實(shí)驗(yàn)八.尿藥法測定核黃素片劑消除速率常數(shù)

1、實(shí)驗(yàn)八實(shí)驗(yàn)八尿藥尿藥測定核黃素片劑消除速率常數(shù)測定核黃素片劑消除速率常數(shù)1 1一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊弧?shí)驗(yàn)?zāi)康膎1、熟悉尿藥法在生物藥劑實(shí)驗(yàn)中、熟悉尿藥法在生物藥劑實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用。的應(yīng)用。n2、掌握尿藥法在計(jì)算消除速度常、掌握尿藥法在計(jì)算消除速度常數(shù)等動(dòng)力參數(shù)的方法。數(shù)等動(dòng)力參數(shù)的方法。2 2二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理藥物在體內(nèi)的吸收、分布、代謝、等過程中既有區(qū)別，又有聯(lián)系，觀察一個(gè)方面的變化，?？砷g接地認(rèn)識另一方面的情況，所以藥物在體內(nèi)的速度過程變化規(guī)律，既可用血藥法來估算，也可用尿藥法來估算。 在多數(shù)情況下，尿藥濃度高于血藥濃度，定量分析精密度好，測定方法較易建立，而且取樣方便，受試者可免受多次抽血的

2、痛苦。因此，在體內(nèi)藥物大部分以原形從尿中排除條件下，通常可用尿藥法估算消除速度常數(shù)、生物半衰期等動(dòng)力學(xué)參數(shù)。尿中原形藥物的瞬時(shí)排泄速度，可用下列微分式表示： Ke為表現(xiàn)一級排泄速度常數(shù)，Xu為t時(shí)間尿中原形藥物的累計(jì)排泄量，X為t時(shí)間體內(nèi)存有的藥。 在靜脈給藥時(shí)，體內(nèi)藥量經(jīng)時(shí)過程可由下式表示： X 為給藥劑量，K為表現(xiàn)一級消除速度常數(shù)。 KeXdtdXu（1）OXX kte（2）將（將（2）式）式X值代入（值代入（1）式后得：）式后得：兩邊取對數(shù)得：兩邊取對數(shù)得：ktoeeXKdtdXu（3）303. 2loglogKtXKdtdXuoe（4）由（4）式可見，原形藥物排泄速度的對數(shù)對時(shí)間作圖為

3、一直線，其斜率為 與血藥濃度的對數(shù)對時(shí)間作圖所求的斜率相同。（4）式適用于靜脈給藥后求算消除速度常數(shù)。若口服給藥，則體內(nèi)藥量經(jīng)時(shí)過程可由下式表示：Ka為表現(xiàn)一級吸收速度常數(shù)。303.2K（5）尿中原形藥物的瞬時(shí)排泄速度可用（尿中原形藥物的瞬時(shí)排泄速度可用（5）式代入（）式代入（1）式得：式得：當(dāng)當(dāng)KaK，t充分大時(shí)，則充分大時(shí)，則 ，（，（5）式簡化為：）式簡化為：（6）（7）兩邊取對數(shù)得：（8）303.2loglogKtKKaKeKaFXodtdXu由上述關(guān)系式可見，若以 對t作圖，可得到一條二項(xiàng)指數(shù)曲線，從其后段直線的斜率可求出一級消除速度常數(shù)K.。由于尿中原形藥物排泄速度的瞬時(shí)變化率是不

4、可能用實(shí)驗(yàn)方法求算的，通過實(shí)驗(yàn)只可求出平均排泄速度，設(shè)在一段時(shí)間間隔t內(nèi)藥物的排泄量為Xu，則平均排泄速度為 ，這樣（4）或（8）式可改寫如下：0X 0X tXuKeX0（9） 中tk303. 2（10）由于實(shí)驗(yàn)中采取平均排泄速度代替瞬時(shí)排泄速度，求得的消除速度常數(shù)K會出現(xiàn)一些誤差。但若以恒定的時(shí)間間隔集尿，其時(shí)間間隔補(bǔ)大于一個(gè)藥物的半衰期時(shí)，則僅發(fā)生較小偏差。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與操作()服藥及尿樣收集1、臨服藥前排空小便。2、早餐后立即服用核黃素三片（5mg/片），用溫水250ml吞服不咀碎，記錄服藥時(shí)間。3、按服下藥片后的第0、0.5、1、1.5、2、2.5、3、 4、5、6、8、10小時(shí)收集尿

