第六章 食品中常檢病原微生物的檢驗(yàn)技術(shù)

1、第六章食品中常檢病原微生物的檢驗(yàn)技術(shù)第六章食品中常檢病原微生物的檢驗(yàn)技術(shù) 病原微生物是嚴(yán)重危害人體健康的一種指標(biāo)菌。病原微生物檢驗(yàn)它是衡量食品衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo)之一，也是判定被檢食品能否食用的科學(xué)依據(jù)之一。通過病原微生物的檢驗(yàn)，可以判斷食品加工環(huán)境及食品衛(wèi)生環(huán)境，能夠?qū)κ称繁患?xì)菌污染的程度作出正確的評價(jià)，為各項(xiàng)衛(wèi)生管理工作提供科學(xué)依據(jù)，提供傳染病和人類，動物和食物中毒的防治措施，有效地防止或者減少食物中毒人畜共患病的發(fā)生，保障人民的身體健康；同時(shí)，它對提高產(chǎn)品質(zhì)量，避免經(jīng)濟(jì)損失，保證出口等方面具有政治上和經(jīng)濟(jì)上的重要意義。食品中不允許有任何病原微生物，一旦檢出，則該食品衛(wèi)生質(zhì)量不合格。目前食品

2、中經(jīng)常檢驗(yàn)的致病菌有沙門氏菌、副溶血性弧菌、致病性大腸桿菌、金黃色葡萄球菌及志賀氏菌等。通過本章學(xué)習(xí)要達(dá)到以下目的： 1、了解食品的質(zhì)量與常檢病原微生物檢驗(yàn)的意義。 2、掌握常檢病原微生物的生物學(xué)特性。 3、掌握常檢病原微生物的生化試驗(yàn)的操作方法和結(jié)果的判斷。 4、掌握食品中常檢病原微生物檢驗(yàn)的方法。第一節(jié)沙門菌檢驗(yàn) 學(xué)習(xí)目的與要求 1. 掌握志賀菌的生物學(xué)特性。 2.掌握沙門菌的致病性。 3.掌握沙門菌的檢驗(yàn)程序。 一、沙門氏菌的生物學(xué)特性一、沙門氏菌的生物學(xué)特性 （一）培養(yǎng)特性：（一）培養(yǎng)特性：需氧或兼性厭氧；普通營養(yǎng)瓊需氧或兼性厭氧；普通營養(yǎng)瓊脂上生長良好，菌落中等大小，無色半透明、圓脂

3、上生長良好，菌落中等大小，無色半透明、圓形、光滑、濕潤。形、光滑、濕潤。3 （二）生化特性：（二）生化特性： 大部分發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖、甘露醇和山梨酸大部分發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖、甘露醇和山梨酸產(chǎn)氣；產(chǎn)氣； 一般不發(fā)酵乳糖和蔗糖，不發(fā)酵側(cè)金盞花醇；一般不發(fā)酵乳糖和蔗糖，不發(fā)酵側(cè)金盞花醇； 一般不產(chǎn)吲哚，一般不產(chǎn)吲哚，V-PV-P反應(yīng)陰性；反應(yīng)陰性； 不分解尿素，苯丙氨酸不脫氨；不分解尿素，苯丙氨酸不脫氨； 三糖鐵瓊脂斜面常產(chǎn)生三糖鐵瓊脂斜面常產(chǎn)生H H2 2S S。45檢樣25g樣品+225mLBPW1mL+SC10mL1mL+TTB10mLBSXLD(HE、顯色培養(yǎng)基)挑取可疑菌落非沙門氏菌生化

4、鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)+H2S+靛基質(zhì)-尿素-KCN-賴氨酸+H2S+靛基質(zhì)+尿素-KCN-賴氨酸+H2S+靛基質(zhì)-尿素-KCN-賴氨酸+/-反應(yīng)結(jié)果與左側(cè)描述不符甘露醇+、山梨醇+ONPG-沙門氏菌，血清學(xué)試驗(yàn)報(bào)告TSI，賴氨酸，靛基質(zhì)，尿素（pH7.2），KCN421,18h24h361,40h48h361,18h24h361,18h24h361,8h18h前增菌：食品樣品在含有營養(yǎng)的非選擇性培養(yǎng)基中增菌，前增菌：食品樣品在含有營養(yǎng)的非選擇性培養(yǎng)基中增菌，使受損傷的沙門氏菌細(xì)胞恢復(fù)到穩(wěn)定的生理狀態(tài)。加工使受損傷的沙門氏菌細(xì)胞恢復(fù)到穩(wěn)定的生理狀態(tài)。加工食品均應(yīng)經(jīng)過前增菌。食品均

