藥物分析學(xué)：第03章 藥物檢查

1、JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE22:411藥品檢驗(yàn)工作的基本程序藥品檢驗(yàn)工作的基本程序取樣取樣鑒別鑒別檢查檢查含量測(cè)定含量測(cè)定寫出檢驗(yàn)報(bào)告寫出檢驗(yàn)報(bào)告第章 藥物的雜質(zhì)檢查第一節(jié) 雜質(zhì)和雜質(zhì)限量檢查JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE22:413一、藥物的純度一、藥物的純度 藥物的純度是指藥物的純凈程度。雜質(zhì)是在生產(chǎn)和貯藏過(guò)程中引入的，有的雜質(zhì)沒有治療作用，有的影響療效和穩(wěn)定性，有的甚至危害人體健康。 檢查藥物中的雜質(zhì)控制其純度是確保用藥安全有效保證藥品質(zhì)量的一個(gè)重要方面。 雜質(zhì)檢查收載在藥物的“檢查”項(xiàng)下

2、，包括檢查方法。 評(píng)價(jià)藥物的純度包括性狀、理化常數(shù)、雜質(zhì)檢查和含量測(cè)定等。JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE22:414藥物的純度要求藥物的純度 指藥物的純凈程度雜質(zhì)檢查 也稱純度檢查雜質(zhì)（impurity） 無(wú)治療作用，影響藥物穩(wěn)定性和療效，對(duì)人體健康有害的物質(zhì)。 注意注意藥物純度與化學(xué)純度的區(qū)別JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE22:415二、藥物中的雜質(zhì)來(lái)源二、藥物中的雜質(zhì)來(lái)源1.在生產(chǎn)過(guò)程中引入：反映物、中間體、副產(chǎn)物、有機(jī)溶劑、試劑等。例如鹽酸普魯卡因、在高溫滅菌過(guò)程中可產(chǎn)生對(duì)氨基苯甲酸和二乙氨基

3、乙醇。2.在貯藏過(guò)程中產(chǎn)生：水解、氧化、分解、異構(gòu)化、晶型轉(zhuǎn)變、聚合、潮解、發(fā)霉等 藥物中的雜質(zhì)按來(lái)源可分為一般雜質(zhì)和特殊雜質(zhì)。按其性質(zhì)可分為信號(hào)雜質(zhì)和有害雜質(zhì)JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE22:416種類：按來(lái)源分：按結(jié)構(gòu)分：按性質(zhì)分：無(wú)機(jī)雜質(zhì)有機(jī)雜質(zhì)一般雜質(zhì)特殊雜質(zhì)信號(hào)雜質(zhì)有害雜質(zhì)JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE22:417三、雜質(zhì)的限量檢查三、雜質(zhì)的限量檢查雜質(zhì)限量（ L ） = 式中：雜質(zhì)最大允許量=(濃度C 體積V)標(biāo)所以：L = C V / S 100%雜質(zhì)最大允許量供試品量（ S ） 1

4、00%例例1 1 對(duì)乙酰氨基酚中檢查氯化物。取對(duì)乙酰對(duì)乙酰氨基酚中檢查氯化物。取對(duì)乙酰氨基酚氨基酚2.02.0g, g,加水加水100100ml,ml,加熱溶解后冷卻，濾過(guò)，加熱溶解后冷卻，濾過(guò)，取濾液取濾液2525mlml，依法檢查氯化物，發(fā)生的渾濁依法檢查氯化物，發(fā)生的渾濁與標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液與標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液5.05.0ml ml （每每1 1ml ml 相當(dāng)于相當(dāng)于1010ugug 的的ClCl）制成的對(duì)照液比較，不得更濃。問(wèn)氯制成的對(duì)照液比較，不得更濃。問(wèn)氯化物的限量是多少？化物的限量是多少？C VL= 100% S10 52 25100 1000000100% =0.01%例例2 2 葡

5、萄糖中檢查重金屬。取葡萄糖葡萄糖中檢查重金屬。取葡萄糖4.04.0g g，加水加水2323mlml溶解后，加醋酸鹽緩沖液溶解后，加醋酸鹽緩沖液( (pH3.5)2mlpH3.5)2ml，依法檢查重金屬，含重金屬依法檢查重金屬，含重金屬不得過(guò)百萬(wàn)分之五。問(wèn)應(yīng)取標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液多不得過(guò)百萬(wàn)分之五。問(wèn)應(yīng)取標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液多少少mlml（每每1 1ml ml 相當(dāng)于相當(dāng)于1010ugug的的PbPb）? ?L SV=C4 5 /1000000 10 1/1000000=2(ml)例例3 3 溴化鈉中砷鹽檢查，規(guī)定含砷量不得過(guò)溴化鈉中砷鹽檢查，規(guī)定含砷量不得過(guò)0.0004%0.0004%，藥典規(guī)定，取標(biāo)準(zhǔn)砷液，藥典

