基質(zhì)輔助激光解析離子化飛行時(shí)間質(zhì)譜綜述基質(zhì)輔助激光解析離子化用于飛行時(shí)間質(zhì)譜的發(fā)展概況

1、基質(zhì)輔助激光解析離子化用于飛行時(shí)間質(zhì)譜的發(fā)展概況摘要：扼要介紹了飛行時(shí)間質(zhì)譜在分析合成高分子中的基本原理、主要優(yōu)點(diǎn)及存在的困難；詳細(xì)分析了基質(zhì)輔助激光解吸電離的基質(zhì)、鹽(陽離子)、pH和樣品制備方法、一些新的無機(jī)材料的應(yīng)用、樣品檢測前脫鹽處理等關(guān)鍵因素對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響；闡明了這一分析技術(shù)在合成高分子定量測定及其應(yīng)用的研究及展望。關(guān)鍵詞：基質(zhì)輔助激光解析離子化(MALDI)飛行時(shí)間質(zhì)譜(TOF)基質(zhì)樣品制備pH值A(chǔ)bstract：thebasicprinciples,mainadvantages,andexistingdifficultiesofTOFinanalyzingsynthesized

2、macromoleculeareintroduced.Theusingofmatrices,salts,andinfluncescausedbypH,samplepreparations,newinorganicmaterials,desaltingforehanddetectionarediscussedindetails.Finally,applicationsandprospectsofMALDI-TOFinanalyzingsynthesizedmacromoleculeareclarified.Keywords：MALDITOFmatricessamplepreparationpH1

3、飛行時(shí)間質(zhì)譜(TOF-MS)概述飛行時(shí)間質(zhì)譜(Time-of-FlightMassSpectrometry,TOFMS)分析是利用動能相同而質(zhì)-荷比不同的離子在恒定電場中運(yùn)動，經(jīng)過恒定距離所需時(shí)間不同的原理對物質(zhì)成分或結(jié)構(gòu)進(jìn)行測定的一種質(zhì)譜分析方法。飛行時(shí)間質(zhì)譜分析技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)在于理論上對測定對象沒有質(zhì)量范圍限制、極快的響應(yīng)速度以及較高的靈敏度。目前，TOFMS技術(shù)被應(yīng)用于生命科學(xué)、分析化學(xué)、表面科學(xué)、原子物理學(xué)及工藝過程監(jiān)控等諸多領(lǐng)域，成為20世紀(jì)90年代以來應(yīng)用最廣的質(zhì)譜分析技術(shù)之一1。1.1TOF-MS分析方法的基本原理TOF-MS分析方法的原理非常簡單。樣品在離子源中離子化后即被電場加速

4、，假設(shè)離子在電場方向上初始位移和初速度都為零，所帶電荷數(shù)為q,質(zhì)量數(shù)為m,加速電場的電勢差為V,則加速后其動能應(yīng)為：mv2/2=qeV，其中,v為離子在電場方向上的速度。離子以此速度穿過負(fù)極板上的柵條，飛向檢測器。離MALDIwithtime-of-flightmassanalyzerMALDITime-of-flightdetector子從負(fù)極板到達(dá)檢測器的飛行時(shí)間進(jìn)行質(zhì)量分析的判據(jù)。在傳統(tǒng)的線性MALDIwithtime-of-flightreflectronmassanalyzerLaserReflectron中，離子detectorIonsIons經(jīng)過多電極劣域i陶甲獨(dú)E反向版r*認(rèn)檢

5、機(jī)隔后者ft,仙f方面優(yōu)丁前者,圖一為常規(guī)線形reflectrondetector圖一常規(guī)線形TOF和反射式TOF1.2TOF-MS技術(shù)及應(yīng)用的發(fā)展歷程以離子的飛行時(shí)間作為判據(jù)進(jìn)行質(zhì)量分析的創(chuàng)意，是Stephenser1946年提出來的。最初設(shè)計(jì)的是線性TOFMSo離子的飛行時(shí)間與其質(zhì)量的平方根成正比。與其他類型的質(zhì)譜儀相比，這種設(shè)計(jì)具有兩個(gè)突出的優(yōu)點(diǎn)：（1）到達(dá)檢測器的所有離子都能在一張圖譜中顯示出來，而不需要進(jìn)行任何電壓或電流的掃描，這使快速測定成為可能，同時(shí)對被測對象沒有質(zhì)量數(shù)的限制；（2）離子運(yùn)動中沒有經(jīng)過篩選，從而使離子源產(chǎn)生的離子絕大多數(shù)都可到達(dá)檢測器，即離子傳輸效率很高，使高靈敏

