月仍可使用的緩沖期對(duì)照品局限性 盡管同一批對(duì)照品不同標(biāo)定方法的含量有很好的相關(guān)性，但并不完全相同，有時(shí)差別會(huì)很大。 如：頭孢呋肟酯對(duì)照品，HPLC標(biāo)定為96.9%，供含量測(cè)定用；UV為98.8%，供溶出度測(cè)定。 中國(guó)藥典凡例明確規(guī)定Chp對(duì)照品僅用于正文中所規(guī)定的分析方法。 常將含量測(cè)定用的標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌酚糜谌艹龆葯z查，而含量測(cè)定方法與溶出度分析方法又不同，故極易引起問(wèn)題！效期和說(shuō)明書(shū) 中國(guó)藥品生物制品檢定所提供的標(biāo)準(zhǔn)品大部分均無(wú)使用說(shuō)明書(shū)和使用期限。 大都沿用新的批號(hào)出現(xiàn)、舊的批

15、號(hào)自動(dòng)停止的管理方式。二級(jí)對(duì)照品（工作對(duì)照品）的標(biāo)定一級(jí)對(duì)照品的規(guī)格小、價(jià)格高、購(gòu)買(mǎi)周期長(zhǎng)的缺點(diǎn)，對(duì)于實(shí)驗(yàn)室對(duì)照品用量大的企業(yè)來(lái)說(shuō)，使用二級(jí)對(duì)照品成了實(shí)驗(yàn)室的首選。選定樣品優(yōu)質(zhì)，高純標(biāo)定樣品選擇“合理”的方法標(biāo)定13人、3樣、3機(jī)。RSD應(yīng)小于0.5%（HPLC法）標(biāo)定2建議按照“新”對(duì)照品標(biāo)定一次，與“對(duì)標(biāo)”結(jié)果應(yīng)相符。分裝西林瓶，單次使用量，一次用完。效期1或2年（據(jù)穩(wěn)定性數(shù)據(jù)），不超過(guò)樣品效期儲(chǔ)存28期間核查半效期雜質(zhì)對(duì)照品 是否需要設(shè)置雜質(zhì)對(duì)照品 外標(biāo)法定量？自身對(duì)照行不行？加校正因子行不行？ 系統(tǒng)適用性（定位）？相對(duì)保留時(shí)間行不行？降解能否獲得？是否有相似替代品？ 技術(shù)門(mén)檻？！ 雜質(zhì)

16、對(duì)照品的研制 獲得方式：定向合成、富集純化、分離純化 結(jié)構(gòu)確證 純度檢查 是否穩(wěn)定，能否滿足長(zhǎng)期供應(yīng)？“量體裁衣”方法學(xué)驗(yàn)證方法驗(yàn)證的步驟USP規(guī)定實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采用試驗(yàn)方式進(jìn)行方法驗(yàn)證：“應(yīng)通過(guò)實(shí)驗(yàn)室的研究制定成一定的分析方法驗(yàn)證程序，證明方法的性能參數(shù)符合預(yù)期的分析應(yīng)用要求?！彬?yàn)證過(guò)程應(yīng)滿足以下條件：易于使用；能夠用計(jì)算機(jī)系統(tǒng)自動(dòng)控制；每次分析的成本；樣品能量；運(yùn)行時(shí)間；以及環(huán)境、健康和安全要求分析方法驗(yàn)證的法規(guī)要求方法驗(yàn)證的目的證明所采用方法適合于相應(yīng)檢測(cè)項(xiàng)目的要求，能夠真實(shí)反映產(chǎn)品質(zhì)量，做到質(zhì)量可控！新分析方法用于常規(guī)檢測(cè)前必須驗(yàn)證方法轉(zhuǎn)移到新的實(shí)驗(yàn)室后需要進(jìn)行重現(xiàn)驗(yàn)證（或方法確認(rèn)）新藥申報(bào)

