儀器分析實驗-紫外可見分光光度法（CAI） - 廣西民族

1、2022-3-16指導老師：馬少妹指導老師：馬少妹實驗實驗1 1 紫外吸收光譜的測繪紫外吸收光譜的測繪實驗實驗2 2 鑒定和識別有機化合鑒定和識別有機化合 物中的電子躍遷類型物中的電子躍遷類型實驗實驗3 3 紫外分光光度法同時測紫外分光光度法同時測 定維生素定維生素C C和維生素和維生素E E實驗實驗4 4 三氯苯酚存在時苯三氯苯酚存在時苯 酚含量的紫外分光酚含量的紫外分光 光度法測定光度法測定實驗實驗5 5 紫外可見吸收光譜法紫外可見吸收光譜法 測定雙組分混合物測定雙組分混合物2022-3-161.1.每每個實驗于個實驗于下下個實驗個實驗之前交，每之前交，每人人交一份。交一份。報報告要告要書

2、寫整齊書寫整齊清楚。清楚。 2.2.報報告不可剽告不可剽竊竊或或抄襲抄襲他人之作，更不可造假他人之作，更不可造假數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)。3.3.報報告以告以A4A4大小大小紙張紙張撰撰寫寫，格式如下，格式如下: : 封面封面 : 記載實驗序號記載實驗序號、實驗項實驗項目、目、實驗實驗日期及日期及報報告人姓名。告人姓名。內(nèi)容內(nèi)容 : 按按“前言前言實驗實驗方法及步方法及步驟驟實驗實驗結(jié)果結(jié)果 討論討論結(jié)語結(jié)語參考文獻參考文獻附附錄錄”等。等。(I)在在“前言前言”(或或“緒論緒論”)部份，扼要敘述部份，扼要敘述實驗實驗目的，所使用之目的，所使用之儀器儀器的特的特性，分析的基本原理，性，分析的基本原理，理論理

3、論背景等，背景等，并并用用幾幾句句話歸納話歸納所作的所作的實驗項目實驗項目及所及所獲獲得的得的結(jié)結(jié)果。果。 儀器分析實驗報告寫法2022-3-16( (II)II)在在”實驗實驗方法及步方法及步驟驟”部份部份則則列述使用之列述使用之儀器設備儀器設備，試試劑與劑與材料以及材料以及實驗實驗步步驟驟。 ( (III)III)在在“實驗結(jié)實驗結(jié)果果”部分，部分，報報告你告你們們所所獲獲得的得的結(jié)結(jié)果，果，這些結(jié)這些結(jié)果果可能是可能是經(jīng)過計算經(jīng)過計算或或換換算之算之后后的的數(shù)據(jù)數(shù)據(jù)，以，以圖圖、表等方式呈、表等方式呈現(xiàn)現(xiàn)，不不用用把原始把原始數(shù)據(jù)數(shù)據(jù)原封不原封不動動的搬出來，原始的搬出來，原始數(shù)據(jù)數(shù)據(jù)最

4、好放在最好放在“附附錄錄”。數(shù)據(jù)數(shù)據(jù)的整理及的整理及計算過程計算過程要敘述清楚，同時要注意要敘述清楚，同時要注意單單位位，別遺別遺落了。落了。( (IV)IV)接下來在接下來在“討論討論”部分，就是解部分，就是解釋釋所所獲獲得得實實驗結(jié)驗結(jié)果。要把果。要把結(jié)結(jié)果融入理果融入理理論理論面，面，討論討論所得到的所得到的結(jié)結(jié)果是不是果是不是如所如所預期預期的，的，還還有有這這些些結(jié)結(jié)果是否符合理果是否符合理論論推推斷斷。討論討論一下所一下所得得實驗實驗結(jié)果有何功用，能夠回答結(jié)果有何功用，能夠回答什么樣什么樣的的問題問題，或者另外又，或者另外又產(chǎn)生產(chǎn)生了了什么問題什么問題值得值得繼續(xù)繼續(xù)探探討討。還還

5、有探有探討實驗時討實驗時有有無無瑕疵瑕疵2022-3-16是否影是否影響響到到實驗結(jié)果實驗結(jié)果的的準確準確性性? ? 數(shù)據(jù)數(shù)據(jù)的精的精確確性、性、準確準確性、再性、再現(xiàn)現(xiàn)性如何性如何? ? 以上等等都可以以上等等都可以寫寫。在。在“討論討論”這這部分你部分你會會指到指到整理整理于于“實驗結(jié)果實驗結(jié)果”中的中的圖圖表，表，請請注意每注意每張圖張圖表都要表都要編號編號，并并且有且有標題標題，如，如“圖圖一一 K2Cr2O7的的UVUV吸收光吸收光譜圖譜圖”。圖圖的的標標題題放在放在圖圖下方，表的下方，表的標題則統(tǒng)一標題則統(tǒng)一放在表的上方。若有需要，放在表的上方。若有需要，圖圖表之表之標題標題底下可