6、度成為可能。不過由此可能帶來如下問題：離子在進(jìn)入飛行區(qū)時(shí)的初始條件不可能完全一致，特別是與連續(xù)離子源如ESI,APCI等聯(lián)用時(shí)，離子產(chǎn)生的位置、時(shí)間、初始動能及初始速度方向的差異，都會造成飛行時(shí)間的延長或縮短，導(dǎo)致質(zhì)譜峰擴(kuò)寬，分辨率下降。很長一段時(shí)間，分辨率低成了阻礙飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)發(fā)展的主要因素。此外時(shí)間信號的接收與處理技術(shù)落后也影響了TOFMS的應(yīng)用。為了解決這個(gè)問題我們引入了MALDI技術(shù)，并且在TOF上引進(jìn)了延遲引出等技術(shù)。離子延遲引出（DelayExtraction）IP當(dāng)激光照射靶的瞬間，若靶電極和與其相對的離子引出電極處丁相同的電位，即在兩電極之間形成無場區(qū)，那么被解吸的離子以不

7、同的初始速度在無場區(qū)內(nèi)運(yùn)動，經(jīng)過一段延遲時(shí)間后，速度高的離子離靶遠(yuǎn)，速度低的離子離靶近，然后以脈沖方式在瞬間使靶與引出電極處丁不同電位，由此產(chǎn)生的電場把離子引出，經(jīng)聚焦透鏡后飛出離子源。離靶近的離子比離靶遠(yuǎn)的離子得到更大的加速（因而獲得更大的動能），適當(dāng)選擇延遲時(shí)間及靶與引出電極問電壓差，可以有效地補(bǔ)償離子的初始動能分散，從而顯著地提高線性TOF質(zhì)譜儀的分辨率，這一技術(shù)即為延遲引出技術(shù)或稱為“脈沖離子引出”(PulseIonExtraction)1圖二為連續(xù)引出和延遲引出技術(shù)比較。Delayedexiracthno)c2MALDI山LaserpulseExtractingpuhe/Resolu

8、tionisdramaticallyinnproviedwrthdelayedexlrction分子的離子化問題。耕提出了基炯勤激光解吸僵離渡來呼沁T高質(zhì)量數(shù)生物200nancx&ecTime是一個(gè)非常復(fù)雜的過程，某puIse至以學(xué)、力學(xué)現(xiàn)輔埋瀏光解折過程象及相變和電離的熱力學(xué)、物理化學(xué)過程，1可以顯著片捷。而最早度、能量者射式質(zhì)譜Sample&matrix離技叢oooV而且袈沖液的典容性，使得樣品的處理步驟能夠耍加簡單快卷器空0致人量的基灸抽品分理冬駒$吸,使速<3*尊一交分散，降低了質(zhì)譜的分辨率。隨后采用輸髀激光、離子鏡、反寸間延遲聚焦技術(shù)都顯著地提高了分辨率。作為一

9、種生物大分子的電聯(lián)用，直到現(xiàn)MALDI-TOF仍然廣泛用丁對蛋白質(zhì)的分析、鑒定。隨后，MALDI與FT-MS聯(lián)用也被用丁對大分子的研究。MALDI-FT-MS不僅能夠獲得更好的分辨率與質(zhì)量準(zhǔn)確度，而且還可以得到更多樣品分子的結(jié)構(gòu)信息。此后不久，MALDI與離子阱也得以成功地聯(lián)用，并應(yīng)用丁生物大分子的分析2。MALDI-TOF與傳統(tǒng)的磁式質(zhì)譜相比，其特點(diǎn)有：可實(shí)現(xiàn)納秒量級的瞬時(shí)記錄，經(jīng)過多次瞬時(shí)記錄累加得到的質(zhì)譜圖，其信噪比得到了極大的改善。具有高的離子流通率，因而獲得高的靈敏度，僅需約1pmol的供試品即可測定，甚至能檢測到離子化區(qū)的幾個(gè)原子。原則上沒有分子量范圍限制，目前可測定蛋白質(zhì)的分子量