17、，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的分析方法必須驗(yàn)證！生產(chǎn)工藝變更、制劑組分變更、分析方法修訂時(shí)，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的分析方法必須驗(yàn)證！方法驗(yàn)證的指導(dǎo)原則中國(guó)藥典2010年版二部附錄XIX A（只有項(xiàng)目沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)）ICH Q2（A/B）FDA cGMPs 211.165，211.194USP 通則, ,驗(yàn)證項(xiàng)目及內(nèi)容不同項(xiàng)目驗(yàn)證內(nèi)容不同！以證明方法適用為根本目的！項(xiàng)目?jī)?nèi)容項(xiàng)目?jī)?nèi)容鑒別鑒別雜質(zhì)定量測(cè)定雜質(zhì)定量測(cè)定雜質(zhì)限度檢查雜質(zhì)限度檢查含量測(cè)定及溶出度測(cè)定含量測(cè)定及溶出度測(cè)定準(zhǔn)確度+精密度+重復(fù)性+中間精密度+專屬性檢測(cè)限定量限線性范圍耐用性 已有重現(xiàn)性驗(yàn)證，不需驗(yàn)證中間精密度。 如一種方法不夠?qū)?，可用其他分析方法予以補(bǔ)充。

18、 視具體情況予以驗(yàn)證。含量測(cè)定方法驗(yàn)證接受標(biāo)準(zhǔn) 容量分析法：原料藥精制品（99.5%）或?qū)φ掌房疾炀芏萊SD0.2%；回收率99.7100.3% UV法：精制品考察精密度RSD1%；制劑回收率98102%；線性吸光度在0.20.7，r0.9999(n 5)，截距近于零。 HPLC法：精制品考察精密度RSD2%；制劑回收率98102%；線性r0.999(n 5)，截距趨于零方法驗(yàn)證的步驟 初步確定分析方法 制定驗(yàn)證方案 驗(yàn)證目的、驗(yàn)證項(xiàng)目、接受標(biāo)準(zhǔn) 準(zhǔn)備儀器設(shè)備、原料、對(duì)照品 人員準(zhǔn)備、文獻(xiàn)材料調(diào)研 開(kāi)展驗(yàn)證 收集實(shí)驗(yàn)記錄和圖譜 提交驗(yàn)證報(bào)告 評(píng)價(jià)方法是否通過(guò)驗(yàn)證方法驗(yàn)證的籌備防止不必要的失誤

19、 用于測(cè)定關(guān)鍵驗(yàn)證參數(shù)的化學(xué)品，應(yīng)具備足夠的數(shù)量，足夠穩(wěn)定，并且按照技術(shù)指標(biāo)核查其具有確切的成分和純度。 其他材料和消耗品也應(yīng)符合要求。應(yīng)選用新的并且符合色譜柱性能指標(biāo)要求的色譜柱（防止材料導(dǎo)致的失?。?分析設(shè)備應(yīng)有明確的規(guī)定和良好的性能，并經(jīng)過(guò)確認(rèn)或校準(zhǔn)，以確保其滿足分析方法要求的功能和性能指標(biāo)。 應(yīng)選擇中等性能的設(shè)備，而不要選擇性能最好的設(shè)備。否則，用不同設(shè)備進(jìn)行中間精密度和重現(xiàn)性研究時(shí)可能會(huì)有問(wèn)題，不容易滿足標(biāo)準(zhǔn)限度的要求。 操作人員應(yīng)對(duì)技術(shù)和設(shè)備足夠熟悉。這樣，他們可以更容易地識(shí)別和診斷不可預(yù)見(jiàn)的問(wèn)題，并且更加高效地完成整個(gè)過(guò)程。分析方法驗(yàn)證順序沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)程序！耗時(shí)最長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)放在最后！1

