folin酚試劑法-2012醫(yī)學(xué)-第六實(shí)驗(yàn)室

1、生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告姓 名： 學(xué) 號(hào)： 專(zhuān)業(yè)年級(jí)： 2012醫(yī)學(xué) 組 別： 第六實(shí)驗(yàn)室生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心一、 實(shí)驗(yàn)室規(guī)則1實(shí)驗(yàn)前應(yīng)認(rèn)真預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)，明確實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵?，?xiě)出預(yù)實(shí)驗(yàn)報(bào)告。2進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必須穿白大衣。嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)課紀(jì)律，不得無(wú)故遲到或早退。不得高聲說(shuō)話。嚴(yán)禁拿實(shí)驗(yàn)器具開(kāi)玩笑。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)禁止吸煙、用餐。3嚴(yán)格按操作規(guī)程進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中自己不能解決或決定的問(wèn)題，切勿盲目處理，應(yīng)及時(shí)請(qǐng)教指導(dǎo)老師。4嚴(yán)格按操作規(guī)程使用儀器，凡不熟悉操作方法的儀器不得隨意動(dòng)用，對(duì)貴重的精密儀器必須先熟知使用方法，才能開(kāi)始使用；儀器發(fā)生故障，應(yīng)立即關(guān)閉電源并報(bào)告老師，不得擅自拆修。5取用試劑時(shí)必須“

2、隨開(kāi)隨蓋”，“蓋隨瓶走”，即用畢立即蓋好放回原處，切忌“張冠李戴”，避免污染。6愛(ài)護(hù)公物，節(jié)約水、電、試劑，遵守?fù)p壞儀器報(bào)告、登記、賠償制度。7注意水、電、試劑的使用安全。使用易燃易爆物品時(shí)應(yīng)遠(yuǎn)離火源。用試管加熱時(shí)，管口不準(zhǔn)對(duì)人。嚴(yán)防強(qiáng)酸強(qiáng)堿及有毒物質(zhì)吸入口內(nèi)或?yàn)R到別人身上。任何時(shí)候不得將強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、高溫、有毒物質(zhì)拋灑在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上。8廢紙及其它固體廢物嚴(yán)禁倒入水槽，應(yīng)倒到垃圾桶內(nèi)。廢棄液體如為強(qiáng)酸強(qiáng)堿，必須事先用水稀釋?zhuān)娇傻谷胨蹆?nèi)，并放水沖走。9以實(shí)事求是的科學(xué)態(tài)度如實(shí)記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果，仔細(xì)分析，做出客觀結(jié)論。實(shí)驗(yàn)失敗，須認(rèn)真查找原因，而不能任意涂改實(shí)驗(yàn)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)完畢，認(rèn)真書(shū)寫(xiě)實(shí)驗(yàn)報(bào)告，按時(shí)上交

3、。10實(shí)驗(yàn)完畢，個(gè)人應(yīng)將試劑、儀器器材擺放整齊，用過(guò)的玻璃器皿應(yīng)刷洗干凈歸置好，方可離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室。值日生則要認(rèn)真負(fù)責(zé)整個(gè)實(shí)驗(yàn)室的清潔和整理，保持實(shí)驗(yàn)整潔衛(wèi)生。離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室前檢查電源、水源和門(mén)窗的安全等，并嚴(yán)格執(zhí)行值日生登記制度。二、實(shí)驗(yàn)報(bào)告的基本要求實(shí)驗(yàn)報(bào)告通過(guò)分析總結(jié)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果和問(wèn)題，加深對(duì)有關(guān)理論和技術(shù)的理解與掌握，提高分析、綜合、概括問(wèn)題的能力，同時(shí)也是學(xué)習(xí)撰寫(xiě)研究論文的過(guò)程。1實(shí)驗(yàn)報(bào)告應(yīng)該在專(zhuān)用的生化實(shí)驗(yàn)報(bào)告本上、按上述格式要求書(shū)寫(xiě)。2實(shí)驗(yàn)報(bào)告的前三部分實(shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)材料（包括實(shí)驗(yàn)樣品、主要試劑、主要儀器與器材）、實(shí)驗(yàn)步驟（包括實(shí)驗(yàn)流程與操作步驟）要求在實(shí)驗(yàn)課前預(yù)習(xí)后撰寫(xiě)，作為實(shí)驗(yàn)預(yù)習(xí)報(bào)告

