動物細胞工程PPT學習教案

1、會計學1動物細胞工程動物細胞工程動物細胞培動物細胞培養(yǎng)養(yǎng)動物細胞融動物細胞融合合單克隆抗體制備單克隆抗體制備動物體細胞動物體細胞核移植技術和克隆動物核移植技術和克隆動物第1頁/共54頁第2頁/共54頁動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)動物細胞融合動物細胞融合單克隆抗體技單克隆抗體技術術核移植核移植動動物物細細胞胞工工程程常常用用技技術術其它動物細胞工程的基礎其它動物細胞工程的基礎第3頁/共54頁一、動物細胞培養(yǎng)的應用和概念：一、動物細胞培養(yǎng)的應用和概念：1 1、概念：、概念：動物細動物細胞培養(yǎng)就是從動物胞培養(yǎng)就是從動物有機體中取出相關有機體中取出相關的的組織組織, ,將它分散將它分散成成單個細胞單個細胞

2、, ,然后然后, ,放在適宜的放在適宜的培養(yǎng)基培養(yǎng)基中中, ,讓這些讓這些細胞生細胞生長和增殖長和增殖. .2、原理：、原理：細胞增殖細胞增殖第4頁/共54頁定義：定義：人們通常將人們通常將動物組織動物組織消化后消化后的的初次培養(yǎng)初次培養(yǎng)稱為原代稱為原代培養(yǎng)。培養(yǎng)。胰蛋白酶處理胰蛋白酶處理取出組織取出組織胚胎或幼齡動物器官組織胚胎或幼齡動物器官組織剪碎剪碎單個細胞單個細胞細胞懸液細胞懸液轉入培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)轉入培養(yǎng)瓶內培養(yǎng) （ 貼貼壁生長壁生長長成單層細胞。有長成單層細胞。有接接觸抑制觸抑制現(xiàn)象）現(xiàn)象）。原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)3 3：過程：過程圖示圖示原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)第5頁/共54頁強調一：細胞貼壁過程

3、強調一：細胞貼壁過程細胞貼壁：細胞貼壁：在培養(yǎng)瓶懸液中分散的細胞很快就在培養(yǎng)瓶懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細胞貼壁。貼附在瓶壁上，稱為細胞貼壁。培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿壁要求：培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿壁要求：表面光滑、無毒、易表面光滑、無毒、易于帖附。于帖附。第6頁/共54頁當貼壁細胞分裂生當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時長到表面相互接觸時, ,細胞就會停止分裂細胞就會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為增殖，這種現(xiàn)象稱為細胞的接觸抑制。細胞的接觸抑制。強調二：接觸抑制強調二：接觸抑制第7頁/共54頁 傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)第8頁/共54頁細胞株：傳代細胞一般能傳到細胞株：傳代細胞一般能傳到40-5040-50代，

4、代，遺傳物質一般不會發(fā)生改變遺傳物質一般不會發(fā)生改變，叫細胞株。，叫細胞株。強調：細胞系、細胞株（強調：細胞系、細胞株（了解即可，老課本體系了解即可，老課本體系）細胞系：傳代細胞系：傳代5050代以后不能再傳下去，代以后不能再傳下去，部分細胞部分細胞遺傳物質發(fā)生了改變遺傳物質發(fā)生了改變，能連續(xù)傳，能連續(xù)傳代，獲得不死性，叫細胞系。代，獲得不死性，叫細胞系。細胞株和細胞系的區(qū)別：細胞株和細胞系的區(qū)別： 細胞系的遺傳物細胞系的遺傳物質改變，具有癌細胞的特點，失去接觸抑質改變，具有癌細胞的特點，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)制，容易傳代培養(yǎng)第9頁/共54頁3 3、總結：動物細、總結：動物細胞培養(yǎng)過程胞培