5、應(yīng)經(jīng)過前增菌。（選擇性）增菌：此培養(yǎng)基允許沙門氏菌持續(xù)增菌，同（選擇性）增菌：此培養(yǎng)基允許沙門氏菌持續(xù)增菌，同時(shí)阻止大多數(shù)其他細(xì)菌的增殖。未經(jīng)加工的食品不必經(jīng)時(shí)阻止大多數(shù)其他細(xì)菌的增殖。未經(jīng)加工的食品不必經(jīng)過前增菌而直接增菌。過前增菌而直接增菌。選擇性平板分離：采用固體選擇培養(yǎng)基，抑制非沙門氏選擇性平板分離：采用固體選擇培養(yǎng)基，抑制非沙門氏菌的生長，提供肉眼可見的疑似沙門氏菌純菌落的識別。菌的生長，提供肉眼可見的疑似沙門氏菌純菌落的識別。生物化學(xué)篩選：排除大多數(shù)非沙門氏菌，也提供了沙門生物化學(xué)篩選：排除大多數(shù)非沙門氏菌，也提供了沙門氏菌培養(yǎng)物菌屬的初步鑒定。氏菌培養(yǎng)物菌屬的初步鑒定。血清學(xué)技術(shù)

6、鑒定培養(yǎng)物菌種。血清學(xué)技術(shù)鑒定培養(yǎng)物菌種。 注意事項(xiàng) 1、亞硫酸鉍瓊脂BS，使用注意事項(xiàng)：不可過度加熱；使用前一天配制，且在48h內(nèi)使用；傾注平板前需搖勻；不能反復(fù)溶解；平板需避光保存于室溫環(huán)境。 2、一株待檢菌需同時(shí)接種氰化鉀試驗(yàn)管和氰化鉀對照管各一支。兩管均需滴加無菌液體石蠟覆蓋液面，因?yàn)榍杌浺追纸?，產(chǎn)生氫氰酸，易揮發(fā)，影響試劑濃度。 思考題 1、進(jìn)行沙門氏菌檢驗(yàn)時(shí)為什么要進(jìn)行前增菌和增菌？ 2、沙門氏菌在三糖鐵培養(yǎng)基上的反應(yīng)結(jié)果如何？為什么？第二節(jié)金黃色葡萄球菌檢測 學(xué)習(xí)目的與要求 1. 掌握金黃色葡萄球菌的生物學(xué)特性。 2.掌握金黃色葡萄球菌的致病性。 3.掌握金黃色葡萄球菌的檢驗(yàn)程

7、序。一、生物學(xué)特性（一）培養(yǎng)特性 金黃色葡萄球菌營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長良好，需氧或兼性厭氧，最適生長溫度37，最適生長pH7.4，干燥環(huán)境下可存活數(shù)周。平板上菌落厚、有光澤、圓形凸起，直徑0.51.0m。血平板菌落周圍形成透明的溶血環(huán)。金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性，可在1015%NaCl肉湯中生長。 1、分解葡萄糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣； 2、甲基紅反應(yīng)陽性，V-P反應(yīng)弱陽性； 3、許多菌株可分解精氨酸，水解尿素，還原硝酸鹽，液化明膠。（二）生化特性（三）致病性 金黃色葡萄球菌為條件致病菌，菌株致病力的強(qiáng)弱金黃色葡萄球菌為條件致病菌，菌株致病力的強(qiáng)弱主要取決于其產(chǎn)生的毒素和