4、的內(nèi)容。預(yù)習(xí)時(shí)也要考慮并設(shè)計(jì)好相應(yīng)實(shí)驗(yàn)記錄的表格。3每項(xiàng)內(nèi)容的基本要求（1）實(shí)驗(yàn)原理：簡(jiǎn)明扼要地寫(xiě)出實(shí)驗(yàn)的原理，涉及化學(xué)反應(yīng)時(shí)用化學(xué)反應(yīng)方程式表示。（2）實(shí)驗(yàn)材料：應(yīng)包括各種來(lái)源的生物樣品及試劑和主要儀器。說(shuō)明化學(xué)試劑時(shí)要避免使用未被普遍接受的商品名和俗名。試劑要標(biāo)清所用的濃度。（3）實(shí)驗(yàn)步驟：描述要簡(jiǎn)潔，不能照抄實(shí)驗(yàn)講義，可以采用工藝流程圖的方式或自行設(shè)計(jì)的表格來(lái)表示，但對(duì)實(shí)驗(yàn)條件和操作的關(guān)鍵環(huán)節(jié)應(yīng)寫(xiě)清楚，以便他人重復(fù)。（4）實(shí)驗(yàn)記錄：包括主要實(shí)驗(yàn)條件、實(shí)驗(yàn)中觀察到的現(xiàn)象及實(shí)驗(yàn)中的原始數(shù)據(jù)。（5）結(jié)果（定量實(shí)驗(yàn)包括計(jì)算）：應(yīng)把所得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果（如觀察現(xiàn)象）和數(shù)據(jù)進(jìn)行整理、歸納、分析、對(duì)比，盡量

5、用圖表的形式概括實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，如實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組實(shí)驗(yàn)結(jié)果的比較表等(有時(shí)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果還可附以必要的說(shuō)明)。（6）討論：不應(yīng)是實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重述，而是以結(jié)果為基礎(chǔ)的邏輯推論。如對(duì)定性實(shí)驗(yàn)，在分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上應(yīng)有中肯的結(jié)論。還可以包括關(guān)于實(shí)驗(yàn)方法、操作技術(shù)和有關(guān)實(shí)驗(yàn)的一些問(wèn)題，對(duì)實(shí)驗(yàn)異常結(jié)果的分析和評(píng)論，對(duì)于實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的認(rèn)識(shí)、體會(huì)和建議，對(duì)實(shí)驗(yàn)課的改進(jìn)意見(jiàn)等。（7）結(jié)論：一般實(shí)驗(yàn)要有結(jié)論，結(jié)論要簡(jiǎn)單扼要，說(shuō)明本次實(shí)驗(yàn)所獲得的結(jié)果。三、實(shí)驗(yàn)報(bào)告的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)（百分制）1實(shí)驗(yàn)預(yù)習(xí)報(bào)告內(nèi)容（30分） 學(xué)生進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室前應(yīng)預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)，并書(shū)寫(xiě)預(yù)習(xí)報(bào)告。實(shí)驗(yàn)預(yù)習(xí)報(bào)告應(yīng)包括以下三部分： 實(shí)驗(yàn)原理（10分）：要求以自己的語(yǔ)言歸納