5、養(yǎng)過程動物胚胎或幼齡動物動物胚胎或幼齡動物的組織、器官的組織、器官配置細胞懸液配置細胞懸液剪碎用胰蛋白酶處理剪碎用胰蛋白酶處理1010代細胞代細胞轉入培養(yǎng)瓶轉入培養(yǎng)瓶40-5040-50代細胞代細胞傳傳代代培培養(yǎng)養(yǎng)無限傳代無限傳代單個細胞單個細胞加培養(yǎng)液稀釋加培養(yǎng)液稀釋傳代傳代1010代以內，代以內，遺傳物質不改變遺傳物質不改變，保持，保持正常正常二倍體核型二倍體核型。傳代傳代10-5010-50代左右，增長緩慢以至于完代左右，增長緩慢以至于完全停止，全停止，部分細胞核型可能發(fā)生變化部分細胞核型可能發(fā)生變化（遺傳物質可能改變（遺傳物質可能改變）為什么用胰蛋白酶處理？為什么用胰蛋白酶處理？分瓶分

6、瓶傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)原代培養(yǎng)特點：原代培養(yǎng)特點：細胞貼壁、細胞貼壁、接觸抑制接觸抑制繼續(xù)傳代培養(yǎng)少部分細胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)少部分細胞獲得不獲得不死性死性，細胞突變細胞突變，遺傳物質已經(jīng)遺傳物質已經(jīng)改變改變，等同于癌細胞等同于癌細胞。細胞株：細胞株：一般說一般說遺傳物質未改變遺傳物質未改變細胞系細胞系：遺傳遺傳物質已物質已改變改變原原代代培培養(yǎng)養(yǎng)第10頁/共54頁4.4.動物細胞培養(yǎng)的條件動物細胞培養(yǎng)的條件: :1 1）無菌無毒）無菌無毒 的環(huán)境：的環(huán)境： 適宜的溫度：適宜的溫度：人和哺乳動物細胞最適溫度人和哺乳動物細胞最適溫度為為36.536.50.50.5。適宜的酸堿度：適宜的酸堿度：PHPH：7

7、.2-7.47.2-7.44 4）氣體環(huán)境：）氣體環(huán)境：2 2）營養(yǎng)：）營養(yǎng)：3 3）溫度和）溫度和pHpH：“95“95空氣空氣+5+5COCO2 2” ”的混合氣體培養(yǎng)箱的混合氣體培養(yǎng)箱。氧氧氣是細胞代謝必須的；氣是細胞代謝必須的； COCO2 2維持維持培養(yǎng)液的培養(yǎng)液的PHPH。對培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具對培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具無菌處理；無菌處理；培養(yǎng)液培養(yǎng)液中中添加抗生素添加抗生素防止培養(yǎng)過程中污染；防止培養(yǎng)過程中污染；定期更定期更換培養(yǎng)液換培養(yǎng)液以清除代謝產(chǎn)物，防止對培養(yǎng)細胞以清除代謝產(chǎn)物，防止對培養(yǎng)細胞造成危害。造成危害。第11頁/共54頁問題問題3 3：為什么用胰蛋白酶處理？：為什么用

8、胰蛋白酶處理？問題問題1 1：、為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做動物細：、為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做動物細胞培養(yǎng)材料？胞培養(yǎng)材料？因為其細胞生命力旺盛，分裂能力強，分化程度低。因為其細胞生命力旺盛，分裂能力強，分化程度低。問題問題2 2、為什么培養(yǎng)前要將組織細胞分散成單個細胞？、為什么培養(yǎng)前要將組織細胞分散成單個細胞？擴大細胞與培養(yǎng)液的接觸面積，利與細胞吸收營養(yǎng)。擴大細胞與培養(yǎng)液的接觸面積，利與細胞吸收營養(yǎng)。動物組織細胞間隙中含有一定量的彈性纖維等蛋白質，動物組織細胞間隙中含有一定量的彈性纖維等蛋白質，胰胰蛋白酶處理動物組織，可以使動物組織細胞間的蛋白質蛋白酶處理動物

