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1、會(huì)計(jì)學(xué)1血清蛋白質(zhì)聚丙烯酰胺凝膠圓盤(pán)電泳血清蛋白質(zhì)聚丙烯酰胺凝膠圓盤(pán)電泳透析透析超速離心超速離心凝膠過(guò)濾層析凝膠過(guò)濾層析離子交換層析離子交換層析COO- COO- COOH + H+ + H+ Pr Pr Pr + OH- + OH- NH2 NH3+ NH3+PHPI PH=PI PH蛋白質(zhì)陰離子甘氨酸陰離子垂直板電泳的優(yōu)點(diǎn):垂直板電泳的優(yōu)點(diǎn):試劑編號(hào)試劑名稱(chēng)配置14*分離膠緩沖液1mol/L鹽酸24.0mL/100mL, Tris 18.2g/100mL (pH 8.9)230%單體交聯(lián)劑丙烯酰胺30.0g與甲叉雙丙烯酰胺0.8g 100mL3催化劑10%過(guò)硫酸銨 (臨用前配置)4加速劑T
2、EMED 1mL加蒸餾水到10mL54*濃縮膠緩沖劑mol/L 鹽酸48mL/100mL, Tris 5.98g/100mL (pH6.7)610*電極緩沖劑甘氨酸28.8g與Tris 6.0g 加蒸餾水至100mL 稀釋(pH 8.3)臨用前十倍稀釋72*上樣緩沖劑溴酚藍(lán)0.05g 20mL甘油,加5號(hào)試劑25mL,定溶至100mL8固定液三氯乙酸12.50g 加蒸餾水至100mL9考馬斯亮藍(lán)R250染色液1.25g考馬斯亮藍(lán)R250,溶于227mL甲醇中加蒸餾水227mL冰醋酸46mL10脫色液甲醇:冰醋酸:水按3:1:6比例配合(凝膠溶液配制表見(jiàn)教材表4-4)取 玻 璃 管 ,一 段 封
3、 口加入分離膠溶液(7cm)加入蒸餾水制備分離膠應(yīng)迅速為了使表面平整,與空氣隔絕靜 置 待 凝 膠聚合濃縮膠制備(1cm)吸取上表面蒸餾水待凝膠與水面的界面重新可辨切勿觸動(dòng)膠面參見(jiàn)分離膠加入分離膠溶液(7cm)制備分離膠應(yīng)迅速加入分離膠溶液(7cm)制備分離膠應(yīng)迅速加入分離膠溶液(7cm)制備分離膠應(yīng)迅速加入分離膠溶液(7cm)制備分離膠應(yīng)迅速加入蒸餾水為了使表面平整,與空氣隔絕取 玻 璃 管 ,一 段 封 口加入分離膠溶液(7cm)制備分離膠應(yīng)迅速取 玻 璃 管 ,一 段 封 口加入分離膠溶液(7cm)制備分離膠應(yīng)迅速取 玻 璃 管 ,一 段 封 口加入蒸餾水為了使表面平整,與空氣隔絕加入分
4、離膠溶液(7cm)制備分離膠應(yīng)迅速取 玻 璃 管 ,一 段 封 口 2 1醋酸纖維素薄膜電泳 醋酸纖維素薄膜電泳是以醋酸纖維薄膜為支持物的電泳。醋酸纖維素是纖維素的醋酸酯,由纖維素的羥基經(jīng)乙?;?。具有色帶清晰,分辨率高;成本低廉,簡(jiǎn)介快速;樣品用量少,靈敏度高,臨床檢驗(yàn)應(yīng)用廣泛等優(yōu)點(diǎn)。醋酸纖維素薄膜電泳試劑編號(hào)試劑名稱(chēng)配置14*分離膠緩沖液1mol/L鹽酸24.0mL/100mL, Tris 18.2g/100mL (pH 8.9)230%單體交聯(lián)劑丙烯酰胺30.0g與甲叉雙丙烯酰胺0.8g 100mL3催化劑10%過(guò)硫酸銨 (臨用前配置)4加速劑TEMED 1mL加蒸餾水到10mL54*
5、濃縮膠緩沖劑mol/L 鹽酸48mL/100mL, Tris 5.98g/100mL (pH6.7)610*電極緩沖劑甘氨酸28.8g與Tris 6.0g 加蒸餾水至100mL 稀釋(pH 8.3)臨用前十倍稀釋72*上樣緩沖劑溴酚藍(lán)0.05g 20mL甘油,加5號(hào)試劑25mL,定溶至100mL8固定液三氯乙酸12.50g 加蒸餾水至100mL9考馬斯亮藍(lán)R250染色液1.25g考馬斯亮藍(lán)R250,溶于227mL甲醇中加蒸餾水227mL冰醋酸46mL10脫色液甲醇:冰醋酸:水按3:1:6比例配合(凝膠溶液配制表見(jiàn)教材表4-4)取 玻 璃 管 ,一 段 封 口加入分離膠溶液(7cm)加入蒸餾水制備分離膠應(yīng)迅速為了使表面平整,與空氣隔絕靜 置 待 凝 膠聚合濃縮膠制備(1cm)吸取上表面蒸餾水待凝膠與水面的界面重新可辨切勿觸動(dòng)膠面參見(jiàn)分離膠加入分離膠溶液(7cm)制備分離膠應(yīng)迅速加入分離膠溶液(7cm)制備分離膠應(yīng)迅速加入分離膠溶液(7cm)制備分離膠應(yīng)迅速加入分離膠溶液(7cm)制備分離膠應(yīng)迅速加入蒸餾水為了使表面平整,與空氣隔絕取 玻 璃 管 ,一 段 封 口加入分離膠溶液(7cm)制備分離膠應(yīng)迅速取 玻 璃 管 ,一 段 封 口
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