血清葡萄糖的測定

1、（GOD-POD法法）實驗九血清葡萄糖濃度的測定CONTENTS相關(guān)臨床知識相關(guān)臨床知識12實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康?實驗原理實驗原理4實驗器材與試劑實驗器材與試劑5實驗操作實驗操作1.相關(guān)臨床知識血液中的葡萄糖稱為血液中的葡萄糖稱為血糖血糖。1.相關(guān)臨床知識空腹血糖空腹血糖3.9-6.1 mmol/L正常餐后兩小時正常餐后兩小時3.9-7.8mmol/L糖尿病糖尿病空腹空腹餐后兩小時餐后兩小時7.0mmol/L11.1mmol/L1.相關(guān)臨床知識胰島B細(xì)胞靶細(xì)胞胰島素胰島素I 型糖尿?。ㄐ吞悄虿。═1DM）l 別名別名：青年發(fā)病型糖尿：青年發(fā)病型糖尿病病或胰島素依賴性糖尿病?；蛞葝u素依賴性糖尿病。l

2、 原因原因：胰腺產(chǎn)生胰島素：胰腺產(chǎn)生胰島素的細(xì)胞已經(jīng)徹底損壞。的細(xì)胞已經(jīng)徹底損壞。l 易發(fā)病人群易發(fā)病人群：年齡輕，：年齡輕，大多大多30歲歲l 治療治療：依賴胰島素治療：依賴胰島素治療II 型糖尿?。ㄐ吞悄虿。═2DM）l 別名別名：非胰島素依賴型糖尿：非胰島素依賴型糖尿病病l 原因原因：自身能產(chǎn)生胰島素，：自身能產(chǎn)生胰島素，但細(xì)胞無法對其做出反應(yīng)。但細(xì)胞無法對其做出反應(yīng)。l 易發(fā)病人群易發(fā)病人群：中老年人，肥：中老年人，肥胖者胖者l 治療治療：需要胰島素單獨(dú)或與：需要胰島素單獨(dú)或與口服藥聯(lián)合應(yīng)用的治療口服藥聯(lián)合應(yīng)用的治療有些患者血糖含量并不穩(wěn)定，有什么辦法進(jìn)一步更準(zhǔn)確診斷？有些患者血糖含量

3、并不穩(wěn)定，有什么辦法進(jìn)一步更準(zhǔn)確診斷？1.相關(guān)臨床知識口服葡萄糖耐量試驗（口服葡萄糖耐量試驗（OGTTOGTT）概念：是一種葡萄糖負(fù)荷試驗，用以了解胰島細(xì)胞功能和機(jī)體對血糖的調(diào)節(jié)能力，是診斷糖尿病的確診試驗原理：正常人進(jìn)食糖類后血糖會暫時升高，0.51小時后升到最高峰，但不超過8.9mmol/L，2小時后回到空腹水平。1.相關(guān)臨床知識OGTT操作步驟1）. 試驗前試驗前3天內(nèi)，每日碳水化合物攝入量天內(nèi)，每日碳水化合物攝入量不少于不少于150g。2）. 空腹取血后，空腹取血后，5分鐘內(nèi)分鐘內(nèi)口服溶于口服溶于250300ml水內(nèi)的水內(nèi)的75g無水葡萄糖粉的糖水，妊娠婦女用量為無水葡萄糖粉的糖水，妊

4、娠婦女用量為100g，兒童按，兒童按1.75g/kg體重給體重給予，不超過予，不超過75g.3）. 服糖后服糖后半小時半小時、1小時、小時、2小時小時、3小時小時分別在前臂采血測血糖分別在前臂采血測血糖,采采血同時，血同時，每隔每隔1小時小時取尿液作尿糖試驗。試驗過程中，受試者不喝茶及取尿液作尿糖試驗。試驗過程中，受試者不喝茶及咖啡，不吸煙，不做劇烈運(yùn)動咖啡，不吸煙，不做劇烈運(yùn)動4）. OGTT 2小時小時后血糖后血糖11.1mmolL可以確診糖尿病可以確診糖尿病OGTT診斷1.當(dāng)靜脈空腹血糖6.1mmolL，OGTT 2小時血糖7.8mmolL，說明人體對進(jìn)食葡萄糖后的血糖調(diào)節(jié)能力正常。2.