8、侵襲性酶毒素和侵襲性酶：a.溶血素溶血素：外毒素，分、四種，能損傷血小板，破壞溶酶體，引起肌體局部缺血和壞死；b.殺白細(xì)胞素殺白細(xì)胞素：可破壞人的白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞；c.血漿凝固酶血漿凝固酶：當(dāng)金黃色葡萄球菌侵入人體時(shí)，該酶使血液或血漿中的纖維蛋白沉積于菌體表面或凝固，阻礙吞噬細(xì)胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化與此酶有關(guān)；d.脫氧核糖核酸酶脫氧核糖核酸酶：金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的脫氧核糖核酸酶能耐受高溫，可用來作為依據(jù)鑒定金黃色葡萄球菌；e.腸毒素腸毒素：金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生數(shù)種引起急性胃腸炎的蛋白質(zhì)性腸毒素，分為A、B、C、D、E五種。 金黃色葡萄球菌是人類化膿感染中最常見的病原菌，臨床表

9、現(xiàn)多種多樣，可引起局部化膿感染，也可引起肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。 葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌腸毒素所引起的疾病，可引發(fā)不同程度的急性胃腸炎癥狀，惡心、嘔吐最為突出而且普遍，腹痛、腹瀉次之。當(dāng)金黃色葡萄球菌污染了含淀粉及水分較多的食品，如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在溫度條件適宜時(shí)，經(jīng)8-10小時(shí)即可相當(dāng)數(shù)量的腸毒素。14血平板18h24hBairdparker平板18h24h或者45h48h25g（ml)樣品+225mL 75%氯化鈉肉湯或10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯，均質(zhì)Bairdparker平板，血平板涂片染色BHI肉湯和營養(yǎng)瓊脂小斜面血漿凝固酶試驗(yàn)36118

10、h24h361觀察溶血報(bào) 告 注意事項(xiàng) 1、平板分離：在Baird-Parker平板上，菌落為圓形，直徑23mm，顏色灰或黑色，周圍有一渾濁帶，在其外層有一透明圈。 2、革蘭氏染色及鏡檢：金黃色葡萄球菌，革蘭氏陽性，顯微鏡下呈葡萄狀排列無芽胞，直徑0.51m。 思考題1、金黃色葡萄球菌在血平板或B-P平板上的菌落特征如何？為什么？2、食品中能否允許有個別金黃色葡萄球菌存在？為什么？3、鑒定致病性金黃色葡萄球菌的重要指標(biāo)是什么？第三節(jié)志賀菌檢驗(yàn)第三節(jié)志賀菌檢驗(yàn) 學(xué)習(xí)目的與要求 1. 掌握志賀菌的主要生物學(xué)特性、 檢驗(yàn)程序和檢驗(yàn)方法。 2. 了解志賀菌的致病性。 3. 了解其他腸道桿菌。一、生物學(xué)

11、特性一、生物學(xué)特性（一）培養(yǎng)特性： 需氧或兼性厭氧菌，最適溫度37，pH6.47.8，在普通瓊脂培養(yǎng)基和SS平板上，形成圓形、微凸、光滑濕潤、無色半透明、邊緣整齊、中等大小的菌落，半透明的光滑型菌落。宋氏致賀菌菌落較大，較不透明，粗燥而扁平，在SS平板上可遲緩發(fā)酵乳糖，菌落呈玫瑰紅色。在肉湯中呈均勻混濁生長，無菌膜。 （二）生化特性 1、分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。除宋氏致賀菌，均不發(fā)酵乳糖； 2、VP試驗(yàn)陰性，不分解尿素，不形成硫化氫，不能利用檸檬酸鹽作為碳源； 3、不發(fā)酵側(cè)金盞花醇、肌醇、水楊苷； 4、甲基紅陽性、靛基質(zhì)不定； 5、痢疾致賀菌不分解甘露醇，其它（福氏、鮑氏、宋內(nèi)氏）均可分解甘露

