浙科版選修1第一部分實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的培養(yǎng)和分離(共24張PPT)

1、實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)1 大腸桿菌的培養(yǎng)和分離大腸桿菌的培養(yǎng)和分離 指結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單指結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單, ,形體微小的單細(xì)胞、多細(xì)胞形體微小的單細(xì)胞、多細(xì)胞或無細(xì)胞結(jié)構(gòu)的低等生物?；驘o細(xì)胞結(jié)構(gòu)的低等生物。 一、微生物一、微生物微生物的類群微生物的類群（1 1）結(jié)構(gòu)：）結(jié)構(gòu)：（2 2）繁殖方式：）繁殖方式：（3 3）變異類型：）變異類型：（4 4）應(yīng)用：）應(yīng)用：1 1、細(xì)菌：、細(xì)菌：擬核區(qū)擬核區(qū)基因突變、基因重組基因突變、基因重組基因工程、遺傳實(shí)驗(yàn)材料基因工程、遺傳實(shí)驗(yàn)材料（1 1）概念：）概念：（2 2）作用：）作用：2 2、菌落：、菌落：鑒定菌種鑒定菌種（1 1）類型：按物理性質(zhì)分）類型：按物理性質(zhì)分凝固劑凝固劑瓊脂瓊

2、脂擴(kuò)大培養(yǎng)，擴(kuò)大培養(yǎng)，工業(yè)生產(chǎn)工業(yè)生產(chǎn)分離純化分離純化，鑒定菌種，計(jì)數(shù)，保藏鑒定菌種，計(jì)數(shù)，保藏LBLB培養(yǎng)基培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基基天然培養(yǎng)天然培養(yǎng)基基合成培養(yǎng)合成培養(yǎng)基基（2 2）成分及其作用：）成分及其作用：成分成分作用作用主要來源主要來源碳源碳源主要作能源物質(zhì)主要作能源物質(zhì)無機(jī)碳無機(jī)碳(CO2)或有機(jī)碳或有機(jī)碳(糖類糖類)氮源氮源合成含合成含N類化合物類化合物N2，NH3，銨，硝酸鹽，銨，硝酸鹽尿素，牛肉膏，蛋白胨尿素，牛肉膏，蛋白胨無機(jī)鹽無機(jī)鹽調(diào)節(jié)滲透壓等調(diào)節(jié)滲透壓等水水生長(zhǎng)因子生長(zhǎng)因子調(diào)節(jié)促生長(zhǎng)調(diào)節(jié)促生長(zhǎng)維生素，維生素，AA，堿基等，堿基等1 1、概念：、概念： 無菌操作泛指在培

3、養(yǎng)微生物的操作中，所無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。有防止雜菌污染的方法。2 2、無菌操作包括：、無菌操作包括：（1 1）對(duì)實(shí)驗(yàn)操作空間、操作者的衣著和手進(jìn)行）對(duì)實(shí)驗(yàn)操作空間、操作者的衣著和手進(jìn)行 清潔和消毒清潔和消毒 ；（2 2）將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行）將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行 滅菌滅菌 ；（3 3）為避免周圍微生物污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在）為避免周圍微生物污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在 酒精燈火焰附近酒精燈火焰附近 旁進(jìn)行；旁進(jìn)行；（4 4）避免已滅菌處理的材料用具與）避免已滅菌處理的材料用具與 周圍物品周圍物品 相接觸。相接觸。（1）消毒：）消毒：利

4、用化學(xué)或物理方法，殺死大部份致病微生物的過程；不利用化學(xué)或物理方法，殺死大部份致病微生物的過程；不能殺死芽孢和孢子。能殺死芽孢和孢子。3、消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別、消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別 （2）滅菌：）滅菌：以化學(xué)或物理方法消滅所有微生物，包括所有細(xì)菌的繁殖以化學(xué)或物理方法消滅所有微生物，包括所有細(xì)菌的繁殖體、芽孢、霉菌及病毒，而達(dá)到完全無菌的過程。體、芽孢、霉菌及病毒，而達(dá)到完全無菌的過程。3.3.常用的消毒與滅菌的方法：常用的消毒與滅菌的方法：（1 1）消毒法：消毒法：A A、煮沸消毒法、煮沸消毒法:100:100煮沸煮沸5-6min5-6minB B、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：

