宋銀宏-病毒的感染與免疫-診斷與防治

1、第第1919章章 病毒的感染與免疫病毒的感染與免疫 viral infection and immunity 宋銀宏宋銀宏 第一節(jié)第一節(jié) 病毒的感染病毒的感染 一、病毒感染的傳播方式與感染途徑一、病毒感染的傳播方式與感染途徑1.水平傳播水平傳播(horizontal transmission):粘膜：粘膜： 呼吸道、消化道、泌尿生殖道、呼吸道、消化道、泌尿生殖道、 眼結(jié)膜眼結(jié)膜皮膚：皮膚： 輸血（或血制品）、注射輸血（或血制品）、注射 ；昆蟲叮；昆蟲叮咬；動(dòng)物咬傷咬；動(dòng)物咬傷2.垂直傳播垂直傳播(vertical transmission): HBV、RV、HIV、CMV感染途徑：感染途徑：呼

2、吸道、呼吸道、消化道、消化道、經(jīng)皮膚（蟲媒）經(jīng)皮膚（蟲媒）感染、感染、血液傳播、血液傳播、泌尿生殖道感泌尿生殖道感染、染、胎盤或產(chǎn)道感胎盤或產(chǎn)道感染染二、病毒感染的類型隱性感染隱性感染(inapparent infection) subclinical infection顯性感染顯性感染(apparent infection)1.急性感染急性感染(acute infection)2.持續(xù)性感染持續(xù)性感染(persistent infection) 慢性感染慢性感染(chronic infection) 潛伏感染潛伏感染(latent infection)HSV機(jī)體機(jī)體急性口炎急性口炎三叉神經(jīng)節(jié)

3、細(xì)胞三叉神經(jīng)節(jié)細(xì)胞口角口角皰疹皰疹慢性感染：慢性感染： 病程長(zhǎng)病毒可檢出病程長(zhǎng)病毒可檢出 如如HBV潛伏感染：潛伏感染：可反復(fù)激活，急性發(fā)作可反復(fù)激活，急性發(fā)作病毒只有在急性發(fā)作時(shí)才被檢出病毒只有在急性發(fā)作時(shí)才被檢出如如 HSV慢發(fā)病毒感染：慢發(fā)病毒感染：潛伏期長(zhǎng)，發(fā)病后為亞急性進(jìn)行性直至死亡潛伏期長(zhǎng)，發(fā)病后為亞急性進(jìn)行性直至死亡尋常病毒尋常病毒非尋常病毒非尋常病毒prion麻疹病毒麻疹病毒:SSPE; HIV:AIDS持持續(xù)續(xù)性性感感染染 三、病毒感染的致病機(jī)制三、病毒感染的致病機(jī)制病毒感染對(duì)宿主細(xì)胞的直接作用病毒感染對(duì)宿主細(xì)胞的直接作用1.1.溶細(xì)胞性感染溶細(xì)胞性感染 殺細(xì)胞效應(yīng)殺細(xì)胞效應(yīng)

4、(cytocidal effect)-無包膜病毒n無包膜病毒；阻斷細(xì)胞大分子合無包膜病毒；阻斷細(xì)胞大分子合成；病毒蛋白的毒性作用；影響細(xì)成；病毒蛋白的毒性作用；影響細(xì)胞溶酶體；細(xì)胞器的改變。胞溶酶體；細(xì)胞器的改變。n用顯微鏡可以觀察到病毒感染的用顯微鏡可以觀察到病毒感染的細(xì)胞出現(xiàn)腫脹、變性、壞死、從瓶細(xì)胞出現(xiàn)腫脹、變性、壞死、從瓶壁脫落等現(xiàn)象，稱為細(xì)胞致病變作壁脫落等現(xiàn)象，稱為細(xì)胞致病變作用用（cytopathic effect，CPE）。）。2.穩(wěn)定狀態(tài)感染穩(wěn)定狀態(tài)感染(steady state infection):有包膜病毒有包膜病毒 (1)(1)細(xì)胞表面出現(xiàn)病毒基因編碼的新抗原細(xì)胞表面