20、. 專屬性2. 重復(fù)性（RT、Area）3. 線性、定量限、檢測(cè)限、范圍4. 準(zhǔn)確度5. 中間精密度（重現(xiàn)性）6. 耐用性部分?jǐn)?shù)據(jù)可以套用！說(shuō)法不一！斟酌考慮！方法驗(yàn)證項(xiàng)目的要求保證分析方法能夠用于在研藥品的質(zhì)量控制 專屬性有其他成分（雜質(zhì)、輔料等）存在時(shí)，擬定的方法能否準(zhǔn)確（分離）測(cè)定出被測(cè)物；反映方法在有共存物時(shí)對(duì)供試物準(zhǔn)確而專屬的測(cè)定能力；指用于復(fù)雜樣品分析時(shí)是否受到相互干擾。 分別分析加有雜質(zhì)、降解產(chǎn)物等控制成分的樣品和實(shí)際樣品，比較兩組測(cè)試結(jié)果空白無(wú)干擾主成分與有關(guān)物質(zhì)完全分離（分離度r 1.5）峰純度符合規(guī)定（ 980） 考慮基質(zhì)(輔料、水、食品等)對(duì)專屬性的干擾，關(guān)注樣品制備減少

21、干擾的發(fā)生。方法驗(yàn)證項(xiàng)目的要求專屬性 鑒別 與可能的共存物或結(jié)構(gòu)相似物質(zhì)相區(qū)別 空白輔料、結(jié)構(gòu)相似物以及其他組分均呈負(fù)反應(yīng) 含量測(cè)定、雜質(zhì)檢測(cè) 提供代表性色譜圖 表明各組分（成分）位置 分離度符合規(guī)定 含量測(cè)定供試品中加入雜質(zhì)，考察對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響(雜質(zhì)定位) 雜質(zhì)測(cè)定供試品加入雜質(zhì)，考察雜質(zhì)間的分離情況降解試驗(yàn)以及降解途徑的研究 降解條件選擇 酸、堿、氧化 濃度、溫度、時(shí)間 高溫、光照 時(shí)間、光強(qiáng) 分離條件的優(yōu)化 峰純度 分離度 主要降解雜質(zhì)鑒定 降解程度控制 降解1020% 至少有一個(gè)條件降解 與非降解品比較；體現(xiàn)考察摸索和研究的過(guò)程方法驗(yàn)證項(xiàng)目的要求專屬性嘗試選擇合適的色譜柱或色譜條件獲

22、得方法的專屬性評(píng)價(jià)目標(biāo)色譜峰純度（二極管陣列檢測(cè)器、MS）當(dāng)共洗脫化合物的光譜圖非常接近時(shí)，紫外-可見(jiàn)二極管陣列檢測(cè)器就有其局限性，這在代謝物及其母體化合物時(shí)極有可能發(fā)生方法驗(yàn)證項(xiàng)目的要求專屬性 當(dāng)共洗脫化合物的光譜圖非常接近時(shí)，采用MS檢測(cè)器 質(zhì)譜通常比紫外光譜專屬性更強(qiáng)，因此常用于色譜的選擇性評(píng)價(jià)方法驗(yàn)證項(xiàng)目的要求專屬性豬去氧膽酸+膽酸膽酸 RT: 0.00 - 40.0002468101214161820222426283032343638Time (min)05101520253035404550556065707580859095100Relative Abundance15.571

23、5.4615.7314.3415.8914.2016.1513.3116.4417.4918.757.0425.8512.7821.499.838.7224.2826.93 28.9832.465.964.943.222.0036.7238.5935.86NL:1.19E7Base Peak F: ITMS - c ESI Full ms 50.00-1000.00 MS dansuan+zhu2m/z=391.44豬去氧膽酸m/z=407.43膽酸m/z=407.38膽酸異構(gòu)體？膽酸豬去氧膽酸方法驗(yàn)證項(xiàng)目的要求系統(tǒng)適用性 系統(tǒng)適用性 6份供試品溶液 響應(yīng)因子RSD 2.0 % 主峰保留時(shí)間R