6、以底下可以補補充說明充說明獲獲得得該結(jié)該結(jié)果的一些果的一些實驗條實驗條件。件。(V)在在”結(jié)語結(jié)語”部分部分簡簡短回短回顧實驗顧實驗的的結(jié)結(jié)果及心得，不要太果及心得，不要太長長。(VI)在在報報告中，若有引用告中，若有引用束束籍文籍文獻獻的話，除了在引用的地方依的話，除了在引用的地方依次按順次按順序序注注明文明文獻編號獻編號，如，如1、2之外，之外，該該文文獻獻之出之出處處，請請在在“參參考文考文獻獻”這里詳細這里詳細說明。說明。(VII)“附附錄錄”部分，把原始部分，把原始數(shù)據(jù)數(shù)據(jù)或其他或其他參參考考資資料整理在料整理在這里這里。(原始原始數(shù)據(jù)數(shù)據(jù)有教有教師師的的見簽見簽名名) 。 ( 20

7、22-3-16實驗實驗1 紫外吸收光譜的測繪紫外吸收光譜的測繪 1目的目的掌握紫外吸收光譜的繪制方法。利用吸收光譜進行化合物的掌握紫外吸收光譜的繪制方法。利用吸收光譜進行化合物的鑒定，并了解溶劑性質(zhì)對吸收光譜的影響。鑒定，并了解溶劑性質(zhì)對吸收光譜的影響。2原理原理 紫外吸收光譜為有機化合物的定性分析提供了有用的信息，紫外吸收光譜為有機化合物的定性分析提供了有用的信息，其方法是將未知化合物的光譜與純的已知化合物的光譜圖進其方法是將未知化合物的光譜與純的已知化合物的光譜圖進行比較，兩者一致就可認為它們在化學上大致是相同的。行比較，兩者一致就可認為它們在化學上大致是相同的。 比較光譜圖的方法是將未知

8、試樣和標準樣品以相同濃度配比較光譜圖的方法是將未知試樣和標準樣品以相同濃度配制在相同的溶劑中，再分別測繪吸收光諸，比較兩者是否一制在相同的溶劑中，再分別測繪吸收光諸，比較兩者是否一致。致。2022-3-16也可將未知試樣的吸收光譜圖與標準圖譜（如也可將未知試樣的吸收光譜圖與標準圖譜（如Sadtler紫外光紫外光詣圖相比較。有時，相同的紫外吸收光譜，并不是兩種化合物詣圖相比較。有時，相同的紫外吸收光譜，并不是兩種化合物完全相同的充分證據(jù)。雖然分子結(jié)構(gòu)不同，只要具有相同的發(fā)完全相同的充分證據(jù)。雖然分子結(jié)構(gòu)不同，只要具有相同的發(fā)色團，它們的最大吸收波長色團，它們的最大吸收波長max相同。然而，其摩爾

9、吸光系數(shù)相同。然而，其摩爾吸光系數(shù)max值是有差別的。因此，必須比較兩吸收光譜的值是有差別的。因此，必須比較兩吸收光譜的max和和max數(shù)數(shù)值是否一致。對于有許多吸收峰的光譜圖，還可規(guī)定幾個吸收值是否一致。對于有許多吸收峰的光譜圖，還可規(guī)定幾個吸收峰的峰的max之間的比值進行比較。通過未知試樣與標準樣品的光之間的比值進行比較。通過未知試樣與標準樣品的光譜圖上這些吸收特征的比較，若它們完全相同，那么被鑒定物譜圖上這些吸收特征的比較，若它們完全相同，那么被鑒定物質(zhì)與標準樣品可能是同一種物質(zhì)，再根據(jù)其它資料進行確證。質(zhì)與標準樣品可能是同一種物質(zhì)，再根據(jù)其它資料進行確證。在沒有紫外吸收峰的物質(zhì)中檢查有

10、高吸光系數(shù)的雜質(zhì)是紫外吸在沒有紫外吸收峰的物質(zhì)中檢查有高吸光系數(shù)的雜質(zhì)是紫外吸收光譜的重要用途之一。如乙醇中收光譜的重要用途之一。如乙醇中2022-3-16雜質(zhì)苯的檢查，只需測定雜質(zhì)苯的檢查，只需測定256nm處有無苯吸收峰即可。因為處有無苯吸收峰即可。因為在這一波段，主成份乙醇無吸收。在繪制比較用的紫外吸收在這一波段，主成份乙醇無吸收。在繪制比較用的紫外吸收光譜圖時，必須采用相同溶劑，以排除溶劑的極性對吸收光光譜圖時，必須采用相同溶劑，以排除溶劑的極性對吸收光譜的影響。同時還應注意譜的影響。同時還應注意pH、溫度等因素的影響。在實際使溫度等因素的影響。在實際使用時，應注意溶劑的純度，最好使用

