1.2基因工程的基本操作程序PPT學(xué)習(xí)教案

1、會(huì)計(jì)學(xué)11.2基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序第1頁(yè)/共44頁(yè)基本操作步驟基本操作步驟從從基因文庫(kù)基因文庫(kù)編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因 第2頁(yè)/共44頁(yè)從基因文庫(kù)中獲取目的基因從基因文庫(kù)中獲取目的基因什么是基因文庫(kù)？什么是基因文庫(kù)？什么是基因組文庫(kù)？什么是基因組文庫(kù)？什么是部分基因文庫(kù)？什么是部分基因文庫(kù)？怎樣從基因文庫(kù)中得到我們所需的目怎樣從基因文庫(kù)中得到我們所需的目的基因？的基因？目的基因的有關(guān)信息與什么相聯(lián)系？目的基因的有關(guān)信息與什么相聯(lián)系？第3頁(yè)/共44頁(yè)基因文庫(kù)基因文庫(kù) 基因組文庫(kù)基因組文庫(kù)部分基因文庫(kù)部分基因文庫(kù)（如（如cDNAcDNA文庫(kù)）文庫(kù)）一種生物一

2、種生物所有所有的基因的基因一種生物的一種生物的一部分一部分基因基因第4頁(yè)/共44頁(yè)基基因因組組文文庫(kù)庫(kù)限制酶限制酶供體細(xì)胞的供體細(xì)胞的全部全部DNA大量大量DNA片段片段拼接到載體上拼接到載體上導(dǎo)入受體細(xì)胞擴(kuò)增導(dǎo)入受體細(xì)胞擴(kuò)增第5頁(yè)/共44頁(yè)cDNAcDNA：第6頁(yè)/共44頁(yè)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)RNA聚合聚合酶結(jié)合位點(diǎn)酶結(jié)合位點(diǎn)外顯子外顯子內(nèi)含子內(nèi)含子終止子終止子基因的結(jié)構(gòu)基因的結(jié)構(gòu)啟動(dòng)子啟動(dòng)子原核原核真核真核第7頁(yè)/共44頁(yè)一個(gè)典型的一個(gè)典型的原核細(xì)胞原核細(xì)胞基因結(jié)構(gòu)示意圖基因結(jié)構(gòu)示意圖 編碼區(qū)編碼區(qū): :組成基因的組成基因的核苷酸序列可以分為不同的區(qū)段核苷酸序列可以

3、分為不同的區(qū)段, ,有有的區(qū)段能夠轉(zhuǎn)錄為相應(yīng)的信使的區(qū)段能夠轉(zhuǎn)錄為相應(yīng)的信使RNARNA，進(jìn)而指導(dǎo)蛋白質(zhì)的合，進(jìn)而指導(dǎo)蛋白質(zhì)的合成，這樣的區(qū)段叫做編碼區(qū)。成，這樣的區(qū)段叫做編碼區(qū)。 非編碼區(qū)：非編碼區(qū)：有的區(qū)段不能轉(zhuǎn)錄為信使有的區(qū)段不能轉(zhuǎn)錄為信使RNARNA，也就是說(shuō)，也就是說(shuō)不能不能編碼蛋白質(zhì)編碼蛋白質(zhì)，這樣的區(qū)段叫做非編碼區(qū)。，這樣的區(qū)段叫做非編碼區(qū)。第8頁(yè)/共44頁(yè)一個(gè)典型的一個(gè)典型的真核細(xì)胞真核細(xì)胞基因結(jié)構(gòu)示意圖基因結(jié)構(gòu)示意圖 真核細(xì)胞基因結(jié)構(gòu)的主要特點(diǎn)是：真核細(xì)胞基因結(jié)構(gòu)的主要特點(diǎn)是： 編碼區(qū)是間隔的、不連續(xù)的。編碼區(qū)是間隔的、不連續(xù)的。 能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做能夠編碼蛋白質(zhì)的序列