6、規(guī)定，取標(biāo)準(zhǔn)砷液2.02.0mlml（1ugAs/ml1ugAs/ml）。）。應(yīng)取供試品多少克？應(yīng)取供試品多少克？ C VS=L2 1 /1000000 0.0004%=0.5 (g)例例4 4 磷酸可待因中檢查嗎啡。取本品磷酸可待因中檢查嗎啡。取本品0.100.10g g，加加鹽酸溶液（鹽酸溶液（9100091000）使溶解成）使溶解成5 5mlml，加亞硝酸加亞硝酸鈉試液鈉試液2 2mlml，放置放置1515分鐘，加氨試液分鐘，加氨試液3 3mlml，所顯所顯顏色與嗎啡溶液顏色與嗎啡溶液 取無(wú)水嗎啡取無(wú)水嗎啡2.02.0mgmg，加鹽酸溶加鹽酸溶液（液（ 9 1000 9 1000 ）使溶

7、解成）使溶解成100100ml5.0mlml5.0ml用同一方用同一方法制成的對(duì)照液比較，不得更深。問(wèn)限量為多法制成的對(duì)照液比較，不得更深。問(wèn)限量為多少？少？C VL= 100% S2.0 /100 5.00.10 1000100% =0.1%第三章 藥物的雜質(zhì)檢查 第二節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE22:4113一、氯化物檢查法 供試液：取規(guī)定量供試品，加水溶解成供試液：取規(guī)定量供試品，加水溶解成25ml25ml，加，加稀硝酸稀硝酸10ml10ml；如不澄清，應(yīng)過(guò)濾如不澄清，應(yīng)過(guò)濾，置，置50ml50ml納氏比色官中，加水

8、成納氏比色官中，加水成40ml40ml 標(biāo)準(zhǔn)液：規(guī)定量標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液，加稀硝標(biāo)準(zhǔn)液：規(guī)定量標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液，加稀硝酸酸10ml10ml，置置50ml50ml納氏比色官中，加水成納氏比色官中，加水成40ml40ml 于供試液、標(biāo)準(zhǔn)液中，分別加入硝酸銀于供試液、標(biāo)準(zhǔn)液中，分別加入硝酸銀1.0ml1.0ml，用水稀釋到用水稀釋到50ml50ml，在暗處放在暗處放5min5min，在黑色背景下從上到下比較。在黑色背景下從上到下比較。JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE22:4114二、硫酸鹽檢查法 供試液：取規(guī)定量供試品，加水溶解成供試液：取規(guī)定量供試品，加水溶

9、解成40ml40ml，如不澄清，應(yīng)過(guò)濾，置如不澄清，應(yīng)過(guò)濾，置50ml50ml納氏比納氏比色官中，加稀鹽酸色官中，加稀鹽酸2ml2ml，搖勻。搖勻。 標(biāo)準(zhǔn)液：規(guī)定量標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液，置標(biāo)準(zhǔn)液：規(guī)定量標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液，置50ml50ml納氏比色官中，加水成納氏比色官中，加水成40ml40ml，加稀鹽酸加稀鹽酸2ml2ml，搖勻。搖勻。 于供試液、標(biāo)準(zhǔn)液中，分別加入于供試液、標(biāo)準(zhǔn)液中，分別加入25%25%氯化氯化鋇鋇5ml5ml，用水稀釋到用水稀釋到50ml50ml，在暗處放在暗處放10min10min，在黑色背景下從上到下比較。在黑色背景下從上到下比較。JILIN UNIVERSITYCOLLEGE

10、 OF LIFE SCIENCE22:4115三、鐵鹽檢查法OHSCNNOHSCNHNO22+- -+ + + + + + +2 24 44 42 24 43 38 82 22 24 42 2) )( (2 2) )( (2 2SOSOSOSONHNHFeFeO OS SNHNHFeFeH HFe3+6SCN-H+Fe(SCN)63-JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE22:4116供試液：取規(guī)定量供試品，加水溶解成供試液：取規(guī)定量供試品，加水溶解成25ml25ml，置置50ml50ml納氏比色官中，加稀鹽酸納氏比色官中，加稀鹽酸4ml4ml與過(guò)硫酸銨