5、液，記錄尿液重量（按密度為1折算藥液體積），然后，將尿液倒入盛有0.1mL冰醋酸的刻度試管內(nèi)至10mL，搖勻，于陰涼避光處保存。注意點(diǎn)：1、每次收集尿液后飲150200mL左右水以維持尿量。2、大便時(shí)收集小便，切勿損失。3、試驗(yàn)期間（包括服藥前一天）控制食譜，不能吃含有核黃素的食物，如：蛋類、牛奶、麥乳精、奶糖等。并不得服用含有B族維生素的藥物。（二）尿液中核黃素含量的測定（二）尿液中核黃素含量的測定 1、原理： 核黃素的異咯嗪環(huán)上具有活潑的雙鍵，能接受和放出氫原子，在保險(xiǎn)粉（連二亞硫酸鈉）的作用下，能還原為無色雙氫核黃素，利用這一特性，可以由加入保險(xiǎn)粉前后二次測得的吸收度（核黃素在波長444

6、nm處有吸收）的差值，來計(jì)算尿液中核黃素的含量。2、方法、方法（1）標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備）標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備精密稱取精密稱取105干燥干燥2小時(shí)的核黃素對照品小時(shí)的核黃素對照品10mg于于100mL量瓶中，加量瓶中，加0.02m0lL醋酸液稀釋醋酸液稀釋60mL，置水浴加熱溶解后，放冷至室溫，用置水浴加熱溶解后，放冷至室溫，用0.02molL醋酸液稀釋至刻度，搖勻，即得，每醋酸液稀釋至刻度，搖勻，即得，每1mL中含核中含核黃素黃素100g（100g/mL），然后加入甲苯覆蓋上），然后加入甲苯覆蓋上面，置涼暗處保存。面，置涼暗處保存。（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備）標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.

7、1、0.3、0.5、1.0、2.0、3.0mL分別置于分別置于10mL量瓶中用酸化蒸餾水（每量瓶中用酸化蒸餾水（每100mL蒸餾水中含蒸餾水中含1mL冰醋酸）稀釋至刻度，搖勻。冰醋酸）稀釋至刻度，搖勻。以酸化蒸餾水作空白，在以酸化蒸餾水作空白，在444nm波長處測定吸收度，波長處測定吸收度，然后，在每管中各加保險(xiǎn)粉約然后，在每管中各加保險(xiǎn)粉約3mg搖勻。在一分鐘搖勻。在一分鐘內(nèi)再次測定吸收度。兩次測定值之差，即為核黃素內(nèi)再次測定吸收度。兩次測定值之差，即為核黃素的吸收度，以此值為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制的吸收度，以此值為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線。（3）尿樣中核黃素含量測定

8、）尿樣中核黃素含量測定取尿液置于盛有取尿液置于盛有0.1mL冰醋酸的刻度試管內(nèi)至冰醋酸的刻度試管內(nèi)至10mL，搖勻，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，搖勻，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，從從“以酸化蒸餾水作空白以酸化蒸餾水作空白”起，依法測定吸收起，依法測定吸收度，以兩次測定值之差，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出度，以兩次測定值之差，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出尿液中核黃素的含量。尿液中核黃素的含量。以上操作步驟，均須注意避光。以上操作步驟，均須注意避光。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論1.原始記錄 服藥后尿液收集與測定數(shù)據(jù)表表1 空白尿藥測定數(shù)據(jù)空白尿藥測定數(shù)據(jù)空白尿體積（ml）：空白尿中排泄核黃素的總Xu（ g ）量：平均每2小時(shí)排泄核黃素的微克數(shù)：2、繪制尿藥排泄速率二項(xiàng)指