11、光譜純等級的溶劑，否用時，應注意溶劑的純度，最好使用光譜純等級的溶劑，否則應事先除去溶劑中含有的雜質(zhì)。則應事先除去溶劑中含有的雜質(zhì)。 3儀器與試劑儀器與試劑916型紫外型紫外-可見分光光度計可見分光光度計容量瓶若干。容量瓶若干。CH3CCHCCH3CH3O乙醇、異丙叉丙酮乙醇、異丙叉丙酮（ （ () 、正已烷、氯仿、甲醇、正已烷、氯仿、甲醇、鄰甲苯酚、鹽酸鄰甲苯酚、鹽酸0.10.1mol/Lmol/L、 2022-3-16氫氧化鈉氫氧化鈉0.10.1mol/L (mol/L (以上試劑均使用光譜純，或經(jīng)提純處理以上試劑均使用光譜純，或經(jīng)提純處理) )4 4實驗步驟實驗步驟未知芳香族化合物的鑒定

12、未知芳香族化合物的鑒定 A取未知試樣的水溶液取未知試樣的水溶液(用去離子水配制用去離子水配制)；B用用1cm石英液槽，以去離子水作參比溶液，在石英液槽，以去離子水作參比溶液，在200360nm范圍內(nèi)測定吸收光譜。范圍內(nèi)測定吸收光譜。 乙醇中雜質(zhì)苯的檢出乙醇中雜質(zhì)苯的檢出 用用1厘米石英液槽，以純乙醇作參比液，在厘米石英液槽，以純乙醇作參比液，在220280nm波波長范圍內(nèi)測繪乙醇試樣的吸收光譜。長范圍內(nèi)測繪乙醇試樣的吸收光譜。溶劑性質(zhì)對吸收光譜的影響溶劑性質(zhì)對吸收光譜的影響 A配制濃度為配制濃度為0.142gL的鄰甲苯酚溶液，其溶劑是：的鄰甲苯酚溶液，其溶劑是：(I)在在2022-3-160.

13、1mol/L鹽酸水溶液中；鹽酸水溶液中；(II)在中性乙醇中；在中性乙醇中；(III)在在0.1mol/L氫氫氧化鈉水溶液中。氧化鈉水溶液中。B配制濃度為配制濃度為5.2mgL異丙叉丙酮溶液，其溶劑分別為正己異丙叉丙酮溶液，其溶劑分別為正己烷、氯仿、甲醇、去離子水。烷、氯仿、甲醇、去離子水。C用用lcm有蓋石英液槽，以相應的溶劑作參比液，測繪各溶液有蓋石英液槽，以相應的溶劑作參比液，測繪各溶液在在210350nm的吸收光譜。的吸收光譜。 5數(shù)據(jù)及處理數(shù)據(jù)及處理（1）記錄未知化合物的吸收光譜及實驗條件。確定峰值波長，）記錄未知化合物的吸收光譜及實驗條件。確定峰值波長，計算峰值波長處計算峰值波長處

14、max值，與標準光譜圖進行比較，指出它可能值，與標準光譜圖進行比較，指出它可能是什么化合物，并計算其摩爾吸光系數(shù)。是什么化合物，并計算其摩爾吸光系數(shù)。（2）記錄乙醇試樣的吸收光譜以及實驗條件。從吸收光譜鑒）記錄乙醇試樣的吸收光譜以及實驗條件。從吸收光譜鑒2022-3-16別乙醇試樣中是否有苯存在。別乙醇試樣中是否有苯存在。（3）記錄各個鄰甲苯酚溶液的吸收光譜及實驗條件。比較吸）記錄各個鄰甲苯酚溶液的吸收光譜及實驗條件。比較吸收光譜有何變化，結(jié)論如何？收光譜有何變化，結(jié)論如何？（4）記錄各個異丙叉丙酮溶液的吸收光譜及實驗條件，比較）記錄各個異丙叉丙酮溶液的吸收光譜及實驗條件，比較吸收峰的波長隨溶

15、劑極性的變化，結(jié)論如何？吸收峰的波長隨溶劑極性的變化，結(jié)論如何？6思考題思考題 1、試樣溶液濃度過大或過小，對測量有何影響？應如何調(diào)整？、試樣溶液濃度過大或過小，對測量有何影響？應如何調(diào)整？2、狹縫寬度大小對吸收光譜的輪廓、峰值波長的位置及吸光、狹縫寬度大小對吸收光譜的輪廓、峰值波長的位置及吸光系數(shù)有何影響系數(shù)有何影響? 如何選擇狹縫寬度？如何選擇狹縫寬度？ （復旦大學化學系儀器分析實驗編寫組編，儀器分析實驗P40）2022-3-16實驗實驗2 2 鑒定和識別有機化合物中的電子躍遷類型鑒定和識別有機化合物中的電子躍遷類型 1實驗目的實驗目的（1）熟悉有機化合物中幾種主要的電子躍遷類型。）熟悉有