4、叫做外顯子外顯子，一般不能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做一般不能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做內(nèi)含子內(nèi)含子。第9頁(yè)/共44頁(yè)第10頁(yè)/共44頁(yè)P(yáng)CR擴(kuò)增儀擴(kuò)增儀DNA雙鏈復(fù)制的基本原理雙鏈復(fù)制的基本原理一段已知目的基因的核苷酸序列一段已知目的基因的核苷酸序列四種脫氧核苷酸（四種脫氧核苷酸（dNTPdNTP）一對(duì)引物一對(duì)引物熱穩(wěn)定熱穩(wěn)定DNADNA聚合酶聚合酶( (TaqTaq酶酶）DNADNA的兩條鏈為模板的兩條鏈為模板溫度控制溫度控制以以_形式擴(kuò)增，即形式擴(kuò)增，即_（n n為擴(kuò)增循環(huán)的次為擴(kuò)增循環(huán)的次數(shù)）數(shù)）指數(shù)指數(shù)2 2n n第11頁(yè)/共44頁(yè)n 過(guò)程過(guò)程變性、退火、延伸三步曲變性、退火、延伸三步曲 變性

5、：變性：加熱至加熱至90909595雙雙鏈鏈DNADNA解鏈成為單鏈解鏈成為單鏈DNADNA 退火：退火：冷卻至冷卻至55556060部部分引物與模板的單鏈分引物與模板的單鏈DNADNA的特定互補(bǔ)部位相配對(duì)和結(jié)的特定互補(bǔ)部位相配對(duì)和結(jié)合合 延伸：延伸：加熱至加熱至70707575以以目的基因?yàn)槟０澹铣苫ツ康幕驗(yàn)槟０?，合成互補(bǔ)的新補(bǔ)的新DNADNA鏈鏈變性變性退火退火延伸延伸第12頁(yè)/共44頁(yè)v需要提供合成模板；需要提供合成模板；v合成的方向都是合成的方向都是5 533。 vDNADNA聚合酶不能起始新的聚合酶不能起始新的DNADNA鏈，必須要有引物提鏈，必須要有引物提供供3 3-OH-OH

6、；核核糖糖脫氧核糖脫氧核糖第13頁(yè)/共44頁(yè)5 5/ /3 3/ /G GG GT TC C3 3/ /5 5/ /G GA AC CC C5 5/ /3 3/ /引物引物G GG G1.目的基因目的基因DNA受熱變性，解鏈；受熱變性，解鏈；2.引物與單鏈互補(bǔ)結(jié)合；引物與單鏈互補(bǔ)結(jié)合；3.合成鏈在合成鏈在DNA聚合酶作用下進(jìn)行延伸。聚合酶作用下進(jìn)行延伸。5 5/ /3 3/ /A AG G引物引物第14頁(yè)/共44頁(yè)利用利用PCRPCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因技術(shù)擴(kuò)增目的基因第15頁(yè)/共44頁(yè)胞內(nèi)胞內(nèi)DNADNA復(fù)制與復(fù)制與PCRPCR技術(shù)的比較：技術(shù)的比較：胞內(nèi)胞內(nèi)DNADNA復(fù)制復(fù)制PCRPCR解旋

7、解旋解旋酶，邊解旋邊復(fù)制解旋酶，邊解旋邊復(fù)制酶酶解旋酶解旋酶/DNA/DNA聚合酶聚合酶模板模板DNADNA母鏈母鏈引物引物RNARNA能量能量+ +原原料料dNTPdNTP溫度溫度最適溫度最適溫度高溫變性高溫變性Taq Taq DNADNA聚合酶聚合酶DNADNA母鏈母鏈dNTPdNTP3 3個(gè)溫度個(gè)溫度DNADNA或或RNARNA第16頁(yè)/共44頁(yè)1.1.下表關(guān)于基因工程中有關(guān)基因操作下表關(guān)于基因工程中有關(guān)基因操作的名詞及對(duì)應(yīng)的內(nèi)容，正確的組合是的名詞及對(duì)應(yīng)的內(nèi)容，正確的組合是2 2、下列屬于獲取目的基因的方法的是、下列屬于獲取目的基因的方法的是( )( )利用利用mRNAmRNA反轉(zhuǎn)錄形

