細(xì)胞生物學(xué)研究的內(nèi)容與現(xiàn)狀

1、第一章 緒論第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)研究的內(nèi)容與現(xiàn)狀一、細(xì)胞生物學(xué)是現(xiàn)代生命科學(xué)的重要基礎(chǔ)學(xué)科細(xì)胞生物學(xué)：是在顯微、亞顯微與分子水平等不同層次上研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)、功能及生命活動規(guī)律的科學(xué)。細(xì)胞生物學(xué)研究的對象是細(xì)胞。細(xì)胞分子生物學(xué)是當(dāng)前細(xì)胞生物學(xué)發(fā)展的主要方向。細(xì)胞生物學(xué)研究的主要內(nèi)容是細(xì)胞的形態(tài)與結(jié)構(gòu)、代謝與調(diào)控、增殖分化、遺傳變異、衰老與死亡、起源與進(jìn)化、興奮與運(yùn)動以及細(xì)胞的傳遞等。細(xì)胞生物學(xué)不同于細(xì)胞學(xué)主要表現(xiàn)在：第一，深刻性。它從細(xì)胞整體結(jié)構(gòu)，超微結(jié)構(gòu)和分子結(jié)構(gòu)對細(xì)胞進(jìn)行剖析，并把細(xì)胞生命活動同分子水平和超分子水平聯(lián)系起來。第二，綜合性。這所研究的內(nèi)容廣泛涉及到許多學(xué)科領(lǐng)域，同生理學(xué)、遺傳學(xué)、生

2、物化學(xué)、發(fā)育生物學(xué)等融合到一起。二、細(xì)胞生物學(xué)的主要研究內(nèi)容大致可分為以下幾個方面： (一)細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究 (二)生物膜與細(xì)胞器的研究 (三)細(xì)胞骨架體系的研究 (四)細(xì)胞增殖及其調(diào)控（五)細(xì)胞分化及其調(diào)控 (六)細(xì)胞的衰老與程序死亡 (七)細(xì)胞的起源進(jìn)化 (八)細(xì)胞工程三、當(dāng)前細(xì)胞生物學(xué)研究的總體趨勢與重點(diǎn)領(lǐng)域（一）當(dāng)前細(xì)胞生物學(xué)研究中的三大基本問題1、細(xì)胞內(nèi)的基因組是如何在時間與空間上有序表達(dá)的？2、基因表達(dá)的產(chǎn)物如何逐級裝配成基本結(jié)構(gòu)體系及各種細(xì)胞器？3、基因表達(dá)的產(chǎn)物如何調(diào)節(jié)細(xì)胞最重要的生命活動過程的？（二）當(dāng)前細(xì)胞基本生命活動研究的若干重大課題1、染色體DNA與蛋白

3、質(zhì)相互作用關(guān)系主要是非組蛋白對基因組的作用。2、細(xì)胞增殖、分化、凋亡（程序性死亡）的相互關(guān)系及調(diào)控3、細(xì)胞信號傳導(dǎo)的研究4、細(xì)胞結(jié)構(gòu)體系的裝配第二節(jié)細(xì)胞學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)發(fā)展簡史一、細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)英國學(xué)者胡克于1665年制造了第一臺有科研價值的顯微鏡，第一次描述了植物細(xì)胞的構(gòu)造，細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)是在1665年。16771683年，荷蘭人列文胡克用自己設(shè)計(jì)好的顯微鏡第一次觀察到活細(xì)胞。二、細(xì)胞學(xué)說的建立及其意義建立：18381839年德國植物學(xué)家施萊登和動物學(xué)家施旺提出：一切植物、動物都是由細(xì)胞組成的，細(xì)胞是一切動植物的基本單位，這就是著名的“細(xì)胞學(xué)說”。第二章細(xì)胞基本知識概要第一節(jié)細(xì)胞的基本概念一、細(xì)胞是生

4、命活動的基本單位細(xì)胞是有膜包圍的能進(jìn)行獨(dú)立繁殖的最小原生質(zhì)團(tuán)，簡單地說細(xì)胞是生命活動的基本單位?？梢詮囊韵陆嵌热ダ斫猓杭?xì)胞是構(gòu)成有機(jī)體的基本單位；細(xì)胞具有獨(dú)立完整的代謝體系，是代謝與功能的基本單位；細(xì)胞是有機(jī)體生長與發(fā)育的基礎(chǔ)；細(xì)胞具有遺傳的全能性，即具有一套基因組(基因組是指一種生物的基本染色體套即單個配子內(nèi)所含有的全部基因，在原核生物中即是一個連鎖群中所含的全部遺傳信息)。沒有細(xì)胞就沒有完整的生命。二、細(xì)胞概念的思考三、細(xì)胞的基本共性組成細(xì)胞的基本化學(xué)元素是相同的，并由這些元素構(gòu)成無機(jī)與有機(jī)化合物。生物膜體系與遺傳信息的復(fù)制與表達(dá)體系是構(gòu)建細(xì)胞所必需的。細(xì)胞的基本共性有：所有細(xì)胞都有細(xì)胞膜

5、；所有細(xì)胞都有DNA與RNA；細(xì)胞都有核糖體；細(xì)胞都以一分為二的方式分裂增殖。第二節(jié) 病毒一、病毒的基本知識病毒是由一個核酸分子(DNA或RNA)與蛋白質(zhì)構(gòu)成的非細(xì)胞形態(tài)的生命體。類病毒僅由一個有感染性的RNA構(gòu)成。朊病毒僅由有感染性的蛋白質(zhì)構(gòu)成。病毒是完全的寄生物。根據(jù)核酸類型不同，病毒可分為DNA病毒與RNA病毒。依據(jù)宿主可分為動物病毒、植物病毒和噬菌體等。二、病毒在細(xì)胞內(nèi)的增殖（復(fù)制）病毒在細(xì)胞內(nèi)的增殖又叫復(fù)制。其復(fù)制過程大致可分為：1.侵染；2.脫去衣殼，早基因的復(fù)制與表達(dá)，晚基因的復(fù)制、結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)的合成；3.裝配、成熟與釋放。三、病毒與細(xì)胞在起源和進(jìn)化中的關(guān)系病毒可能是細(xì)胞在特定條件

6、下“扔出”的一個基因組，或者是具有復(fù)制與轉(zhuǎn)錄能力的mRNA。這些游離的基因組只有回到它們原來的細(xì)胞內(nèi)環(huán)境中才能進(jìn)行復(fù)制與轉(zhuǎn)錄。第三節(jié)原核細(xì)胞與古核細(xì)胞種類繁多的細(xì)胞可以分為原核細(xì)胞與真核細(xì)胞兩類大類。近年有些生物學(xué)家建議將生物劃分原核生物、古核生物和真核生物三大界，將細(xì)胞相應(yīng)分為三大類型：原核細(xì)胞、古核細(xì)胞與真核細(xì)胞。原核細(xì)胞無典型的細(xì)胞核，其基本特點(diǎn)：遺傳物質(zhì)僅由一個裸露的環(huán)狀DNA構(gòu)成；細(xì)胞內(nèi)沒有分化出以膜為基礎(chǔ)的細(xì)胞器與細(xì)胞核膜。原核細(xì)胞大約出現(xiàn)在35億年前，包括支原體、衣原體、立克次體、細(xì)菌、放線菌及藍(lán)藻(藍(lán)細(xì)菌)等6類。一、支原體支原體是目前發(fā)現(xiàn)的最小、最簡單的細(xì)胞，直徑只有0.10

7、.3µm,能在體外生長，也能寄生在細(xì)胞內(nèi)。二、原核細(xì)胞的兩個代表細(xì)菌和藍(lán)藻（一）細(xì)菌細(xì)菌有3種形態(tài)：球菌、桿菌、螺旋菌。進(jìn)化上，細(xì)菌又可分為原細(xì)菌（古細(xì)菌）與真細(xì)菌兩類大類。1、細(xì)菌細(xì)胞的核區(qū)與基因：一個環(huán)狀的DNA分子盤繞在核區(qū)，沒有或有極少的組蛋白，無明顯的Feulgen正反應(yīng)。DNA復(fù)制不受細(xì)胞分裂周期的限制，可以連續(xù)進(jìn)行，且DNA復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)翻譯可以同時進(jìn)行,這是細(xì)菌乃至整個原核細(xì)胞器與真核細(xì)胞最顯著的差異之一。 2、細(xì)菌細(xì)胞的表面結(jié)構(gòu)：主要指細(xì)胞膜、細(xì)胞壁及其特化結(jié)構(gòu)(中膜體、莢膜、鞭毛等)。細(xì)胞膜是細(xì)胞表面的重要結(jié)構(gòu)。細(xì)胞膜的功能包括：選擇性地物質(zhì)運(yùn)輸；細(xì)菌細(xì)

