核仁組織者區(qū)NOR的銀染顯示法

1、核仁組織者區(qū)NOR的銀染顯示法實驗原理 染色體上為5.8SrRNA、18SrRNA和28SrRNA編碼的基因（rDNA）所在的部位，稱為核仁組成區(qū)（NOR）。在間期細(xì)胞中，這一區(qū)域的染色質(zhì)，參與形成核仁，由于核仁直至前期結(jié)束才完全消散，所以這一部分染色質(zhì)常常來不及完全收縮，在中期染色體上，比其它染色質(zhì)更疏松，因而被淡染，即表現(xiàn)為次縊痕結(jié)構(gòu)。 每個染色體組中，常有多個NOR。例如人的23對染色體中，有5對端部著絲點染色體短臂的次縊痕處為NOR。然而，并不是所有的NOR隨時都出于轉(zhuǎn)錄之中。當(dāng)NOR在間期轉(zhuǎn)錄時，產(chǎn)生一種與轉(zhuǎn)錄活動有關(guān)的酸性蛋白，此蛋白可保留至中期并能將染液中的銀離子還原為金屬銀而顯

2、現(xiàn)為黑色。所以銀染法可在中期染色體上顯示具有轉(zhuǎn)錄活性的NOR數(shù)目，而且，染色的深黑程度，還可以反應(yīng)出基因的活性高低。 第1頁/共7頁實驗方法 銀染的具體方法有很多種，如Ag-AS法,Ag-I法等，我們在此采用快速銀染法，具體操作如下： 在染色體標(biāo)本上滴加含1%甲酸的2%明膠水溶液3滴，再加50%硝酸銀3滴，混合后蓋上蓋片，將標(biāo)本置于60恒溫臺上，處理至液體為棕黃色為止，自來水沖洗，空氣干燥，鏡檢。第2頁/共7頁實驗結(jié)果 若染色適中，間期核及染色體為金黃色，油鏡觀察，可在某些染色體上看到成對的黑色小點，此即為銀染NOR（Ag- NOR）。 若整張片子色淡，間期核及染色體都不易看清，為染色時間不足

3、，在未滴過香柏油的情況下，可重新續(xù)染。 若染色時間偏長，則染色體為棕色，此時，仍可看到黑色的NOR，只是NOR與染色體間的反差較低。染色嚴(yán)重過度時，整張片子都布滿黑色沉淀，這樣的標(biāo)本一般都丟棄不用。若標(biāo)本珍貴，也可采用特殊方法褪色后重新染色。第3頁/共7頁作 業(yè) 在油鏡下繪制一中期分裂相圖，顯示Ag- NOR的位置、數(shù)目和形態(tài)。第4頁/共7頁第5頁/共7頁實驗原理 染色體上為5.8SrRNA、18SrRNA和28SrRNA編碼的基因（rDNA）所在的部位，稱為核仁組成區(qū)（NOR）。在間期細(xì)胞中，這一區(qū)域的染色質(zhì)，參與形成核仁，由于核仁直至前期結(jié)束才完全消散，所以這一部分染色質(zhì)常常來不及完全收縮，在中期染色體上，比其它染色質(zhì)更疏松，因而被淡染，即表現(xiàn)為次縊痕結(jié)構(gòu)。 每個染色體組中，常有多個NOR。例如人的23對染色體中，有5對端部著絲點染色體短臂的次縊痕處為NOR。然而，并不是所有的NOR隨時都出于轉(zhuǎn)錄之中。當(dāng)NOR在間期轉(zhuǎn)錄時，產(chǎn)生一種與轉(zhuǎn)錄活動有關(guān)的酸性蛋白，此蛋白可保留至中期并能將染液中的銀離子還原為金屬銀而顯現(xiàn)為黑色。所以銀染法