6、要點(diǎn)；實(shí)驗(yàn)材料（5分）：包括樣品、試劑及儀器。只列出主要儀器、試劑（常規(guī)材料不列）；實(shí)驗(yàn)方法（15分）：包括流程或路線、操作步驟，要以流程圖、表格式給出要點(diǎn)，簡(jiǎn)明扼要。依據(jù)各部分內(nèi)容是否完整、清楚、簡(jiǎn)明等，分以下三個(gè)等級(jí)給分。優(yōu)秀合格不合格30252418分170分優(yōu)秀：項(xiàng)目完整，能反映實(shí)驗(yàn)者的加工、整理、提煉。 合格：較完整，有一定整理，但不夠精煉。不合格：不完整、缺項(xiàng)，大段文字，完全照抄教材，記流水賬。實(shí)驗(yàn)預(yù)習(xí)報(bào)告不合格者，不允許進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。該實(shí)驗(yàn)應(yīng)重新預(yù)約，待實(shí)驗(yàn)室安排時(shí)間后方可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。2實(shí)驗(yàn)記錄內(nèi)容（20分）實(shí)驗(yàn)記錄是實(shí)驗(yàn)教學(xué)、科學(xué)研究的重要環(huán)節(jié)之一，必須培養(yǎng)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)作風(fēng)。實(shí)驗(yàn)記錄的

7、主要內(nèi)容包括以下三方面：主要實(shí)驗(yàn)條件（如材料的來(lái)源、質(zhì)量；試劑的規(guī)格、用量、濃度；實(shí)驗(yàn)時(shí)間、操作要點(diǎn)中的技巧、失誤等，以便總結(jié)實(shí)驗(yàn)時(shí)進(jìn)行核對(duì)和作為查找成敗原因的參考依據(jù)）；實(shí)驗(yàn)中觀察到的現(xiàn)象（如加入試劑后溶液顏色的變化）；原始實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表格（注意三線表格式），準(zhǔn)確記錄實(shí)驗(yàn)中測(cè)得的原始數(shù)據(jù)。記錄測(cè)量值時(shí)，要根據(jù)儀器的精確度準(zhǔn)確記錄有效數(shù)字（如吸光值為0.050，不應(yīng)寫(xiě)成0.05），注意有效數(shù)字的位數(shù)。實(shí)驗(yàn)記錄應(yīng)在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中書(shū)寫(xiě)；應(yīng)該用鋼筆或者圓珠筆記錄，不能用鉛筆。記錄不可擦抹和涂改，寫(xiě)錯(cuò)時(shí)可以準(zhǔn)確劃去重記。記錄數(shù)據(jù)時(shí)請(qǐng)教師審核并簽名。實(shí)驗(yàn)記錄分以下三個(gè)等級(jí)給分。優(yōu)秀合格不合格201

8、71613分120分優(yōu)秀：如實(shí)詳細(xì)地記錄了實(shí)驗(yàn)條件、實(shí)驗(yàn)中觀察到的現(xiàn)象、結(jié)果及實(shí)驗(yàn)中的原始數(shù)據(jù)（如三次測(cè)定的吸光度值）等；實(shí)驗(yàn)記錄用鋼筆或者圓珠筆記錄，沒(méi)有抹擦和涂改跡象。書(shū)寫(xiě)準(zhǔn)確，表格規(guī)范（三線表）。有教師的簽字審核。合格：記錄了主要實(shí)驗(yàn)條件，但不詳細(xì)、凌亂；實(shí)驗(yàn)中觀察到的現(xiàn)象不細(xì)致；原始數(shù)據(jù)無(wú)涂改跡象，但不規(guī)范。有教師的簽字審核。不合格：記錄不完整，有遺漏；原始數(shù)據(jù)有抹擦和涂改跡象、捏造數(shù)據(jù)（以0分計(jì)）；圖、表格形式錯(cuò)誤；用鉛筆記錄原始數(shù)據(jù)；無(wú)教師的簽字審核。若記錄的結(jié)果有懷疑、遺漏、丟失，必須重做實(shí)驗(yàn)，培養(yǎng)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)作風(fēng)。3結(jié)果與討論（45分）（1）數(shù)據(jù)處理（5分）對(duì)實(shí)驗(yàn)中所測(cè)得的一系列