9、組織，可以使動物組織細胞間的蛋白質和和細胞外的其他成分酶解，獲得單個細胞。細胞外的其他成分酶解，獲得單個細胞。 問題問題4 4：為什么用胰蛋白酶處理而不用胃蛋白酶？：為什么用胰蛋白酶處理而不用胃蛋白酶？動物細胞培養(yǎng)的最適動物細胞培養(yǎng)的最適PH值為值為7.2-7.4，胰蛋白酶作用的適，胰蛋白酶作用的適宜宜PH為為7.2-8.4，胃蛋白酶適宜，胃蛋白酶適宜PH為為2.胃蛋白酶在胃蛋白酶在PH為為7.2-7.4的動物細胞培養(yǎng)中無活性。的動物細胞培養(yǎng)中無活性。問題問題5 5：用胰蛋白酶處理不會把所培養(yǎng)的細胞消化掉嗎？：用胰蛋白酶處理不會把所培養(yǎng)的細胞消化掉嗎？控制好時間！長時間處理當然會損傷細胞?？刂?/p>

10、好時間！長時間處理當然會損傷細胞。第12頁/共54頁5 5、動物細胞培養(yǎng)技術的應用、動物細胞培養(yǎng)技術的應用: :1 1、蛋白質生物制品的生產(chǎn)、蛋白質生物制品的生產(chǎn) 如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體2 2、應用于基因工程、應用于基因工程 主要用于作為受體細胞主要用于作為受體細胞3 3、檢測有毒物質，判斷某種物質的毒性、檢測有毒物質，判斷某種物質的毒性 4 4、細胞的生理、藥理、病理研究、細胞的生理、藥理、病理研究 如用于篩選抗癌藥物如用于篩選抗癌藥物 第13頁/共54頁1.1.動物細胞工程技術的基礎是（動物細胞工程技術的基礎是（ ）A A、動物細胞融合、動物細胞融合

11、B B、胚胎移植、胚胎移植 C C、動物細胞培養(yǎng)、動物細胞培養(yǎng) D D、核移植、核移植2.2.下列有關動物細胞培養(yǎng)的敘述中正確的是（下列有關動物細胞培養(yǎng)的敘述中正確的是（ ）A A、動物細胞培育的目的是獲得大量的細胞分泌蛋白、動物細胞培育的目的是獲得大量的細胞分泌蛋白B B、動物細胞培養(yǎng)前要用胰蛋白酶使細胞分散、動物細胞培養(yǎng)前要用胰蛋白酶使細胞分散C C、細胞的癌變發(fā)生于原代培養(yǎng)向傳代培養(yǎng)的過渡過程中、細胞的癌變發(fā)生于原代培養(yǎng)向傳代培養(yǎng)的過渡過程中D D、培養(yǎng)至、培養(yǎng)至5050代后的傳代細胞稱為細胞株代后的傳代細胞稱為細胞株C CB B 第14頁/共54頁3.3.下列關于動物細胞培養(yǎng)的敘述中，

12、錯誤的是（下列關于動物細胞培養(yǎng)的敘述中，錯誤的是（ ）A A、用于培養(yǎng)的細胞大多取自胚胎或幼齡動物的器官或組、用于培養(yǎng)的細胞大多取自胚胎或幼齡動物的器官或組織織B B、將所取的組織先用胰蛋白酶等進行處理使其分散成單、將所取的組織先用胰蛋白酶等進行處理使其分散成單個細胞個細胞C C、在培養(yǎng)瓶中要定期用胰蛋白酶使細胞從瓶壁上脫離，、在培養(yǎng)瓶中要定期用胰蛋白酶使細胞從瓶壁上脫離，制成懸浮液制成懸浮液D D、動物細胞培養(yǎng)只能傳、動物細胞培養(yǎng)只能傳5050代左右，所培養(yǎng)的細胞會衰代左右，所培養(yǎng)的細胞會衰老死亡老死亡D D 第15頁/共54頁核移植核移植（難度高）（難度高）受體細胞：受體細胞：MM期的期的

13、卵母細胞卵母細胞胚胎細胞核移植：胚胎細胞核移植：體細胞核移植：體細胞核移植：細胞分化程度低，細胞分化程度低，恢復全能性容易恢復全能性容易用核移植的方法得到的動物用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物稱為克隆動物原理：動物體細胞核的全能性。原理：動物體細胞核的全能性。二、動物體細胞核移植技術和克隆動物二、動物體細胞核移植技術和克隆動物第16頁/共54頁 取供體細胞傳取供體細胞傳代培養(yǎng)代培養(yǎng)1010代以代以內的細胞內的細胞. .為為什么？什么？用的是去核的用的是去核的減數(shù)第二次分減數(shù)第二次分裂中期細胞（裂中期細胞（M中期中期）為）為什么？什么？激活方法：激活方法：激活目的：激活目的：促融方法：促融方