8、成反轉(zhuǎn)錄形成 從基因組文庫(kù)中提取從基因組文庫(kù)中提取從受體細(xì)胞中提取從受體細(xì)胞中提取 利用利用PCRPCR技術(shù)技術(shù) 利用利用DNADNA轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄 人工合成人工合成A.A. B. B. C. C. D.D.第17頁(yè)/共44頁(yè)3、在遺傳工程中，若有一個(gè)控制有利性狀的在遺傳工程中，若有一個(gè)控制有利性狀的DNADNA分子片分子片段為段為ATGTGATGTGTACACTACAC，要使其數(shù)量增多，可用，要使其數(shù)量增多，可用PCRPCR技術(shù)進(jìn)行技術(shù)進(jìn)行人工復(fù)制，復(fù)制時(shí)應(yīng)給予的條件是人工復(fù)制，復(fù)制時(shí)應(yīng)給予的條件是 雙鏈雙鏈DNADNA分子為模板分子為模板 ATGTGATGTG或或TACACTACAC模板鏈模板鏈

9、 四種脫四種脫氧核苷酸氧核苷酸 四種核苷酸四種核苷酸 DNADNA聚合酶聚合酶 熱穩(wěn)定熱穩(wěn)定DNADNA聚合酶聚合酶引物引物 溫度變化溫度變化 恒溫恒溫A BC D4、在基因工程中，把選出的目的基因（共、在基因工程中，把選出的目的基因（共1000個(gè)脫氧核個(gè)脫氧核苷酸對(duì)，其中腺嘌呤脫氧核苷酸是苷酸對(duì)，其中腺嘌呤脫氧核苷酸是460個(gè)）放入個(gè)）放入DNA擴(kuò)增儀中擴(kuò)增儀中擴(kuò)增擴(kuò)增4代，那么，在擴(kuò)增儀中應(yīng)放入胞嘧啶脫氧核苷酸的代，那么，在擴(kuò)增儀中應(yīng)放入胞嘧啶脫氧核苷酸的個(gè)數(shù)是個(gè)數(shù)是A.540個(gè)個(gè) B.8100個(gè)個(gè) C.17280個(gè)個(gè)D.7560個(gè)個(gè)第18頁(yè)/共44頁(yè)m (2n-1)m 2n-1第19頁(yè)/

10、共44頁(yè)質(zhì)粒質(zhì)粒DNADNA分子分子一個(gè)一個(gè)切口切口兩個(gè)兩個(gè)黏性末端黏性末端兩個(gè)兩個(gè)切口切口獲得目的基因獲得目的基因DNA DNA 連接酶連接酶重組重組DNADNA分子（重組質(zhì)粒）分子（重組質(zhì)粒）同一種同一種 限制酶限制酶第20頁(yè)/共44頁(yè)（1 1）用一定的）用一定的_切割質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個(gè)切割質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個(gè)切口，露出切口，露出_。（2 2）用）用_切切斷目的基因，使其產(chǎn)生斷目的基因，使其產(chǎn)生 _。（3 3）將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的）將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的_處，處，再加入適量再加入適量_，形成了一個(gè)重組，形成了一個(gè)重組DNADNA分子分子（重組質(zhì)粒）（重組質(zhì)粒）限制酶限制酶黏

11、性末端黏性末端同一種限制酶同一種限制酶相同相同的黏性末端的黏性末端切口切口DNADNA連接酶連接酶重組質(zhì)粒形成過(guò)程重組質(zhì)粒形成過(guò)程: :第21頁(yè)/共44頁(yè) 科學(xué)家在培育抗蟲(chóng)棉時(shí)，經(jīng)過(guò)了許多復(fù)雜的過(guò)程和科學(xué)家在培育抗蟲(chóng)棉時(shí)，經(jīng)過(guò)了許多復(fù)雜的過(guò)程和不懈的努力，才獲得成功。不懈的努力，才獲得成功。 起初把蘇云金芽孢桿菌的抗蟲(chóng)基因插入載體質(zhì)粒中起初把蘇云金芽孢桿菌的抗蟲(chóng)基因插入載體質(zhì)粒中，然后導(dǎo)入棉花的受精卵中，結(jié)果抗蟲(chóng)基因在棉花體內(nèi)，然后導(dǎo)入棉花的受精卵中，結(jié)果抗蟲(chóng)基因在棉花體內(nèi)沒(méi)有表達(dá)。沒(méi)有表達(dá)。 然后在插入抗蟲(chóng)基因的質(zhì)粒中插入啟動(dòng)子然后在插入抗蟲(chóng)基因的質(zhì)粒中插入啟動(dòng)子( (抗蟲(chóng)抗蟲(chóng)基因首端基因首