9、數(shù)值，要選擇合適的處理方法進(jìn)行整理和分析。數(shù)據(jù)處理時(shí)，要根據(jù)計(jì)算公式正確書(shū)寫(xiě)中間計(jì)算過(guò)程或推導(dǎo)過(guò)程及結(jié)果，得出最終實(shí)驗(yàn)結(jié)果。要注意有效數(shù)字的位數(shù)、單位（國(guó)際單位制）。經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)處理的數(shù)據(jù)要以X±SD表示?？煞殖梢韵氯齻€(gè)等級(jí)給分。優(yōu)秀合格不合格5分4分30分優(yōu)秀：處理方法合理，中間過(guò)程清楚，數(shù)據(jù)格式單位規(guī)范。合格：處理方法較合理，有中間計(jì)算過(guò)程；數(shù)據(jù)格式單位較規(guī)范。不合格：處理方法不當(dāng)；無(wú)中間過(guò)程；有效數(shù)字的位數(shù)、單位不規(guī)范。（2）結(jié)果（20分）實(shí)驗(yàn)結(jié)果部分應(yīng)把所觀察到的現(xiàn)象和處理的最終數(shù)據(jù)進(jìn)行歸納、分析、比對(duì)，以列表法或作圖法來(lái)表示。同時(shí)對(duì)結(jié)果還可附以必要的說(shuō)明。要注意圖表的規(guī)范：表格

10、要有編號(hào)、標(biāo)題；表格中數(shù)據(jù)要有單位（通常列在每一列頂端的第一行或每一行左端的第一列）。圖也要有編號(hào)、標(biāo)題，標(biāo)注在圖的下方；直角坐標(biāo)圖的縱軸和橫軸要標(biāo)出方向、名稱(chēng)、單位和長(zhǎng)度單位；電泳圖譜和層析圖譜等要標(biāo)明正、負(fù)極方向及分離出的區(qū)帶、色帶或色斑的組分或成分。電泳結(jié)果還要標(biāo)記泳道，并在圖題下給出泳道的注釋?zhuān)灰獦?biāo)出分子量標(biāo)準(zhǔn)的各條帶的大小。并且注意需要結(jié)合圖表對(duì)結(jié)果進(jìn)行較詳細(xì)的解釋說(shuō)明?？煞殖梢韵氯齻€(gè)等級(jí)給分。優(yōu)秀合格不合格20171613分120分優(yōu)秀：實(shí)驗(yàn)結(jié)果有歸納、 解釋說(shuō)明，結(jié)果準(zhǔn)確，格式規(guī)范。合格：堆砌實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象、數(shù)據(jù)，解釋說(shuō)明少。不合格：最終實(shí)驗(yàn)結(jié)果錯(cuò)誤且無(wú)解釋說(shuō)明，圖表、數(shù)字不規(guī)范。（3

11、）討論（20分）討論應(yīng)圍繞實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行，不是實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重述，而是以實(shí)驗(yàn)結(jié)果為基礎(chǔ)的邏輯推論，基本內(nèi)容包括：用已有的專(zhuān)業(yè)知識(shí)理論對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行討論，從理論上對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的各種資料、數(shù)據(jù)、現(xiàn)象等進(jìn)行綜合分析、解釋?zhuān)f(shuō)明實(shí)驗(yàn)結(jié)果，重點(diǎn)闡述實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的一般規(guī)律與特殊性規(guī)律之間的關(guān)系；實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示了哪些新問(wèn)題，指出結(jié)果與結(jié)論的理論意義及其大??；對(duì)實(shí)踐的指導(dǎo)與應(yīng)用價(jià)值；實(shí)驗(yàn)中遇到的問(wèn)題、差錯(cuò)和教訓(xùn)，與預(yù)想不一致的原因，有何待解決的方法，提出在今后的實(shí)驗(yàn)中需要注意和改進(jìn)的地方；實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖欠襁_(dá)到。同時(shí)能結(jié)合查閱的其他文獻(xiàn)等資料進(jìn)行討論，有獨(dú)到的見(jiàn)解。在實(shí)驗(yàn)結(jié)果和理論分析的基礎(chǔ)上，經(jīng)過(guò)推理，歸納規(guī)律得出結(jié)論。結(jié)論