14、法：電刺激電刺激胚胎移植至代胚胎移植至代孕受體內孕受體內 妊娠、分娩妊娠、分娩2.）核移植流程）核移植流程供體：優(yōu)質高產(chǎn)奶牛供體：優(yōu)質高產(chǎn)奶牛受體：普通奶牛（卵受體：普通奶牛（卵母細胞的采集與培養(yǎng)母細胞的采集與培養(yǎng)） 1、體積大，易、體積大，易操作。操作。2、含有促使細、含有促使細胞核表達全能胞核表達全能性的物質和營性的物質和營養(yǎng)條件。養(yǎng)條件。有人說它三個母有人說它三個母親，對嗎？親，對嗎？第17頁/共54頁第18頁/共54頁4、體細胞核移植技術的應用前景、體細胞核移植技術的應用前景第19頁/共54頁3.3.克隆動物的研究意義：克隆動物的研究意義：1.1.克隆動物作為生物反應器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白克

15、隆動物作為生物反應器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白2.2.改良動物品種改良動物品種 3.3.治療人類疾病，作為供體治療人類疾病，作為供體4.4.保護瀕危動物保護瀕危動物4體細胞核移植技術存在的問題：體細胞核移植技術存在的問題：1.1.許多克隆動物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷，如體型許多克隆動物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷，如體型過大，異常肥胖，發(fā)育困難，免疫失調等。過大，異常肥胖，發(fā)育困難，免疫失調等。2.2.成功率非常低及克隆動物食品的安全性問題。成功率非常低及克隆動物食品的安全性問題。第20頁/共54頁黑面綿羊去黑面綿羊去核卵母細胞核卵母細胞白面綿羊乳白面綿羊乳腺細胞核腺細胞核a重組細重組細胞胞電脈沖刺激電脈沖刺激早期重

16、組胚胎早期重組胚胎b另一頭綿羊的子宮另一頭綿羊的子宮妊娠、出生妊娠、出生克隆羊多利克隆羊多利1、寫出、寫出AB所代表細胞工程名稱：所代表細胞工程名稱：a表示：表示： b表示表示: 2、實施細胞工程時，所需、實施細胞工程時，所需受體細胞大多采用卵母細胞受體細胞大多采用卵母細胞的原因：的原因：體積大，易操作。含有促使細胞核體積大，易操作。含有促使細胞核表達全能性的物質和營養(yǎng)條件。表達全能性的物質和營養(yǎng)條件。3 3、多利面部毛色是：、多利面部毛色是： 根據(jù)遺傳學原理說明判斷依據(jù)。根據(jù)遺傳學原理說明判斷依據(jù)。4 4、若黑面綿羊的基因型為、若黑面綿羊的基因型為AA,AA,白白面綿羊的基因型為面綿羊的基因

17、型為aaaa，則克隆羊，則克隆羊的基因型為的基因型為 核移植核移植胚胎移植胚胎移植白色白色多利全部的核基因都來自白面綿羊多利全部的核基因都來自白面綿羊aa第21頁/共54頁1 .1 .從母羊甲的體細胞中取出細胞核，注入到母羊乙去掉從母羊甲的體細胞中取出細胞核，注入到母羊乙去掉核的卵細胞中，融合后的細胞經(jīng)卵裂形成早期胚胎，再植核的卵細胞中，融合后的細胞經(jīng)卵裂形成早期胚胎，再植入到另一只母羊丙的子宮內，出生小羊的大多數(shù)性狀入到另一只母羊丙的子宮內，出生小羊的大多數(shù)性狀（ ）A A、難以預測、難以預測 B B、像甲、像甲 C C、像乙、像乙 D D、像丙、像丙2.2.生物技術的發(fā)展速度很快，已滅絕生