8、胞膜含有豐富的酶系，執(zhí)行重要的代謝功能。中膜體由細(xì)胞膜內(nèi)陷形成，可能起DNA復(fù)制的支點(diǎn)作用。細(xì)胞壁的共同成分是肽聚糖，革蘭氏陽性菌與陰性菌細(xì)胞壁成分與結(jié)構(gòu)差異明顯。莢膜是某些細(xì)菌表面的特殊結(jié)構(gòu)，是位于細(xì)胞壁表面的一層粘液物質(zhì)。鞭毛是某些細(xì)菌的運(yùn)動器官，結(jié)構(gòu)簡單。3、細(xì)菌細(xì)胞的核糖體核糖體的沉降系數(shù)為70S，由50S大亞單位和30S亞單位組成。大亞單位含有23S rRNA, 5S rRNA和30多種蛋白質(zhì)，對紅霉素與氯霉素敏感；小亞單位含有16S rRNA與20多種蛋白質(zhì)，對四環(huán)素與鏈霉素敏感。4、細(xì)菌細(xì)胞核外DNA核外DNA：質(zhì)粒。裸露的環(huán)狀DNA，能自我復(fù)制，并可整合到核DNA中。5、細(xì)菌細(xì)

9、胞的內(nèi)生孢子又稱芽孢，是對不良環(huán)境有強(qiáng)抵抗力的休眠體。內(nèi)生孢子：細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)的重要物質(zhì)(特別是DNA)，積聚在細(xì)胞的一端，形成致密體，可度過惡劣環(huán)境。細(xì)菌的增殖為直接分裂。（二）藍(lán)藻又稱藍(lán)細(xì)菌，是原核生物，又是最簡單的自養(yǎng)植物類型之一。藍(lán)藻含有豐富的色素，可進(jìn)行類似高等植物的光合作用。中央相當(dāng)于細(xì)菌的核區(qū)；光合作用片層由藻膽蛋白構(gòu)成，將光能傳遞給葉綠素a；細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含物有的是儲存的養(yǎng)料，有的功能不詳；細(xì)胞膜外有細(xì)胞壁和膠質(zhì)層(鞘)。三、原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的比較原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的根本區(qū)別：細(xì)胞膜系統(tǒng)的分化演變；遺傳信息量與遺傳裝置的擴(kuò)增與復(fù)雜化。由于上述的根本差異，真核細(xì)胞的體積也相應(yīng)擴(kuò)增，細(xì)胞內(nèi)

10、部出現(xiàn)精密的網(wǎng)架結(jié)構(gòu)細(xì)胞骨架。二者的區(qū)別可分為兩部分進(jìn)行比較：結(jié)構(gòu)與功能比較：真核細(xì)胞的生物膜將細(xì)胞分化為核與質(zhì)兩部分，細(xì)胞質(zhì)又分化出各種細(xì)胞器，細(xì)胞骨架又保證了細(xì)胞形態(tài)的合理排布與執(zhí)行功能的有序性(P36 表2-2)。細(xì)胞遺傳裝置與基因表達(dá)方式的比較：核膜使擴(kuò)增了的遺傳信息與復(fù)雜的遺傳裝置相對獨(dú)立，使基因表達(dá)的程序有嚴(yán)格的階段性與區(qū)域性(P36表2-3 )。四、古核細(xì)胞（古細(xì)菌）古細(xì)菌（又稱原細(xì)菌）是一些生長在極端特殊環(huán)境中（高溫或高鹽）的細(xì)菌。最早發(fā)現(xiàn)的是產(chǎn)甲烷細(xì)菌類。古核細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)、遺傳裝置雖與原核細(xì)胞相似，但一些基本分子生物學(xué)特點(diǎn)又與真核細(xì)胞接近?，F(xiàn)已有更多的論據(jù)說明真核生物可能起

11、源于古核生物，論據(jù)如下：（1）古細(xì)菌的細(xì)胞壁成分與真核細(xì)胞一樣；（2）古核細(xì)胞DNA中有重復(fù)序列的存在；（3）具有組蛋白；（4）古核細(xì)胞的核糖體與真細(xì)菌的差異很大，從對抗生素的反應(yīng)看，應(yīng)更類似真核細(xì)胞的核糖體；（5）根據(jù)對5SrRNA的分子進(jìn)化分析和二級結(jié)構(gòu)的研究，認(rèn)為古細(xì)菌與真核生物同屬一類。而真細(xì)菌卻與之差別甚遠(yuǎn)。第四節(jié) 真核細(xì)胞的基本知識概要一、真核細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)體系1、生物膜系統(tǒng)細(xì)胞表面是一種多功能結(jié)構(gòu)；核膜又把細(xì)胞分為細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核。以生物膜系統(tǒng)為基礎(chǔ)形成了各種細(xì)胞器。線粒體、葉綠體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體及溶酶體等。2、遺傳信息表達(dá)結(jié)構(gòu)系統(tǒng)由DNA蛋白質(zhì)與RNA蛋白質(zhì)復(fù)合體形成的遺傳信息

12、載體與表達(dá)系統(tǒng)，一般以顆?；蚶w維狀的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)存在。包括染色質(zhì)，核仁、核糖體等。3、細(xì)胞骨架系統(tǒng)細(xì)胞骨架由特異的結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)構(gòu)成網(wǎng)架系統(tǒng)，可分為胞質(zhì)骨架與核骨架。二、細(xì)胞大水及其分析細(xì)胞體積的守恒規(guī)律。三、細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系細(xì)胞的形態(tài)與功能具有相關(guān)性與一致性。四、植物細(xì)胞與動物細(xì)胞的比較植物細(xì)胞特有的細(xì)胞器：細(xì)胞壁（主要成分是纖維素）、液泡、葉綠體等；而動物細(xì)胞的中心粒在植物細(xì)胞中不常見到。第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法第一節(jié)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察方法一、光學(xué)顯微鏡技術(shù)1、普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡技術(shù)普通光學(xué)顯微鏡（最大分辨率為0.2µm），主要由三部分組成：光學(xué)放大系統(tǒng)，即目鏡和物鏡；照明系統(tǒng)；

13、機(jī)械和支架系統(tǒng)。顯微鏡的性能優(yōu)劣決定于它的分辨率。分辨率是指顯微鏡區(qū)分開相近兩點(diǎn)的能力。2、熒光顯微鏡技術(shù)在紫外光顯微鏡基礎(chǔ)上發(fā)展而來，利用樣品自發(fā)熒光和誘發(fā)熒光，可以對某些生物大分子進(jìn)行定性和定位研究。不僅可以觀察固定切片標(biāo)本，還可以在活體染色后對活細(xì)胞進(jìn)行研究。3、激光共焦點(diǎn)掃描顯微鏡技術(shù)共焦點(diǎn)是指物鏡和聚光鏡同時聚焦到同一小點(diǎn)。它在某一瞬間只用一束通過檢測器前的小孔的光成像，可顯著提高分辨率?？梢杂^察較厚樣品的內(nèi)部結(jié)構(gòu)。4、相差顯微鏡技術(shù)和微分干涉顯微鏡技術(shù)光線在通過密度不同的介質(zhì)時，其滯留程度不同，即產(chǎn)生了光程差和相位差。相差顯微鏡的基本原理把光程差變成振幅差(即明暗)。從而提高樣品反

14、差，故樣品不需染色，適合觀察活細(xì)胞。甚至研究細(xì)胞核、線粒體等細(xì)胞器的動態(tài)。它在結(jié)構(gòu)上與普通顯微鏡最大的不同是在物鏡后裝有相差板。微分干涉顯微鏡用的是偏振光，增加了樣品反差，并具有立體感，可作于研究活體細(xì)胞中較大的細(xì)胞器。錄像增差顯微鏡技術(shù)在一定程度上可以填補(bǔ)光鏡與電鏡之間分辨率上的間隙。二、電子顯微鏡技術(shù)（一）電子顯微鏡基本知識分辨率最終決定于光的波長，由于使用電子束作光源，電鏡的分辨率大大提高。電鏡的分辨率常是超薄切片厚度的1/10，它的分辨率可達(dá)0.2nm，其放大倍數(shù)為106倍。電鏡的基本構(gòu)造包括：電子束照明系統(tǒng)；電磁透鏡成像系統(tǒng)；真空系統(tǒng)；記錄系統(tǒng)；電源系統(tǒng)。（P52表3-1）（二）主要