12、要嚴(yán)謹(jǐn)、精煉，表達(dá)要準(zhǔn)確，與實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮魬?yīng)。也分三個(gè)等級(jí)給分。優(yōu)秀合格不合格20171613分120分優(yōu)秀：分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果的問(wèn)題與經(jīng)驗(yàn)；分析實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的優(yōu)劣；能提出實(shí)驗(yàn)技術(shù)、方法的改進(jìn)意見(jiàn)；能結(jié)合自己查閱的其他資料來(lái)討論，有自己獨(dú)到的見(jiàn)解；有結(jié)論。合格：僅針對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行討論，有一定自己的見(jiàn)解。不合格：將討論寫(xiě)成注意事項(xiàng)分析或回答思考題等，與實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)關(guān)。4格式與版面（5分）按照實(shí)驗(yàn)報(bào)告的書(shū)寫(xiě)格式、版面是否整潔、工整，分三個(gè)等級(jí)給分。優(yōu)秀合格不合格5分4分30分優(yōu)秀：實(shí)驗(yàn)報(bào)告字體工整，版面整潔。合格：實(shí)驗(yàn)報(bào)告字體較工整，版面較整潔。不合格：實(shí)驗(yàn)報(bào)告字體潦草，版面凌亂。5. 加分（510分）：以全英文

13、書(shū)寫(xiě)實(shí)驗(yàn)報(bào)告視情況加510分。Introduction to Biochemistry ExperimentBiochemistry experiment is a preclinical curriculum of omni-specialties in biomedicine and an experimental curriculum for going with biochemistry teaching. Its task is to help students to understand and master the basic technical principles and m

14、ethods in biochemistry, to possess the abilities of analyzing problems and working out solutions independently. By learning this curriculum, the students should understand the basic experimental principles of spectrophotometry，chromatography, electrophoresis and centrifuge, et al.，master the basic t

15、echnical skills commonly used with these principles and possess the abilities to apply the skills systematically and to optimize the experiment conditions. The goal of biochemistry experiment is to make the students strengthen their grasp of the biochemistry theories and to integrate what they have

16、learned with scientific research and clinical application.There are 9 experiments that represent most important areas of biochemistry including characterization of proteins and nucleic acid by electrophoresis and spectroscopic or chromatographic analysis. These experiments are essential for a typica

17、l one-semester course and are to be revised and updated when necessary. New experiments will be added to this list in the future to cover more topics of biochemistry and to reflect the many advances in biochemistry. Biochemistry Laboratory Rules1Pre-Laboratory Preparation All students must prepare B

18、EFORE ARRIVING IN THE LABORATORY. The experiments are designed so that they can be carried out with proper advance planning within the four-hour laboratory periods. It is expected that students should have a fundamental understanding of the theory and practices pertaining to the experiment before en

19、tering the laboratory to conduct these experiments. Biochemical experiments often employ toxic chemicals. For the health and safety of all students, the experimental protocols must be studied and the days activities should be planned in advance. If it becomes obvious that a student is ill-prepared,

20、he or she will not be permitted to continue the experiment. 2Safety Precautions in the Biochemistry LaboratoryAll INJURIES, no matter how minor, should be reported to the instructor IMMEDIATELY. If you have any questions regarding the safe handling of any biochemical, consult your instructor. 3Stric

21、tly follow the experimental procedures. Turn to instructors immediately for help once the laboratory instruments dont work. DONT try to fix the breakdown by yourself. Proper compensation for loss because of your own fault will be demanded.4Disposal of SolutionsIn most cases the solutions used during