11、與過(guò)硫酸銨50mg50mg，加水稀釋成加水稀釋成35ml35ml后，加后，加30%30%硫氰酸銨硫氰酸銨3ml3ml，再加水至再加水至50ml50ml，搖勻。搖勻。標(biāo)準(zhǔn)液：取規(guī)定量硫酸鐵按，加水溶解成標(biāo)準(zhǔn)液：取規(guī)定量硫酸鐵按，加水溶解成25ml25ml，置置50ml50ml納氏比色官中，加稀鹽酸納氏比色官中，加稀鹽酸4ml4ml與過(guò)硫酸銨與過(guò)硫酸銨50mg50mg，加水稀釋成加水稀釋成35ml35ml后，加后，加30%30%硫氰酸銨硫氰酸銨3ml3ml，再加水至再加水至50ml50ml，搖勻。搖勻。JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE22:4117四、

12、重金屬檢查法 重金屬是指在實(shí)驗(yàn)條件下能與重金屬是指在實(shí)驗(yàn)條件下能與S S2- 2-作用顯色作用顯色的金屬雜質(zhì)，如銀、鉛、貢、銅等。主要的金屬雜質(zhì)，如銀、鉛、貢、銅等。主要以鉛為主。以鉛為主。硫代乙酰胺法硫代乙酰胺法取各藥品項(xiàng)下規(guī)定量的供試品取各藥品項(xiàng)下規(guī)定量的供試品, ,加醋酸鹽加醋酸鹽緩沖液緩沖液(pH3.5)2ml (pH3.5)2ml 與水適量使成與水適量使成25ml,25ml,加硫加硫代乙酰胺代乙酰胺2ml,2ml,放置放置2min2min后后, ,與標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一與標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量按同法制成的對(duì)照液所形成的棕色進(jìn)定量按同法制成的對(duì)照液所形成的棕色進(jìn)行 比 較 。行 比 較 。 . .

13、CH CH3 3CSNHCSNH2 2+ H+ H2 2O CHO CH3 3CONHCONH2 2 + H + H2 2S S H H2 2S + PbS + Pb2+2+ PbSPbS + 2H + 2H+ +JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE22:4119第二種方法 將將供試品熾灼破壞后檢查或取熾灼殘?jiān)?xiàng)下遺留的殘?jiān)M(jìn)行供試品熾灼破壞后檢查或取熾灼殘?jiān)?xiàng)下遺留的殘?jiān)M(jìn)行檢查檢查 用于在水、乙醇中難溶或能與重金屬形成配位化合物而干擾用于在水、乙醇中難溶或能與重金屬形成配位化合物而干擾檢查的有機(jī)藥物。檢查的有機(jī)藥物。 溫度影響較大，溫度影響較大，5

14、00600500600度為宜。度為宜。 必須蒸干除盡氧化氮。否則形成亞硝酸可氧化硫化氫析出硫必須蒸干除盡氧化氮。否則形成亞硝酸可氧化硫化氫析出硫，影響比色。，影響比色。 蒸干后加鹽酸使成鹽酸鹽，再蒸干殘留的鹽酸，加水溶解，蒸干后加鹽酸使成鹽酸鹽，再蒸干殘留的鹽酸，加水溶解，以氨調(diào)以氨調(diào)pHpH至中性，加醋酸鹽緩沖液至中性，加醋酸鹽緩沖液(Ph3.5)(Ph3.5)微熱溶解，依法微熱溶解，依法測(cè)量。測(cè)量。 對(duì)照液按同法處理，保持平行對(duì)照液按同法處理，保持平行JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE22:4120第三法 在堿性條件下，以硫化鈉為試液，適合于不溶

15、于稀酸而溶于堿的藥物。 取供試品適量+NaOH+H2O溶解+Na2S試液，與一定量標(biāo)準(zhǔn)鉛液同法處理后的顏色比較。第四法 微孔濾膜過(guò)濾法，適合于重金屬含量低的藥物（原理與一法同）。 顯色后用 50ml注射器轉(zhuǎn)移至濾器中進(jìn)行壓濾，取下濾膜，干燥，比較生成的斑點(diǎn)顏色。上蓋上蓋墊圈濾膜輔助 濾板連接頭濾器下部支撐器濾器下部支撐器JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE22:4122w 注意v供試品溶液有色：在對(duì)照管中加少量稀焦糖溶液，（也可加其他無(wú)干擾的指示劑等）使兩管色調(diào)一致。如果外消色法不能消除干擾，可采用內(nèi)消色法。v供試品含有微量Fe3+ ：會(huì)氧化H2S析出