10、已超過100000對固體、液體表面分析，可以很好地控制離子化的位置或深度，分析時(shí)間大大縮短，1'3圖四為最常見的MALDI-TOF聯(lián)用結(jié)構(gòu)。VartaMcAiknuitor限制，比如牧制復(fù)依并且價(jià)不足。D=島tn裔尚e析精密度，可靠性，分辨率等方面存在聯(lián)。如:腿茹麗!網(wǎng)酸，多聚糖）分辨力。Dclectjar4申Daiuystem囂;X"*也正受著諸多因素的在一些商業(yè)化儀器里，不同性質(zhì)和功能的分析器往往被綜合到一臺儀器上,以削減成本。然而，這樣帶來的另一問題，就是復(fù)雜性提高，可靠性下降。最近，人們正在逐步優(yōu)化諸如儀器尺寸，最大加速電壓，以及某些初始條件如初速度，離子初始位置的不

11、確定性，從中總結(jié)出的種種理論也在指導(dǎo)著新的技術(shù)的產(chǎn)生：如高速激光，快速數(shù)字轉(zhuǎn)換器和在線疊加技術(shù)，快速高電壓脈沖發(fā)生器以及計(jì)算機(jī)數(shù)字延遲發(fā)生器，以上這些構(gòu)成了目前高效MALDI-TOF的來源4c3MALDI基質(zhì)的選擇基質(zhì)作為MALDI研究的核心，左右著MALDI對分析物研究的發(fā)展。從大體上來說，質(zhì)譜的基質(zhì)輔助激光解析離子化基質(zhì)必須滿足以下幾個(gè)要求：1、能夠嵌入并分散被測物（如：通過共結(jié)晶的方式）；2、能與被測物共溶與合適的溶劑體系；3、在真空下能穩(wěn)定存在；4、能吸收激光;5、在激光照射下，能與被測物共解析；6、能促進(jìn)被測物離子化5。離子化是一個(gè)復(fù)雜的過程，它決定丁共結(jié)晶體系中樣品和基質(zhì)的物理化學(xué)

12、性質(zhì)。3.1常規(guī)基質(zhì)的衍生化以測定特定衍生物ThorstenJaskollaBeateFuchs等人在測定腦磷脂氯胺時(shí)發(fā)現(xiàn)：常規(guī)基質(zhì)如a-臘基-4-羥基苯丙烯酸（CHCA）和2,5-二羥基苯甲酸（2,5-DHB）不能很好地用丁其測定。而在此之前，氯胺衍生物的測定也只在ESI-MS中成功測定。作者通過研究發(fā)現(xiàn)利用基質(zhì)與氯胺基團(tuán)的反應(yīng)，以及激光下使氮氯鍵斷裂可以解決這一問題。同時(shí)，作者發(fā)現(xiàn)，4-氯-a-臘基肉桂酸（ClCCA）可以勝任氯胺類化合物的基質(zhì)。它能使磷脂在氣相中發(fā)生分子內(nèi)重組，從而暴露乙醇胺的基團(tuán)，為MALDI所檢測。但是，此離子化反應(yīng)具體的機(jī)理至今不明，唯一可以確定的是，氯胺衍生物只有

13、在類似ClCCA等合適的基質(zhì)下才能很好的測定，因此基質(zhì)的選擇對MALDI的推廣和普及尤為重要6。3.2二元基質(zhì)的互補(bǔ)使用糖蛋白其大分子量特性使得我們選則基質(zhì)時(shí)有了一定困難。正確選用基質(zhì)，是研究大分子加合物的關(guān)鍵。一般，2,5-二羥基苯甲酸（2,5-DHB）和a-臘基-4-羥基苯丙烯酸（CHCA）能夠順利使分子量小于5000的糖肽離子化。對于完整的糖蛋白（分子量往往在5000以上），我們一般會采用芥子酸（SA）,2-（-4-羥基苯偶氮）苯甲酸（HABA）,2,5-二羥基苯乙酮（DHAB），或2,4,6-三羥基苯乙酮（THAP）。應(yīng)用二元基質(zhì)是一種能夠提高質(zhì)譜行為的有效途徑，Karas等人通過2,