12、端) )，導(dǎo)入棉花受精卵，長(zhǎng)成的棉花植株還，導(dǎo)入棉花受精卵，長(zhǎng)成的棉花植株還是沒(méi)有抗蟲(chóng)能力?？茖W(xué)家又在有是沒(méi)有抗蟲(chóng)能力?？茖W(xué)家又在有啟動(dòng)子啟動(dòng)子、抗蟲(chóng)基因抗蟲(chóng)基因的質(zhì)粒中插入終止子的質(zhì)粒中插入終止子( (抗蟲(chóng)基因末端抗蟲(chóng)基因末端) )，導(dǎo)入棉花受精卵，導(dǎo)入棉花受精卵，結(jié)果成長(zhǎng)的植株，有了抗蟲(chóng)能力。，結(jié)果成長(zhǎng)的植株，有了抗蟲(chóng)能力。 基因表達(dá)載體構(gòu)建基因表達(dá)載體構(gòu)建第22頁(yè)/共44頁(yè)目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)使目的基因能并且可以遺傳給下一代，同時(shí)使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。夠表達(dá)和發(fā)揮作用。a、目的基因、目的基因b、啟動(dòng)

13、子、啟動(dòng)子c、終止子、終止子d、標(biāo)記基、標(biāo)記基因因啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄, ,是是RNARNA聚合酶的聚合酶的識(shí)識(shí)別別和和結(jié)合結(jié)合部位部位位于基因的末端位于基因的末端, ,終止轉(zhuǎn)錄終止轉(zhuǎn)錄檢測(cè)檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞，目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞，篩選篩選出含目的基因的受體細(xì)胞出含目的基因的受體細(xì)胞第23頁(yè)/共44頁(yè)1、（多選）一個(gè)基因表達(dá)載體的構(gòu)建應(yīng)包括、（多選）一個(gè)基因表達(dá)載體的構(gòu)建應(yīng)包括A目的基因目的基因 B啟動(dòng)子啟動(dòng)子 C終止子終止子 D標(biāo)記基因標(biāo)記基因ABCD2、下列關(guān)于基因表達(dá)載體的敘述不正確的是、下列關(guān)于基因表達(dá)載體的敘述不正確的是A啟動(dòng)子是與啟動(dòng)子是與RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，是

14、起聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，是起始密碼始密碼B啟動(dòng)子和終止子都是特殊結(jié)構(gòu)的啟動(dòng)子和終止子都是特殊結(jié)構(gòu)的DNA短片段，對(duì)短片段，對(duì)mRNA的轉(zhuǎn)錄起調(diào)控作用的轉(zhuǎn)錄起調(diào)控作用C標(biāo)記基因是為了鑒別受體細(xì)胞中是否有目的基標(biāo)記基因是為了鑒別受體細(xì)胞中是否有目的基因從而便于篩選因從而便于篩選D基因表達(dá)載體的構(gòu)建視受體細(xì)胞及導(dǎo)入方式不基因表達(dá)載體的構(gòu)建視受體細(xì)胞及導(dǎo)入方式不同而有所差別同而有所差別A3、目前轉(zhuǎn)基因工程可以、目前轉(zhuǎn)基因工程可以A. 打破地理隔離但不能突破生殖隔離打破地理隔離但不能突破生殖隔離B. 打破生殖隔離但不能突破地理隔離打破生殖隔離但不能突破地理隔離C. 完全突破地理隔離和生殖隔離完全突破地