18、物的生物技術的發(fā)展速度很快，已滅絕生物的“復生復生”將不再將不再是神話。如果世界上最后一只野驢剛死亡，以下較易成功是神話。如果世界上最后一只野驢剛死亡，以下較易成功“復生復生”野驢的方法是野驢的方法是 （ ）A A將野驢的體細胞取出，利用組織培養(yǎng)技術，經(jīng)脫分將野驢的體細胞取出，利用組織培養(yǎng)技術，經(jīng)脫分化、再分化，培育成新個體化、再分化，培育成新個體B B將野驢的體細胞兩兩融合，再經(jīng)組織培養(yǎng)培育成新個將野驢的體細胞兩兩融合，再經(jīng)組織培養(yǎng)培育成新個體體C C取出野驢的體細胞核移植到母家驢的去核卵細胞中，取出野驢的體細胞核移植到母家驢的去核卵細胞中，經(jīng)孕育培養(yǎng)成新個體經(jīng)孕育培養(yǎng)成新個體D D將野驢的

19、基因導入家驢的受精卵中，培育成新個體將野驢的基因導入家驢的受精卵中，培育成新個體B B C C 第22頁/共54頁3.3.下圖所示為用兩棲動物卵所做的實驗圖解，據(jù)圖回答下圖所示為用兩棲動物卵所做的實驗圖解，據(jù)圖回答下列問題：下列問題：蝌蚪腸上皮細胞核中含有青蛙發(fā)育所需的蝌蚪腸上皮細胞核中含有青蛙發(fā)育所需的_，重新組合的細胞相當于蛙的重新組合的細胞相當于蛙的_ 細胞，經(jīng)過細胞，經(jīng)過_ _ 和和_形成組織和器官。形成組織和器官。全部基因全部基因 受精卵受精卵 細胞分裂細胞分裂 細胞分化細胞分化 本實驗結果說明本實驗結果說明_具有全能性具有全能性，圖中，圖中A A過程采用的技術手段稱做過程采用的技術

20、手段稱做_。 動物體細胞核動物體細胞核 核移植技術核移植技術第23頁/共54頁動物細胞融合與單克隆抗體第24頁/共54頁第25頁/共54頁一、動物細胞融合一、動物細胞融合細胞雜交：細胞雜交：不同基因型的細胞不同基因型的細胞之間的融合就是之間的融合就是細胞雜交細胞雜交。雜交細胞：雜交細胞：融合后形成的具有融合后形成的具有原來原來兩個或多個細胞遺傳信息兩個或多個細胞遺傳信息的的單核細胞單核細胞成為雜交細胞成為雜交細胞。第26頁/共54頁 細胞融合是正常的生命活動細胞融合是正常的生命活動兩個細胞正在融合兩個細胞正在融合 受精作用受精作用第27頁/共54頁第28頁/共54頁病毒顆粒黏病毒顆粒黏 附細胞

21、表面附細胞表面細胞膜連接細胞膜連接細胞膜被細胞膜被 病毒顆粒穿通病毒顆粒穿通細胞融合、形成雜種細胞細胞融合、形成雜種細胞第29頁/共54頁第30頁/共54頁第31頁/共54頁1.1.科學工作者用綠色和紅色熒光材料，分別標記人和鼠的科學工作者用綠色和紅色熒光材料，分別標記人和鼠的細胞膜上的蛋白質。當兩個標記細胞融合成一個細胞后，細胞膜上的蛋白質。當兩個標記細胞融合成一個細胞后，起初一半膜發(fā)出綠色熒光，另一半膜發(fā)出紅色熒光，一段起初一半膜發(fā)出綠色熒光，另一半膜發(fā)出紅色熒光，一段時間后，兩種顏色的熒光點均勻分布，如圖所示。請分析時間后，兩種顏色的熒光點均勻分布，如圖所示。請分析回答：回答： 該實驗結

22、果說明了細胞膜該實驗結果說明了細胞膜 ，這是因為，這是因為若在兩個細胞融合成一個細胞后，將融合細胞置于若在兩個細胞融合成一個細胞后，將融合細胞置于0條件下再保持條件下再保持40min，則融合細胞仍然是一半膜發(fā)綠色熒，則融合細胞仍然是一半膜發(fā)綠色熒光，另一半膜發(fā)紅色熒光，這說明光，另一半膜發(fā)紅色熒光，這說明具有一定的流動性具有一定的流動性 構成細胞膜的磷脂分子和蛋白質大都是可以運動的構成細胞膜的磷脂分子和蛋白質大都是可以運動的 膜的流動性受溫度影響，在低溫下分子的運動受抑制膜的流動性受溫度影響，在低溫下分子的運動受抑制第32頁/共54頁n能否用單個能否用單個B B淋巴細胞通過克隆形成淋巴細胞通過