5、70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min（牛奶）（牛奶）C C、化學(xué)藥劑消毒法、化學(xué)藥劑消毒法: :用用70%70%酒精進(jìn)行皮膚消毒酒精進(jìn)行皮膚消毒; ;氯氯氣消毒水源氣消毒水源D D、紫外線消毒（空氣、紫外線消毒（空氣）（2）常用滅菌的方法：）常用滅菌的方法：高壓蒸汽滅菌：高壓蒸汽滅菌： 培養(yǎng)基、無菌水、各種培養(yǎng)基、無菌水、各種耐高溫的玻璃金屬器具耐高溫的玻璃金屬器具高壓蒸汽滅菌鍋高壓蒸汽滅菌鍋1kg/cm1kg/cm2 2、121121下維持下維持15min15min酒精燈灼燒滅菌：酒精燈灼燒滅菌： 接種環(huán)等金屬器具接種環(huán)等金屬器具

6、1.1.無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？被其他外來微生物污染外，還有什么目的？2.2.請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請(qǐng)選擇合適的方法。菌。如果需要，請(qǐng)選擇合適的方法。（1 1） 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2 2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管玻棒、試管、燒瓶和吸管（3 3） 實(shí)驗(yàn)操作者的雙手實(shí)驗(yàn)操作者的雙手 答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。身被微生物感染。答：（答：（1）、（）、（2）需要滅菌

7、；（）需要滅菌；（3）需要消毒）需要消毒。1 1、劃線分離法、劃線分離法 2 2、涂布分離法、涂布分離法1) 1) 稀釋菌液稀釋菌液 （1010-5-5 10 10-7-7倍）倍） 用無菌吸管吸取用無菌吸管吸取1ml1ml細(xì)菌培養(yǎng)液加入另一個(gè)盛有細(xì)菌培養(yǎng)液加入另一個(gè)盛有9ml9ml無無菌水的試管中，混合均勻，以此制成菌水的試管中，混合均勻，以此制成1010-1-1倍的稀釋液。倍的稀釋液。2) 2) 涂布涂布 用無菌吸管取用無菌吸管取0.1ml0.1ml稀釋度不同的菌液，加在培養(yǎng)皿的稀釋度不同的菌液，加在培養(yǎng)皿的固體培養(yǎng)基上。再將玻璃刮刀放在酒精燈火焰上灼燒，待固體培養(yǎng)基上。再將玻璃刮刀放在酒精

8、燈火焰上灼燒，待刮刀冷卻后，在酒精燈旁打開培養(yǎng)皿，將菌液涂布到整個(gè)刮刀冷卻后，在酒精燈旁打開培養(yǎng)皿，將菌液涂布到整個(gè)平面上。平面上。3) 3) 培養(yǎng)培養(yǎng) ： 將培養(yǎng)皿倒置，在將培養(yǎng)皿倒置，在3737恒溫箱中培養(yǎng)恒溫箱中培養(yǎng)2448h2448h。 劃線分離：劃線分離：方法簡(jiǎn)單，但單菌落較難分開。方法簡(jiǎn)單，但單菌落較難分開。涂布分離：涂布分離：?jiǎn)尉涓追珠_，但操作復(fù)雜。單菌落更易分開，但操作復(fù)雜。將將LB液體和固體培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿高壓蒸液體和固體培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿高壓蒸汽滅菌汽滅菌將滅菌后冷卻到將滅菌后冷卻到60的的LB固體培養(yǎng)基倒固體培養(yǎng)基倒入滅菌過的培養(yǎng)皿中，制作平面培養(yǎng)基入滅菌過的培養(yǎng)皿中，制作

9、平面培養(yǎng)基.將大腸桿菌從斜面接種到將大腸桿菌從斜面接種到LB液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基中，然后在中，然后在37搖床中震蕩培養(yǎng)搖床中震蕩培養(yǎng)12h。用接種環(huán)取震蕩培養(yǎng)后的菌液，并在固用接種環(huán)取震蕩培養(yǎng)后的菌液，并在固體培養(yǎng)基上劃線，然后將劃線后的培養(yǎng)體培養(yǎng)基上劃線，然后將劃線后的培養(yǎng)皿倒置與皿倒置與37的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1224h，觀察劃線末端的菌落生長(zhǎng)情況，觀察劃線末端的菌落生長(zhǎng)情況.用接種環(huán)取單菌落，用劃線法接種于斜用接種環(huán)取單菌落，用劃線法接種于斜面上，在面上，在37的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，再放入再放入4的冰箱中保存的冰箱中保存 。 1. 1.培養(yǎng)基滅菌后，

10、需要冷卻到培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到60 60 左右時(shí)，才能左右時(shí)，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？ 可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可進(jìn)行倒平板了。溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可進(jìn)行倒平板了。 2. 2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？ 通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。3.3.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之

11、間的部位，這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？物嗎？為什么？ 空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。 1.1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？ 操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃

12、線前灼上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。染操作者。 2.2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？后再進(jìn)行劃線？ 以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。 3.3.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線么總是從上一次劃線的末端開始劃線？ 劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的