16、機化合物中幾種主要的電子躍遷類型。（2）了解環(huán)境對體系的影響。）了解環(huán)境對體系的影響。2方法原理方法原理當分了中含有兩個或兩個以上的生色團時，它們之間的相對當分了中含有兩個或兩個以上的生色團時，它們之間的相對位置將會影響分子的吸收帶，其一般規(guī)律如下：位置將會影響分子的吸收帶，其一般規(guī)律如下：1）當分子中兩個生色團被一個以上的碳原子分開時，產(chǎn)生的）當分子中兩個生色團被一個以上的碳原子分開時，產(chǎn)生的吸收等于兩個生色團單獨存在時的和；吸收等于兩個生色團單獨存在時的和；2）當分子中兩個生色團相鄰接時，其吸收波長比只有一個生）當分子中兩個生色團相鄰接時，其吸收波長比只有一個生色團時出現(xiàn)在較長波長處，且吸

17、收強度增強；色團時出現(xiàn)在較長波長處，且吸收強度增強； 2022-3-163 3）當分子中兩個生色團同時與一個碳原子相連時，其吸收情）當分子中兩個生色團同時與一個碳原子相連時，其吸收情況是上述況是上述1 1、(2)(2)兩種極端條件的中間狀態(tài)。兩種極端條件的中間狀態(tài)。 吸收峰的位置及強度隨使用的溶劑不同而異。這些影響吸收峰的位置及強度隨使用的溶劑不同而異。這些影響與溶劑的性質(zhì)、吸收帶的特征以及溶質(zhì)的性質(zhì)有關(guān)。一般說與溶劑的性質(zhì)、吸收帶的特征以及溶質(zhì)的性質(zhì)有關(guān)。一般說來，隨著溶劑極性的增加，來，隨著溶劑極性的增加， n*躍遷吸收帶向短波移動，而躍遷吸收帶向短波移動，而*躍遷吸收帶向長波移動。躍遷吸

18、收帶向長波移動。3儀器和試劑儀器和試劑916型紫外型紫外-可見分光光度計；石英比色皿可見分光光度計；石英比色皿2個。個。（1）2.010-3mol/L碘甲烷，溶劑：己烷。碘甲烷，溶劑：己烷。（2）2.010-3mol/L碘甲烷，溶劑：甲醇。碘甲烷，溶劑：甲醇。（3）1.010-2mol/L丙酮，溶劑：水。丙酮，溶劑：水。2022-3-16（4）1.010-2mol/L 2，5-己二酮，溶劑：水。己二酮，溶劑：水。（5）2.510-2mol/L亞異丙基丙酮，溶劑：己烷。亞異丙基丙酮，溶劑：己烷。（6）2.510-2mol/L甲基酮，溶劑：水。甲基酮，溶劑：水。（7）6.610-5mol/L亞異丙

19、基丙酮，溶劑：己烷。亞異丙基丙酮，溶劑：己烷。（8）6.610-5mol/L亞異丙基丙酮，溶劑：水。亞異丙基丙酮，溶劑：水。（9）4.010-3mol/L苯，溶劑：甲醇。苯，溶劑：甲醇。（10）3.110-4mol/L苯酚，溶劑：甲醇。苯酚，溶劑：甲醇。（11）3.110-4mol/L苯酚鈉，溶劑：甲醇。苯酚鈉，溶劑：甲醇。2022-3-164 4實驗步驟實驗步驟（1 1）仔細閱讀儀器操作說明書，開啟儀器。）仔細閱讀儀器操作說明書，開啟儀器。（2 2）用與該溶液對應的溶劑為參照，分別測定上述）用與該溶液對應的溶劑為參照，分別測定上述1111種溶液種溶液在在200-650200-650nmnm范

20、圍內(nèi)的吸收光譜曲線。記錄其最大吸收波長范圍內(nèi)的吸收光譜曲線。記錄其最大吸收波長maxmax和吸光波和吸光波A (A (注意：手拿比色皿時，只接觸毛玻璃一側(cè)注意：手拿比色皿時，只接觸毛玻璃一側(cè)) )。（3 3）一滴純苯在比色皿的底部，并且蓋上蓋子，讓其自然揮）一滴純苯在比色皿的底部，并且蓋上蓋子，讓其自然揮發(fā)，以空氣為參照，測定氣態(tài)苯的吸收光譜曲線，記錄發(fā)，以空氣為參照，測定氣態(tài)苯的吸收光譜曲線，記錄maxmax和和吸光波吸光波A A。5數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)處理 （1）計算）計算11種溶液的摩爾吸收系數(shù)種溶液的摩爾吸收系數(shù)max；（2）用列表形式總結(jié)所測試樣的用列表形式總結(jié)所測試樣的max、max及吸收