12、醇。（三）、致病性致病性 致病物質(zhì)：致病物質(zhì)： 1. 1. 侵襲力：菌毛可粘附回腸和結(jié)腸粘膜上皮侵襲力：菌毛可粘附回腸和結(jié)腸粘膜上皮 細(xì)胞，細(xì)胞，并侵入細(xì)胞內(nèi)生長繁殖，在粘膜固有層形成感染灶引起炎并侵入細(xì)胞內(nèi)生長繁殖，在粘膜固有層形成感染灶引起炎癥反應(yīng)。癥反應(yīng)。 2. 2. 內(nèi)毒素：內(nèi)毒素： 作用于腸粘膜使其通透性增高，促作用于腸粘膜使其通透性增高，促進(jìn)內(nèi)毒素吸收，形成內(nèi)毒素血癥（高熱、意識障礙、中毒進(jìn)內(nèi)毒素吸收，形成內(nèi)毒素血癥（高熱、意識障礙、中毒性休克）；性休克）；直接破壞腸粘膜。形成炎癥潰瘍、出血，呈直接破壞腸粘膜。形成炎癥潰瘍、出血，呈典型的膿血粘液便；典型的膿血粘液便；還可以作用于腸

13、壁植物神經(jīng)，使其還可以作用于腸壁植物神經(jīng)，使其腸蠕動失調(diào)和痙攣（直腸括約肌最明顯）出現(xiàn)腹痛、里急腸蠕動失調(diào)和痙攣（直腸括約肌最明顯）出現(xiàn)腹痛、里急后重的癥狀。后重的癥狀。 3. 外毒素外毒素：此與霍亂弧菌、ETEC產(chǎn)生的毒素相同。 其作用有三：腸毒素性：引起早期的水樣腹瀉；細(xì)胞毒性，對Vero細(xì)胞、Hela細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、腎小管內(nèi)皮細(xì)胞、人肝細(xì)胞均有毒性；神經(jīng)毒性或致死毒性：注入家兔可使其麻痹、死亡。 二、檢驗(yàn)程序檢樣25g+GN 225mLHE瓊脂或SS麥康凱或EMB挑取可疑菌落TSI，葡萄糖半固體TSI底層產(chǎn)酸，斜面產(chǎn)堿，H2S-，不產(chǎn)氣，無動力血清學(xué)分型生化分群試驗(yàn)志賀氏菌屬分群及分

14、型結(jié)果進(jìn)一步的生化試驗(yàn)葡萄糖銨試驗(yàn)、西蒙氏檸檬酸鹽、賴氨酸、尿素、氰化鉀（KCN）、水楊苷和七葉苷葡萄糖銨+或任何其他陽性結(jié)果非志賀菌非如左述的各種結(jié)果非志賀菌報(bào)告361,6h8h361,18h24h1、志賀菌屬分幾個群，各群有多少個血清型？2、志賀菌屬在三糖鐵尿素半固體瓊脂斜面上的生化反應(yīng)是什么？3、志賀菌四種多價(jià)血清指哪幾種？ 思考題思考題 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)1、三糖鐵尿素半固體為三糖鐵瓊脂與尿素半固體兩者合并的復(fù)合培養(yǎng)物，可以同時(shí)測定葡萄糖、乳糖、蔗糖的發(fā)酵、產(chǎn)酸、產(chǎn)氣情況，并觀察H2S的生成，尿素分解和動力；斜面上的菌苔可做玻片凝集試驗(yàn)。2、由于分解葡萄糖后產(chǎn)酸使PH降低，中層及斜面變黃

15、。同時(shí)又因?yàn)榧?xì)菌利用蛋白胨后產(chǎn)生的代謝物，在斜面微氧環(huán)境下產(chǎn)堿使斜面變紅，而中層保持厭氧狀態(tài)，不易氧化及揮發(fā)。仍為黃色。 3、尿素加熱過高，過久可使尿素酶分解變紅；如加熱不足又可造成滅菌不徹底。因此關(guān)鍵問題是準(zhǔn)確控制滅菌溫度及其加熱時(shí)間。第四節(jié)致瀉大腸埃希氏菌檢驗(yàn) 學(xué)習(xí)目的與要求 1. 掌握致瀉大腸埃希氏菌的主要生物學(xué)特性。 2.掌握致瀉大腸埃希氏菌的致病性。 3.掌握致瀉大腸埃希氏菌的檢驗(yàn)程序。 （一）培養(yǎng)特性 1)需氧及兼性厭氧菌 2)對營養(yǎng)的要求不高，在普通瓊脂上就生長良好，在15C-45范圍內(nèi)均可生長，但最適生長溫度為37，最適pH為7.2-7.4。 3)在普通瓊脂平板上培養(yǎng)24小時(shí)，