23、克隆形成的細胞群來產(chǎn)生單一類型的抗體呢？的細胞群來產(chǎn)生單一類型的抗體呢？B B淋巴細胞在體外不能無限增殖。淋巴細胞在體外不能無限增殖。二：動物細胞融合的成功應用二：動物細胞融合的成功應用 單克隆抗體的制備單克隆抗體的制備思思考考第33頁/共54頁第34頁/共54頁雜交雜交 細胞細胞滅活的病毒等手段滅活的病毒等手段小鼠骨髓瘤細胞小鼠骨髓瘤細胞B淋巴細胞淋巴細胞經(jīng)免疫經(jīng)免疫的小鼠的小鼠提取提取雜交瘤雜交瘤細胞細胞第一次篩選第一次篩選用特定的用特定的選選擇性培養(yǎng)基擇性培養(yǎng)基能產(chǎn)生特定抗體、培養(yǎng)條能產(chǎn)生特定抗體、培養(yǎng)條件下能無限增殖的雜交瘤件下能無限增殖的雜交瘤細胞細胞體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔注

24、射到小鼠腹腔提取單克隆抗體提取單克隆抗體第35頁/共54頁3 3）、為何要進行兩次篩選？）、為何要進行兩次篩選？第第1 1次篩選得到雜交瘤細胞（多種）。第次篩選得到雜交瘤細胞（多種）。第2 2次篩選得次篩選得到能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞群。到能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞群。問題強化：問題強化：1 1）、本過程利用了哪些原理？）、本過程利用了哪些原理？免疫原理，細胞融合原理和動物細胞培養(yǎng)原理免疫原理，細胞融合原理和動物細胞培養(yǎng)原理2 2）、為什么選用小鼠骨髓瘤細胞與）、為什么選用小鼠骨髓瘤細胞與B B細胞融合細胞融合？ 這樣融合成的雜交瘤細胞，繼承了雙親細胞的遺傳物這樣融合成的雜交瘤細胞，繼承

25、了雙親細胞的遺傳物質，不僅具有質，不僅具有B B細胞分泌抗體的能力，而且還有無限增細胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領，因而可以獲得大量單克隆抗體殖的本領，因而可以獲得大量單克隆抗體第36頁/共54頁2 2、單克隆抗體的優(yōu)點：、單克隆抗體的優(yōu)點： 特異性強，靈敏度高，可大量制備。特異性強，靈敏度高，可大量制備。3 3、單克隆抗體的應用、單克隆抗體的應用第37頁/共54頁例題例題1 1：19751975年，英國劍橋大學分子生物年，英國劍橋大學分子生物學實驗室的科勒和米爾斯坦，把學實驗室的科勒和米爾斯坦，把小鼠的淋巴細胞（脾細胞）和小小鼠的淋巴細胞（脾細胞）和小鼠的骨髓瘤細胞融合起來，成為鼠

26、的骨髓瘤細胞融合起來，成為雜交瘤細胞，實現(xiàn)在體外大量生雜交瘤細胞，實現(xiàn)在體外大量生產(chǎn)抗體的目的。實驗過程如圖所產(chǎn)抗體的目的。實驗過程如圖所示。示。(1)(1)淋巴細胞能與骨髓瘤細胞融合成一個細胞，兩種細胞膜也能淋巴細胞能與骨髓瘤細胞融合成一個細胞，兩種細胞膜也能“融合融合” 在一起，說明細胞膜在一起，說明細胞膜 。(2)(2)單克隆抗體的準確定義應為單克隆抗體的準確定義應為 ( )( ) A A一類特殊抗體一類特殊抗體 B B無性繁殖系無性繁殖系 C C單一抗體細胞的無性繁殖第產(chǎn)生的抗體單一抗體細胞的無性繁殖第產(chǎn)生的抗體 D D單一抗體細胞的有性繁殖系產(chǎn)生的抗體單一抗體細胞的有性繁殖系產(chǎn)生的抗