14、5-DHB和2-羥基-5-甲基苯甲酸聯(lián)用提高了糖和糖蛋白的質(zhì)譜分辨率。在2,5-DHB中加入1-羥基異啊林，可以提高質(zhì)譜對緩沖溶液和其它污染的耐受性。利用CHCA/2,5-DHB二元基質(zhì)能很好地解決多肽質(zhì)譜成像和完整的糖蛋白分析。CHCA和9-氨基叮噬混合基質(zhì)在分析小分子物質(zhì)時(shí)能顯著減少背景十?dāng)_。本文作者選用了2,5-DBH/CHCA;2,5-DBH/THAP;2,5-DBH/DHAP;2,5-DBH/SA;THAP/CHCA;THAP/SA這六種基質(zhì)組合形式研究了各自制備的樣品的質(zhì)譜行為，并使用核糖核酸酶B（RNaseB）這個(gè)常用的標(biāo)準(zhǔn)物來檢測這些混合基質(zhì)，在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步分析優(yōu)化質(zhì)譜參數(shù)和

15、試驗(yàn)條件。選用的參數(shù)有：信噪比，峰強(qiáng)，對RNaseB單個(gè)糖型的分辨率。較好的基質(zhì)組合應(yīng)該能有高的質(zhì)譜分辨，色譜圖上能顯示出5個(gè)尖銳的色譜峰，各峰對應(yīng)的質(zhì)譜分子量各自相差162（一個(gè)甘露糖單元）。通過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)2,5-DHB/CHCA和2,5-DHB/SA顯示的結(jié)果最好。用這兩種混合基質(zhì)得到的色譜峰活晰尖銳，分辨率高，重現(xiàn)性好。同時(shí)，2,5-DHB/CHCA在較低的激光能流下也能達(dá)到好的離子化效果，從而保護(hù)了儀器并減少離子污染7。4MALDI樣品的制備樣品的制備方法有很多種，常用的有：1、微滴十燥技術(shù)(Dried-droplettechnique,2、快速蒸發(fā)技術(shù)(Fast-evaporation

16、technique,3、電噴物沉積技術(shù)(Electrospraydeposition),4、非溶劑樣品制備技術(shù)(Solvent-freesamplepreparation)等等。在樣品準(zhǔn)備以及分析人工合成高分子化合物這一環(huán)節(jié)，很多人做出了不懈的努力，如：電噴霧沉積和真空沉積能制備出均一的樣品，提高分析物響應(yīng)值。8-11在傳統(tǒng)基質(zhì)中加入硝酸纖維，利用氣體噴霧技術(shù)(aerospra產(chǎn)生的均一薄基質(zhì)層在多次激光脈沖激發(fā)中有很高的重現(xiàn)性。12-13與電噴霧沉積相比，用升華法沉積基質(zhì)，可以用較少的堿性加合物達(dá)到較高的信號響應(yīng)。MichaelKaras等人用一些特有的理化參數(shù)對DD法和升華法進(jìn)行了比較14

17、,說明了升華法的優(yōu)越性。使用的基質(zhì)即最常用的CHCA及其適宜作基質(zhì)的CHCA衍生物。具體通過：1、通過掃描電子顯微技術(shù)對兩法制備的結(jié)晶大小進(jìn)行比較，2、熱重量分析(ThermogravimetricAnalysis,TGA),3、質(zhì)譜強(qiáng)度、激發(fā)初始速度的比較，4、分析物結(jié)合深度評價(jià)。實(shí)驗(yàn)表明，升華法得到的基質(zhì)斑沉積在疏水的表面時(shí)，疏水作用引起的橫向聚集使得分析物以很小的液滴存在，另外，表面預(yù)處理技術(shù)(surfacepreparation使得分析物在縱向上富集在基質(zhì)表面，小的結(jié)晶顆粒和富集作用提高了分析物-基質(zhì)比，從而在一次激光激發(fā)過程中有可能產(chǎn)生更多的離子化的分析物，這能讓其擁有液滴十燥法(D

