實(shí)驗(yàn)三牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的制備、微生物的分離與純化

1、實(shí)驗(yàn)五實(shí)驗(yàn)五 細(xì)菌生理生化反應(yīng)、細(xì)菌生理生化反應(yīng)、 免疫標(biāo)本的觀察免疫標(biāo)本的觀察 微生物學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)教研室微生物學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)教研室 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?o掌握細(xì)菌生理生化反應(yīng)原理與方法掌握細(xì)菌生理生化反應(yīng)原理與方法o熟悉細(xì)菌的莢膜、芽孢、鞭毛等特殊結(jié)構(gòu)熟悉細(xì)菌的莢膜、芽孢、鞭毛等特殊結(jié)構(gòu)o了解淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化、了解淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化、E-E-玫瑰花環(huán)試驗(yàn)原理玫瑰花環(huán)試驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 1.糖發(fā)酵試驗(yàn)糖發(fā)酵試驗(yàn)不同微生物發(fā)酵單糖的能力各異，產(chǎn)生的分解產(chǎn)物也不同微生物發(fā)酵單糖的能力各異，產(chǎn)生的分解產(chǎn)物也不同，可以作為細(xì)菌分類鑒定的手段。不同，可以作為細(xì)菌分類鑒定的手段。大腸埃希菌大腸埃希菌/產(chǎn)氣腸桿

2、菌產(chǎn)氣腸桿菌葡萄糖葡萄糖CH3COCOOHHCOOH甲酸解氫酶甲酸解氫酶H2+ CO2傷寒沙門菌傷寒沙門菌葡萄糖葡萄糖CH3COCOOHHCOOH指示劑：溴麝香草酚藍(lán)指示劑：溴麝香草酚藍(lán)pH6.3(黃黃)；6.3 pH7.2(藍(lán)藍(lán))pH6.3pH7.2不同微生物所含酶系統(tǒng)不同，某些細(xì)菌含有不同微生物所含酶系統(tǒng)不同，某些細(xì)菌含有色氨酸酶色氨酸酶，能夠分解培養(yǎng)基內(nèi)蛋白胨中的色氨酸。能夠分解培養(yǎng)基內(nèi)蛋白胨中的色氨酸。大腸埃希菌大腸埃希菌色氨酸色氨酸產(chǎn)氣腸桿菌產(chǎn)氣腸桿菌色氨酸酶色氨酸酶+H2OCH3COCOOH吲哚吲哚 +檢測：檢測：吲哚吲哚 +對(duì)二甲基對(duì)二甲基氨基苯甲醛氨基苯甲醛玫瑰吲哚玫瑰吲哚+H

3、2O玫瑰紅色玫瑰紅色吲哚試驗(yàn)陽性。吲哚試驗(yàn)陽性。實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 2. 吲哚試驗(yàn)（吲哚試驗(yàn)（I）吲哚陰性。吲哚陰性。檢測不同細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)酸的能力。檢測不同細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)酸的能力。大腸埃希菌大腸埃希菌葡萄糖葡萄糖產(chǎn)氣腸桿菌產(chǎn)氣腸桿菌指示劑：指示劑：甲酸甲酸乙酸乙酸乳酸乳酸琥珀酸等琥珀酸等分解分解甲酸、乙醇和乙酰甲基乙醇甲酸、乙醇和乙酰甲基乙醇葡萄糖葡萄糖分解分解甲基紅甲基紅pH5.4(橘黃色橘黃色)。實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 3.甲基紅試驗(yàn)（甲基紅試驗(yàn)（M ）pH4.5pH5.4某些細(xì)菌在糖代謝過程中，經(jīng)糖酵解途徑產(chǎn)生丙酮酸。某些細(xì)菌在糖代謝過程中，經(jīng)糖酵解途徑產(chǎn)生丙酮酸。因不同細(xì)菌所含酶不同，進(jìn)

