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1、堿性磷酸酯酶(AP)劉潔小組成員:徐雪梅 魏飄飄 張艷目錄nAP簡介nAP的催化機理nAP和NP的比較AP的簡介n 堿性磷酸酯酶是一種核酸酶,因為它在pH為8是的活性最大而得名，它只催化磷酸酯的水解反應(yīng)，而對磷酸二酯無催化作用。它的催化活性很高，其中從Escherichia coli中提取出來的AP是目前發(fā)現(xiàn)的催化反應(yīng)加速最快的酶之一AP的簡介 堿性磷酸酯酶是催化從單鏈或雙鏈DNA和RNA分子中除去5-磷酸殘基,即脫磷酸作用: 1.磷酸鹽在細胞內(nèi)不能合成,當磷酸鹽數(shù)量受限的時候,細胞必須通過磷酸酯酶的水解從核酸、磷酸化糖和蛋白質(zhì)中得到有機體所需的磷酸鹽 2.在基因工程中主要是應(yīng)用該酶處理經(jīng)限制

2、性內(nèi)切酶切割后的載體DNA,去除載體DNA兩末端的5-磷酸殘基,以防止載體DNA自我環(huán)化,從而提高其重組效率 3. AP處理后的DNA片段缺少連接酶所要求的5磷酸末端,使得它們不能進行自連接,利用這個特性可以降低克隆時載體DNA的背景。 AP的簡介 由此可見,AP的應(yīng)用很多，有核酸的生物細胞中都含有這種酶，因而AP的來源廣泛,可來源于細菌真菌、藻類、無脊椎動物及脊椎動物。 下面挑選幾種酶做簡要介紹：3GTO3MK0 3Q3Q an novel alkaline phosphatase from bacterium Sphingomonas sp. strain BSAR-1 2x98AP催化機

3、理 雖然不同的酶的結(jié)構(gòu)有差異，但起反應(yīng)活性中心都是一樣的，含有一對Zn（）離子和一個Mg（ ）離子過程AP和NP的比較 兩者都屬于核酸酶，二者的結(jié)構(gòu)相似，活性中心都是兩個Zn（）離子，但是兩者的催化的底物不同原因一 結(jié)構(gòu)原因二 活化能 It has been proposed, for example, that the distance between the metal ions might be used to predict whether a two-metal-ion enzyme catalyzes phosphate monoester or diester hydrolysis.This proposal is based on differences in the transition states of monoester and diester reactions in solution; monoesters proceed through looser transition states than diesters,withmore extensive bond cl

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