動物細(xì)胞培養(yǎng)常用試劑介紹

1、動物細(xì)胞培養(yǎng)常用試劑介紹 Hanks液 D-Hanks液 PBS EDTA 胰蛋白酶 青霉素、鏈霉素Hanks液與D-Hanks液 Hanks液是常見的平衡鹽溶液(BSS)之一。D-Hanks液則是無鈣鎂離子的Hanks液（也有資料認(rèn)為除了不含鈣鎂離子之外也不含葡萄糖）。BSS與細(xì)胞生長狀態(tài)下的pH值、滲透壓及無菌狀態(tài)一致，且配方簡單，是組織培養(yǎng)基本用液，常用于配制培養(yǎng)基及其他用液，或洗細(xì)胞等，細(xì)胞在這種BSS中可生存幾個小時。 Hanks液配方Hanks液（原液） 原液甲： NaCl 160g KCl 8g MgSO47H2O 2g MgCl26H2O 2g 上述試劑加入800ml雙蒸水。溶

2、解。 CaCl2 2.8g溶于100ml雙蒸水 上述二液混合，加雙蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4保存。 原液乙： Na2HPO412H2O 3.04g KH2PO4 1.2g 葡萄糖 20g 加入800ml雙蒸水，溶解。 0.4%酚紅溶液 100ml 上述二液混合，加雙蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4保存。 使用時甲，乙原液按下列比例配成 Hanks 液 使用液：原液甲1份、原液乙1份、雙蒸水18份濾過，20min滅菌，放4冰箱保存，使用前用NaHCO3調(diào)整pH值。D-Hanks液配方 D-Hanks液 NaCl 4.5g KCl 0.2g NaHCO3 0.175g N

3、a2HPO412H2O 0.076g KH2PO4 0.03g 葡萄糖 0.5g 0.4%酚紅 2.5ml 將上述成分依次溶解或加入到雙蒸水中，最后加雙蒸水定容至500ml，以5.6%NaHCO3調(diào)整 pH 值至7.4，4冰箱保存?zhèn)溆谩?酚紅在低pH值時呈現(xiàn)黃色,在pH6.6至8.0間會呈現(xiàn)橙色，在高pH值時呈現(xiàn)紅色。 酚紅只是起指示酸堿度的作用，有酚紅較方便但沒有也無妨。有人主張最好不用酚紅，可能對細(xì)胞生長不利，有時也會影響一些檢測結(jié)果。 此外酚紅有雌激素樣作用，所以如果做相關(guān)的實(shí)驗(yàn)最好不加。 對于Hanks與D-hanks液的配制，不同的文獻(xiàn)有不同的配方 我們可以看到，兩者最主要的區(qū)別就是

4、D-hanks液中沒有鈣鎂離子。Hanks液與D-Hanks液用途上的比較 Hanks液是組織培養(yǎng)基本用液，常用于配制培養(yǎng)基及其他用液，或洗滌組織、細(xì)胞等。細(xì)胞在Hanks液中可以在一段時間內(nèi)維持一定的活力。另外Hanks液還可以用于終止EDTA的作用。 配制胰酶液或者是胰酶/EDTA的基礎(chǔ)液都是D-hanks 液，而不能使用Hanks液。 這是由于鈣離子和鎂離子會影響胰蛋白酶的活性，也會阻礙EDTA的作用。PBS 磷酸鹽緩沖液 磷酸鹽是生物化學(xué)研究中使用最廣泛的一種緩沖劑，由於它們是二級解離，有二個pKa值，所以用它們配制的緩沖液，pH范圍最寬： NaH2PO4： pKa12.12， pKa

5、27.21 Na2HPO4： pKa17.21， pKa212.32 配酸性緩沖液： 用 NaH2PO4，pH14， 配中性緩沖液： 用混合的兩種磷酸鹽，pH68， 配堿性緩沖液： 用 Na2HPO4，pH1012。 因?yàn)榈蜏貢r鈉鹽難溶，鉀鹽易溶，一般情況下用鉀鹽比鈉鹽好（使用SDS-PAGE時除外）。PBS與Hanks液的用途區(qū)別 PBS：磷酸緩沖鹽溶液具有pH緩沖作用的等滲鹽溶液。多用于非活體。 Hanks：平衡鹽溶液無機(jī)鹽和葡萄糖濃度接近大部分動物（植物）細(xì)胞的水平，可作為動（植）物細(xì)胞短期培養(yǎng)（保存）。多用于活體。 Hanks液中鹽成分較PBS復(fù)雜，且有葡萄糖，可為細(xì)胞提供簡單的營養(yǎng)，

6、而PSB中只有磷酸根，鈉，鉀，氯離子，只是最簡單的鹽平衡緩沖液，不能為細(xì)胞提供暫時的營養(yǎng)。 其他緩沖系統(tǒng) 碳酸鹽緩沖系統(tǒng) 一般細(xì)胞培養(yǎng)液的pH在7.0-7.4之間。由于碳酸鹽pH緩沖系統(tǒng)是一種生理pH緩沖系統(tǒng)，大多數(shù)培養(yǎng)液用它來保持穩(wěn)定的pH。為了維持穩(wěn)定的pH，培養(yǎng)箱中的二氧化碳需要維持在2-10%之間，以保持培養(yǎng)液中溶解的二氧化碳的濃度。 HEPES緩沖系統(tǒng) HEPES，即4-羥乙基哌嗪乙磺酸 HEPES在pH7.2-7.4之間有很強(qiáng)的緩沖能力，當(dāng)透氣的培養(yǎng)器皿被拿到二氧化碳培養(yǎng)箱外面的時候，由于空氣中二氧化碳濃度很低，培養(yǎng)液中碳酸鹽緩沖系統(tǒng)就會失去效果，這時候HEPES緩沖系統(tǒng)就能繼續(xù)保持 pH的穩(wěn)定。 EDTA與胰蛋白酶 EDTA，常用的陽離子螯合劑。 組織細(xì)胞間存在鈣黏蛋白（一類Ca2+依賴的細(xì)胞黏著糖蛋白 ）。而EDTA可以通過螯合金屬離子，破壞Ca2+或Mg2+依賴性的細(xì)胞黏著。 胰蛋白酶 水解細(xì)胞間的蛋白質(zhì)，方便形成細(xì)胞懸液。 消化細(xì)胞時可以只使用胰蛋白酶，也可以胰蛋白酶