27、體(3)(3)雜交瘤細胞繁殖進行的是雜交瘤細胞繁殖進行的是_分裂，其遺傳性狀分裂，其遺傳性狀_。 (4)(4)單克隆抗體注入體內后可以自動追蹤抗原單克隆抗體注入體內后可以自動追蹤抗原( (病原體或癌變細胞等病原體或癌變細胞等) )并并與之結合，而絕不攻擊任何正常細胞，故稱為與之結合，而絕不攻擊任何正常細胞，故稱為“生物導彈生物導彈”這是利用了這是利用了 _ 。具有一定的流動性具有一定的流動性C C有絲有絲不變不變抗體能與抗原發(fā)生特異性結合的特點抗體能與抗原發(fā)生特異性結合的特點第38頁/共54頁已知細胞已知細胞合成合成DNA有有D和和S兩條途徑兩條途徑，其中，其中D途徑能被途徑能被氨基嘌呤氨基嘌

28、呤阻阻斷。人淋巴細胞中有這兩種斷。人淋巴細胞中有這兩種DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖的合成途徑，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤細胞中盡管沒有鼠骨髓瘤細胞中盡管沒有S途徑途徑，但能不斷分裂增殖，將這兩種，但能不斷分裂增殖，將這兩種細胞在試管中混合，加聚乙二醇促融，獲得雜種細胞。請回答：細胞在試管中混合，加聚乙二醇促融，獲得雜種細胞。請回答： （1）試管中除融合的雜種細胞外，還有）試管中除融合的雜種細胞外，還有 種融合細胞。種融合細胞。（2）設計一方法（不考慮機械方法），從培養(yǎng)液中分離出）設計一方法（不考慮機械方法），從培養(yǎng)液中分離出 雜種細胞，并說原理。雜種細胞，并說原理。 方法方法： 。 原理

29、：原理：加入氨基嘌呤后加入氨基嘌呤后,使使D合成的途徑阻斷合成的途徑阻斷,所以僅所以僅D合成途徑的骨髓瘤細胞或彼此融合的細胞就不合成途徑的骨髓瘤細胞或彼此融合的細胞就不能增殖能增殖,但雜種細胞則可以利用淋巴細胞中的但雜種細胞則可以利用淋巴細胞中的S途徑合成途徑合成DNA而增殖而增殖第39頁/共54頁1、動物細胞工程技術的基礎是：（）、動物細胞工程技術的基礎是：（）A動物細胞融合動物細胞融合B胚胎移植胚胎移植C動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)D核移植核移植課堂練習課堂練習第40頁/共54頁、在動物細胞融合和植物體細胞雜交的比較中，正、在動物細胞融合和植物體細胞雜交的比較中，正確的是（）確的是（）A結果是

30、相同的結果是相同的B雜種細胞的形成過程基本相同雜種細胞的形成過程基本相同C操作過程中酶的作用相同操作過程中酶的作用相同D誘導融合的手段相同誘導融合的手段相同第41頁/共54頁、單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細胞和、單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細胞和B淋巴細胞淋巴細胞誘導融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞，誘導融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細胞是（在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細胞是（ ） 淋巴細胞淋巴細胞小鼠骨髓瘤細胞小鼠骨髓瘤細胞B淋巴細胞自身融合細胞淋巴細胞自身融合細胞小鼠骨髓瘤細胞自身融合細胞小鼠骨髓瘤細胞自身融合細胞雜交瘤細胞雜交瘤細胞A BC D

31、 C第42頁/共54頁第43頁/共54頁問題問題6 6、動物細胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？較植、動物細胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？較植物組培培養(yǎng)基有何獨特之處？物組培培養(yǎng)基有何獨特之處？問題問題7 7、動物細胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最、動物細胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個體？終培養(yǎng)成新個體？主要成分：（葡萄糖、氨基酸）、（水、無機鹽）、維主要成分：（葡萄糖、氨基酸）、（水、無機鹽）、維生素和動物血清等。獨特之處有：生素和動物血清等。獨特之處有：1 1、液體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基 2 2、成分中有動物血清等、成分中有動物血清等不能，動物細胞培養(yǎng)只能使細胞數(shù)目增多，不能發(fā)不能，動物