15、電鏡制樣技術(shù)介紹人樣品制備技術(shù)的特殊要求：樣品要??；更好地保持樣品的精細(xì)結(jié)構(gòu)；樣品具有一定的反差。主要的用于觀察生物樣品的電鏡技術(shù)有：超薄切片技術(shù)；是觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)。負(fù)染色技術(shù)；冷凍斷裂和冷凍蝕刻電鏡技術(shù)技術(shù)；電鏡三維重構(gòu)技術(shù)；掃描電鏡技術(shù)（SEM）是觀察細(xì)胞表面形的有力工具。三、掃描隧道顯微鏡(STM)是一種探測微觀世界物質(zhì)表面形貌的儀器，在納米生物學(xué)的研究領(lǐng)域具有獨(dú)特的優(yōu)越性。STM的特點(diǎn)：具有原子尺度的高分辨本領(lǐng)；可在真空、大氣、液體等條件下工作；非破壞性測量。第二節(jié) 細(xì)胞組分的分析方法細(xì)胞成分分析和形態(tài)學(xué)觀察相結(jié)合，可揭示生物大分子在細(xì)胞內(nèi)的構(gòu)建及功能。一、用超速離心技術(shù)分離細(xì)

16、胞器與生物大分子及其復(fù)合物利用多種方法使細(xì)胞崩解，形成細(xì)胞器和細(xì)胞組分的混合勻漿，再通過差速離心，即利用不同的離心速度所產(chǎn)生的不同離心力，將各種亞細(xì)胞組分和各種顆粒分開。差速離心與密度離心相結(jié)合可以達(dá)到精確的分離。細(xì)胞不同組分沉降率不同，主要依賴于它們的形狀和大小，通常以沉降系數(shù)S來表示(沉降系數(shù)是指懸浮在密度較低的溶劑中的一種溶質(zhì)大分子，在每單位離心場作用下的沉降速率)。二、細(xì)胞內(nèi)核酸、蛋白質(zhì)、酶、糖類、脂質(zhì)等到的顯色方法原位成分分析常利用一些顯色劑與所檢物質(zhì)的特殊基團(tuán)特異性結(jié)合的特征，通過染色反應(yīng)的部位和顏色的深淺來斷某種物質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的分布與含量。福爾根(Feulgen)反應(yīng)可特異顯示DN

17、A的存在部位。PAS反應(yīng)可確定多糖的存在。四氧化鋨可證明脂肪滴的存在。蘇丹和蘇丹黑也常用于脂肪的鑒定。米倫反應(yīng)及重氮反應(yīng)等用來測定蛋白質(zhì)。檢測和定位酶的技術(shù)是基于細(xì)胞或組織切片與適宜底物共同孵育，通過一定方法使產(chǎn)物顯示出來。例如檢測堿性磷酸酶的格莫瑞方法。三、特異蛋白質(zhì)抗原的定位與定性免疫熒光和免疫電鏡是最常用的細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)定位技術(shù)。1、免疫熒光技術(shù)免疫熒光技術(shù)就是將免疫學(xué)方法與熒光標(biāo)記技術(shù)相結(jié)合研究特異蛋白質(zhì)抗原在細(xì)胞內(nèi)分布的方法。2、免疫電鏡技術(shù)免疫電鏡技術(shù)使特異蛋白的定位與超微結(jié)構(gòu)結(jié)合起來，使抗原定位更準(zhǔn)確。如蛋白分泌的研究胞內(nèi)酶的研究；一些結(jié)構(gòu)蛋白的研究。四、細(xì)胞內(nèi)特異核酸的定位與定性

18、1、原位雜交技術(shù)用標(biāo)記的核酸探針通過分子雜交確定特殊核苷酸序列在染色體上或細(xì)胞中的位置的方法。2、Southern技術(shù)（了解）蛋白樣品經(jīng)電泳后，與DNA探針進(jìn)行吸附，與DNA有親合作用的蛋白帶被顯示出來。五、利用放射性標(biāo)記技術(shù)研究生物大分子在細(xì)胞內(nèi)的合成動態(tài)放射自顯影技術(shù)是利用放射性同位素的電離輻射對乳膠的感光作用，對樣品中放射性標(biāo)記物進(jìn)行定性與定位測定。放射自顯影技術(shù)包括兩個主要步驟：即同位素標(biāo)記的大分子前體的摻入和細(xì)胞內(nèi)同位素所在位置的顯示?；静襟E為：摻入、制片、敷膠、曝光、顯影、鏡檢。六、定量細(xì)胞化學(xué)分析技術(shù)1、顯微分光光度測定技術(shù)根據(jù)細(xì)胞內(nèi)某些物質(zhì)對光譜吸收的原理，來測定這些物質(zhì)（如

19、核酸與蛋白質(zhì)等）在細(xì)胞內(nèi)的含量。2、流式細(xì)胞儀可定量地測定某一細(xì)胞中的DNA、RNA或某一特異蛋白的含量，以及細(xì)胞群體中上述成分含量不同的細(xì)胞的數(shù)量。第三節(jié) 細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞工程與顯微操作技術(shù)一、細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)就是將動植物組織或細(xì)胞從機(jī)體取出，分散成單個細(xì)胞或直接以單細(xì)胞生物，給予必要的生長條件，讓其在培養(yǎng)瓶中或培養(yǎng)基上繼續(xù)生長與增殖。（一）動物細(xì)胞培養(yǎng)從機(jī)體取出立即培養(yǎng)的細(xì)胞叫原代細(xì)胞。適應(yīng)在培養(yǎng)條件下持續(xù)傳代培養(yǎng)的細(xì)胞為傳代細(xì)胞。 通過純系化或選擇法從原代培養(yǎng)細(xì)胞中分離出來的細(xì)胞群體叫細(xì)胞株，細(xì)胞分裂周期約限于5060次。從原代細(xì)胞或細(xì)胞株中獲得的可無限傳代的細(xì)胞叫細(xì)胞系。（二）植物細(xì)胞培

20、養(yǎng) 單倍體細(xì)胞培養(yǎng)。 原生質(zhì)體培養(yǎng)：去壁的植物細(xì)胞叫原生質(zhì)體?？膳囵B(yǎng)成植株或體細(xì)胞雜交植株。（三）非細(xì)胞體系在細(xì)胞生物學(xué)研究中的作用來源于細(xì)胞，而不具有完整的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，但包含了正常生物學(xué)反應(yīng)所需的物質(zhì)（供能系統(tǒng)和酶反應(yīng)體系等）組成的體系即為非細(xì)胞體系。二、細(xì)胞工程應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)方法，按照預(yù)先的設(shè)計(jì)，有計(jì)劃地改變或創(chuàng)造細(xì)胞遺傳物質(zhì)的技術(shù)以及發(fā)展這種技術(shù)的領(lǐng)域?yàn)榧?xì)胞工程。細(xì)胞工程所使用的技術(shù)主要是細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞分化的定向誘導(dǎo)、細(xì)胞融合和顯微注射等。（一）細(xì)胞融合與細(xì)胞雜交技術(shù)真核生物的體細(xì)胞經(jīng)過培養(yǎng)，兩個或多個細(xì)胞融合成一個雙核或多核細(xì)胞的過程叫細(xì)胞融合。動物細(xì)胞融合一般要用滅活的病毒(如仙臺病毒

21、)或化學(xué)物質(zhì)(如聚乙二醇，即PEG)介導(dǎo)；植物細(xì)胞融合時，要用纖維素酶去掉纖維素壁。20世紀(jì)80年代又發(fā)明了電融合技術(shù)。細(xì)胞融合可以在基因型相同的細(xì)胞間進(jìn)行，也可以在基因型不同的種內(nèi)細(xì)胞間甚至種間細(xì)胞間進(jìn)行。（二）單克隆抗體技術(shù) 1975年英國學(xué)者M(jìn)ilestein等開創(chuàng)了將產(chǎn)生抗體的單個細(xì)胞同瘤細(xì)胞雜交的技術(shù)。他們的設(shè)計(jì)是經(jīng)綿羊紅細(xì)胞免疫過的小鼠脾細(xì)胞(B淋巴細(xì)胞)與骨髓瘤細(xì)胞融合，融合的雜交瘤具有兩種親本細(xì)胞的特性既可分泌抗綿羊紅細(xì)胞的抗體，又可無限增殖。學(xué)者們紛紛利用這一技術(shù)來制備針對不同抗原的高度純一的單克隆抗體。單克隆抗體就是單個雜交瘤細(xì)胞增殖產(chǎn)生的克隆細(xì)胞群分泌的高度純一的抗體。（