5、出現(xiàn)病毒基因編碼的新抗原(2)(2)如果胞膜表面的病毒蛋白有融合膜生物活性，則易造成如果胞膜表面的病毒蛋白有融合膜生物活性，則易造成細(xì)胞融合細(xì)胞融合: :形成多核巨細(xì)胞形成多核巨細(xì)胞, ,如麻疹病毒如麻疹病毒3.細(xì)胞凋亡細(xì)胞凋亡(cellular apoptosis):1972年年Kerr; 腺病毒、腺病毒、HIV等等細(xì)胞細(xì)胞鼓泡、細(xì)胞核濃縮鼓泡、細(xì)胞核濃縮凋亡小體凋亡小體(apoptic body)電泳：階梯式電泳：階梯式DNA條帶。條帶。（2002年獲諾貝爾獎(jiǎng)）年獲諾貝爾獎(jiǎng)） 4.基因整合與細(xì)胞轉(zhuǎn)化基因整合與細(xì)胞轉(zhuǎn)化: 整合整合（integration）細(xì)胞增生細(xì)胞增生(hyper-pla

6、sia)或轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)化(transformation) 1911年年, Rous;Rous sarcoma virus, RSV. 1966年獲諾貝爾獎(jiǎng)年獲諾貝爾獎(jiǎng) ( Rous18791970） 與人類惡性腫瘤密切相關(guān)的病毒有：與人類惡性腫瘤密切相關(guān)的病毒有： 人乳頭瘤病毒（人乳頭瘤病毒（HPV）-宮頸癌宮頸癌 HBV、HCV-原發(fā)性肝癌原發(fā)性肝癌 EB病毒病毒( EBV )-鼻咽癌、惡性淋巴瘤鼻咽癌、惡性淋巴瘤 人人T細(xì)胞白血病病毒細(xì)胞白血病病毒型（型（HTLV-）-白血病白血病5 5. .包涵體包涵體(inclusion body)形成：有些病毒感染細(xì)胞后，在細(xì)胞質(zhì)和（或）細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)嗜酸

7、性或嗜堿性、大小數(shù)量不同的圓形或卵圓形斑塊結(jié)構(gòu)。病毒感染的免疫病理作用病毒感染的免疫病理作用: :體液、細(xì)胞免疫體液、細(xì)胞免疫1.抗體介導(dǎo)的免疫病理作用抗體介導(dǎo)的免疫病理作用 靶細(xì)胞靶細(xì)胞+抗體抗體+補(bǔ)體補(bǔ)體靶細(xì)胞溶解靶細(xì)胞溶解 Ag+AbAg-Ab沉積沉積型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng)2.細(xì)胞介導(dǎo)的免疫病理作用細(xì)胞介導(dǎo)的免疫病理作用: CTL殺傷靶細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞 TDTH細(xì)胞損傷細(xì)胞損傷3.抑制免疫系統(tǒng)的功能抑制免疫系統(tǒng)的功能: 麻疹病毒麻疹病毒、RV、CMV 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化 HIV CD4+（TH）細(xì)胞的功能細(xì)胞的功能持續(xù)性感染、惡性腫持續(xù)性感染、惡性腫瘤瘤第二節(jié)第二節(jié) 抗病毒免疫抗病毒免

8、疫一、非特異性免疫一、非特異性免疫(non-specific immunity)1.遺傳因素遺傳因素(hereditable factor):2.屏障作用屏障作用(action of protective screen):皮膚屏障皮膚屏障粘膜屏障粘膜屏障胎盤屏障胎盤屏障母體子宮的基蛻膜，另一部分是胎兒的絨毛膜。血腦屏障血腦屏障3.3.吞噬細(xì)胞吞噬細(xì)胞(phagocyte)(phagocyte)和和NKNK細(xì)胞：細(xì)胞：巨噬細(xì)胞：巨噬細(xì)胞：NK細(xì)胞細(xì)胞(natural killer cell): TNF-, TNF- 作用特點(diǎn)：作用特點(diǎn)： 1）殺傷過程不受）殺傷過程不受MHC限制，也不依賴抗體限制