24、SD 1.0% 主峰拖尾因子2.0（0.951.05） 主峰與雜質(zhì)峰基線分離（ 2.0 ） 理論板數(shù)符合規(guī)定方法驗(yàn)證項(xiàng)目準(zhǔn)確度方法驗(yàn)證項(xiàng)目準(zhǔn)確度原料藥原料藥 利用已知純度的對(duì)照品或樣品進(jìn)行測(cè)定 與已建立準(zhǔn)確度的另一方法測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較（容量法?。┲苿┲苿?空白輔料+對(duì)照品 制劑+對(duì)照品（無(wú)法獲得空白輔料）方法驗(yàn)證項(xiàng)目的要求精密度 精密度同一樣品多次測(cè)定結(jié)果的接近程度 重復(fù)性 6份供試液（100%濃度），含量RSD 2.0%（n=6） 檢測(cè)范圍內(nèi)，3水平，9樣品測(cè)定（回收率結(jié)果） 中間精密度 （與重現(xiàn)性“二選一”） 6份供試液，雙人雙機(jī)分別測(cè)定，含量RSD 2.0%（n=12） 人員、儀器、操作

25、條件、試劑、色譜柱等因素影響 重現(xiàn)性 不同實(shí)驗(yàn)室，不同人員測(cè)定結(jié)果的精密度（方法通用性，方法轉(zhuǎn)移）準(zhǔn)，不精不準(zhǔn)，精準(zhǔn)，精方法驗(yàn)證項(xiàng)目的要求靈敏度（檢測(cè)限） 檢測(cè)限被測(cè)物能夠被檢測(cè)出的最低濃度或含量。 限度指標(biāo)，無(wú)需定量。 目視法：能夠可靠檢出的被測(cè)物的最低濃度或含量(結(jié)果記錄！) 信噪比法：儀器分析法(計(jì)算基線噪音)，s/n 3 標(biāo)準(zhǔn)差法(I)：A3 (n6) A:平均峰面積；：偏差 標(biāo)準(zhǔn)差法(II)： 空白=0：測(cè)背景噪音(n10)，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)差；計(jì)算標(biāo)曲上3對(duì)應(yīng)的濃度，即為檢出限 空白0：測(cè)背景噪音(n10)，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)差；計(jì)算標(biāo)曲上(Y截距+3)對(duì)應(yīng)的濃度，該濃度即為檢出限 空白0：測(cè)背景噪

26、音(n10)，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)差；計(jì)算標(biāo)曲上3對(duì)應(yīng)的濃度，X截距+該濃度即為檢出限方法驗(yàn)證項(xiàng)目的要求靈敏度（定量限） 檢測(cè)限被測(cè)物能夠被定量測(cè)定的最低濃度或含量，結(jié)果應(yīng)準(zhǔn)確和精密。 信噪比法：儀器分析法(計(jì)算基線噪音)，s/n 10 標(biāo)準(zhǔn)差法：A10 (n6) A:平均峰面積；：偏差 六份定量限溶液，主峰保留時(shí)間RSD 2.0%；主峰峰面積RSD 2.0% 工作站計(jì)算信噪比，注意選取參比時(shí)間 色譜圖顯示s/n方法驗(yàn)證項(xiàng)目的要求線性 線性被測(cè)物濃度與結(jié)果之間呈正比關(guān)系的程度 回歸方程（最小二乘法；一次、二次、雙對(duì)數(shù)） 80%120%；定量限120% n6（至少五個(gè)點(diǎn)，均勻分布） r 0.998 Y截距在

27、100%響應(yīng)值的2%內(nèi) 響應(yīng)因子RSD 2.0%方法驗(yàn)證項(xiàng)目的要求范圍 范圍 達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性下，測(cè)試方法使用的高、低濃度或量的區(qū)間 根據(jù)分析方法具體應(yīng)用和線性、準(zhǔn)確性、精密度驗(yàn)證的結(jié)果和要求確定 一般用與檢測(cè)結(jié)果相同的單位表述（百分比、百萬(wàn)分之幾）。 含量測(cè)定：80%120% 含量均勻度：70%130% 雜質(zhì)：報(bào)告值（定量限）限度120% 溶出度：范圍20%（下限-20%上限+20%）10012080線性回收精密度范圍方法驗(yàn)證項(xiàng)目的要求耐用性 耐用性實(shí)驗(yàn)條件略有變動(dòng)，是否影響檢測(cè)結(jié)果；衡量城規(guī)情況下實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重現(xiàn)性；如方法易受影響，應(yīng)著重注明！關(guān)注溶液穩(wěn)定性影響（不同儲(chǔ)存時(shí)間的樣

