耳聾基因檢測

1、背景介紹耳聾基因檢測的意義產品介紹案例分享2聽覺障礙，不能聽到外界聲響的表現，輕者聽而不真，重者不聞外聲。WHO 耳聾分級標準：4級別級別表現表現純音聽閾純音聽閾輕度聾近距離聽一般談話無困難2640dB中度聾近距離聽話感到困難4160dB 重度聾在耳邊大聲呼喊方能聽到6180dB全聾聽不到耳邊大聲呼喊的聲音超過80dB耳聾分為傳導性耳聾、感音性耳聾、混合性耳聾遺傳因素；母親懷孕期間的藥物使用史；孕母宮內感染:如巨細胞病毒、皰疹、毒漿體原蟲??；母親的生產史；新生兒高膽紅素血癥；顱面部畸形；早產或體重低；各種后天因素，如外傷67常染色體隱性遺傳方式：有25%的幾率生育聾兒。線粒體母系遺傳：母系成員

2、均會有聾病常染色體顯性遺傳：有50%的幾率生育聾兒。 聽力障礙的發(fā)病率聽力障礙的發(fā)病率：新生兒1；青年人1%；45-64歲人群14%；65-75歲為30%-60%；75歲以后達50%-70%存在不同程度的聽力損失。 中國殘疾人聯合會公布： 1987年的第一次全國殘疾人抽樣調查各類殘疾人總數約為5164萬，其中聽力言語殘疾為1770萬人，占總殘疾人總數的34.28%，是各類殘疾的首位。 2006年的第二次全國殘疾人抽樣調查，全國各類殘疾人總數為8296萬人，聽力殘疾2004萬人占殘疾人總數24.16%，位于第二位，僅次于肢體殘疾。在對四歲及四歲以內的聽力損失患兒病因進行分析時，遺傳因素所占比例為

3、71%，高于出生時新生兒聽力損失中遺傳因素占據了65%的病因N Engl J Med, 2006. 354: p. 2151-2164.SLC26A43%GJB2基因21%綜合征11%非綜合征型30%其他環(huán)境因素14%臨床明確的感染因素10%臨床不明確的感染因素11%出生時發(fā)病率（出生時發(fā)病率（186/100,000)186/100,000)SLC26A412%遲發(fā)型聽力損失10%GJB2突變15%綜合征型11%非綜合征型22%線粒體mtDNA1555G1%其他環(huán)境因素14%臨床確定的感染因素7%臨床不確定的感染因素8%4 4歲時的發(fā)病率（歲時的發(fā)病率（270/100,000270/100,0

4、00） 確立了中國聾啞人群常見的3個易感基因及突變熱點藥物敏感性耳聾（mtDNA 1555AG)： 占我國2780萬聽力殘疾者的5-12%,意味著139-333萬人可以通過用藥警示而避免致聾。先天性重度耳聾(GJB2)： 占聽力殘疾者的20%,意味著556萬人可以明確病因，早期發(fā)現，早期干預，聾而不“啞”。大前庭水管綜合征(SLC26A4)： 占聽力殘疾者的16%,意味著445萬人通過早期發(fā)現可以避免永久性聽力損失。 純音測聽，閾值在4090dB（中度重度耳聾）都應建議配用。1）先天性雙耳重度-極重度感音性耳聾；Audiol Neurootol. 2004 Jul-Aug;9(4):224-3

5、32）語后聾及成年患者有基本語言識別能力及辨音能力且佩戴助聽器無效者。 節(jié)省財政支出 提高出生缺陷防治水平；同時推進計生、衛(wèi)生服務水平 分析耳聾基因在當地的流行病學分布 發(fā)現的藥物敏感性耳聾和遲發(fā)性耳聾的個體提高診斷效率，減少漏診率指導婚育。實現優(yōu)生優(yōu)育早發(fā)現、早干預，實現聾而不啞4個基因20個位點非綜合征型耳聾基因檢測-51單個耳聾基因sanger全測序遺傳性聽力損失基因檢測-127三個耳聾基因高通量測序Base Molecular Weight A 313.21 C 289.18 G 329.21 T 304.19 CddATPddCTPddGTPddTTPG單堿基延伸技術單堿基延伸技術（

6、iPLEXiPLEX ）檢測位點多：可同時檢測20個基因位點；靈敏度高：能分辨質量差別為1 Da的分子；準確率高：99%；通量大：每天可檢測3000份以上；自動化程度高：檢測數據自動分析；檢測周期短：收到樣本后5個工作日可出報告。突變基因GJB2SLC26A4 (PDS)12S rRNAGJB3突變位點35delG、167delT、 176-191del16、299_300delAT、 235delC281CT、589GA、IVS7-2AG、1174AT、1226GA、1229CT、1975GC、2027TA、2162CT、2168AG、IVS15+5GA1494CT 1555AG538CT5

7、47GA染色體13q11-127q31mtDNA1p33-p35表達蛋白縫隙連接蛋白Connexin 26多次跨膜蛋白Pendrin線粒體功能損失縫隙連接蛋白Connexin 31臨床表現常染色體隱性遺傳。變異較大，可由輕度到極重度，但多數為重度或極重度耳聾常染色體隱性遺傳。先天性或后天性耳聾，耳聾發(fā)生或加重與外傷、感冒有關氨基糖甙類藥物性致聾，無法逆反常染色體顯性遺傳。我國本土克隆和鑒定的第一個耳聾致病基因新生兒婚前、孕前和產前人群各種原因不明的耳聾，包括先天性聾 和后天性聾人群聽力正常，但有耳聾家族史的人群受檢人群檢測醫(yī)院 初篩TEOAE/DPOAE 結果不通過結果通過復篩(TEOAE/D