16、可形成圓形、凸起、光滑、濕潤、半透明、邊緣整齊、中等大小的菌落其菌落與沙門氏菌比較相似，但是，大腸桿菌菌落對光(45角折射)觀察可見熒光。 4)在肉湯培養(yǎng)基中生長18-24小時(shí)變?yōu)榫鶆驕?，而后底部出現(xiàn)粘性沉淀物，并伴有臭味。 5）在鮮血瓊脂平板上生長，有些菌株可見溶血環(huán)。 6）在遠(yuǎn)藤瓊脂上長成帶金屬光澤的紅色菌落 7）在SS瓊脂平板上多不生長，少數(shù)生長的細(xì)菌，也因發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸而形成紅色菌落； 8）在伊紅美蘭瓊脂上形成紫黑色具有金屬光澤的菌落 9）在麥康凱瓊脂上培養(yǎng)24小時(shí)后孤立菌落呈紅色 埃希氏菌在SS瓊脂平板上形成紅色菌落 在麥康基培養(yǎng)基上培養(yǎng)的大腸埃希桿菌 大腸埃希桿菌產(chǎn)生粉紅色乳糖發(fā)酵菌

17、落。麥康基培養(yǎng)基是腸道細(xì)菌的選擇培養(yǎng)基，含膽鹽、乳糖和pH指示劑中性紅。乳糖發(fā)酵菌落產(chǎn)生酸，將指示劑變紅。（麥康基瓊脂，18小時(shí)，37） （二）生化特性 1）可發(fā)酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇產(chǎn)酸產(chǎn)氣，有些不典型的菌株不發(fā)酵或遲緩發(fā)酵乳糖； 2）不同菌株對蔗糖，衛(wèi)矛醇、水楊苷發(fā)酵結(jié)果不一致; 3）本菌可使賴氨酸脫鞍、不能使苯丙氨酸脫羧。 4）不產(chǎn)生H2S，不液化明膠，不分解尿素;5）、不能在氰化鉀培養(yǎng)基上生長，靛基質(zhì)試驗(yàn)陽性，V-P試驗(yàn)陰性，不利用枸櫞酸鹽。后四項(xiàng)生化特性是典型的大腸埃希氏菌，與此不一致的即為非典型大腸埃希氏菌菌。 IMViC試驗(yàn)：如IMViC試驗(yàn)為+、+、-、-，且乳糖發(fā)酵，

18、表明被檢物已有糞便污染，有發(fā)生腸道傳染病的危險(xiǎn)，這是衛(wèi)生細(xì)菌中常用的檢測指標(biāo)。（I：吲哚形成試驗(yàn)，M：甲基紅試驗(yàn)，Vi：V-P試驗(yàn)，C：枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)） 二、檢驗(yàn)程序檢樣測大腸菌群MPN25g+營養(yǎng)肉湯225mL污染嚴(yán)重的檢樣均液麥康凱EMB腸道菌增菌肉湯乳糖發(fā)酵的陽性管乳糖發(fā)酵或不發(fā)酵的菌落3個5個，氧化酶-，革蘭氏陰性桿菌TSI，靛基質(zhì)，pH7.2，尿素，KCN-，賴氨酸，動力腸道侵襲性大腸埃希氏菌非如左述的各種結(jié)果TSI地層+，H2S，KCN-，尿素-血清學(xué)試驗(yàn)?zāi)c毒素+產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏菌ETEC+EPEC+或EHEC+(0157)賴氨酸-，靛基質(zhì)+動力-（0124動力+/-）非如左述