18、D法)無法媲美的良好的靈敏度15-17。與DD法相比，升華法提高了分析物激光解析的穩(wěn)定性。使其激發(fā)后將能量更多地轉(zhuǎn)化為較高的初速度，降低了離子的內(nèi)能。作者還發(fā)現(xiàn)升華法制備的樣品在激發(fā)時(shí)表面溫度明顯高于DD法，這也許是因?yàn)榧?xì)小的基質(zhì)顆粒能更顯著的阻斷熱傳導(dǎo)。這樣，激光的激發(fā)效率就會明顯增加。同時(shí)，基質(zhì)的準(zhǔn)備和點(diǎn)樣過程也可以省略，這將極有利于高通量分析中縮減樣品制備工作的時(shí)間。更重要的是，升華過程純化了基質(zhì)混合物，純化的基質(zhì)能夠更廣泛、均勻的覆蓋樣品斑。更小的基質(zhì)結(jié)晶展現(xiàn)出更好的樣品相容性和均一性，在多次不同點(diǎn)位的激光激發(fā)中可以達(dá)到良好的重現(xiàn)18。而DD法制備的樣品這一性質(zhì)明顯不足，使得其樣品分析

19、中有必要進(jìn)行個(gè)別晶體的選擇，或者讓激光束在樣品斑上隨機(jī)走動以彌補(bǔ)局部不均。這樣，DD法制備的樣品在沒有基質(zhì)覆蓋或部分覆蓋的樣品斑點(diǎn)區(qū)所耗的分析時(shí)間和激光激發(fā)次數(shù)明顯增加。升華法的這些優(yōu)點(diǎn)結(jié)合上其他的固有性質(zhì)，如:精確的斑點(diǎn)大小，形狀，位置等等使得樣品制備條件大大同化，得到了良好的重現(xiàn)性19。然而，升華對基質(zhì)性質(zhì)的影響及其詳細(xì)機(jī)理并沒有完全明確；并且，較強(qiáng)的離子化條件容易造成分析物離子化過程產(chǎn)生過多碎片。因此，升華法還需要進(jìn)行進(jìn)一步研究和探討和優(yōu)化。5pH值對MALDI的影響自基體輔助激光解吸電離質(zhì)譜法(MALDI)面世不久，人們即發(fā)現(xiàn)基體溶液的pH值對測定結(jié)果有影響，基體在輔助激光解吸電離樣品

20、過程產(chǎn)生質(zhì)子轉(zhuǎn)移的作用機(jī)理已得到了普遍的認(rèn)同20,因此人們都傾向于選用pH值偏于酸性的基體，并往往在配制蛋白質(zhì)溶液時(shí)使用0.1%三氟醋酸水溶液21。Ehring等22認(rèn)為MALDI法只能在基體化合物溶液的等電點(diǎn)或酸性情況下才能進(jìn)行，如果基體溶液的pH值高于pKa值時(shí)，基體將以陰離子存在，在溶劑揮發(fā)后，就形成了相應(yīng)的鹽而不能起輔助解吸電離的作用。最近研究發(fā)現(xiàn)，利用2,5-二羥基苯甲酰月并衍生化試劑引入碳納米管材料(CNT)后可作為MALDI基質(zhì)和PH值調(diào)節(jié)劑，2,5-二羥基苯甲酰脫衍生化試劑能在CNT表面引入酚羥基和苯基，前者能提供可變的表面電荷和質(zhì)子來源；后者可成為強(qiáng)烈的自外激光吸收體。并且衍

21、生化后的CNT在pH為10.5的條件下能較充分的舒展，比表面積增大，從而為吸附痕量的多肽提供了很大的空間。而在pH為5的條件下，吸附了樣品的CNT開始沉積，與樣品溶液達(dá)到完美的分離。這為快速分離和提取技術(shù)的發(fā)展提供了有力的支持，克服了早期CNT材料在樣品提取和富集方面的不足，很大程度上提高質(zhì)譜離子化效率和檢測限，用于痕量多肽的研究。實(shí)驗(yàn)表明，通過如上的pH調(diào)節(jié)，當(dāng)被測物濃度達(dá)到0.01pg/L時(shí)，仍能通過此法達(dá)達(dá)檢測要求23。6MALDI中金屬離子的引入與MALDI分析生物分子相比，合成高分子的離子化在多數(shù)情況下是金屆離子陽離子化而不是質(zhì)子化。因此，僅僅優(yōu)化基質(zhì)是不夠的。而應(yīng)該與金屆離子同時(shí)考