8、POAE )+AABR/ABR閾值)篩選聽力異常知情同意、自愿選擇采取最少3個采血斑自愿選擇，知情同意臨床檢驗中心耳聾基因檢測出具檢測報告檢測結果正常檢測結果為雜合突變或純合突變隨訪檢測醫(yī)院確診出具確診報告確診結果為突變確診結果正常干預追蹤隨訪基因檢測流程5 5個工作日個工作日PCRPCR、第一代第一代測序測序目標區(qū)域目標區(qū)域捕獲、捕獲、第二代高通量第二代高通量測序測序適用范圍：適用范圍：1）基因診斷基因診斷：對于臨床表型難以確診的病例給予分子水平的鑒別診斷；2）攜帶者篩查攜帶者篩查：對于無臨床表型的致病突變攜帶者進行基因篩查；檢測周期：檢測周期：3535工作日工作日醫(yī)院就診樣本采集DNA提取

9、文庫制備高通量測序數據分析親屬驗證發(fā)送報告檢測周期：檢測周期：3535個工作日個工作日疾病疾病基因基因非綜合征型非綜合征型耳聾耳聾ACTG1,CCDC50,CDH23,CLDN14,COCH,DFNB31,DFNA5,DFNB59,DIAPH1,ESPN,ESRRB,EYA4,GJB2,GJB3,GJB6,GRHL2,GRXCR1,HGF,KCNQ4,LHFPL5,LOXHD1,LRTOMT,MARVELD2,MIR96,MYH14,MYH9,MYO15A,MYO1A,MYO3A,MYO6,MYO7A,OTOA,OTOF,PCDH15,POU3F4,POU4F3,PRPS1,RDX,SIX1,

10、SLC17A8,SLC26A4,SLC26A5,STRC,TECTA,TMC1,TMIE,TMPRSS3,TPRN,TRIOBP,USH1C,WFS1,m.1555AG,m.1494CT綜合征型耳聾綜合征型耳聾基因基因Waardenburg（瓦登伯格）綜合征EDN3,EDNRB,MITF,PAX3,SNAI2,SOX10遺傳性共濟失調性多發(fā) 性 神 經 炎 樣 ?。≧efsum綜合征）PEX1,PEX2,PEX26尤塞氏綜合征（Usher syndrome）CDH23,CLRN1,GPR98,USH2AMohr-Tranebjaerg綜合征TIMM8A特雷徹-柯林斯綜合征（Treacher C

11、ollins syndrome）TCOF1Alport綜合征（遺傳性腎炎）COL4A3,COL4A4,COL4A5Wolfram綜合征1型WFS1檢測基因 GJB2 GJB3 SLC26A4測序采用sanger法，在以下情況可建議進行單個基因全測序 1）耳聾患者檢測某個耳聾基因雜合子突變，為明確病因做該基因的全測序 2）若胎兒母親為某個耳聾基因的攜帶者，為了評估胎兒患有耳聾的風險，對父親做該耳聾基因的全測序。先天性耳聾（1/10003/1000）遺傳因素 （65%）綜合征型（SHL） （30%）非綜合征型(NSHL)（70%）常染色體隱性（7585%）GJB2/DFNB1（50%）其他DFNB

12、（50%）常染色體顯性（1524%）X-連鎖 （12%）非遺傳因素（35%）疾病分類疾病分類疾病中疾病中類類基因數目基因數目非綜合征型非綜合征型（7272個個基因）基因）常染色體隱性45常染色體顯性28X-連鎖3大前庭水管綜合征3聽神經病4綜合征型綜合征型（6666個基因）個基因）伴外耳畸形11伴眼病17伴代謝性疾病2伴肌肉骨骼異常10伴泌尿生殖疾病6伴內分泌疾病3伴皮膚疾病6伴神經病變2伴心臟缺陷4線粒體遺傳性線粒體遺傳性聽力損失聽力損失- -5臨床服務：臨床服務：127127個基因（重復個基因（重復1111個基因）個基因）技術簡介：采用新一代高通量測序技術，對受檢者的耳聾相關基因區(qū)域進行檢

13、測和分析。目標區(qū)域捕獲測序 檢測時間：35個工作日（7周）檢測樣本：全血：5ml，EDTA抗凝 (紫蓋)； DNA：6ug，OD在1.7-2.0，未降解運輸條件：冰袋+干冰運輸檢測結果：形成報告文件 2727樣本處理樣本處理樣本檢測樣本檢測數據分析數據分析報告發(fā)送報告發(fā)送血樣接收血樣接收解讀咨詢解讀咨詢主要適用于以下情況：1：通過熱點突變檢測未能發(fā)現致病原因的耳聾患者2：非綜合征型耳聾，無法確定致病基因及遺傳方式的3：綜合征型耳聾患者4：存在耳聾家族史的人群一家9口人，6人是耳聾 佛山家系為3代遺傳的耳聾家系，現有家系成員9人，其中6名為耳聾患者，除由于婚姻關系成為該家系成員的2名耳聾患者外，

14、剩余的4名患者均為母系家庭成員。 30外婆同質突變外公正常 姨媽 同質突變祖父雜合突變祖母雜合突變叔叔純和突變女：1555A純和 235delc雜合12SrRNA A1555GGJB2 235delc母親重聾同質突變 父親重聾 純和突變非常值得警惕的是：這個孩子通過了聽力篩查，如果沒有做基因篩查，一旦誤用了氨基糖苷類藥物將一針致聾，導致嚴重后果31患兒杜某，女，11歲；自述4歲左右，“感冒”后出現耳聾癥狀；臨床診斷：大前庭水管綜合征；否認孕期病毒感染及耳聾家族史；檢測結果：患兒：SLC26A4基因1174AT+2168AG1174AT+2168AG復合突變；患兒父親： SLC26A4基因117