16、S，可加VitC 0.5-1.0g，使Fe3+ Fe2+ ，同時(shí)在對(duì)照管中加等量的VitC，再依法測(cè)定。JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE22:4123五、砷鹽檢查法 砷鹽是有毒的物質(zhì)砷鹽是有毒的物質(zhì) 中國(guó)藥典（中國(guó)藥典（20002000年版）采用古蔡法和二年版）采用古蔡法和二乙基二硫代氨基甲酸銀法（乙基二硫代氨基甲酸銀法（Ag-DDCAg-DDC）檢查藥物中的砷鹽。檢查藥物中的砷鹽。JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE22:4124第一法第一法 古蔡法古蔡法原理原理: :As3+ 3Zn +3H+ AsH3

17、+3Zn2+AsO33+ 3Zn +9H+ AsH3+3Zn2+3H2OAsH3+ 3HgBr2 3HBr+As(HBr)3（試紙） 砷斑與2ml標(biāo)準(zhǔn)砷溶液同法操作。 砷斑： As(HgBr)3 (黃色)； AsH(HgBr)2(棕色)； As2Hg3 (棕黑色)JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE22:4125第二法 二乙基二硫代氨基甲酸銀法 簡(jiǎn)稱 Ag(DDC)法AsH3+ 6Ag(DDC) +3吡啶 As (DDC) 3 + 6Ag （紅色膠態(tài)銀） +3吡啶 HDDCC2H5C2H5NCSSAg于510nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以Ag(DDC) 溶液

18、為空白。古蔡法測(cè)砷瓶測(cè)砷管Hg(Br)試紙Pb(Ac)2棉花反應(yīng)液玻璃試管Ag(DDC)Ag(DDC)法(KI, SnCl2)(KI, SnCl2)JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE22:4127 六、熾灼殘?jiān)≧esidue on ignition） 熾灼殘?jiān)卜Q硫酸鹽灰分-有機(jī)藥物經(jīng)熾灼炭化，加硫酸濕潤(rùn)，低溫加熱至硫酸蒸氣除盡后，于高溫（700800）熾灼灰化逸出，殘留下非揮發(fā)性無(wú)機(jī)雜質(zhì)（金屬氧化物或無(wú)機(jī)鹽類）成為硫酸鹽。 限量一般控制在0.1-0.2%, 取樣量為1-2gJILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIEN

19、CE22:4128注意遺留的熾灼殘?jiān)枇糇髦亟饘贆z查時(shí)， 熾灼溫度應(yīng)控制在500-600C熾灼至恒重的第二次稱重應(yīng)在規(guī)定溫度繼續(xù)熾灼30分鐘以上。恒重連續(xù)二次稱重重量差0.3mg。含氟藥物對(duì)磁坩堝有腐蝕，應(yīng)采用鉑坩堝。JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE22:4129 七、干燥失重（Loss on drying） 是指藥物在規(guī)定的條件下經(jīng)干燥后所減失的重量。主要指水分，也包括其他揮發(fā)性雜質(zhì)。測(cè)定方法有：1 1 常壓恒溫干燥法（105 ） 適用于受熱較穩(wěn)定的藥物。 將樣品（研細(xì)）平鋪于扁稱量瓶中，厚度5mm。干燥時(shí)間一般在達(dá)到指定溫度后干燥2-4h，稱重

20、，再干燥，直至恒重。2 2 干燥劑干燥法本法適用于受熱易分解或易揮發(fā)的藥物。 將樣品置干燥器內(nèi)干燥至恒重。常用干燥劑有：硅膠、硫酸、無(wú)水氯化鈣、五氧化二磷等。其中五氧化二磷吸水效力最強(qiáng)，但P2O5吸水后產(chǎn)生H3PO4，若樣品對(duì)酸不穩(wěn)定，可能會(huì)受影響。3 3 減壓干燥法適用于mp低，受熱不穩(wěn)定及難除去水分的藥物。減壓干燥時(shí)可用減壓干燥器或恒溫干燥箱，一般壓力2.67KPa20mmHg。N通常分析一個(gè)藥物時(shí)，干燥失重與含量測(cè)定應(yīng)同時(shí)進(jìn)行，然后根據(jù)干燥失重%，將樣品折算成干燥品，再計(jì)算含量。JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE22:41324 4 熱分析法（