22、三）細(xì)胞折合與顯微操作技術(shù)細(xì)胞拆合就是把細(xì)胞核與質(zhì)分離開后將不同來源的細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核相互配合，形成核質(zhì)雜交細(xì)胞。顯微操作技術(shù)：即在顯微鏡下用顯微操作裝置對細(xì)胞進(jìn)行解剖和微量注射的技術(shù)。第四章 細(xì)胞膜與細(xì)胞表面第一節(jié)細(xì)胞膜與細(xì)胞表面特化結(jié)構(gòu)細(xì)胞膜又稱質(zhì)膜，是圍繞在細(xì)胞最外層，由膜脂和膜蛋白構(gòu)成。一、細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)模型1925年Gorter等人提出質(zhì)膜由雙層脂分子構(gòu)成。1935年Danielli和Davson提出三夾板模型。1959年Robertson提出單位膜模型。1972年Singer和Nicolson提出流動鑲嵌模型。該模型主要強(qiáng)調(diào)膜的流動性；膜蛋白的分布不對稱性；這是生物膜的基本特征。根據(jù)已

23、有的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，生物膜具有如下共同特征：膜的基本結(jié)構(gòu)由脂雙分子層鑲嵌蛋白質(zhì)構(gòu)成，雙層脂分子以疏水性尾部相對，極性頭部朝向水相。蛋白質(zhì)分子以不同的方式鑲嵌在脂雙分子層中或結(jié)合在其表面，其分布的不對稱性和與脂分子的協(xié)同作用使生物膜具有各自的特性與功能。生物膜可看成是蛋白質(zhì)在雙層脂分子中的二維溶液。二、膜脂（一）成分膜脂主要包括磷脂、糖脂、膽固醇三種類型。1、磷脂：磷脂構(gòu)成了膜脂的基本成分，分為甘油磷脂和鞘磷脂。由極性頭部和兩條疏水尾部組成，為雙極性分子。2、糖脂：為鞘氨醇的衍生物。含17個糖殘基。3、膽固醇和中性脂質(zhì)：膽固醇主要存在于動物細(xì)胞，可調(diào)節(jié)膜的流動性、增加膜的穩(wěn)定性及降低水溶性物質(zhì)的通透性

24、。某些細(xì)菌含有中性脂類。（二）膜脂的運(yùn)動方式膜脂分子的熱運(yùn)動方式：1、側(cè)向運(yùn)動；2、自旋運(yùn)動；3、尾部擺動；4、翻轉(zhuǎn)運(yùn)動。三、膜蛋白（一）類型膜蛋白可分為兩類：膜周邊蛋白和膜內(nèi)在蛋白。外在膜蛋白為水溶性蛋白，分布在膜表面，與膜結(jié)合較疏松，用溫和的方法就可從膜上分離下來，膜結(jié)構(gòu)并不被破壞。內(nèi)在蛋白多為跨膜蛋白，也有些插入脂雙層中，與脂雙層分子結(jié)合緊密。只有用去垢劑使膜崩解后才可分離出。（二）膜內(nèi)在蛋白與膜脂結(jié)合的方式與膜結(jié)合的主要方式有3種。內(nèi)在膜蛋白跨膜結(jié)構(gòu)域是與膜脂結(jié)合的主要部位。具體作用方式為：跨膜結(jié)構(gòu)域含有20個左右的疏水氨基酸殘基形成螺旋，其外部疏水側(cè)鏈通過范德華力與脂雙層分相互作用。

25、某些螺旋的外側(cè)是非極性鏈，內(nèi)側(cè)極性鏈，形成特異極性分子的跨膜通道。某些跨膜蛋白的跨膜結(jié)構(gòu)域常常僅有1012個氨基酸殘基形成 折疊結(jié)構(gòu)。（三）去垢劑是分離與研究膜蛋白的常用試劑，可使細(xì)胞膜分解。去垢劑有離子型去垢劑(如SDS)和非離子去垢劑(Triton x100)。四、膜的流動性（一）膜脂的流動膜脂的流動性主要指脂分子的側(cè)向運(yùn)動。（二）膜蛋白的流動五、膜的不對稱性（一）細(xì)胞膜各部分的名稱（二）膜脂的不對稱性是指膜脂分子在膜的脂雙層中呈不均勻分布。糖脂的分布表現(xiàn)出完全不對稱性。（三）膜蛋白的不對稱性膜蛋白的不對稱性是指每種膜蛋白分子在細(xì)胞膜上都具有明確的方向性。各種生物膜的特征及其生物學(xué)功能主要

26、由膜蛋白來決定的。六、細(xì)胞膜的功能細(xì)胞質(zhì)膜的主要功能：為細(xì)胞的生命活動提供相對穩(wěn)定的內(nèi)環(huán)境；選擇性的物質(zhì)運(yùn)輸并伴隨著能量的傳遞；細(xì)胞識別與信息傳遞；為多種酶提供結(jié)合位點(diǎn)；介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與基質(zhì)這間的連接；參與形成細(xì)胞表面特化結(jié)構(gòu)。七、膜骨架與細(xì)胞表面的特化結(jié)構(gòu)細(xì)胞表面的特化結(jié)構(gòu)包括膜骨架、鞭毛、纖毛、變形足和微絨毛等，它們都是細(xì)胞質(zhì)膜與膜內(nèi)細(xì)胸骨架纖維形成的復(fù)合結(jié)構(gòu)，分別于維持細(xì)胞的形態(tài)、細(xì)胞的運(yùn)動、細(xì)胞與環(huán)境的物質(zhì)交換等功能有關(guān)。（一）膜骨架膜骨架是指細(xì)胞質(zhì)膜下與膜蛋白相連的由纖維蛋白組成的網(wǎng)架結(jié)構(gòu)，它參與維持細(xì)胞質(zhì)膜的形狀并協(xié)助完成多種功能。紅細(xì)胞的膜骨架成分主要包括：血影蛋白、肌動蛋

27、白、錨蛋白、帶4.1蛋白等。(二)紅細(xì)胞質(zhì)膜蛋白及膜骨架膜骨架蛋白網(wǎng)絡(luò)與細(xì)胞膜之間的連接主要通過錨蛋白。此外，帶4.1蛋白還可以與血型糖蛋白或帶3蛋白結(jié)合，起到與質(zhì)膜連接的作用。第二節(jié) 細(xì)胞連接細(xì)胞連接是多細(xì)胞有機(jī)體中相鄰細(xì)胞之間通過質(zhì)膜相互聯(lián)系、協(xié)同作用的重要結(jié)構(gòu)。主要有3種類型：一、封閉連接封閉連接的主要形式是緊密連接。緊密連接存在于上皮細(xì)胞之間，通過嵴線使相鄰細(xì)胞質(zhì)膜緊靠在一起，可阻止可溶性物質(zhì)沿細(xì)胞間隙滲入體內(nèi)。同時還起到膜蛋白的隔離作用。二、錨定連接錨定連接使相鄰細(xì)胞的骨架系統(tǒng)或?qū)⒓?xì)胞與基質(zhì)相連形成一個堅(jiān)挺有序的群體。（一）橋粒與半橋粒橋粒在細(xì)胞之間形成鈕扣式的結(jié)構(gòu)將相鄰細(xì)胞鉚接在一

28、起，同時也是細(xì)胞內(nèi)中間纖維的錨定位點(diǎn)。橋粒相鄰細(xì)胞質(zhì)膜的間隙約30nm，在質(zhì)膜的胞質(zhì)面有一致密斑，中間纖維直接與其相連。相鄰兩細(xì)胞的致密斑由跨膜連接糖蛋白連接。（二）粘著帶(中間連接)與粘著斑粘著帶位于上皮細(xì)胞緊密連接的下方，相鄰細(xì)胞間形成一個連續(xù)的帶狀結(jié)構(gòu)。粘合帶處相鄰細(xì)胞質(zhì)膜的間隙約1520nm。與粘著帶相連的是肌動蛋白纖維，在細(xì)胞中形成平行于質(zhì)膜的可收縮的纖維束。粘著斑是肌動蛋白纖維與細(xì)胞外基質(zhì)之間的連接方式。在粘著斑處，跨膜連接糖蛋白向外通過纖粘連蛋白與胞外基質(zhì)結(jié)合，其胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域則通過微絲結(jié)合蛋白與肌動蛋白纖維結(jié)合。粘著帶及粘著斑均起細(xì)胞附著與支持作用。三、通訊連接（一）間隙連接間隙連