28、品和對(duì)照品溶液與新制備對(duì)照品溶液的比對(duì)結(jié)果分析）關(guān)注提取條件影響！常規(guī)考察：流動(dòng)相比例變化(5%)、pH變化(0.2)、柱溫變化(5)、流速變化(20% )、檢測(cè)波長(zhǎng)（2nm）色譜柱：同品牌不同批號(hào)每條件測(cè)試2次拖尾因子2.0主峰與雜質(zhì)峰基線分離各條件含量數(shù)據(jù) RSD2.0%方法確認(rèn)和轉(zhuǎn)移 方法驗(yàn)證主要在產(chǎn)品開(kāi)發(fā)階段完成 生產(chǎn)后的驗(yàn)證包括方法確認(rèn)和方法轉(zhuǎn)移 方法確認(rèn)本單位生產(chǎn)的產(chǎn)品是否符合變更后的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)或藥典標(biāo)準(zhǔn)關(guān)注新舊方法的區(qū)別確認(rèn)新方法的接受標(biāo)準(zhǔn)對(duì)實(shí)際樣品和穩(wěn)定性樣品進(jìn)行考察 方法轉(zhuǎn)移研發(fā)單位轉(zhuǎn)移方法至接受單位（生產(chǎn)單位）恰當(dāng)?shù)姆桨盖‘?dāng)?shù)姆桨高m用的方法適用的方法精密的驗(yàn)證精密的驗(yàn)證優(yōu)質(zhì)的

29、產(chǎn)品優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品雜質(zhì)譜分析 根據(jù)主成分及雜質(zhì)的理化性質(zhì)、化學(xué)結(jié)構(gòu)、雜質(zhì)的控制要求，采用適當(dāng)手段將雜質(zhì)的信號(hào)放大，易于辨認(rèn)和定量。 化合物結(jié)構(gòu)特征、理化性質(zhì)、劑型特征、工藝過(guò)程、標(biāo)準(zhǔn)要素 綜合設(shè)計(jì)、嚴(yán)謹(jǐn)研究、規(guī)范驗(yàn)證。 專屬、靈敏、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)捷。 分析方法各有局限，注意不同原理分析方法間的相互補(bǔ)充和驗(yàn)證。 雜質(zhì)譜研究遵循原則：雜質(zhì)譜分析方法建立 方法的選擇 不同原理方法比較 方法的最優(yōu)化 色譜系統(tǒng)選擇 雜交色譜（柱串聯(lián)） 二維色譜 新技術(shù)應(yīng)用（HILIC） 檢測(cè)器的選擇 UV、DAD/ ELSD、CAD、NQAD IR / MS雜質(zhì)譜分析雜質(zhì)比較與譜峰歸屬 比較方法 圖譜疊加 平行列表 逐峰比較 結(jié)

30、果報(bào)告 新雜質(zhì)（個(gè)數(shù)、單個(gè)最大、總量） 單一新雜質(zhì)量（0.1%？、0.2%？） 新雜質(zhì)總量所占比例峰序號(hào)峰序號(hào)溶劑峰溶劑峰對(duì)照藥對(duì)照藥自制品自制品峰性質(zhì)峰性質(zhì)新增雜質(zhì)總量新增雜質(zhì)總量10.20.20.2溶劑峰24.2/0.2%新增雜質(zhì)新增雜質(zhì)38.2/0.5%8.2/0.3%原有雜質(zhì)411.8/0.5%苯乙胺518.2/0.5%新增雜質(zhì)（苯乙醇）雜質(zhì)總量1.2%1.0%0.7%雜質(zhì)譜分析阿奇霉素中可能的雜質(zhì)：37種原料：紅霉素 A、紅霉素 B、紅霉素 C、紅霉素D、紅霉素 E、紅霉素 F、阿奇霉素B、阿奇霉素C、阿奇霉素E、阿奇霉素F中間體：紅霉素A肟（Z）、6，9-亞胺醚、氮紅霉素A、紅霉素