4、一步對(duì)丙酮酸的代謝也不同。因不同細(xì)菌所含酶不同，進(jìn)一步對(duì)丙酮酸的代謝也不同。大腸埃希菌大腸埃希菌產(chǎn)氣腸桿菌產(chǎn)氣腸桿菌2CH3COCOOHCH3COCHOHCH3+ 2CO2O2+ KOHCH3COCHOHCH3CH3COCOCH3CH3COCOCH3+ 胍基胍基紅色化合物紅色化合物 + H2OVP試驗(yàn)陰性。試驗(yàn)陰性。實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 4.VP試驗(yàn)（試驗(yàn)（V）腸桿菌科各種細(xì)菌利用檸檬酸鹽的能力不同，有的菌可利用腸桿菌科各種細(xì)菌利用檸檬酸鹽的能力不同，有的菌可利用檸檬酸鈉作為碳源，有的則不能。檸檬酸鈉作為碳源，有的則不能。大腸埃希菌大腸埃希菌產(chǎn)氣腸桿菌產(chǎn)氣腸桿菌大腸埃希菌不能利用檸檬酸鹽，故不能在

5、以檸檬酸鹽大腸埃希菌不能利用檸檬酸鹽，故不能在以檸檬酸鹽為唯一碳源的培養(yǎng)基上生長。檸檬酸鹽利用試驗(yàn)陰性。為唯一碳源的培養(yǎng)基上生長。檸檬酸鹽利用試驗(yàn)陰性。產(chǎn)氣腸桿菌能在以檸檬酸鹽為唯一碳源的培養(yǎng)基上生長，并產(chǎn)氣腸桿菌能在以檸檬酸鹽為唯一碳源的培養(yǎng)基上生長，并分解檸檬酸鹽產(chǎn)生分解檸檬酸鹽產(chǎn)生CO2，再生成碳酸鹽，使培養(yǎng)基由中性變，再生成碳酸鹽，使培養(yǎng)基由中性變?yōu)閴A性，培養(yǎng)基中的指示劑為堿性，培養(yǎng)基中的指示劑BTB由綠色變?yōu)樗{(lán)色。由綠色變?yōu)樗{(lán)色。實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 5.枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)（枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)（C）實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料 o培養(yǎng)基：生化培養(yǎng)基培養(yǎng)基：生化培養(yǎng)基o菌種：大腸埃細(xì)菌、產(chǎn)氣腸桿菌菌種：大

6、腸埃細(xì)菌、產(chǎn)氣腸桿菌o試劑：柯氏試劑、甲基紅、試劑：柯氏試劑、甲基紅、40%KOH40%KOH、 -6%6%萘酚萘酚 單糖發(fā)酵試驗(yàn)單糖發(fā)酵試驗(yàn) 直接觀察直接觀察 吲哚試驗(yàn)吲哚試驗(yàn) 加入加入5滴柯氏滴柯氏試劑，振蕩，試劑，振蕩， 靜置后觀察靜置后觀察 甲基紅試驗(yàn)甲基紅試驗(yàn) 加入加入5 5滴甲基紅，振蕩，滴甲基紅，振蕩， 靜置后觀察靜置后觀察 伏普試驗(yàn)伏普試驗(yàn) 加入加入0.4mL 40%KOH, 開蓋振蕩，再加入開蓋振蕩，再加入-6%萘酚萘酚 檸檬酸鹽利用試驗(yàn)檸檬酸鹽利用試驗(yàn) 直接觀察直接觀察 1.1.細(xì)菌生理生化反應(yīng)結(jié)果觀察：細(xì)菌生理生化反應(yīng)結(jié)果觀察：實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟2.2.細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀察：細(xì)

7、菌特殊結(jié)構(gòu)觀察：實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟 芽孢芽孢 破傷風(fēng)梭菌破傷風(fēng)梭菌2.2.細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀察：細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀察：實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟 莢膜莢膜 肺炎鏈球菌肺炎鏈球菌2.2.細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀察：細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀察：實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟 鞭毛鞭毛 變形桿菌變形桿菌3.3.免疫標(biāo)本觀察：免疫標(biāo)本觀察：實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化觀察已轉(zhuǎn)化3.3.免疫標(biāo)本觀察：免疫標(biāo)本觀察：實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟 E-E-玫瑰花環(huán)玫瑰花環(huán)原始記錄原始記錄 列表描述細(xì)菌生理生化反應(yīng)現(xiàn)象列表描述細(xì)菌生理生化反應(yīng)現(xiàn)象實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.1.細(xì)菌生理生化反應(yīng)結(jié)果細(xì)菌生理生化反應(yīng)結(jié)果+IMVC大腸埃希菌大腸埃希菌產(chǎn)氣腸桿菌產(chǎn)氣腸桿菌+- - - -菌菌 名