5、當(dāng)靜脈空腹血糖7.0mmolL或OGTT 2小時血糖11.1mmolL，說明人體處理進(jìn)食后葡萄糖的能力明顯降低，可以確診糖尿病。3.當(dāng)靜脈空腹血糖7.0mmolL，并且OGTT 2小時血糖介于7.811.1mmolL之間，說明人體對葡萄糖的調(diào)節(jié)能力輕度下降，可以診斷糖耐量減低。4.當(dāng)靜脈空腹血糖介于6.17.0mmolL之間，且OGTT 2小時血糖7.8mmolL，說明人體對進(jìn)食葡萄糖后的血糖調(diào)節(jié)能力尚好，但對空腹血糖調(diào)節(jié)能力輕度減退，可以診斷空腹血糖受損。1.相關(guān)臨床知識2.實驗?zāi)康?.掌握酶法測定血清葡萄糖濃度的原理2.掌握血糖變化的臨床意義3.實驗原理血糖測定的方法有哪些？（一）無機(jī)化學(xué)

6、法：Folin-Wu法，基于葡萄糖醛基的還原性（二）有機(jī)化學(xué)法：鄰甲笨胺法，聯(lián)笨胺法等（三）酶法Cu2+OH-GluCu+磷鉬酸顯色1.己糖激酶法（HK）2.葡萄糖氧化酶法（GOD-POD法）鄰甲笨胺 + Glu葡萄糖基胺藍(lán)綠色化合物分子重排脫水希夫氏堿縮合特異性差3.實驗原理葡萄糖氧化酶法（GOD-POD法）l 葡萄糖氧化酶（GOD）將葡萄糖氧化為葡萄糖酸酶，同時釋放過氧化氫。l 過氧化氫酶（POD）催化過氧化氫氧化色素原（如4-氨基安替比林和苯酚），并使色素原氧化成紅色醌類化合物，即Trinder反應(yīng)。l 紅色醌類化合物的生成量與葡萄糖含量成正比。葡萄糖+O2+H2O葡萄糖酸+2H2O2G

7、OD2H2O2+4-氨基安替比林+苯酚紅色醌類化合物POD4.實驗器材和試劑(一）器材5ml移液管，微量可調(diào)式移液管，移液管，微量可調(diào)式移液管，721E分光計，分光計，37恒溫水浴恒溫水浴（二）試劑1. 苯甲酸鈉溶液（苯甲酸鈉溶液（12mmol/L12mmol/L）2. 酶酚混合試劑酶酚混合試劑 酶試劑酶試劑+ +酚溶液酚溶液 1:11:13. 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)工作液（葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)工作液（5mmol/L）防止氧化，葡萄糖為單糖,含醛基,易氧化成羧基5.實驗操作取試管3支，按表操作試劑試劑/ml空白管（空白管（B）標(biāo)準(zhǔn)管（標(biāo)準(zhǔn)管（S）測定管（測定管（T）血清-0.020葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液-0.020-蒸餾水0

8、.020-酶酚混合液3.003.003.00混勻，置37水浴中，保暖25min,在波長510nm處比色，以空白管調(diào)零，讀取標(biāo)準(zhǔn)管及測定管的吸光度。計算公式計算公式血清葡萄糖濃度=A測定A標(biāo)準(zhǔn)5mmol/L參考值 空腹血清葡萄糖濃度：3.896.11mmol/L臨床意義1.生理性高血糖 可見攝入高糖食物后，或情緒緊張腎上腺分泌增加時。2.病理性高血糖 糖尿病：病理性高血糖常見于胰島素絕對或相對不足的糖尿病患者。內(nèi)分泌腺功能障礙：甲狀腺功能亢進(jìn)，腎上腺皮質(zhì)功能及髓質(zhì)功能亢進(jìn)，引 起各自對抗胰島素的激素分泌過多，或升高血糖的激素增多引起的高血糖 現(xiàn)已歸入特異性糖尿病中。顱內(nèi)壓增高：可刺激血糖中樞，如腦膜炎，顱外傷，顱內(nèi)出血等，引起血糖增高。脫水引起的高血糖：如嘔吐，腹瀉和高熱等也可使血糖輕度增高。3.生理性低血糖 見于饑餓和劇烈運(yùn)動時。4.病理性低血糖 特發(fā)性功能性低血糖最多見，其次是藥源性，肝源性和胰島素瘤等。注意事項1.葡萄糖氧化酶法可直接測定腦脊液葡萄糖含量，但不能直接測定尿液葡萄糖含量。這是因為尿