31、A肟（E）、紅霉素 C肟（E）、9，11-亞胺醚、紅霉素C 6，9-亞胺醚、紅霉素A內(nèi)酰胺 副產(chǎn)物：紅霉素-N-氧化物、N-去甲基紅霉素A、N-去甲基阿奇霉素A、氨基阿奇霉素A、N-甲?；?N去甲基阿奇霉素A、N-去甲基-N-苯磺酰基阿奇霉素、阿奇霉素N-氧化物、3-去（二甲氨基）- 3,4-去氫阿奇霉素、 O-甲苯磺酰基紅霉素肟、紅霉素Z肟重排物、氮紅霉素11，12-硼酸酯、 N，N-去二甲基N-甲?；⑵婷顾谹、丙基阿奇霉素、3-N， N-去二甲基氨基-酮基阿奇霉素A、阿奇霉素11，12-硼酸酯降解產(chǎn)物：去克拉克定糖阿奇霉素A、去克拉克定糖氮紅霉素、紅霉素8， 9-脫水-6，9-半縮酮、紅

32、霉素6，9：9，12-螺縮酮系統(tǒng)圖實(shí)際圖雜質(zhì)研究關(guān)鍵點(diǎn)方法合理性色譜方法色譜方法（HPLC、TLC、GC）HPLC：雜質(zhì)是否有UV吸收(檢測(cè)器的選擇)、溶液是否穩(wěn)定、方法本身是否引起藥物降解TLC：固定相的選擇顯色方式（UV吸收的差異、顯色劑靈敏度的差異）溶液是否穩(wěn)定薄層固定相是否會(huì)引起藥物的降解檢測(cè)手段檢測(cè)手段檢測(cè)器DAD / UVELSD /CAD/ NQADIR /MS 首選DAD 檢測(cè)器，考慮”通用”檢測(cè)器檢出雜質(zhì)的數(shù)與量干擾因素操作的便捷性 除非GC，不建議衍生化雜質(zhì)研究關(guān)鍵點(diǎn)建立的方法能否有效檢出所有雜質(zhì)？ HPLC洗脫方法的選擇-等度洗脫等度洗脫 or 梯度梯度洗脫洗脫 等度洗脫

33、極性大的化合物可能被掩蓋；極性小的化合物難以被洗脫，甚至保留在柱上 梯度洗脫雜質(zhì)研究中值得借鑒的手段；有效檢出極性相差懸殊的系列雜質(zhì)驗(yàn)證等度洗脫法對(duì)各類(lèi)雜質(zhì)的檢出能力原方法原方法新方法新方法雜質(zhì)研究關(guān)鍵點(diǎn)測(cè)定值是否真實(shí)反映雜質(zhì)的含量？ 申報(bào)資料中“HPLC檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇”問(wèn)題 (a)直接將主藥的最大吸收波長(zhǎng)選作檢測(cè)波長(zhǎng); (b)簡(jiǎn)單地套用含量測(cè)定的色譜條件。實(shí)際仍是以主藥的最大吸收波長(zhǎng)作為有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)波長(zhǎng); (c)以樣品進(jìn)行破壞性試驗(yàn)（酸、堿、熱、光照、氧化等）后的溶液做紫外掃描。由于未破壞主藥所占比例較大，故破壞性試驗(yàn)后溶液的最大吸收波長(zhǎng)一般仍為主藥的最大吸收波長(zhǎng)。若盲目地將主藥的最大吸收波