22、 the laboratory can be disposed of as directed by laboratory personnel at the end of the period. Any volatile organic solvents should be placed in the hood as directed. Laboratory personnel will then dispose of these solvents.5Solid trashes including waste papers are prohibited to discard into the s

23、ink. 6All the glassware should be cleaned immediately after use. And all the reagent bottles and instruments should be placed neatly after use. 7An experiment report should be submitted to the Professor and/or TAs in time. Laboratory Report1Although students will work in pairs for all experiments, e

24、ach student must turn in an individual laboratory report, written by himself or herself. These reports should be clearly written in ink, typed, or printed and be clear and legible. If mistakes are made, neatly cross them out and enter the corrections nearby. Reports should be written in the third pe

25、rson (e.g., do not use “I” or “we”). STAPLE a Title Page to the top of the report and STAPLE the accompanying graphs, tables, and laboratory notebook sheets to the back. If the report is not clearly presented, the instructor may return the report without grading it. 2Each laboratory report should co

26、nsist of: a. Title Page A title page for each experiment is required and should state the title of the experiment, the name of the student, the dates of the laboratory periods covered, the names of the laboratory partners, and the date that the laboratory report is due. b. ObjectivesStatement of the

27、 point of the experiment - in no more than two sentences. c. Procedures DO NOT recapitulate the laboratory protocol. Write in you OWN words. A clear flowchart of the procedures is recommended. d. Results This section should summarize your observations presented in the form of graphs, calculations, t

28、ables, etc. e. Discussion Evaluate your data. Explain what you observed and also why you think the data were as observed. Do not restate procedures! List possible sites of error. Whenever possible demonstrate your understanding of the theory behind the experiment. Support your results (e.g.: “Using

29、the linear portion of the Absorbance vs. Concentration graph to calculate the slope, it was determined that.”) (Limited to only one page per experiment for experiments 1 - 6 and four pages for experiment 7-9). 3If any laboratory report is not completed and turned in by the end of the quarter, the st

30、udent maybe receive an Incomplete for the course at the discretion of the instructors; alternatively a “zero” for the missing laboratory report will be recorded and the final grade determined accordingly.實(shí)驗(yàn)名稱(chēng)(Title of Experimetn)Folin-酚試劑法測(cè)定蛋白質(zhì)含量實(shí)驗(yàn)日期(Date of Experiment)2013-10-18實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)(Lab No.)第六實(shí)驗(yàn)室合作

31、者(Partner)指導(dǎo)老師(Instructor)總分(Total Score)教師簽名(Signature)批改日期(Date)【實(shí)驗(yàn)報(bào)告第一部分（預(yù)習(xí)報(bào)告內(nèi)容）：實(shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)材料（包括實(shí)驗(yàn)樣品、主要試劑、主要儀器與器材）、實(shí)驗(yàn)步驟（包括實(shí)驗(yàn)流程、操作步驟和注意事項(xiàng)）；評(píng)分（滿分30分）：XX】1、 實(shí)驗(yàn)原理：（1）蛋白質(zhì)分子含有大量彼此相連的肽鍵（-CO-NH-），同樣能在堿性條件下與Cu2+發(fā)生雙縮脲反應(yīng)，生成的紫紅色絡(luò)合物（蛋白質(zhì)- Cu2+復(fù)合物）。且在540nm處的吸光度與蛋白質(zhì)的含量在10120g/L范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。 （2）Folin-酚試劑在堿性條件下極不穩(wěn)定，其磷