19、的各種結(jié)果ETEC+腸道致病性大腸埃希氏菌或腸道出血性大腸埃希氏菌腸道侵襲性大腸埃希氏菌腸道侵襲性大腸埃希氏菌報(bào)告36118h24h3616h1、志賀菌屬分幾個群，各群有多少個血清型？2、大腸埃希菌在SS、KI等培養(yǎng)基上的生長情況如何？3、簡述大腸埃希菌的檢驗(yàn)程序？ 思考題思考題 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) 克氏鐵瓊脂與三糖鐵瓊脂的主要區(qū)別在于后者加蔗糖可以排除一些發(fā)酵蔗糖的非致病性腸道桿菌科細(xì)菌，兩者主要用于初步鑒別腸桿菌科的細(xì)菌。第五節(jié)、肉毒梭狀芽孢桿菌及肉毒毒素檢驗(yàn) 學(xué)習(xí)目的與要求 1. 掌握肉毒梭狀芽孢桿菌生物學(xué)特性。 2.掌握肉毒梭狀芽孢桿菌及肉毒毒素的致病性。 3.掌握肉毒梭狀芽孢桿菌及肉毒

20、毒素檢驗(yàn)的檢驗(yàn)程序。一、生物學(xué)特性一、生物學(xué)特性（一）培養(yǎng)特性（一）培養(yǎng)特性最嚴(yán)格的厭氧菌最嚴(yán)格的厭氧菌 生長最適溫度：生長最適溫度：28 37 ：pH為為6.87.6，產(chǎn)毒的最適，產(chǎn)毒的最適pH為為7.8 8.2。產(chǎn)毒培養(yǎng)溫度：不同菌型產(chǎn)毒的最適培養(yǎng)溫度不完全相同。產(chǎn)毒培養(yǎng)溫度：不同菌型產(chǎn)毒的最適培養(yǎng)溫度不完全相同。C、D型型溫度高些為宜，溫度高些為宜，35 培養(yǎng)培養(yǎng)3d即可，而即可，而E型菌低溫度長時(shí)間培養(yǎng)效果較好。型菌低溫度長時(shí)間培養(yǎng)效果較好。對營養(yǎng)要求不高對營養(yǎng)要求不高 ：在普通培養(yǎng)基上都能生長。：在普通培養(yǎng)基上都能生長。 肉毒梭狀芽孢桿菌菌落肉毒梭狀芽孢桿菌菌落 在固體培養(yǎng)基表面上，

21、形成類圓形，在固體培養(yǎng)基表面上，形成類圓形，邊緣不整齊，約邊緣不整齊，約3毫米左右的菌落。菌落毫米左右的菌落。菌落半透明，表面一般比較光滑也有的呈顆粒半透明，表面一般比較光滑也有的呈顆粒狀，界線不明顯，向外擴(kuò)散。呈絨毛網(wǎng)狀，狀，界線不明顯，向外擴(kuò)散。呈絨毛網(wǎng)狀，常常擴(kuò)散成菌苔。常常擴(kuò)散成菌苔。u肉毒梭菌的生化性狀很不規(guī)律，即使同型，也常見到株間肉毒梭菌的生化性狀很不規(guī)律，即使同型，也常見到株間的差異。的差異。（二）生化特性（二）生化特性1、生化特性很不規(guī)律；2、一般能分解葡萄糖、麥芽糖、果糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣；3、對麥角、凝固血清、凝固蛋白有水解作用，并引起液化；4、不形成靛基質(zhì)。能產(chǎn)生硫化氫。（三（三

22、 ）致病性致病性 1、致病物質(zhì)：肉毒毒素是已知最劇烈的神經(jīng)外毒素（對人致死量為、致病物質(zhì)：肉毒毒素是已知最劇烈的神經(jīng)外毒素（對人致死量為0.1ug）。）。肉毒毒素經(jīng)胃腸道吸收入血后，作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的腦神經(jīng)核和外周神經(jīng)肌肉肉毒毒素經(jīng)胃腸道吸收入血后，作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的腦神經(jīng)核和外周神經(jīng)肌肉神經(jīng)接頭處以及自主神經(jīng)末梢，阻礙乙酰膽堿的釋放，引起運(yùn)動神經(jīng)末梢功能失調(diào)，神經(jīng)接頭處以及自主神經(jīng)末梢，阻礙乙酰膽堿的釋放，引起運(yùn)動神經(jīng)末梢功能失調(diào)，導(dǎo)致肌肉麻痹。導(dǎo)致肌肉麻痹。 2、所致疾?。?、所致疾?。?（1）食物中毒：由于肉毒梭菌芽胞污染食品，未經(jīng)徹底消毒，在厭氧條件下繁殖）食物中毒：由于肉毒梭菌芽胞