21、帶的躍遷類及吸收帶的躍遷類型。型。2022-3-166 6問題討論問題討論（1 1）指出碘甲烷在水和己烷中測定時，最大吸收波長相差多少）指出碘甲烷在水和己烷中測定時，最大吸收波長相差多少？（2 2）為什么在紫外）為什么在紫外- -可見光區(qū)常用水、甲醇和已烷為溶劑測定可見光區(qū)常用水、甲醇和已烷為溶劑測定吸收光譜曲線？吸收光譜曲線？（3 3）分別指出亞異基丙酮中，）分別指出亞異基丙酮中，nn* *和和* *躍遷吸收帶，躍遷吸收帶，并說明理由。并說明理由。（4 4）試推測）試推測0.10.1mol/L 2,5,8-mol/L 2,5,8-三壬酮和三壬酮和2-2-烯烯5,8-5,8-壬二酮的紫外壬二酮

22、的紫外吸收光譜曲線。吸收光譜曲線。 （5 5）共軛作用如何影響亞異丙酮的光譜？推測）共軛作用如何影響亞異丙酮的光譜？推測l-l-戊烯戊烯-1,5-1,5二烯二烯和和1,3,5-1,3,5-己三烯的光譜曲線。己三烯的光譜曲線。2022-3-16（6 6）氣態(tài)苯和溶液中苯的吸收曲線有何個同？為什么？）氣態(tài)苯和溶液中苯的吸收曲線有何個同？為什么？（7 7）助色團）助色團NHNH2 2將如何影響苯胺？質(zhì)子化作用后，產(chǎn)生的苯將如何影響苯胺？質(zhì)子化作用后，產(chǎn)生的苯胺陽離子將如何改變這種影響？胺陽離子將如何改變這種影響？（高等教育出版社 趙文寬等編，儀器分析實驗）2022-3-16實驗實驗3 3 同時測定維

23、生素同時測定維生素C C和維生素和維生素E E2實驗目的實驗目的掌握在紫外區(qū)中同時測定掌握在紫外區(qū)中同時測定個雙組分體系個雙組分體系抗壞血酸抗壞血酸(維生素維生素C)和和-生育酚生育酚(維生索維生索E)的實驗方法。的實驗方法。2儀器和試劑儀器和試劑916型紫外型紫外-可見分光光度計；可見分光光度計； ，石英比色皿，石英比色皿2只，容量瓶移和只，容量瓶移和液管若干?？箟难幔ㄒ汗苋舾?。抗壞血酸（AR）：）：0.0132gL在無水乙醇中在無水乙醇中(7.50 l0-5mol/L)；-生育酚生育酚(維生素維生素E)：0.0488g/L在無水乙醇中；在無水乙醇中；無水乙醇；未知溶液：在無水乙醇中含有抗

24、杯血酸和無水乙醇；未知溶液：在無水乙醇中含有抗杯血酸和-生育酚生育酚溶液。溶液。 2022-3-163實驗原理實驗原理在同一溶液中同的測定雙組分的原理已在第五章中介紹過?？乖谕蝗芤褐型臏y定雙組分的原理已在第五章中介紹過?？箟难岱Q為壞血酸稱為“水溶性水溶性”維生素，維生素，-生育酚稱為生育酚稱為“脂溶性脂溶性”維生維生素。但是，它們二者都溶解于無水乙醇從而能夠在紫外區(qū)測定，素。但是，它們二者都溶解于無水乙醇從而能夠在紫外區(qū)測定，因為抗壞血酸緩慢地氧化成為脫氫抗壞血酸，所以必須每天制因為抗壞血酸緩慢地氧化成為脫氫抗壞血酸，所以必須每天制備新鮮的溶液。備新鮮的溶液。-生育酚比較穩(wěn)定?？箟难岷?/p>

25、生育酚比較穩(wěn)定?？箟难岷?生育酚起抗氧生育酚起抗氧劑作用，即它們在一定時間內(nèi)能防止油脂酸敗。兩者結(jié)合一起劑作用，即它們在一定時間內(nèi)能防止油脂酸敗。兩者結(jié)合一起的效果超過單獨添加使用時的效果，因為它們在抗氧化性能方的效果超過單獨添加使用時的效果，因為它們在抗氧化性能方面是面是“協(xié)同的協(xié)同的”。由于這個原因，它們對于防護各種食品油脂。由于這個原因，它們對于防護各種食品油脂氧化是一種有效的組合試劑。氧化是一種有效的組合試劑。 2022-3-164操作步驟操作步驟制備抗壞血酸標準溶液：分別取抗壞血酸貯備液制備抗壞血酸標準溶液：分別取抗壞血酸貯備液2，3，4和和5ml于于25mL容量瓶中，用無水乙醇稀