15、理隔離和生殖隔離D. 部分突破地理隔離和生殖隔離部分突破地理隔離和生殖隔離 C第24頁(yè)/共44頁(yè)( (三三) )將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化目的基因進(jìn)入目的基因進(jìn)入_內(nèi)，并且在內(nèi)，并且在 受受體細(xì)胞內(nèi)維持體細(xì)胞內(nèi)維持_和和_的過(guò)程的過(guò)程受體細(xì)胞受體細(xì)胞穩(wěn)定穩(wěn)定表達(dá)表達(dá)第25頁(yè)/共44頁(yè)導(dǎo)入動(dòng)物導(dǎo)入動(dòng)物 細(xì)胞：細(xì)胞：導(dǎo)入微生物細(xì)胞：導(dǎo)入微生物細(xì)胞：受體細(xì)胞受體細(xì)胞 導(dǎo)入方法導(dǎo)入方法體細(xì)胞體細(xì)胞 受精卵受精卵受精卵受精卵 顯微注射法顯微注射法Ca2處理法處理法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 基因槍法基因槍法花粉管通道法花粉管通道法第26頁(yè)/共44頁(yè)1、將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞、將目

16、的基因?qū)胫参锛?xì)胞（1）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法化法特點(diǎn)特點(diǎn):能感染能感染雙子葉植物雙子葉植物和和祼子植物祼子植物,對(duì)單對(duì)單子葉植物無(wú)感染能力子葉植物無(wú)感染能力Ti質(zhì)粒質(zhì)粒的的TDNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞并并整合整合到其染色體上到其染色體上轉(zhuǎn)化過(guò)程轉(zhuǎn)化過(guò)程:Ti質(zhì)粒質(zhì)粒目的基因目的基因構(gòu)建構(gòu)建表表達(dá)達(dá)載載體體導(dǎo)入導(dǎo)入植植物物細(xì)細(xì)胞胞插入插入植物細(xì)胞植物細(xì)胞染色染色DNA表達(dá)表達(dá)新新性性狀狀轉(zhuǎn)入轉(zhuǎn)入農(nóng)農(nóng)桿桿菌菌第27頁(yè)/共44頁(yè)（2）基因槍法）基因槍法 基因槍法又稱(chēng)基因槍法又稱(chēng)微彈轟擊法微彈轟擊法，是利用壓縮氣體產(chǎn)生的動(dòng)力，將，是利用壓縮氣體產(chǎn)生的動(dòng)力，將包裹在金屬顆粒表面的表達(dá)載體包

17、裹在金屬顆粒表面的表達(dá)載體DNA打入受體細(xì)胞中，使目的基因與打入受體細(xì)胞中，使目的基因與其整合并表達(dá)的方法。其整合并表達(dá)的方法。第28頁(yè)/共44頁(yè)（3）花粉通道法）花粉通道法 植物花粉在柱頭上萌發(fā)后，花粉管要穿過(guò)花柱直通胚囊?；ㄖ参锘ǚ墼谥^上萌發(fā)后，花粉管要穿過(guò)花柱直通胚囊。花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管還未愈合前，粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管還未愈合前，剪去柱頭，然后，滴加剪去柱頭，然后，滴加DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道進(jìn)入受體細(xì)胞。通道進(jìn)入受體細(xì)胞。第29頁(yè)/共44頁(yè)2、將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞、將目的基

18、因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞方法方法:顯微注射技術(shù)顯微注射技術(shù)操作程序操作程序:提純含目的基提純含目的基因表達(dá)載體因表達(dá)載體取受精卵取受精卵顯微注射顯微注射移植到子宮移植到子宮受精卵發(fā)育受精卵發(fā)育新性狀動(dòng)物新性狀動(dòng)物第30頁(yè)/共44頁(yè)3、將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞、將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞常用法常用法：Ca2+處理處理常用菌常用菌：大腸桿菌：大腸桿菌微生物作受體細(xì)胞原因：微生物作受體細(xì)胞原因：繁殖快繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)少、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)少過(guò)程：過(guò)程：Ca2+處理處理大腸桿菌大腸桿菌感受態(tài)感受態(tài)細(xì)胞細(xì)胞表達(dá)載體表達(dá)載體與感受態(tài)與感受態(tài)細(xì)胞混合細(xì)胞混合感受態(tài)細(xì)感受態(tài)細(xì)胞吸收胞吸收DNA增大細(xì)