23、污染食品，未經(jīng)徹底消毒，在厭氧條件下繁殖產(chǎn)生毒素，食前又未加熱烹調(diào)而發(fā)生食物中毒。臨床表現(xiàn)胃腸道癥狀較少，在整個產(chǎn)生毒素，食前又未加熱烹調(diào)而發(fā)生食物中毒。臨床表現(xiàn)胃腸道癥狀較少，在整個病程中病人神智清楚并不發(fā)熱病程中病人神智清楚并不發(fā)熱,。出現(xiàn)復(fù)視、斜視、眼瞼下垂等眼肌麻痹癥狀；再。出現(xiàn)復(fù)視、斜視、眼瞼下垂等眼肌麻痹癥狀；再是吞咽、咀嚼困難、口齒不清等咽部肌肉麻痹癥狀，進(jìn)而膈肌麻痹、呼吸困難、直是吞咽、咀嚼困難、口齒不清等咽部肌肉麻痹癥狀，進(jìn)而膈肌麻痹、呼吸困難、直至呼吸停止而導(dǎo)致死亡。至呼吸停止而導(dǎo)致死亡。 （2）創(chuàng)傷感染中毒）創(chuàng)傷感染中毒 （3）嬰兒肉毒：）嬰兒肉毒： 因食入被肉毒梭菌芽胞

24、污染的食品（如蜂蜜）后發(fā)生中毒，早因食入被肉毒梭菌芽胞污染的食品（如蜂蜜）后發(fā)生中毒，早期癥狀為便閉，吸吮啼哭無力、眼瞼下垂等。病死亡率不高。期癥狀為便閉，吸吮啼哭無力、眼瞼下垂等。病死亡率不高。二、檢驗(yàn)程序檢樣毒素檢測增菌產(chǎn)毒培養(yǎng)30，5d觀察生長性狀染色鏡檢毒素檢測報(bào)告（二）分離培養(yǎng)觀察菌落性狀染色鏡檢毒素檢測培養(yǎng)檢查報(bào)告（三）報(bào)告（一）增菌產(chǎn)毒培養(yǎng)30，5d 1、肉毒梭狀芽孢桿菌的培養(yǎng)特性是什么? 2、肉毒梭狀芽孢桿菌的生化特性是什么? 思考題思考題 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) 為檢出蜂蜜中存在的肉毒梭菌，蜂蜜檢樣需預(yù)溫37（流質(zhì)蜂蜜），或5253（晶質(zhì)蜂蜜）充分?jǐn)嚥⒑罅⒓捶Q取20g溶于100mL

25、滅菌燕餾水（37或5253），攪拌稀釋，以8000r/min10000r/min，離心30min（20），沉淀，加滅菌蒸餾水1mL，充分搖勻等分各半，接種應(yīng)肉培養(yǎng)基8ml10mL各一支，分別在30及37下厭氧培養(yǎng)7d，按肉毒梭菌檢出（增菌產(chǎn)毒培養(yǎng)試驗(yàn)）方法進(jìn)行肉毒毒素檢測。第六節(jié) 副溶血性弧菌檢驗(yàn) 學(xué)習(xí)目的與要求 1. 掌握副溶血性弧菌的生物學(xué)特性。 2.掌握副溶血性弧菌的致病性。 3.掌握副溶血性弧菌的檢驗(yàn)程序。（一）（一）培養(yǎng)特性培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧需氧或兼性厭氧嗜鹽，嗜鹽，在在2%NaCL培養(yǎng)基中生長最好，無鹽或食培養(yǎng)基中生長最好，無鹽或食鹽鹽10%不能生長。不能生長。最適溫度最適溫度