9、，也不依賴抗體 2）對(duì)靶細(xì)胞無特異性）對(duì)靶細(xì)胞無特異性 3）殺傷作用出現(xiàn)早；）殺傷作用出現(xiàn)早；4h 4）部分細(xì)胞因子可激活）部分細(xì)胞因子可激活中性粒細(xì)胞：對(duì)病毒感染無防御作用中性粒細(xì)胞：對(duì)病毒感染無防御作用4.干擾素干擾素( interferon,IFN ):病毒或其他干擾素誘生劑刺激人或動(dòng)物細(xì)胞所產(chǎn)生的一病毒或其他干擾素誘生劑刺激人或動(dòng)物細(xì)胞所產(chǎn)生的一類具有抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等多種生物活性的糖類具有抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等多種生物活性的糖蛋白。蛋白。種類：種類：抗原性抗原性抗病毒機(jī)制：抗病毒機(jī)制：通過誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生通過誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生抗病毒蛋白抗病毒蛋白 起作用。起作用?？共《咀饔玫目共《?/p>

10、作用的特點(diǎn)：特點(diǎn)： a 廣譜抗病毒廣譜抗病毒 b 抑制抑制病毒而不是殺病毒病毒而不是殺病毒 c 抗病毒作用具有抗病毒作用具有種屬特異性種屬特異性 d 間接抗病毒間接抗病毒IFN誘生劑誘生劑(inducer):病毒、細(xì)菌內(nèi)毒素、原蟲、病毒、細(xì)菌內(nèi)毒素、原蟲、poly I:C二、特異性免疫二、特異性免疫(specific immunity)（一）體液免疫（一）體液免疫1.中和抗體中和抗體(neutrolizing antibody):IgG、IgM、IgA（SIgA）2.非中和抗體非中和抗體(non- neutrolizing antibody):3.抗體介導(dǎo)對(duì)靶細(xì)胞的作用抗體介導(dǎo)對(duì)靶細(xì)胞的作用:

11、靶細(xì)胞+抗體+補(bǔ)體細(xì)胞溶解 靶細(xì)胞+抗體（ IgG-Fc）-NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞靶細(xì)胞裂解：ADCC（二）細(xì)胞免疫（二）細(xì)胞免疫(cellular immunity)T、K、NK、M 病毒病毒機(jī)體機(jī)體致敏致敏T細(xì)胞細(xì)胞CTL:穿孔素、細(xì)胞毒素穿孔素、細(xì)胞毒素TH ：IFN、TNF、ILCTLCTL殺傷病毒感染的靶細(xì)胞殺傷病毒感染的靶細(xì)胞1.產(chǎn)生牢固免疫力產(chǎn)生牢固免疫力:全身性病毒感染全身性病毒感染 只有單一血清型的病毒感染只有單一血清型的病毒感染2.產(chǎn)生短暫免疫力產(chǎn)生短暫免疫力:局部性病毒感染局部性病毒感染病毒血清型多病毒血清型多病毒抗原易發(fā)生變異病毒抗原易發(fā)生變異第第2020章章 病毒感染的診

12、斷與防治病毒感染的診斷與防治 Laboratory Diagnosis and prevention一、標(biāo)本的采集與送檢：一、標(biāo)本的采集與送檢：用于分離培養(yǎng)的標(biāo)本：用于分離培養(yǎng)的標(biāo)本：采取病程初期或急性期標(biāo)本、防止病毒滅活血清學(xué)診斷的標(biāo)本：血清學(xué)診斷的標(biāo)本： 雙份血清(paired serum)第一節(jié)第一節(jié) 病毒感染的檢查方病毒感染的檢查方法法Laboratory Diagnosis二、常二、常規(guī)規(guī)分離分離與鑒與鑒定定動(dòng)物接種動(dòng)物接種animal inoculation雞胚接種雞胚接種egg inoculation組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)器官培養(yǎng)移植培養(yǎng) 細(xì)胞培養(yǎng) 原代細(xì)胞培養(yǎng)原代細(xì)胞培養(yǎng)二倍體細(xì)胞培

13、養(yǎng)二倍體細(xì)胞培養(yǎng)傳代細(xì)胞培養(yǎng)傳代細(xì)胞培養(yǎng)三大培三大培養(yǎng)方法養(yǎng)方法病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖的指標(biāo)病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖的指標(biāo)1、CPE2、紅細(xì)胞吸附、紅細(xì)胞吸附正常細(xì)胞正常細(xì)胞病變細(xì)胞病變細(xì)胞病毒數(shù)量和感染性病毒數(shù)量和感染性測(cè)定測(cè)定1、蝕斑試驗(yàn)、蝕斑試驗(yàn)2、LD50 或或 TCID50 感染雞胚動(dòng)物或細(xì)胞后，引起 50% 發(fā)生死亡或病變的最小量 病毒感染單層細(xì)胞后，產(chǎn)生的局限性病灶，稱蝕斑，蝕斑是由一個(gè)感染性病毒體復(fù)制形成的，稱蝕斑形成單位，病毒懸液中的感染性病毒量以每毫升的蝕斑形成單位(plaque forming unit, PFU)來表示 病毒的血清學(xué)診斷病毒的血清學(xué)診斷中和試驗(yàn)中和試驗(yàn)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)補(bǔ)體