29、接處相鄰質(zhì)膜間的間隙為23nm。連接的基本單位是連接子。連接子由6個相同或類似的跨膜蛋白亞單位環(huán)繞，形成直徑約1.5nm的孔道。相鄰細(xì)胞質(zhì)膜上的兩個連接子相對形成間隙連接單位。間隙連接在細(xì)胞間代謝耦聯(lián)和細(xì)胞通訊中具有重要作用。（二）胞間連絲高等植物細(xì)胞之間通過胞間連絲相互連接，完成細(xì)胞間的通迅聯(lián)絡(luò)。（三）化學(xué)突觸化學(xué)突觸是存在于可興奮細(xì)胞之間的細(xì)胞連接方式，它通過釋放神經(jīng)遞質(zhì)來傳導(dǎo)神經(jīng)沖動。四、細(xì)胞表面的粘著因子（了解）細(xì)胞與細(xì)胞之間的粘連是由特定的細(xì)胞粘著因子鈣粘素等介導(dǎo)的，細(xì)胞之間的錨定連接也需要粘著因子鈣粘素與整聯(lián)蛋白等參與。粘著因子均為整合膜蛋白，在胞內(nèi)與細(xì)胞骨架成分相連。多數(shù)要依賴C

30、a2+或Mg2+才起作用，少數(shù)不需要Ca2。1、鈣粘素同親性依賴Ca2+的細(xì)胞粘連糖蛋白，對胚胎發(fā)育中的細(xì)胞識別、遷移和組織分化以及成體組織器官構(gòu)成具有主要作用。已發(fā)現(xiàn)幾十種鈣粘素，如E鈣粘素、P鈣粘素等。2、選擇素異親性依賴于Ca2+的糖蛋白，主要參與白細(xì)胞與脈管內(nèi)皮細(xì)胞之間的識別與粘著。3、免疫球蛋白超家族的CAM分子結(jié)構(gòu)中具有與免疫球蛋白類似的結(jié)構(gòu)域CAM超家族。其粘著作用不依賴于Ca2+。其中了解最多的為NCAMs，它在神經(jīng)組織細(xì)胞間的粘著中起主要作用。4、整聯(lián)蛋白一類重要的細(xì)胞粘著因子，是由和兩個亞基形成的異源二聚體糖蛋白。介導(dǎo)細(xì)胞與基質(zhì)、細(xì)胞與細(xì)胞之間的粘著。第三節(jié) 細(xì)胞外被與細(xì)胞

31、外基質(zhì)細(xì)胞外被(cell coat)又叫糖萼。一般指動物細(xì)胞外表由糖蛋白或糖脂構(gòu)成的絨絮狀物質(zhì)。起保護(hù)細(xì)胞和識別細(xì)胞的作用。細(xì)胞外基質(zhì)是指分布于細(xì)胞外空間，由細(xì)胞分泌的確良蛋白和多糖所構(gòu)成的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，它將細(xì)胞粘連在一起構(gòu)成組織，在細(xì)胞中或組織之間起支持作用。細(xì)胞外基質(zhì)的基本成分是由膠原蛋白和彈性蛋白組成的蛋白纖維和由糖胺聚糖形成的水合膠體構(gòu)成的復(fù)雜的結(jié)構(gòu)體系。層粘連蛋白和纖粘連蛋白具有多個結(jié)合位點(diǎn)，在細(xì)胞與胞外基質(zhì)成分相互粘著中起重要作用。一、膠原1、膠原的類型及分子結(jié)構(gòu)膠原是胞外基質(zhì)最基本成分之一，是動物體內(nèi)含量最豐富的蛋白，目前已發(fā)現(xiàn)20種。型膠原是形成纖維的膠原，型纖維為片狀(或網(wǎng)狀)結(jié)

32、構(gòu)，基膜所特有。膠原纖維的基本分子結(jié)構(gòu)是原膠原。原膠原由3條多肽連盤繞成3股螺旋結(jié)構(gòu)，長300nm直徑1.5nm，具有Glyxy重復(fù)序列。2、膠原的功能膠原在細(xì)胞外基質(zhì)中含量最高，剛性和抗張力強(qiáng)度最大，構(gòu)成細(xì)胞外基質(zhì)的骨架結(jié)構(gòu)，對細(xì)胞具有粘連作用。膠原基質(zhì)能影響培養(yǎng)細(xì)胞的生長和分化。二、糖胺聚糖和蛋白聚糖1.糖胺氨基聚糖由重復(fù)的氨基己糖(氨基葡萄糖或氨基半乳糖)+糖醛酸二糖單位構(gòu)成的長鏈多糖?？煞譃?類。如透明質(zhì)酸、肝素等。2.蛋白聚糖是由氨基聚糖與核心蛋白的絲氨酸殘基共價連接形成的巨分子，這樣的單體可借連接蛋白以非共價鍵與透明質(zhì)酸結(jié)合形成多聚體。三、層粘連蛋白和纖粘連蛋白這兩種蛋白均為高分子

33、量糖蛋白。1、層粘連蛋白 層粘連蛋白是動物組織基膜的主要結(jié)構(gòu)組分，對基膜基質(zhì)的組裝起關(guān)鍵作用，可介導(dǎo)細(xì)胞粘著于膠原進(jìn)而鋪展，并促進(jìn)細(xì)胞生長。通常細(xì)胞不直接與型膠原或蛋白聚糖結(jié)合，而是通過層粘連蛋白將細(xì)胞錨定于基膜上。2、纖粘連蛋白纖粘連蛋白的主要功能是介導(dǎo)細(xì)胞粘著。四、彈性蛋白彈性蛋白是彈性纖維的主要成分。五、植物細(xì)胞壁植物細(xì)胞壁由纖維素、半纖維素、果膠質(zhì)等構(gòu)成。第五章 物質(zhì)的跨膜運(yùn)動與信號傳遞第一節(jié)物質(zhì)的跨膜運(yùn)動物質(zhì)通過細(xì)胞膜的轉(zhuǎn)運(yùn)主要有三種途徑：被動運(yùn)輸、主動運(yùn)輸和胞吞與胞吐作用。一、被動運(yùn)輸(一)簡單擴(kuò)散小分子或離子的熱運(yùn)動從濃度高的一側(cè)通過質(zhì)膜向濃度低的一側(cè)自行擴(kuò)散。在這種跨膜運(yùn)動中，

34、不需要細(xì)胞能量，也沒有膜蛋白的協(xié)助。基通透性主要決定于分子大水和分子極性。載體蛋白（通透酶）相當(dāng)于結(jié)合在細(xì)胞膜上的酶，有特異的結(jié)合位點(diǎn)，可同特異性底物（溶質(zhì)）結(jié)合，一種特異性載體只轉(zhuǎn)運(yùn)一種類型的分子或離子。2、通道蛋白及其功能通道蛋白所介導(dǎo)的被動運(yùn)輸不需要與溶質(zhì)分子結(jié)合，橫跨膜形成親水通道，允許適宜大小的分子和帶電荷的離子通過。絕大多數(shù)通道蛋白是跨膜的離子通道，具有兩個顯著的特征：具有離子選擇性，而且轉(zhuǎn)動速率高，凈驅(qū)動力是溶質(zhì)跨膜的電化學(xué)梯度；離子通道是門控的，即離子通道的活性由通道開或關(guān)兩種構(gòu)象所調(diào)節(jié)，并通過通道開關(guān)應(yīng)答于適當(dāng)?shù)男盘枴６?、主動運(yùn)輸主動運(yùn)輸是由載體蛋白所介導(dǎo)的物質(zhì)逆濃度梯度或電