26、36，pH7.57.8在固體培養(yǎng)基上菌落呈圓形凸起，混濁不透明，表面在固體培養(yǎng)基上菌落呈圓形凸起，混濁不透明，表面光滑，較濕潤，邊緣不整齊。光滑，較濕潤，邊緣不整齊。在血平板上可見溶血環(huán)。在血平板上可見溶血環(huán)。 一、生物學(xué)特性一、生物學(xué)特性（二）、生化特性（二）、生化特性 分解分解葡萄糖葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不分解乳糖，蔗糖。產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不分解乳糖，蔗糖。 H H2 2S S（）、（）、V-PV-P（）、靛基質(zhì)（）、靛基質(zhì)（+ +）、精氨酸（）、精氨酸（） 甲基紅（甲基紅（+ +）、賴氨酸（）、溶血）、賴氨酸（）、溶血/-/-（三）、致病性（三）、致病性1、致病因素、致病因素脲酶脲酶產(chǎn)生溶血毒素：

27、產(chǎn)生溶血毒素：耐熱性溶血毒素耐熱性溶血毒素(THD)和耐熱性溶血毒素和耐熱性溶血毒素相關(guān)的溶血毒素相關(guān)的溶血毒素(TRH)，此外有的可產(chǎn)生不耐熱溶血毒素，此外有的可產(chǎn)生不耐熱溶血毒素(TLH)。 2、所致疾病、所致疾病 食物中毒、急性胃腸炎、敗血癥等。食物中毒、急性胃腸炎、敗血癥等。 361 818h樣品25g(25mL)+225 mL3氯化鈉堿性蛋白陳水硫代硫酸鹽-檸檬酸鹽-膽鹽-蔗糖瓊脂或科瑪嘉弧菌顯色培養(yǎng)基劃線分離361 1824h挑取可以菌落，接種于3氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂3氯化鈉堿性蛋白陳水3管3個合適的稀釋度如果進(jìn)行定性檢測，則不需要進(jìn)行此步驟361 1824h 篩選試驗(yàn)氧化酶試驗(yàn)

28、，革蘭染色3氯化鈉三糖鐵瓊脂，嗜鹽性試驗(yàn)挑取可以菌落，接種于3氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂生化試驗(yàn)或選用API20E生化鑒定試劑盒VITEK 結(jié)果報(bào)告 血清學(xué)試驗(yàn)，神奈川試驗(yàn)二、檢驗(yàn)程序 1、簡答副溶血性弧菌的生物學(xué)特性？ 2、簡答副溶血性弧菌的自然生存環(huán)境和易受污染的食品類型？ 3、簡答根據(jù)副溶血性弧菌的抵抗力特點(diǎn)，如何防止吃海產(chǎn)品副溶血性弧菌中毒發(fā)生？ 4、簡答副溶血性弧菌的致病性？ 5、解釋副溶血性弧菌的檢驗(yàn)程序？ 思考題思考題 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) 1、此試驗(yàn)要求是用人或兔的新鮮紅血球制備高鹽血平板，經(jīng)37、24h培養(yǎng)，如在單個菌落周圍呈現(xiàn)透明溶血環(huán)或在菌落下面有明顯溶血者，為“神奈川現(xiàn)象”陽性

29、，若不出現(xiàn)透明溶血環(huán)或無明顯溶血者，為“神奈川現(xiàn)象”陰性。 2、有致病性的副溶血性弧菌，多數(shù)為神奈川現(xiàn)象陽性，但亦有少數(shù)為陰性。第七節(jié) 溶血性鏈球菌檢驗(yàn) 學(xué)習(xí)目的與要求 1. 掌握溶血性鏈球菌的生物學(xué)特性。 2.掌握溶血鏈球菌的致病性。 3.掌握溶血鏈球菌的檢驗(yàn)程序。（一）（一）培養(yǎng)特性培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧菌，營養(yǎng)要求較高，普通培養(yǎng)基上生長不良，需補(bǔ)充需氧或兼性厭氧菌，營養(yǎng)要求較高，普通培養(yǎng)基上生長不良，需補(bǔ)充血清、血液、腹水，大多數(shù)菌株需核黃素、維生素血清、血液、腹水，大多數(shù)菌株需核黃素、維生素B6、煙酸等生長因子。、煙酸等生長因子。最適生長溫度為最適生長溫度為37，在，在20-42能生長，最適能生長，最適pH為為7.4-7.6。在血清肉。在血清肉湯中易成長