26、釋至刻度，以同樣的方容量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，以同樣的方法制備法制備-生育酚的標準溶液，將生育酚的標準溶液，將2，3，4和和5mL-生育酚貯備生育酚貯備溶液稀釋到溶液稀釋到25mI。以無水乙醇作為參比調(diào)得以無水乙醇作為參比調(diào)得320-220nm的吸的吸收光譜。將四個抗壞血酸的光譜繪在同一個圖上。同樣，將收光譜。將四個抗壞血酸的光譜繪在同一個圖上。同樣，將四個四個-生育酚的光譜繪在同一個圖上。按同樣方法測定未知生育酚的光譜繪在同一個圖上。按同樣方法測定未知溶液的吸收光譜。溶液的吸收光譜。5數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)處理（1）繪制抗壞血酸和）繪制抗壞血酸和-生育酚的標準曲線：選擇每種物質(zhì)的生育酚的標準曲線

27、：選擇每種物質(zhì)的最大吸收波長最大吸收波長(對于抗壞血酸約為對于抗壞血酸約為246nm，對于對于-生育酚約生育酚約2022-3-16為為292nm)，以吸光度對濃度作圖。以吸光度對濃度作圖。（2）計算抗壞血酸和）計算抗壞血酸和-生育酚在最大吸收波長（生育酚在最大吸收波長（246nm和和292nm）時的摩爾吸光系數(shù)：即標準曲線圖的斜率。時的摩爾吸光系數(shù)：即標準曲線圖的斜率。（3）計算未知物中抗壞血酸和）計算未知物中抗壞血酸和-生育酚的濃度：根據(jù)吸光度生育酚的濃度：根據(jù)吸光度的加和性，聯(lián)立方程解求得。的加和性，聯(lián)立方程解求得。6思考題思考題（1）多組分同時測定的波長選擇的原則是什么？是否先要找）多組

28、分同時測定的波長選擇的原則是什么？是否先要找出各組分的線性范圍？出各組分的線性范圍？（2）進行多組分同時測定的準確度與哪些因素有關(guān)？）進行多組分同時測定的準確度與哪些因素有關(guān)？（DT索耶，W.R.海納曼, J.M.畢比 著, ） 2022-3-16實驗實驗4 三氯苯酚存在時苯酚含量的紫外分光光度法測定三氯苯酚存在時苯酚含量的紫外分光光度法測定1 1目的：掌握等吸光度測量法消除干擾的原理及實驗方法。目的：掌握等吸光度測量法消除干擾的原理及實驗方法。2 2原理：分光光度法測定多組份混合物時，通過解聯(lián)立方程原理：分光光度法測定多組份混合物時，通過解聯(lián)立方程式，可求出各組份含量。然而，對吸收光譜相互重

29、疊的兩組式，可求出各組份含量。然而，對吸收光譜相互重疊的兩組份混合物，若只要測定其中其一組份含量，可利用等吸光度份混合物，若只要測定其中其一組份含量，可利用等吸光度測量法達到目的。測量法達到目的。 對含有對含有N N和和M M兩組份的試樣，設它們兩組份的試樣，設它們的吸收光譜相互重疊，如圖的吸收光譜相互重疊，如圖6-16-1。如。如要求測定要求測定M M組組份含量而消除份含量而消除N組份的組份的干擾，則可從干擾，則可從N的吸收光譜上選擇的吸收光譜上選擇兩個波長兩個波長1、2，在這兩波長處在這兩波長處N組組份具有相等的吸光度份具有相等的吸光度 2022-3-16即對即對N N來說，不論其濃度是多

30、少，來說，不論其濃度是多少，A AN NA A11A A22=0=0。這樣，這樣，就就可從這兩個波長測得可從這兩個波長測得M M的吸光度差值的吸光度差值A AM M確定確定M M組份的含量。組份的含量。因為因為A AM M與與M M的濃度呈線性關(guān)系。這個方法就是等吸光度測定的濃度呈線性關(guān)系。這個方法就是等吸光度測定法。由上可見，所選得的波長必須滿足兩個基本條件：在這法。由上可見，所選得的波長必須滿足兩個基本條件：在這兩波長處，干擾組份應具有相同的吸光度即兩波長處，干擾組份應具有相同的吸光度即AN等于零；等于零；在這兩波長處，待測組份的吸光度差值在這兩波長處，待測組份的吸光度差值AM足夠大。足夠

31、大。為了選擇有利于測量的為了選擇有利于測量的1 1、2 2，應先分別測繪它們單一組份時應先分別測繪它們單一組份時的吸收光譜，再用作圖法確定的吸收光譜，再用作圖法確定1 1和和2 2。在待測組份在待測組份M M的吸收峰的吸收峰處或其附近選擇一測定波長處或其附近選擇一測定波長2 2，作一垂直于作一垂直于X X軸的直線，交于軸的直線，交于干擾組份干擾組份N N的吸收光譜上的某一點，再從此點畫一平行于的吸收光譜上的某一點，再從此點畫一平行于X X軸的軸的直線，在組份直線，在組份N N的吸收光譜上便可得到一個或幾個交點，的吸收光譜上便可得到一個或幾個交點，2022-3-16交點處的波長可作為參比波長交點