22、慮。對于相對于極性較大的高分子，在MALDI分析中一般是鉀離子化或鈉離子化剖o金屆離子的引入，在大分子化合物分析中往往能提供特征化的碎片離子，在化合物結(jié)構(gòu)確定，特征離子的選擇，目標(biāo)物定量分析中有著重要的作用。DavidH.Russell等人報(bào)道了一種新的含銅離子的基質(zhì)，能讓被測物產(chǎn)M+xCu-(x-1)H+(x=1-6)離子優(yōu)臘基-4-羥基苯丙烯酸(CHCA)銅離子復(fù)合物(CHCA)4Cu2。(CHCA)4Cu2可由CHCA和氧化業(yè)銅反應(yīng)得到。作者發(fā)現(xiàn)，激光解析后產(chǎn)生的加合離子豐度明顯高于普通基質(zhì)產(chǎn)生的M+Cu+離子，同時(shí)這為人們研究銅離子與肽結(jié)合并在氣相中的相互作用提供了可靠依據(jù)和有效途徑。

23、其反應(yīng)機(jī)理有待于進(jìn)一步研究25。7其他添加劑及無機(jī)材料的應(yīng)用7.1碳納米管在MALDI-TOF檢測中的應(yīng)用碳納米管自從1991年被Iijima21,22發(fā)現(xiàn)以來，因?yàn)槠洫?dú)特的結(jié)構(gòu)，電學(xué)和機(jī)械特性使得在MALDI技術(shù)里引入碳納米管作為基質(zhì)添加劑和離子化輔助劑已逐漸成為一種新的方法。很多已發(fā)表的工作26-28都利用其本身以及衍生化材料和技術(shù)對小分子中性物質(zhì)進(jìn)行分析和檢測。有人報(bào)道29利用碳納米材料的疏水性，在樣品溶液中加入10L碳納米管甲醇(50%,vol/vol)懸:濁液，將分析物提取到碳納米管表面，經(jīng)過離心，碳納米管沉積到試管底部。除去上活液，加入分散劑使其再次懸浮，利用吸量管直接將其定量轉(zhuǎn)移

24、至樣品靶作進(jìn)一步分析。事實(shí)證明，對于小分子物質(zhì)的分析，用碳納米管作為基質(zhì)，樣品的離子化效率和峰分辨率明顯高于活性炭。在此之前的方法，僅僅將樣品沉積在單層碳納米材料表面，沒有萃取的過程；而在這整個(gè)分析過程中，碳納米管發(fā)揮了雙重作用：前處理過程中的固相萃取劑和MALDI分析的基質(zhì)。作者在此選用了B-Arg(N說-苯甲酰-L-精氨酸)，BAEE(N«-苯甲酰-L-精氨酸乙酯），propranolol（普奈洛爾），quinine（奎寧），Leu-Tyr（亮氨酸-酪氨酸二肽）,Leu-Met（亮氨酸-甲硫氨酸二肽）幾種小分子，比較了使用碳納米管和活性炭各自的峰強(qiáng)度，信噪比以及分辨率見表一。碳納

25、米管有著比活性炭更小的體積，并且在結(jié)構(gòu)上，碳納米管外側(cè)有很多共軸的電子，可以很好地吸收和傳遞紫外光的能量，而活性炭卻無法通過共軸電子流暢地將能量傳遞給被測物，因此從下表我們可以看出，所有的參數(shù)，碳納米管都優(yōu)丁活性炭。m2Intensity>1伊卜S/N(x10ResdutJonAC(xIO5CNTsACcmsACCNTs料在實(shí)驗(yàn)中襤調(diào)駕115N5.92.21金N4.51.7o.goN2421M#K|317N1.5N1.1N1.G很難固定*辟播|虹2,1P14.32.5160.933.62-21612172-3M+IQ+,34&1.11,10.92Q.9213220這一思路來源UN

26、0.77分辨率可以得到提高同時(shí)減少可能的離子源污染rM+«二扇NN面增強(qiáng)激光解析離子化）|M+Kl363NN的應(yīng)用，并在小分子的檢測中發(fā)揮重要的作用。M+KJ3337.2對惘ft靶的預(yù)覆蓋用*63NN0.070.72N2.91.3NN3.SM-N3j26S、，,M+KI,301目前有一種新的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)炊NNV2NNN0.53N0L72"670.91LGNN0.963A1-1一2.nf一，一一一，對樣品進(jìn)行預(yù)處理，即在利用MALDI-TOFo.ai0.8S品進(jìn)行快速、高質(zhì)量分析之前，將不銹鋼樣品板用以下三種物質(zhì)之一進(jìn)行涂漬覆蓋：礦物油，甘油，或者凡士林，并且對降血鈣素，胰島素等