34、長(zhǎng)確定為檢測(cè)波長(zhǎng)，則雜質(zhì)在此波長(zhǎng)下的吸收可能偏低；某些雜質(zhì)甚至無(wú)吸收，這樣會(huì)造成對(duì)雜質(zhì)含量的低估甚至漏檢，從而不能反映產(chǎn)品的真實(shí)質(zhì)量。無(wú)紫外吸收或檢測(cè)波長(zhǎng)處吸收相差較大的多種化合物，有時(shí)在單一檢測(cè)波長(zhǎng)處不能檢出雜質(zhì)研究關(guān)鍵點(diǎn)測(cè)定值是否真實(shí)反映雜質(zhì)的含量？HPLC波長(zhǎng)選擇解決方案對(duì)產(chǎn)品中可能存在的雜質(zhì)（合成原料、中間體、副產(chǎn)物以及降解產(chǎn)物）的紫外吸收特性進(jìn)行研究。 已知雜質(zhì)的紫外吸收特性可采用對(duì)其流動(dòng)相溶液直接進(jìn)行掃描的方法考察; 未知雜質(zhì)（如未知降解產(chǎn)物等）可通過(guò)二極管陣列檢測(cè)器考察其紫外吸收情況。根據(jù)各主要雜質(zhì)及主成分的紫外吸收特性，選取響應(yīng)值基本一致的波長(zhǎng)作為有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)波長(zhǎng)。 若對(duì)不同

35、雜質(zhì)難于找到均適宜的檢測(cè)波長(zhǎng)： 選擇在不同波長(zhǎng)下分別測(cè)定， 采用加校正因子的主成分自身對(duì)照法。改用通用檢測(cè)器（ELSD、CAD、NQAD）雜質(zhì)研究首選HPLC-DAD；建議HPLC-DAD-CAD聯(lián)用！雜質(zhì)研究關(guān)鍵點(diǎn)多種方法聯(lián)用 由雜質(zhì)多樣性復(fù)雜性和方法局限性所決定。 單一方法不能滿足多個(gè)雜質(zhì)的檢測(cè)時(shí)，可采用兩種或兩種以上的方法互為補(bǔ)充。 化學(xué)法、色譜法、光譜法、生物檢定法 同一方法采用不同的測(cè)試條件，如正相HPLC、反相HPLC、不同流動(dòng)相的反相HPLC等 分離技術(shù)與檢測(cè)手段聯(lián)用，較為有效，如HPLC、GC、LC-MS、GC-MS、HPLC-DAD、CE等 多維色譜（HPLC-IC） 多檢測(cè)

36、器聯(lián)用（LC-DAD-CAD-MS）雜質(zhì)研究關(guān)鍵點(diǎn)檢測(cè)方法的規(guī)范性驗(yàn)證 專屬性：原料藥合成中間體、粗品等的分離度考察 原料藥及制劑的強(qiáng)制破壞實(shí)驗(yàn) 制劑輔料干擾實(shí)驗(yàn) 雜質(zhì)加入實(shí)驗(yàn) 與藥典或經(jīng)過(guò)論證的其他方法比較 峰純度檢測(cè)（DAD/MS）雜質(zhì)研究關(guān)鍵點(diǎn)檢測(cè)方法的規(guī)范性驗(yàn)證 靈敏度：通常用檢測(cè)限及定量限表征 直觀評(píng)價(jià)、信噪比、響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)差和斜率獲得。 關(guān)注雜質(zhì)紫外吸收特性，確定適宜波長(zhǎng)； 判斷是否需要采用雜質(zhì)對(duì)照品 精密度： 重復(fù)性(在相同條件下由同一分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度) 中間精密度(在同一實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備測(cè)定結(jié)果的精密度) 重現(xiàn)性(在不同實(shí)驗(yàn)室由不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度)雜質(zhì)研究關(guān)鍵點(diǎn)檢測(cè)方法的規(guī)范性驗(yàn)證 準(zhǔn)確度： 已知雜質(zhì)：回收率（根據(jù)精密度、專屬性、線性）推斷 未知雜質(zhì)：與另一成熟方法比對(duì)、根據(jù)質(zhì)量平衡原理結(jié)合含量等結(jié)果進(jìn)行粗略判定，必要時(shí)研究幾種不同色譜條件甚至不同測(cè)定原理的方法進(jìn)行比較選用 線性：在設(shè)計(jì)范圍內(nèi)，響應(yīng)值與待測(cè)物質(zhì)量之間成正比例關(guān)系的程度。 范圍：檢測(cè)方法能達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性的高、低濃度或量的區(qū)間 范圍應(yīng)在規(guī)定限度的20%