32、處的波長可作為參比波長1 1。當當1 1有幾個位置可供選擇時，有幾個位置可供選擇時，所選擇的所選擇的1 1應能獲得較大的待測組份的吸光度差值。應能獲得較大的待測組份的吸光度差值。本實驗中，本實驗中，2，4，6三氯苯酚水溶液和苯酚水溶液的吸收光三氯苯酚水溶液和苯酚水溶液的吸收光譜相互重疊，要求測定譜相互重疊，要求測定2，4，6三氯苯酚存在下苯酚的含量。三氯苯酚存在下苯酚的含量。3儀器與試劑儀器與試劑916型紫外型紫外-可見分光光度計；可見分光光度計； ，石英比色皿，石英比色皿2只，容量瓶只，容量瓶25毫毫升升7個，吸量管個，吸量管5毫升毫升2支，燒杯支，燒杯25毫升毫升2個。個。苯酚水溶液苯酚水

33、溶液(0.250g/L)：稱取稱取25.0毫克苯酚，用去離子水溶解，毫克苯酚，用去離子水溶解，在容量瓶中稀釋至在容量瓶中稀釋至100毫升，搖勻。毫升，搖勻。2，4，6三氯苯酚水溶三氯苯酚水溶液液(0.10gL)：稱取稱取l0毫克毫克2，4，6三氯苯酚，用去離子水三氯苯酚，用去離子水溶解，在溶解，在100毫升容量瓶中稀釋至刻度，搖勻。毫升容量瓶中稀釋至刻度，搖勻。 2022-3-164 4實驗步驟實驗步驟（1 1）苯酚系列標準溶液的配制：取五個）苯酚系列標準溶液的配制：取五個2525毫升容量瓶，分別毫升容量瓶，分別加入加入1.001.00，2.002.00，3.003.00，4.004.00，5

34、.005.00毫升濃度為毫升濃度為0.2500.250克升的苯酚水溶液，用去離子水稀釋克升的苯酚水溶液，用去離子水稀釋至刻度，搖勻。至刻度，搖勻。（2 2）苯酚水溶液及）苯酚水溶液及2 2，4 4，6 6三氯苯酚水溶液吸收光譜的繪三氯苯酚水溶液吸收光譜的繪制：分別用苯酚水溶液制：分別用苯酚水溶液(30.0(30.0mg/L)mg/L)及及2 2，4 4，6 6三氯苯酚水溶三氯苯酚水溶液液(20.0(20.0mg/L)mg/L)，在在220-350220-350nmnm波長范圍，以去離子水作參比溶波長范圍，以去離子水作參比溶液，用紫外分光光度計測繪它們的吸收光譜。得到兩條吸收液，用紫外分光光度計

35、測繪它們的吸收光譜。得到兩條吸收光譜繪于同一坐標上，選擇合適的光譜繪于同一坐標上，選擇合適的1 1及及2 2。在選擇的波長在選擇的波長1 1及及2 2處，再用處，再用2 2，4 4，6 6三氯苯酚溶液復測其吸光度是否三氯苯酚溶液復測其吸光度是否2022-3-16相等。（相等。（3 3）苯酚水溶液的標準曲線繪制及未知試樣溶液的測）苯酚水溶液的標準曲線繪制及未知試樣溶液的測定：在所選擇的測定波長及定：在所選擇的測定波長及2 2及參比波長及參比波長1 1處，用去離子水作處，用去離子水作參比溶液，分別測定苯酚系列標準溶液中含有參比溶液，分別測定苯酚系列標準溶液中含有2 2，4 4，6 6三氯三氯苯酚的

36、未知試樣溶液的吸光度。苯酚的未知試樣溶液的吸光度。5數(shù)據(jù)及處理數(shù)據(jù)及處理（1）在同一坐標上繪制苯酚水溶液及）在同一坐標上繪制苯酚水溶液及2，4，6三氯苯酚水溶三氯苯酚水溶液的吸收光譜，并選擇合適的測定波長液的吸收光譜，并選擇合適的測定波長2及參比波長及參比波長1。（2）求出系列標準溶液在兩波長處吸光度的差值求出系列標準溶液在兩波長處吸光度的差值A2-1。以以A2-1為縱坐標，苯酚水溶液的濃度為縱坐標，苯酚水溶液的濃度C為橫坐標，繪制標準曲為橫坐標，繪制標準曲線。由未知試樣溶液的線。由未知試樣溶液的A2-1值，從標準曲線上求得未知試值，從標準曲線上求得未知試樣溶液中苯酚的濃度樣溶液中苯酚的濃度(

37、mgL)。 2022-3-166 6思考題思考題（1 1）本實驗與普通的分光光度法有何異同）本實驗與普通的分光光度法有何異同? ?（2 2）如需測定未知試樣溶液中苯酚及）如需測定未知試樣溶液中苯酚及2 2，4 4，6 6三氯苯酚兩三氯苯酚兩組份的含量，應如何設計實驗組份的含量，應如何設計實驗? ?測量波長要如何選擇？測量波長要如何選擇？（復旦大學化學系儀器分析實驗編寫組編，儀器分析實驗P25）2022-3-16實驗實驗5 5 紫外吸收光譜法測定雙組分混合物紫外吸收光譜法測定雙組分混合物實驗目的實驗目的掌握用解聯(lián)立方程組的方法，同時測定吸收光譜互掌握用解聯(lián)立方程組的方法，同時測定吸收光譜互相重疊