32、細胞培養(yǎng)只能使細胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的動物個體育成新的動物個體問題問題8 8、動物細胞培養(yǎng)的原理：、動物細胞培養(yǎng)的原理： 細胞增殖。細胞增殖。問題問題9 9、目前使用的或冷凍保存的正常細胞通常在、目前使用的或冷凍保存的正常細胞通常在1010代代以內，為什么？以內，為什么？1010代以內的細胞代以內的細胞遺傳物質不改變，保持正常二倍體核型。遺傳物質不改變，保持正常二倍體核型。第44頁/共54頁4、體細胞核移植過程、體細胞核移植過程-示動物克隆示動物克隆-無性繁殖無性繁殖1）克隆羊多）克隆羊多利培育過程：利培育過程：黑面綿羊去黑面綿羊去核卵母細胞核卵母細胞白面綿羊乳白面綿羊乳腺細胞核腺細胞核細

33、胞核移植細胞核移植重組細重組細胞胞電脈沖刺激電脈沖刺激早期重組胚胎早期重組胚胎胚胎移植胚胎移植另一頭綿羊的子宮另一頭綿羊的子宮妊娠、出生妊娠、出生克隆羊多利克隆羊多利特別注意：特別注意：克隆動物性狀克隆動物性狀與供體動物完全一樣嗎？與供體動物完全一樣嗎？不可能！不可能！因為：因為：一、供體動物只提供細胞核，一、供體動物只提供細胞核，而細胞質中的遺傳物質（如線而細胞質中的遺傳物質（如線粒體粒體DNA）來自于受體卵母細）來自于受體卵母細胞胞.二、生物的性狀不僅與遺傳物二、生物的性狀不僅與遺傳物質有關，還受環(huán)境的影響。質有關，還受環(huán)境的影響。供體供體受體受體代孕代孕受體受體第45頁/共54頁二、動物

34、體細胞核移植技術和克隆動物二、動物體細胞核移植技術和克隆動物1、定義：定義： 動物核移植是將動物的動物核移植是將動物的一個細胞一個細胞的細胞核的細胞核, ,移入一個已經(jīng)移入一個已經(jīng)去掉細胞核的卵母去掉細胞核的卵母細胞中細胞中. .使其重組并發(fā)育成一個使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎新的胚胎, ,這這個新的胚胎最終發(fā)育為個新的胚胎最終發(fā)育為動物個體動物個體. .3、分類：分類： 胚胎核移植、體細胞核移植。胚胎核移植、體細胞核移植。胚胎細胞分化程胚胎細胞分化程度低，恢復其全度低，恢復其全能性相對容易。能性相對容易。動物體細胞分化動物體細胞分化程度高，恢復其程度高，恢復其全能性十分困難全能性十分困難2、

35、原理：原理： 動物細胞核具有全能性動物細胞核具有全能性第46頁/共54頁第47頁/共54頁核移植流程核移植流程:1、供體細胞的采集與培養(yǎng)、供體細胞的采集與培養(yǎng)5、用物理或化學方法激活受體細胞，使其完成減、用物理或化學方法激活受體細胞，使其完成減數(shù)分裂進程。數(shù)分裂進程。6電刺激促融使供體核進入受體卵母細胞，構建重電刺激促融使供體核進入受體卵母細胞，構建重組胚胎。組胚胎。4、將供體細胞注入去核卵母細胞、將供體細胞注入去核卵母細胞3、顯微操作去除卵母細胞中的核、顯微操作去除卵母細胞中的核2、受體卵母細胞的采集與體外培養(yǎng)、受體卵母細胞的采集與體外培養(yǎng)7、胚胎移植入代孕母牛體內、胚胎移植入代孕母牛體內8、妊娠分娩與供體遺傳物質基礎相同的犢牛。、妊娠分娩與供體遺傳物質基礎相同的犢牛。第48頁/共54頁5、體細胞核移植技術存在的問題、體細胞核移植技術