21、Thermal analysis）熱分析是指在程序控制溫度下，測(cè)量物質(zhì)的物理、化學(xué)變化與溫度關(guān)系的一類技術(shù)。物質(zhì)在加熱（冷卻）過(guò)程中，往往會(huì)脫水、揮發(fā)或發(fā)生相變（熔化、冷凝、升華、沸騰）及發(fā)生分解、氧化、還原等化學(xué)變化，熱分析就是將這些變化作為溫度的函數(shù)來(lái)進(jìn)行研究和測(cè)定。 常用方法有：JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE22:4133八、水分測(cè)定法八、水分測(cè)定法 I2 +SO2+H2O=2HI+SO3(A-B)F供試品中水分含量= *100%WJILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE22:4134 九、有機(jī)溶劑殘留

22、量測(cè)定法用以檢查藥物在合成過(guò)程中引入的有害有機(jī)溶劑。ChP規(guī)定：二氧六環(huán) 0.038 % 吡啶 0.02 %苯 0.0002 %甲苯 0.089 %氯仿 0.006 %二氯甲烷 0.06 %環(huán)氧乙烷 0.001 % Ch.P 對(duì)殘留有機(jī)溶劑采用GC法測(cè)定 第一法-直接進(jìn)樣法 內(nèi)標(biāo)法RSD5 %（n=5） 外標(biāo)法- RSD10 %（n=5） 第二法-頂空進(jìn)樣法 可免去樣品萃取、濃集等步驟，并可避免非揮發(fā)性組分對(duì)色譜柱的污染，但要求待測(cè)物有足夠的揮發(fā)性。10-20ml玻璃瓶（具有硅橡膠隔墊片蓋）1-2g固體或1-5ml液體（平衡30-60min）恒溫水浴樣品 頂空分析法（head space ch

23、romatography） 也稱液上氣相色譜分析，是指用氣相色譜法來(lái)分析封閉系統(tǒng)中與液體或固體樣品相平衡的氣體的一種方法。JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE22:4137第三節(jié) 特殊雜質(zhì)檢查方法色譜法（ TLC、HPLC、GC）光譜法化學(xué)分析法物理分析法JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE22:4138TLC法 雜質(zhì)對(duì)照品法（A） 供試品自身對(duì)照法（高低濃度法）（B） 對(duì)照物質(zhì)法（C） 不允許有雜質(zhì)斑點(diǎn)（以方法靈敏度來(lái)控制雜質(zhì)量） 樣樣 對(duì)對(duì) 樣樣 對(duì)對(duì) 樣樣 對(duì)對(duì)A B CJILIN UNIVERSITYC

24、OLLEGE OF LIFE SCIENCE22:4139vHPLC（GC）法 峰面積歸一化法A雜總/A總100%=雜% A總=A雜1A雜2A樣 雜1 雜2 樣內(nèi)標(biāo)法校正因子測(cè)定液=對(duì)照品內(nèi)標(biāo)樣品測(cè)定液=樣品同樣量?jī)?nèi)標(biāo) 分別進(jìn)樣，記錄色譜圖。校正因子F=A內(nèi)/A對(duì)m對(duì)/m內(nèi)m雜=FA雜/ A內(nèi)m內(nèi)雜質(zhì)限量%= m雜/W樣100%F=(A內(nèi)/A對(duì))(m對(duì)/m內(nèi))m雜=F(A雜/ A內(nèi)) m內(nèi)對(duì)照樣品雜質(zhì)限量%= m雜/W樣100% 外標(biāo)法m雜= A雜/ A對(duì)m對(duì)雜質(zhì)限量%= m雜/W樣100%雜質(zhì)對(duì)照品樣品JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE22:4143不加校正因子的主成分自身對(duì)照法A雜總/A自C自/取樣100%=雜質(zhì)%樣品測(cè)定液 1 2 3A雜總雜總=A1A2A3自身對(duì)照液（1%）JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE22:4144藥物的純度概念藥物的純度概念 雜質(zhì)的來(lái)源雜質(zhì)的來(lái)源( (生產(chǎn)和貯藏生產(chǎn)和貯藏) )雜質(zhì)的種類雜質(zhì)的種類( (一般和特殊一般和特殊) )雜質(zhì)的限量檢查雜質(zhì)的限量檢查(L = C V / S (L = C V / S 100%)100%)一般雜質(zhì)檢查一般雜質(zhì)檢查(Cl,SO4,Fe,(Cl,SO4