32、鉬酸鹽-磷鎢酸鹽易被酚類(lèi)化合物還原而呈藍(lán)色反應(yīng)(鉬藍(lán)和鎢藍(lán)的混合物)。由于蛋白質(zhì)中含有帶酚羥基的酪氨酸( Tyr ) ，故有此顯色反應(yīng)。 即蛋白質(zhì)- Cu2+復(fù)合物中所含的酪氨酸殘基還原酚試劑中的磷鉬酸和磷鎢酸，生成藍(lán)色的化合物。 （3）在一定濃度范圍內(nèi)，藍(lán)色的深淺度與蛋白質(zhì)濃度呈線性關(guān)系，故與同樣處理的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液比色即可求出蛋白質(zhì)的含量。即根據(jù)預(yù)先繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線求出未知樣品中蛋白質(zhì)的含量。2、實(shí)驗(yàn)材料:樣品 健康人血清 （正常人血清蛋白質(zhì)含量：6080 g/L）試劑 1.牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)液（200g/ml） 2.堿性硫酸銅溶液（當(dāng)日有效） 3.Folin-酚試劑儀器與器材 1.V-1100

33、分光光度計(jì) 2.恒溫水浴箱 3.試管6支、試管架 4.加樣槍、加樣槍架3、 實(shí)驗(yàn)步驟：Folin-酚試劑法測(cè)定蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)流程如表所示步驟操作（1）反應(yīng)體系設(shè)置取6支試管，做好標(biāo)記，按下表加入試劑，混勻試劑（ml） 空白管 標(biāo)準(zhǔn)管 樣品管 1 2 3 4 5 6牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)液 - 0.2 0.4 0.6 0.8 -樣品液 - - - - - 0.5蒸餾水 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0.5（2）雙縮尿反應(yīng)向各管內(nèi)分別加入堿性硫酸銅溶液2ml，混勻，室溫放置10min(3) Folin-酚顯色反應(yīng)再向各管內(nèi)加入Folin-酚試劑0.20ml, 2s內(nèi)迅速混勻！ 40水浴放置10mi

34、n后，冷卻至室溫（4）比色測(cè)定以500nm波長(zhǎng)比色，用1號(hào)管作空白，讀取各管吸光度4、注意事項(xiàng)：（1）Folin-酚試劑在酸性條件下較穩(wěn)定，而堿性硫酸銅試劑是在堿性條件下與蛋白質(zhì)作用生成堿性的銅-蛋白質(zhì)溶液。 故當(dāng)Folin-酚試劑加到堿性的銅-蛋白質(zhì)溶液中后，必須立即混勻（加一管混勻一管），使還原反應(yīng)發(fā)生在磷鉬酸-磷鎢酸試劑被破壞之前 (2) 因Lowry反應(yīng)的顯色隨時(shí)間不斷加深，因此各項(xiàng)操作必須精確控制時(shí)間。即第1支試管加入2.0mL堿性硫酸銅試劑后，開(kāi)始計(jì)時(shí)，1分鐘后，第2支試管加入2.0mL堿性硫酸銅試劑，2分鐘后加第3支試管，以此類(lèi)推。全部試管加完堿性硫酸銅試劑后若已到10分鐘，則第

35、1支試管可立即加入0.20mL Folin-酚試劑，1分鐘后第2支試管加入0.20mL Folin-酚試劑，2分鐘后加第3支試管，以此類(lèi)推。水浴10min，冷卻后，每一分鐘測(cè)一管。 （3）有關(guān)干擾物質(zhì)：凡是能干擾雙縮脲反應(yīng)的基團(tuán)以及在性質(zhì)上是氨基酸或肽的緩沖劑。此外，所測(cè)的蛋白質(zhì)樣品中，若含有酚類(lèi)及檸檬酸，均對(duì)此反應(yīng)有干擾作用。若樣品酸度較高，也許提高碳酸鈉-氫氧化鈉濃度1-2倍，這樣既可糾正顯色后色淺的弊病。 (4) 分光光度計(jì)使用的注意事項(xiàng)：比色杯應(yīng)相匹配性，不得隨意挪用；盛液達(dá)到比色杯的3/4即可，不能太滿，外壁如有液體，只能用濾紙蘸去水分再用鏡面紙搽拭干凈；測(cè)畢，比色液一般應(yīng)倒回原試管