19、胞壁的通透性增大細(xì)胞壁的通透性第31頁(yè)/共44頁(yè)1、基因工程中科學(xué)家常用細(xì)菌、酵母菌等微生物作為受、基因工程中科學(xué)家常用細(xì)菌、酵母菌等微生物作為受體細(xì)胞，原因是體細(xì)胞，原因是 A結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、操作方便結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、操作方便 B繁殖速度快繁殖速度快 C遺傳物質(zhì)含量少、簡(jiǎn)單遺傳物質(zhì)含量少、簡(jiǎn)單 D性狀穩(wěn)定、變異性狀穩(wěn)定、變異少少2、基因工程常用的受體細(xì)胞有、基因工程常用的受體細(xì)胞有 大腸桿菌大腸桿菌 枯草桿菌枯草桿菌 支原體支原體 動(dòng)植物細(xì)胞動(dòng)植物細(xì)胞A B C DBD3、基因工程是在、基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)施工的，在基分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)施工的，在基因操作的基本步驟中，不進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)的步

20、驟是因操作的基本步驟中，不進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)的步驟是A.人工合成基因人工合成基因 B.目的基因與運(yùn)載體結(jié)合目的基因與運(yùn)載體結(jié)合C.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 D.目的基因的檢測(cè)和表達(dá)目的基因的檢測(cè)和表達(dá)C第32頁(yè)/共44頁(yè)4. 采用基因工程的方法培育抗蟲(chóng)棉，下列導(dǎo)入目的基因采用基因工程的方法培育抗蟲(chóng)棉，下列導(dǎo)入目的基因的做法正確的是的做法正確的是將毒素蛋白質(zhì)注射到棉受精卵中將毒素蛋白質(zhì)注射到棉受精卵中 將編碼毒素蛋白的將編碼毒素蛋白的DNA序列注射到棉受精卵中序列注射到棉受精卵中 將編碼毒素蛋白的將編碼毒素蛋白的DNA序列與序列與細(xì)菌質(zhì)粒重組，注射到棉的子房并進(jìn)入受精卵中細(xì)菌質(zhì)

21、粒重組，注射到棉的子房并進(jìn)入受精卵中 將編將編碼毒素蛋白的碼毒素蛋白的DNA序列與質(zhì)粒重組，導(dǎo)入細(xì)菌感染棉的序列與質(zhì)粒重組，導(dǎo)入細(xì)菌感染棉的體細(xì)胞，再進(jìn)行組織培養(yǎng)體細(xì)胞，再進(jìn)行組織培養(yǎng)A B C DC5. 下列屬于基因工程中導(dǎo)入目的基因方法的是下列屬于基因工程中導(dǎo)入目的基因方法的是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 基因槍法基因槍法 花粉管道法花粉管道法 顯微注顯微注射法射法 胚胎移植胚胎移植 DNA分子雜交法分子雜交法A BC DC第33頁(yè)/共44頁(yè)目的基因是否表達(dá)：目的基因是否表達(dá)：目的基因是否轉(zhuǎn)錄目的基因是否轉(zhuǎn)錄：方法方法: : DNADNA分子雜交分子雜交方法方法: : 分分 子子 雜雜 交交方

22、法方法: : 抗原抗體雜交抗原抗體雜交鑒定鑒定抗蟲(chóng)性鑒定、抗病性鑒定、生物活性抗蟲(chóng)性鑒定、抗病性鑒定、生物活性鑒定等（鑒定等（生理、性狀水平的檢測(cè)生理、性狀水平的檢測(cè)）檢測(cè)檢測(cè)第34頁(yè)/共44頁(yè)知識(shí)延伸知識(shí)延伸DNADNA分子雜交技術(shù)分子雜交技術(shù) 該方法是根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，把互補(bǔ)的雙鏈該方法是根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，把互補(bǔ)的雙鏈DNA解開(kāi)，把單股的解開(kāi)，把單股的DNA小片段用同位素、熒光分子或化學(xué)發(fā)光小片段用同位素、熒光分子或化學(xué)發(fā)光催化劑等進(jìn)行標(biāo)記，之后同被檢測(cè)的催化劑等進(jìn)行標(biāo)記，之后同被檢測(cè)的DNA中的同源互補(bǔ)序列中的同源互補(bǔ)序列雜交，從而檢出所要查明的雜交，從而檢出所要查明的DNA或基