38、的雙組分體系的實驗方法相重疊的雙組分體系的實驗方法實驗原理實驗原理各組分的吸收曲線互有重疊，可根據(jù)朗伯各組分的吸收曲線互有重疊，可根據(jù)朗伯- -比爾定律比爾定律及吸光度的加合性原則，通過適當?shù)臄?shù)學處理來進及吸光度的加合性原則，通過適當?shù)臄?shù)學處理來進行測定。具體方法行測定。具體方法：在在a a和和b b的最大吸收波長的最大吸收波長1 1及及2 2處，分別測定混合物的吸光度處，分別測定混合物的吸光度A A11、A A22，然后解聯(lián)然后解聯(lián)立方程組，求得出各組分的含量。立方程組，求得出各組分的含量。如下圖：如下圖： 2022-3-16圖 兩組分吸收光譜 （I：吸收光譜不重疊；II：二組分吸收光譜重疊

39、）2022-3-16) 1 (11111bbaababCbCAAA) 2 (22222bbaababCbCAAA在1處：在2處：式中：A1、A2為混合液a+b在1、2處吸光度；A1a、A2a是混合溶液中組分a在1、2處吸光度；A1b、A2b是混合溶液中組分b在1、2處吸光度。baba2211,首先要從已知濃度的各單獨組分吸收光譜中獲得：首先要從已知濃度的各單獨組分吸收光譜中獲得：如何求呢2022-3-16聯(lián)立求解式（聯(lián)立求解式（1 1）和（）和（2 2）組成的方程組可求得）組成的方程組可求得C Ca a、C Cb b。采用此法可求得兩種以上組分的含量。采用此法可求得兩種以上組分的含量。 儀器和

40、試劑儀器和試劑916916型紫外型紫外- -可見分光光度計（澳大利亞可見分光光度計（澳大利亞GBCGBC公司）；石英比公司）；石英比色皿色皿2 2只（只（1 1cmcm）；）；容量瓶（容量瓶（5050mlml）和移液管若干。和移液管若干。0.0200.020mol/L KMnOmol/L KMnO4 4 、0.020mol/L 0.020mol/L K K2 2CrCr2 2O O7 7 的貯備溶液（其的貯備溶液（其中都含有中都含有H H2 2SOSO4 4 0.5mol/L 0.5mol/L、 KIO KIO4 4 2g/L2g/L） 操作步驟操作步驟制備標準溶液：分別取制備標準溶液：分別取

41、KMnOKMnO4 4貯備液于貯備液于5050mLmL容量瓶容量瓶中，稀釋成濃度為中，稀釋成濃度為0.00010.0001，0.00020.0002，0.00030.0003，0.00040.0004，0.0005 0.0005 mol/Lmol/L；以同樣的方法制備以同樣的方法制備K K2 2CrCr2 2O O7 7的標準溶液，濃度為的標準溶液，濃度為0.00030.0003，0.00060.0006，0.00090.0009，0.00120.0012，0.0015 0.0015 mol/Lmol/L。2022-3-16測量波長的選擇：以水作為參比液，分別對測量波長的選擇：以水作為參比液，

42、分別對KMnOKMnO4 4 K K2 2CrCr2 2O O7 7的標準溶液進行（的標準溶液進行（350-625350-625nmnm）掃描掃描. .（見下圖見下圖）測定測定KMnOKMnO4 4 、K K2 2CrCr2 2O O7 7標液及樣品在測量波長處的標液及樣品在測量波長處的吸光度。吸光度。( (1.1.在在445445nmnm測測K K2 2CrCr2 2O O7 7標液、樣品、標液、樣品、 KMnOKMnO4 4標液的吸光度。標液的吸光度。2.2.在在545545nmnm測測KMnOKMnO4 4標液、樣品、標液、樣品、 K K2 2CrCr2 2O O7 7 標液的吸光度標液的吸光度) ) 數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)處理（1 1）繪制）繪制KMnOKMnO4 4和和K K2 2CrCr2 2O O7 7的標準曲線：以吸光度對濃度作圖的標準曲線：以吸光度對濃度作圖 （見下圖見下圖）（2 2）計算）計算KMnOKMnO4 4和和K K2 2CrCr2 2O O7 7在波長（在波長（440440nmnm和和545545nmnm）時的摩爾時的摩爾吸光系數(shù)，即標準曲線圖的斜率。吸光系數(shù)，即標準曲線圖的斜率。見下圖見下圖（3 3）計算樣品中）計算樣品中KMnOKMnO4 4和和K K2 2Cr