35、化學(xué)梯度運(yùn)輸?shù)目缒み\(yùn)動方式，此過程需要能量供應(yīng)。根據(jù)主動運(yùn)輸過程所需能量來源的不同可歸納為：由ATP直接提供能量和間接提供能量以及光能驅(qū)動的三種基本類型。(一) 由ATP直接提供能量的主動運(yùn)輸鈉鉀泵在細(xì)胞膜兩側(cè)存在著很大的離子濃度差，一般的動物細(xì)胞要消耗13的能量來維持細(xì)胞內(nèi)低Na+高K +離子環(huán)境，Na +和K +的逆濃度與電化學(xué)梯度輸入和輸出的跨膜運(yùn)動就是由ATP直接供能，通過質(zhì)膜上的Na + K +泵來完成的，是典型的主動運(yùn)輸方式。Na + K +泵又叫Na + K + ATP酶，由和兩個亞基組成。工作模式是在細(xì)胞內(nèi)側(cè)亞基與Na +結(jié)合促進(jìn)ATP水解，亞基上的一個天冬氨酸殘基磷酸化引起構(gòu)

36、象發(fā)生變化，將Na +運(yùn)出，同時細(xì)胞外的K +與亞基的另一個位點(diǎn)結(jié)合，使其去磷酸化，亞基構(gòu)象再度發(fā)生變化將K +輸入細(xì)胞，完成了整個循環(huán)。每個循環(huán)消耗一個ATP分子，轉(zhuǎn)運(yùn)3個Na +和2個K +。動物細(xì)胞借助Na +K +泵維持細(xì)胞滲透平衡。同時利用胞外高濃度的Na +所儲存的能量，主動從細(xì)胞外攝取營養(yǎng)。(二)由ATP直接提供能量的主動運(yùn)輸鈣泵和質(zhì)子泵Ca +泵又稱Ca + ATP酶，主要存在于細(xì)胞質(zhì)膜和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上，將Ca +輸出細(xì)胞或泵入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔中貯存起來，以維持細(xì)胞內(nèi)低濃度的Ca +。Ca +與ATP的水解相耦聯(lián)，每消耗一個ATP分子轉(zhuǎn)運(yùn)出兩個Ca+。鈣泵在肌質(zhì)網(wǎng)中儲存的Ca+，對調(diào)節(jié)肌細(xì)

37、胞的收縮與舒張是至關(guān)重要的。質(zhì)子泵：植物細(xì)胞、真菌（包括酵母）和細(xì)菌細(xì)胞其質(zhì)膜上沒有Na + K +泵，而是具有H +泵，將H +泵出細(xì)胞，建立跨膜的H +電化學(xué)梯度，利用H +電化學(xué)梯度來驅(qū)動主動轉(zhuǎn)動溶質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞?？煞譃槿N，P型質(zhì)子泵；在轉(zhuǎn)運(yùn)H +的過程中涉及磷酸化和去磷酸化，存在于真核細(xì)胞膜上。V型質(zhì)子泵；存在于溶酶體小膜和植物液泡膜上，轉(zhuǎn)運(yùn)H +過程中不形成磷酸化的中間體。H + -ATP酶；存在于線粒體內(nèi)膜、植物類囊體膜和多數(shù)細(xì)菌質(zhì)膜上，它以相反的方式來發(fā)揮作用，即沿濃度梯度運(yùn)動，將所釋放的能量貯存在ATP中。(三)協(xié)同運(yùn)輸協(xié)同運(yùn)輸是一類由Na + K +泵或（H +泵）與載體蛋白協(xié)

38、同作用，靠間接消耗ATP所完成的主動運(yùn)輸方式。物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)所需的直接能量來自膜兩側(cè)離子濃度梯度。動物細(xì)胞常利用膜兩側(cè)Na +的濃度來驅(qū)動。植物細(xì)胞和細(xì)菌常利用H +濃度來驅(qū)動。根據(jù)物質(zhì)運(yùn)輸方向與離子沿濃度梯度轉(zhuǎn)運(yùn)方向，協(xié)同運(yùn)輸又可分為兩種，共運(yùn)輸：是物質(zhì)運(yùn)輸方向與離子轉(zhuǎn)運(yùn)方向相同。對向運(yùn)輸：是指物質(zhì)運(yùn)動方向與離子轉(zhuǎn)移方向相反。(四)物質(zhì)的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)與膜電位(生理上講)物質(zhì)的跨膜運(yùn)輸，維持了膜兩側(cè)的濃度分布，對離子來說，同時形成了膜兩側(cè)的電位差，即膜電位，對于可興奮細(xì)胞，膜電位具有重要的生物學(xué)意義。三、胞吞作用與胞吐作用真核細(xì)胞通過胞吞作用與吞噬作用完成大分子顆粒性物質(zhì)的跨膜運(yùn)輸。屬主動運(yùn)輸。(一)胞

39、飲作用與吞噬作用胞吞作用是通過細(xì)胞質(zhì)膜內(nèi)陷形成囊泡將外界物質(zhì)裹進(jìn)并輸入細(xì)胞的過程。根據(jù)胞吞物質(zhì)的大水，胞吞作用又可分為胞飲作用吞噬作用。兩者的區(qū)別有三點(diǎn)：內(nèi)吞泡的大水不同：胞飲泡的直徑為150nm，吞噬泡的直徑常大于250nm ；胞飲作用是一個連續(xù)發(fā)生的過程，所有真核細(xì)胞都能通過胞飲作用連續(xù)攝入溶液和分子；而大的顆粒性物質(zhì)則通過特殊的吞噬細(xì)胞攝入，吞噬作用首先需要被吞噬物與細(xì)胞表面結(jié)合并激活細(xì)胞表面受體，因此是一個信號觸發(fā)過程。胞吞泡形成機(jī)制不同：胞飲泡的形成需有網(wǎng)格蛋白、接合素蛋白和結(jié)合蛋白等的參與。吞噬泡的形成需要微絲及其結(jié)合蛋白參與，在多細(xì)胞動物體內(nèi)，只有某些特化細(xì)胞才有吞噬功能。(二)

40、受體介導(dǎo)的胞吞作用根據(jù)胞吞的物質(zhì)是否有專一性，胞吞作用有兩種類型受體介導(dǎo)的胞吞作用：被轉(zhuǎn)運(yùn)的物質(zhì)和細(xì)胞質(zhì)膜上專一的受體相結(jié)合后引誘發(fā)的胞吞作用，如膽固醇的跨膜運(yùn)轉(zhuǎn)。非特異性的胞吞作用。受體介導(dǎo)的胞吞作用是大多數(shù)動物細(xì)胞通過網(wǎng)格蛋白有被小泡從胞外液攝取特定大分子的有效途徑。(三)胞吐作用是將細(xì)胞內(nèi)的分泌泡或其它膜泡中的物質(zhì)通過細(xì)胞質(zhì)膜運(yùn)出細(xì)胞的過程。所有真核細(xì)胞都有組成型胞吐途經(jīng)，特化的分泌細(xì)胞還有一種調(diào)節(jié)型胞吐途經(jīng)。無論是胞吞作用或是胞吐作用。都是通過膜泡運(yùn)輸?shù)姆绞竭M(jìn)入的，這種動態(tài)過程對質(zhì)膜更新和維持細(xì)胞的生存與生長是必要的。胞吞作用和胞吐作用都涉及到膜的融合，現(xiàn)在已鑒定有膜融合蛋白參與催化，

41、以克服質(zhì)膜融合過程中的能量障礙。第二節(jié)細(xì)胞通訊與信號傳遞一、細(xì)胞通訊與細(xì)胞識別(一)細(xì)胞通訊細(xì)胞通訊是指一個細(xì)胞發(fā)出的信息通過介質(zhì)傳遞到另一個細(xì)胞產(chǎn)生反應(yīng)的過程。細(xì)胞以三種方式進(jìn)行通訊：分泌化學(xué)信號；直接接觸；間隙連接。細(xì)胞分泌化學(xué)信號的作用方式可分：內(nèi)分泌旁分泌自分泌通過化學(xué)突觸傳遞信號分子。細(xì)胞間直接接觸，通過與質(zhì)膜結(jié)合的信號分子與其相接觸的靶細(xì)胞質(zhì)膜上的受體分子相結(jié)合，影響其他細(xì)胞。(二)細(xì)胞識別與信號通路細(xì)胞通過其表面的受體與胞外信號分子選擇性地相互作用，最終導(dǎo)致細(xì)胞整體的生物學(xué)效應(yīng)的過程。細(xì)胞接受外界信號，將胞外信號轉(zhuǎn)為胞內(nèi)信號，最終調(diào)節(jié)特定基因的表達(dá)，引起細(xì)胞的應(yīng)答反應(yīng)，這是細(xì)胞信