23、因。或基因。第35頁(yè)/共44頁(yè)第36頁(yè)/共44頁(yè)基本原理基本原理操作環(huán)境操作環(huán)境操作對(duì)象操作對(duì)象操作水平操作水平基本過(guò)程基本過(guò)程結(jié)果結(jié)果優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)不足不足實(shí)例實(shí)例基因拼接成功基因拼接成功的原因的原因成功表達(dá)原因成功表達(dá)原因基因重組基因重組體外體外基因基因DNA分子水平分子水平剪切剪切拼接拼接導(dǎo)入導(dǎo)入表達(dá)表達(dá)新的生物類(lèi)型和生物產(chǎn)品新的生物類(lèi)型和生物產(chǎn)品密碼子的通用性：密碼子的通用性：生物界共用一套相同的密碼子生物界共用一套相同的密碼子基本單位相同基本單位相同 結(jié)構(gòu)相同結(jié)構(gòu)相同堿基配對(duì)方式相同堿基配對(duì)方式相同安全性問(wèn)題：生物安全、食品安全、環(huán)境安安全性問(wèn)題：生物安全、食品安全、環(huán)境安全全轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉

24、轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉打破生殖隔離定向改造生物時(shí)間短打破生殖隔離定向改造生物時(shí)間短第37頁(yè)/共44頁(yè)1、基因工程中科學(xué)家常用細(xì)菌、酵母菌等微生物作為受體、基因工程中科學(xué)家常用細(xì)菌、酵母菌等微生物作為受體細(xì)胞，原因是細(xì)胞，原因是 A結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、操作方便結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、操作方便 B繁殖速度快繁殖速度快 C遺傳物質(zhì)含量少、簡(jiǎn)單遺傳物質(zhì)含量少、簡(jiǎn)單 D性狀穩(wěn)定、變異少性狀穩(wěn)定、變異少2、基因工程常用的受體細(xì)胞有、基因工程常用的受體細(xì)胞有 大腸桿菌大腸桿菌 枯草桿菌枯草桿菌 支原體支原體 動(dòng)植物細(xì)胞動(dòng)植物細(xì)胞A B C DBD2、基因工程是在、基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)施工的，在基因分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)施工的，在

25、基因操作的基本步驟中，不進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)的步驟是操作的基本步驟中，不進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)的步驟是A.人工合成基因人工合成基因 B.目的基因與運(yùn)載體結(jié)合目的基因與運(yùn)載體結(jié)合C.將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 D.目的基因的檢測(cè)和表達(dá)目的基因的檢測(cè)和表達(dá)C第38頁(yè)/共44頁(yè)3. 采用基因工程的方法培育抗蟲(chóng)棉，下列導(dǎo)入目的基因采用基因工程的方法培育抗蟲(chóng)棉，下列導(dǎo)入目的基因的做法正確的是的做法正確的是將毒素蛋白質(zhì)注射到棉受精卵中將毒素蛋白質(zhì)注射到棉受精卵中 將編碼毒素蛋白的將編碼毒素蛋白的DNA序序列注射到棉受精卵中列注射到棉受精卵中 將編碼毒素蛋白的將編碼毒素蛋白的DNA序列與細(xì)序列與細(xì)菌質(zhì)粒重組，注射到棉的子房并進(jìn)入受精卵中菌質(zhì)粒重組，注射到棉的子房并進(jìn)入受精卵中 將編碼將編碼毒素蛋白的毒素蛋白的DNA序列與質(zhì)粒重組，導(dǎo)入細(xì)菌感染棉的體細(xì)序列與質(zhì)粒重組，導(dǎo)入細(xì)菌感染棉的體細(xì)胞，再進(jìn)行組織培養(yǎng)胞，再進(jìn)行組織培養(yǎng)A B C DC4. 下列屬于基因工程中導(dǎo)入目的基因方法的是下列屬于基因工程中導(dǎo)入目的基因方法的是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 基因槍法基因槍法 花粉管道法花粉管道法 顯微注顯微注射法射法 胚胎移植胚