27、多肽及其混合物在未覆蓋以上三種物質(zhì)之一的樣品板以及覆蓋了的樣品板上的分析進(jìn)行比較。發(fā)現(xiàn)，覆蓋之后，樣品的信號強(qiáng)度和檢測限都有所提高。同時(shí)，作者用SephadexLH-20微柱處理后的人血活蛋白檢驗(yàn)了此法的精密度和重現(xiàn)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，覆蓋后的樣品板在分析時(shí)，能夠測出更多痕量物質(zhì)，從而說明了該法優(yōu)越性。作者認(rèn)為，這種把微柱分離技術(shù)和此法結(jié)合，已可直接用丁對生物體液進(jìn)行檢測。另外，作者檢驗(yàn)了覆蓋樣品板對鹽的耐受性，所用物質(zhì)為氯化鈉和尿素濃縮物。測試發(fā)現(xiàn)，覆蓋處理后，樣品對鹽的耐受有所增強(qiáng)，特別是稀釋后的樣品。作者也通過靶上沖洗的方法對樣品進(jìn)行脫鹽處理，所采用的活洗溶液可以是1%的三氟醋酸（TFA）或用

28、蒸僻水。處理后比較兩種樣品板發(fā)現(xiàn)，未進(jìn)行涂漬處理的板，由丁沒有涂漬物的固定吸附作用，樣品會先從板上流失，損失很大，達(dá)不到脫鹽的效果。而覆蓋后，由于涂漬物與樣品的作用，樣品不容易被沖洗掉，從而在盡量減少樣品丟失的情況下，使得脫鹽效率顯著提高。此外，處理后的樣品板裝載樣品檢測使質(zhì)譜強(qiáng)度大大提高，這有利于MALDI-TOF對大分子檢測。此法簡單易行，耗時(shí)短，重現(xiàn)性、靈敏度高，對鹽耐受性高，樣品板便于活洗，同時(shí)一定程度下能減少基質(zhì)效應(yīng)，不失為一種較好的樣品處理技術(shù)。8結(jié)論與展望20世紀(jì)70年代以來，利用質(zhì)譜來測定多肽、蛋白質(zhì)、人工合成高聚物等已經(jīng)取得了長足的進(jìn)步。而這很大程度上要?dú)w因于先進(jìn)的離子化技術(shù)

29、的發(fā)展，如：MALDI,APPI,SELDI等。換句話說，這些新技術(shù)為我們在分析這些大分子化合物時(shí)，保證了良好的分辨率和準(zhǔn)確度。如今，痕量(fmol級別)的多肽和蛋白質(zhì)的分析鑒定已經(jīng)日趨成熟，而蛋白質(zhì)質(zhì)譜成像和結(jié)構(gòu)確定也變得非常簡單。我們都知道凝膠電泳在分子生物學(xué)相關(guān)分析中的重要地位，同時(shí)，我們也可以斷定，質(zhì)譜法憑借著它的高靈敏度，高精確性和準(zhǔn)確度以及高通量的優(yōu)勢迅速成為獨(dú)樹一幟的分析方法，以上的應(yīng)用只是質(zhì)譜MALDI的應(yīng)用的一小部分，我們相信，這些方法和技術(shù)在不久的將來會不斷完善31,同時(shí)，新的樣品預(yù)處理方法，新脫鹽試劑的應(yīng)用以及新基質(zhì)的發(fā)現(xiàn)，必將把MALDI-TOF的應(yīng)用推上一個(gè)新的臺階。

30、參考文獻(xiàn)：1 飛行時(shí)間質(zhì)譜分析技術(shù)的發(fā)展趙冰沈?qū)W靜ModernScientificInstruments2006,430-33蛋白質(zhì)組學(xué)中基質(zhì)輔助激光解吸電離的基質(zhì)研究進(jìn)展許亞偉陸豪杰楊苴原分析化學(xué)評述與進(jìn)展第35卷第3期2007年3月455460HillenkampF,KarasM,BeavisRC,etal.Matrix-assistedlaserdesorptionionizationmass-spectrometryofbiopolymersJ.AnalChem,1991,63(24):1193A-1202AHighperformanceMALDI-TOFmassspectrometr

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