36、中，計(jì)算無(wú)誤后方可倒掉?！緦?shí)驗(yàn)報(bào)告第二部分（實(shí)驗(yàn)記錄）：主要實(shí)驗(yàn)條件（如材料的來(lái)源、質(zhì)量；試劑的規(guī)格、用量、濃度；實(shí)驗(yàn)時(shí)間、操作要點(diǎn)中的技巧、失誤等，以便總結(jié)實(shí)驗(yàn)時(shí)進(jìn)行核對(duì)和作為查找成敗原因的參考依據(jù)）；實(shí)驗(yàn)中觀察到的現(xiàn)象（如加入試劑后溶液顏色的變化）；原始實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。評(píng)分（滿分20分）：XX】1、 主要實(shí)驗(yàn)條件：（1）牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)液：稱(chēng)取牛血清白蛋白粉末50mg，用0.1mol/L NaOH溶液溶解，再加蒸餾水 （2）硫酸銅溶液：溶于100ml 0.1mol/L NaOH中 0.5g溶于100ml 35mmol/L酒石酸鉀鈉中 使用前將兩種物質(zhì)按50:1混合即成。使用時(shí)需新鮮配制 （3）F

37、olin-酚試劑：溶液呈黃色（如帶綠色則不能用），保存于棕色瓶中置冷暗處備用。如配置時(shí)間較長(zhǎng)，試劑轉(zhuǎn)呈綠色，可再加液體溴數(shù)滴，煮沸15分鐘。若能恢復(fù)原有顏色則可繼續(xù)使用。 (4)操作技巧：加試劑最好用加樣槍?zhuān)奖憧旖?，用滴定管操作較反復(fù)，也有讀數(shù)誤差。 （5）操作失誤：在第一次實(shí)驗(yàn)時(shí)，管未做標(biāo)記，加錯(cuò)了試劑，后又重新標(biāo)記，重新開(kāi)始。2、實(shí)驗(yàn)中觀察到的現(xiàn)象： Folin酚試劑中的磷鉬酸鹽磷鎢酸鹽被蛋白質(zhì)中的酪氨酸和苯丙氨酸殘基還原，產(chǎn)生藍(lán)色（鉬蘭和鎢蘭的混合物）。在一定的條件下，藍(lán)色深度與蛋白的量成正比。3、原始實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)： 500nm波長(zhǎng)吸光度值記錄測(cè)定次數(shù) 500nm處各管吸光度值

38、2 3 4 5 61 0.083 0.158 0.237 0.304 0.2092 0.083 0.159 0.234 0.304 0.2093 0.083 0.160 0.234 0.304 0.209各管平均值 0.083 0.159 0.235 0.304 0.209【實(shí)驗(yàn)報(bào)告第三部分（結(jié)果與討論）：結(jié)果（定量實(shí)驗(yàn)包括計(jì)算）：應(yīng)把所得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果（如觀察現(xiàn)象）和數(shù)據(jù)進(jìn)行整理、歸納、分析、對(duì)比，盡量用圖表的形式概括實(shí)驗(yàn)的結(jié)果；討論：不應(yīng)是實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重述，而是以結(jié)果為基礎(chǔ)的邏輯推論。結(jié)論：簡(jiǎn)單扼要，說(shuō)明本次實(shí)驗(yàn)所獲得的結(jié)果。（包括思考題）。評(píng)分（滿分45分）：XX】1、 結(jié)果：（1）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 從圖中我們可以看到線性方程: y=0.0019x，將樣品溶液的吸光度（即y值）代入方程，可得出樣品濃度（即x值）.計(jì)算結(jié)果： 樣品吸光度為A=0.209，代入方程可得X=110ug/ml 血清蛋白濃度(g/ml)=樣品蛋白質(zhì)濃度×2×300=66000ug/ml=66g/L2、 討論： （1）Folin-