14、結(jié)合試驗(yàn)血凝抑制試驗(yàn)血凝抑制試驗(yàn)免疫擴(kuò)散等免疫擴(kuò)散等三、病毒感染的血清學(xué)診斷三、病毒感染的血清學(xué)診斷 (serodiagnosis ) 四、病毒的快速診斷四、病毒的快速診斷(rapid diagnosis)光鏡光鏡-包涵體電鏡電鏡免疫熒光免疫熒光ELISA分子生物學(xué)技術(shù)分子生物學(xué)技術(shù)雜交Southern blotPCRNorthern blot第二節(jié)第二節(jié) 病毒感染的防治病毒感染的防治免疫預(yù)防免疫預(yù)防(immunoprophylaxis)人工主動(dòng)免疫人工主動(dòng)免疫(artificial active immunity)滅活疫苗：乙腦疫苗乙腦疫苗 狂犬疫苗狂犬疫苗 流感滅活疫苗流感滅活疫苗減毒活疫

15、苗： 脊髓灰質(zhì)炎疫苗脊髓灰質(zhì)炎疫苗麻疹疫苗麻疹疫苗腮腺炎疫苗腮腺炎疫苗風(fēng)疹疫苗風(fēng)疹疫苗HAV疫苗疫苗 亞單位疫苗：Inactived vaccine Live attenuated vaccine牛痘疫苗牛痘疫苗 流感流感 HBV免疫預(yù)防免疫預(yù)防(immunoprophylaxis)人工被動(dòng)免疫人工被動(dòng)免疫(artificial passive immunity)免疫血清：丙種球蛋白：細(xì)胞因子：含有抗病毒中和抗體含有抗病毒中和抗體IL-2 IFN TNF立即生效、免疫力維持時(shí)間短（1 m） 病毒感染的治療病毒感染的治療(therapy)(therapy) 一、抑制病毒穿入與脫殼一、抑制病毒穿入

16、與脫殼 金剛烷胺（金剛烷胺（amantadineamantadine）用于甲型流感的治療）用于甲型流感的治療 二、二、 抑制病毒生物合成抑制病毒生物合成 1 1、核苷類化合物、核苷類化合物(Nucleotide analogues)(Nucleotide analogues)：通通過阻抑子代病毒基因的合成與表達(dá)，抑制病毒復(fù)制。過阻抑子代病毒基因的合成與表達(dá)，抑制病毒復(fù)制。 常用藥物有常用藥物有: : 用于用于DNADNA病毒感染病毒感染: :碘尿苷（皰疹凈）、無環(huán)鳥苷碘尿苷（皰疹凈）、無環(huán)鳥苷 （ 阿昔洛韋）、阿糖腺苷、丙氧鳥苷。阿昔洛韋）、阿糖腺苷、丙氧鳥苷。 疊氮胸苷（疊氮胸苷（AZTAZT） 廣譜抗病毒廣譜抗病毒: :3-3-氮唑核苷（病毒唑），對(duì)多種氮唑核苷（病毒唑），對(duì)多種RNA RNA 或或DNADNA病毒有抑制作用。病毒有抑制作用。2 2、病毒蛋白酶抑制劑：通過抑制病毒蛋白酶的、病毒蛋白酶抑制劑：通過抑制病毒蛋白酶的活性，阻止病毒的復(fù)制?；钚?，阻止病毒的復(fù)制。 常用藥物常用藥物英迪納瓦英迪納瓦（indinavirindinavir）、）、瑞托納瓦瑞托納瓦(ritonavir)(ritonavir)等，對(duì)等，對(duì)HIVHIV有一定抑制作用。有一定抑制作用。3 3、干擾素（、干擾素（InterferonInterf