42、號系統(tǒng)的主線，這種反應(yīng)系列稱之為細(xì)胞信號通路。 (三)細(xì)胞的信號分子與受體1、細(xì)胞的信號分子根據(jù)其溶解性通?？煞譃橛H脂性和親水性兩類：親脂性信號分子，主要代表是甾類激素和甲狀腺素。親水性信號分子，包括神經(jīng)遞質(zhì)、生長因子、局部化學(xué)遞質(zhì)和大多數(shù)激素。2、受體是一種能夠識別和選擇性地結(jié)合某種配體（信號分子）的大分子，與配體結(jié)合后，產(chǎn)生化學(xué)的或物理的信號，以啟動一系列過程，最終表現(xiàn)為生物學(xué)效應(yīng)。受體多為糖蛋白，一般包括兩個功能區(qū)域，與配體結(jié)合的區(qū)域及產(chǎn)生效應(yīng)的區(qū)域。根據(jù)靶細(xì)胞上受體存在的部位，可將受體分為細(xì)胞內(nèi)受體和細(xì)胞表面受體。3、第二信使與分子開關(guān)第二信使第一信使與受體作用后在細(xì)胞內(nèi)最早產(chǎn)生的信號

43、物質(zhì)稱為第二信使。目前公認(rèn)的第二信使有cAMP、三磷酸肌醇(IP3)、二?；视?DG)等，Ca2+是磷脂酰肌醇信號通路的“第三信使”。分子開關(guān)細(xì)胞內(nèi)信號傳遞蛋白質(zhì)(開關(guān)蛋白)可分為兩類：一類開關(guān)蛋白的活性由激酶使之磷酸化而開啟，由磷酸酶使之去磷酸化而關(guān)閉；另一類主要開關(guān)蛋白由GTP結(jié)合蛋白組成，結(jié)合GTP而活化，結(jié)合GDP而失活。二、通過細(xì)胞內(nèi)受體介導(dǎo)的信號傳遞細(xì)胞信號傳遞的通路隨信號的受體存在的部位不同分為兩類：一是親脂性小分子通過與細(xì)胞內(nèi)受體結(jié)合傳遞信號；二是通過細(xì)胞表面受體介導(dǎo)的信號傳遞。通過細(xì)胞內(nèi)受體介導(dǎo)的信號傳遞親脂性信號分子（如甾類激素）可直接跨越質(zhì)膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，與細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的受體

44、形成激素復(fù)合物，并穿過核膜孔進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)結(jié)合于特異的DNA序列調(diào)節(jié)基因表達(dá)。這一過程可分為初級反應(yīng)階段和延遲反應(yīng)階段。三、通過細(xì)胞表面受體介導(dǎo)的信號跨膜傳遞親水性化學(xué)信號分子（包括神經(jīng)遞質(zhì)、蛋白激素、生長因子等）一般不能直接進(jìn)入細(xì)胞。而是通過與細(xì)胞表面特異受體的結(jié)合，進(jìn)行信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，繼而對靶細(xì)胞產(chǎn)生效應(yīng)。根據(jù)信號傳導(dǎo)機(jī)制和受體蛋白類型的不同，細(xì)胞表面受體分屬三大家族：離子通道偶聯(lián)的受體；G蛋白偶聯(lián)的受體；酶偶聯(lián)的受體。(一)離子通道偶聯(lián)的受體離子通道偶聯(lián)的受體是細(xì)胞表面由多亞基組成的受體離子通道復(fù)合體，本身既有信號結(jié)合位點(diǎn)，又是離子通道，其跨膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)無需中間步驟。主要存在于神經(jīng)細(xì)胞或其他可興奮

45、細(xì)胞間的突觸信號傳遞。神經(jīng)遞質(zhì)通過于受體的結(jié)合開閉離子通道，改變質(zhì)膜的離子通透性，從改變突觸后細(xì)胞的興奮。受體對配體具有特異性選擇，是具有同源性的跨膜蛋白。(二) G蛋白偶聯(lián)的受體G蛋白偶聯(lián)的受體是細(xì)胞表面由單條多肽經(jīng)7次跨膜形成的受體。該信號通路是指配體受體復(fù)合物與靶蛋白的作用要通過與G蛋白的偶聯(lián)，在細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生第二信使，從而將胞外信號跨膜傳遞到細(xì)胞內(nèi)。G蛋白是三聯(lián)體GTP結(jié)合調(diào)節(jié)蛋白，由a、b、g三個亞基組成。（參下圖）由G蛋白偶聯(lián)受體所介導(dǎo)的細(xì)胞信號通路，根據(jù)產(chǎn)生第二信使的不同，又可分cAMP信號通路和磷脂酰肌醇信號通路。1、cAMP信號通路信號分子與受體結(jié)合后，通過與GTP結(jié)合的調(diào)節(jié)蛋白

46、(G蛋白)的耦聯(lián)，在細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生第二信使，從而引起細(xì)胞的應(yīng)答反應(yīng)。cAMP信號通路由質(zhì)膜上的5種成分組成：激活型激素受體(Rs)；抑制型激素受體(Ri)；與GDP結(jié)合的活化型調(diào)節(jié)蛋白(Gs)；與GDP的抑制型調(diào)節(jié)蛋白(Gi)；腺苷酸環(huán)化酶( C )。（參下圖） (1) Rs 與Ri Rs與Ri位于質(zhì)膜外表面，識別細(xì)胞外信號分子并與之結(jié)合，受體有兩個區(qū)域，一個與激素作用，另一個與G蛋白作用。 (2) Gs與Gi G蛋白也稱耦聯(lián)蛋白或信號轉(zhuǎn)換蛋白，它將受體和腺苷酸環(huán)化酶耦聯(lián)起來，使細(xì)胞外信號跨膜轉(zhuǎn)換為細(xì)胞內(nèi)信號，即第二信使cAMP。（參下圖） (3)腺苷酸環(huán)化酶cAMP信號通路的催化單位是結(jié)合在質(zhì)膜

47、上的腺苷酸環(huán)化酶，它催化ATP生成cAMP。cAMP信號通路的主要效應(yīng)是激活靶酶和開啟基因表達(dá)，是通過蛋白激酶A完成的。激活靶酶：通過對蛋白激酶A的活化進(jìn)而使下游靶蛋白磷酸化，從而影響細(xì)胞代謝和細(xì)胞行為是細(xì)胞快速答應(yīng)胞外信號的過程。（參下圖）開啟基因表達(dá)：是一類細(xì)胞緩慢應(yīng)答胞外信號的過程，這就是cAMP信號通路對細(xì)胞基因表達(dá)的影響。該信號途徑涉及的反應(yīng)鏈可表示為：激素G蛋白偶聯(lián)受體G蛋白腺苷酸環(huán)化酶cAMP cAMP依賴的蛋白激酶A 基因調(diào)控蛋白基因轉(zhuǎn)錄。（P139圖5-28）2、磷脂酰肌醇信號通路( 肌醇磷脂信號通路)外界信號分子與受體結(jié)合，使質(zhì)膜上的 4,5二磷酸磷脂酰肌醇(PIP2)水解

48、成 1，4,5三磷酸肌醇(IP3)和二酰苷油(DG )兩個第二信使。磷脂酰肌醇信號通路的最大特點(diǎn)是胞外信號被膜受體接受后，同時產(chǎn)生兩個胞內(nèi)信使，分別啟動兩個信號傳遞途徑即IP3Ca 2+和DGPKC途徑，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞對外界的應(yīng)答，因此把這一信號系統(tǒng)稱之為“雙信使系統(tǒng)”。（P140圖5-29）IP3是一種水溶性分子，在細(xì)胞內(nèi)動員內(nèi)源Ca 2+，使胞質(zhì)中內(nèi)源Ca 2+濃度提高。Ca 2+通過鈣調(diào)蛋白引起細(xì)胞反應(yīng)；DG激活蛋白激酶C(PKC)。在許多細(xì)胞中，PKC的活化可增強(qiáng)特殊基因轉(zhuǎn)錄。有兩條途徑：PKC激活一條蛋白激酶的級聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致基因調(diào)控蛋白的磷酸化和激活；PKC的活化，導(dǎo)致一種抑制蛋白的磷酸化

49、，使基因調(diào)控蛋白擺脫抑制狀態(tài)釋放出來，進(jìn)入細(xì)胞核，刺激特殊基因的轉(zhuǎn)錄。(圖531)(三)與酶連接的受體與酶連接的細(xì)胞表面受體又稱催化性受體，一旦被配基活化即具有酶的活性。包括5類：受體酪氨酸激酶；受體絲氨酸激酶/ 蘇氨酸激酶；受體酪氨酸磷酸酯酶；受體鳥苷酸環(huán)化酶；酪氨酸蛋白激酶聯(lián)系的受體。1、受體酪氨酸激酶(RTKS)及RTKRas蛋白信號受體酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinase，RTKs)又稱酪氨酸蛋白激酶受體，是細(xì)胞表面一大類重要受體家族，包括6個亞族。CTKs的多肽鏈只跨膜一次，胞外區(qū)是結(jié)合配體的結(jié)構(gòu)域，胞內(nèi)區(qū)肽段是酪氨酸蛋白激酶的催化部位，并具有自磷酸化位點(diǎn)。自

50、磷酸化的結(jié)果是激活了受體的酪氨酸蛋白激酶活性，磷酸化的酪氨酸殘基可被含有SH2結(jié)構(gòu)域的胞內(nèi)信號所識別并與之結(jié)合，由此啟動信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。RTKRas蛋白信號通路活化的RTK可以結(jié)合多種帶有SH2 結(jié)構(gòu)域的結(jié)合蛋白或信號蛋白，其中一類是接頭蛋白；另一類是在信號通路中有關(guān)的酶，如GTP酶活化蛋白(GTPase activating protein，GAP)、蛋白磷酸脂酶(SyP)等。這兩類RTK結(jié)合蛋白的結(jié)構(gòu)和功能不同，但它們都具有兩個高度保守而無催化活性的結(jié)構(gòu)域即SH2和SH3。 Ras蛋白是ras基因表達(dá)的產(chǎn)物，具有GTPase活性，分布于質(zhì)膜胞質(zhì)一側(cè)，結(jié)合GTP時為活化態(tài)，結(jié)合GDP時為失活態(tài)。所

51、以Ras蛋白具有分子開關(guān)的作用。GDP的釋放需要鳥苷酸釋放因子(GRF)的促進(jìn)；Ras蛋白從活化態(tài)到失活態(tài)的轉(zhuǎn)變，則要GTP酶活化蛋白(GAP)的促進(jìn)；所以GRF和GAP都與Ras蛋白參與的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)。GAP因具有SH2結(jié)構(gòu)域可直接與活化的受體蛋白結(jié)合。GRF在SH3結(jié)構(gòu)域，但沒有SH2結(jié)構(gòu)域，因此需要接頭蛋白連接來活化Ras。 RTKRas信號通路可概括為如下模式：配體 RTK adapdor GRF Ras Raf (MAPKKK) MAPKK MAPK 進(jìn)入細(xì)胞核其他激酶或基因調(diào)控蛋白(轉(zhuǎn)錄因子)的磷酸化修飾。2、細(xì)胞表面其他與酶偶聯(lián)的受體(1)受體絲氨酸/蘇氨酸激酶(2)受體酪氨酸磷

52、酸酯酶(3)受體鳥苷酸環(huán)化酶(4)酪氨酸蛋白激酶聯(lián)系的受體四、由細(xì)胞表面整聯(lián)蛋白介導(dǎo)的信號傳遞整聯(lián)蛋白是細(xì)胞表面的跨膜蛋白(異二聚體)，不僅介導(dǎo)細(xì)胞附著到胞外基質(zhì)上，更重要的是提供了一種細(xì)胞外環(huán)境調(diào)控細(xì)胞內(nèi)活性的渠道。整聯(lián)蛋白與胞外配體相互作用，可產(chǎn)生多種信號，如Ca+的釋放進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)，肌醇第二信使的合成，胞內(nèi)蛋白酪氨酸殘基的磷酸化等。細(xì)胞與胞外基質(zhì)之間形成的粘著斑具有兩個方面的功能：一是機(jī)械結(jié)構(gòu)功能，粘著斑的裝配也是受信號控制的裝配，通過肌動蛋白纖維和多種肌動蛋白的結(jié)合蛋白而完成；二是信號傳遞功能，通過酪氨酸激酶Src和粘著斑激酶(FAK)而實(shí)現(xiàn)。通過粘著斑由整聯(lián)蛋白介導(dǎo)的信號傳遞基通路有兩

53、條： (1)由細(xì)胞表面到細(xì)胞核的信號通路。(圖537) (2)由細(xì)胞表面到細(xì)胞質(zhì)核糖體的信號通路。粘著斑激酶FAK的酪氨酸殘基被磷酸化后，活化PI(3)K?；罨腜I(3)K催化產(chǎn)生兩種磷脂酰肌醇衍生物：PI-3,4-二磷酸和PI-3,4，5-三磷酸，兩者活化激酶P70S6K，活化的磷酸化核糖體小單位的S6蛋白；含有磷酸化S6的核糖體被優(yōu)先利用，合成細(xì)胞從G1期到S期所需的某些蛋白。五、細(xì)胞信號傳遞的基本特征與蛋白激酶的網(wǎng)絡(luò)整合信息 (一)細(xì)胞信號傳遞的基本特征 (1)多途徑、多層次的細(xì)胞信號通路具有收斂或發(fā)散的特點(diǎn)。 (2)細(xì)胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)具有專一性又有作用機(jī)制的相似性。 (3)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程具

54、有信號放大作用，但這種放大作用又必需受到適度控制，這表現(xiàn)為信號放大作用與信號所啟動的作用的終止并存。 (4)當(dāng)細(xì)胞長期暴露在某種形式的刺激下，細(xì)胞對刺激的反應(yīng)將會降低，這就是細(xì)胞進(jìn)行適應(yīng)。 (二) 蛋白激酶的網(wǎng)絡(luò)整合信息第六章細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)與細(xì)胞內(nèi)膜系統(tǒng)真核細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)復(fù)雜，包括細(xì)胞器、細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)和內(nèi)含物等。細(xì)胞內(nèi)膜系統(tǒng)是指在結(jié)構(gòu)、功能或發(fā)生上相關(guān)的膜圍繞的細(xì)胞器或細(xì)胞結(jié)構(gòu)，主要指內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、溶酶體和分泌泡等。第一節(jié) 細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)一、細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)的涵義細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)指細(xì)胞質(zhì)中除去細(xì)胞器和內(nèi)膜系統(tǒng)留下的無一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的膠狀物質(zhì)。有的學(xué)者稱為胞質(zhì)溶膠。主要含有與中間代謝有關(guān)的數(shù)千種酶類以及與維持細(xì)胞

55、形態(tài)和物質(zhì)運(yùn)輸有關(guān)的細(xì)胞質(zhì)骨架結(jié)構(gòu)。已有的證據(jù)顯示，細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)可能是一個高度有序且又不斷變化的結(jié)構(gòu)體系，細(xì)胞骨架纖維貫穿其中。二、細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)的功能1、許多中間代謝過程在細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中進(jìn)行。包括糖酵解過程、磷酸戊糖途徑、糖醛酸途徑、糖原合成與分解以及蛋白質(zhì)與脂酸肪的合成等。2、細(xì)胞質(zhì)骨架是細(xì)胞基質(zhì)的主要結(jié)構(gòu)成分，與維持細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞運(yùn)動、物質(zhì)運(yùn)輸及能量傳遞有關(guān)。3、與蛋白質(zhì)的修飾及選擇性降解有關(guān)。（1）蛋白質(zhì)的修飾在細(xì)胞質(zhì)中發(fā)生的蛋白質(zhì)修飾的類型主要有：輔酶或輔基與酶的共價結(jié)合；磷酸化與去磷酸化，用以調(diào)節(jié)很多蛋白質(zhì)的生物活性；糖基化；對某些蛋白質(zhì)的N端進(jìn)行甲基化修飾；?；?；（2）控制蛋白質(zhì)的壽命（3）降解變性和錯誤折疊的蛋白質(zhì)（4）幫助變性或錯誤折疊的蛋白質(zhì)重新折疊形成正確的分子構(gòu)象最近有人提出細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)主要是由微管、微絲和中等纖維等形成的相互聯(lián)系的結(jié)構(gòu)體系。其中蛋白質(zhì)和其它分子以凝聚狀態(tài)或暫時的凝聚狀態(tài)存在，它與周圍溶液中的分子處于動態(tài)平衡。第二節(jié) 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ER）內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是由封閉的膜系統(tǒng)及圍成的腔形成的互相溝通的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。在不同類型細(xì)胞中或同一細(xì)胞不同