動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作

1、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本技能大鼠生物學(xué)特性l大鼠汗腺極不發(fā)達(dá)，僅在爪墊上有汗腺，尾巴是散熱器官。l大鼠無嘔吐反應(yīng)，對(duì)許多藥物易產(chǎn)生耐藥性。l對(duì)營(yíng)養(yǎng)缺乏敏感，可發(fā)生典型的缺乏癥狀。l大鼠無膽囊，膽汁通過總膽管進(jìn)入十二指腸。l大鼠神經(jīng)系統(tǒng)與人類相似。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本技能 編號(hào)與標(biāo)記方法 大鼠的抓取 大鼠麻醉 供試品給予方法 采集體液 大鼠的采血一、編號(hào)與標(biāo)記方法 穿耳孔法穿耳孔法 標(biāo)牌法標(biāo)牌法 烙印法烙印法 剪毛法剪毛法 在每組動(dòng)物不超過在每組動(dòng)物不超過l0l0只或一個(gè)實(shí)驗(yàn)不超過只或一個(gè)實(shí)驗(yàn)不超過4040只的情況下適用只的情況下適用 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：大鼠、小鼠實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：大鼠、小鼠 染色劑：染色劑：3-53-5苦味酸溶液

2、，可染成黃色苦味酸溶液，可染成黃色 涂染原則：從左到右、從上到涂染原則：從左到右、從上到下下 左前肢為左前肢為1 1號(hào)、左側(cè)腹部號(hào)、左側(cè)腹部2 2號(hào)、號(hào)、左后肢左后肢3 3號(hào)，號(hào)， 兩耳后部?jī)啥蟛? 4號(hào)、背部號(hào)、背部5 5號(hào)、后肢號(hào)、后肢背部背部6 6號(hào)，號(hào)， 右前肢右前肢7 7號(hào)、右側(cè)腹部號(hào)、右側(cè)腹部 8 8號(hào)、右號(hào)、右后肢后肢9 9號(hào)號(hào) 頭部為頭部為4040號(hào)、尾巴根為號(hào)、尾巴根為1010號(hào)。號(hào)。 在每組動(dòng)物不超過在每組動(dòng)物不超過100100只的情況下適用只的情況下適用 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：大鼠、小鼠實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：大鼠、小鼠 常用染色劑：常用染色劑：3-53-5苦味酸溶液，可染成黃色，苦味酸溶液，可

3、染成黃色，作為作為“個(gè)個(gè)”位數(shù)位數(shù) 常用染色劑：常用染色劑：0.5%0.5%中性紅或品紅溶液，可染中性紅或品紅溶液，可染成紅色，作為成紅色，作為“十十”位數(shù)位數(shù) 用兩種顏色同時(shí)進(jìn)行染色標(biāo)記用兩種顏色同時(shí)進(jìn)行染色標(biāo)記 用苦味酸用苦味酸( (黃色黃色) )染色標(biāo)記作為個(gè)位數(shù)，個(gè)位染色標(biāo)記作為個(gè)位數(shù)，個(gè)位數(shù)的染色標(biāo)記方法同單色涂染法數(shù)的染色標(biāo)記方法同單色涂染法 用品紅用品紅( (紅色紅色) )染色標(biāo)記作為十位數(shù)染色標(biāo)記作為十位數(shù) 左前肢為左前肢為1010號(hào)、號(hào)、 左側(cè)腹部左側(cè)腹部2020號(hào)、左后肢號(hào)、左后肢3030號(hào)號(hào) 兩耳后部?jī)啥蟛?040號(hào)、號(hào)、 背部背部5050號(hào)、號(hào)、 后肢背部后肢背部60

4、60號(hào)號(hào) 右前肢右前肢7070號(hào)、右側(cè)腹部號(hào)、右側(cè)腹部 8080號(hào)、右后肢號(hào)、右后肢9090號(hào)號(hào) 第第100100號(hào)不作染色標(biāo)記號(hào)不作染色標(biāo)記：用專用耳空器在動(dòng)物耳朵不同部位：用專用耳空器在動(dòng)物耳朵不同部位打一小孔或缺口表示一定號(hào)碼的方法。原則是：打一小孔或缺口表示一定號(hào)碼的方法。原則是：左耳代表十位，右耳代表個(gè)位。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：兔、左耳代表十位，右耳代表個(gè)位。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：兔、犬、豬犬、豬：一般掛在動(dòng)物的頸部、耳朵、腳上。：一般掛在動(dòng)物的頸部、耳朵、腳上。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：犬、猴實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：犬、猴大鼠飼養(yǎng)盒大鼠飼養(yǎng)盒 + + 面罩面罩 1 1套套 首先戴好防護(hù)手套首先戴好防護(hù)手套 用右手拇指和食指抓住小鼠尾巴

5、中部將大鼠提起，放用右手拇指和食指抓住小鼠尾巴中部將大鼠提起，放在大鼠飼養(yǎng)盒的面罩上在大鼠飼養(yǎng)盒的面罩上 左手順勢(shì)按、卡在大鼠軀干背部，稍加壓力向頭頸部左手順勢(shì)按、卡在大鼠軀干背部，稍加壓力向頭頸部滑行滑行 以左手拇指和食指捏住大鼠兩耳后部的頭頸皮膚，其以左手拇指和食指捏住大鼠兩耳后部的頭頸皮膚，其余三指和手掌握住大鼠背部皮膚，完成抓取固定余三指和手掌握住大鼠背部皮膚，完成抓取固定 動(dòng)物全身麻醉分四期：動(dòng)物全身麻醉分四期： 隨意興奮期，出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)與運(yùn)動(dòng)失調(diào)隨意興奮期，出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)與運(yùn)動(dòng)失調(diào) 不隨意興奮期，由意識(shí)完全喪失至規(guī)則的自動(dòng)呼吸開始時(shí)止不隨意興奮期，由意識(shí)完全喪失至規(guī)則的自動(dòng)呼吸開始時(shí)止外科麻

6、醉期外科麻醉期 延髓麻醉期，進(jìn)入此期，麻醉已嚴(yán)重過量延髓麻醉期，進(jìn)入此期，麻醉已嚴(yán)重過量三、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉 麻醉方法：全身麻醉和局部麻醉，通過吸入、麻醉方法：全身麻醉和局部麻醉，通過吸入、注射（靜脈、皮下、肌肉、腹腔）、口服、注射（靜脈、皮下、肌肉、腹腔）、口服、灌胃等方法使動(dòng)物麻醉灌胃等方法使動(dòng)物麻醉 常用麻醉藥物：乙醚（吸入），戊巴比妥鈉、常用麻醉藥物：乙醚（吸入），戊巴比妥鈉、硫賁妥鈉、氯胺酮（靜脈），普魯卡因、利硫賁妥鈉、氯胺酮（靜脈），普魯卡因、利多卡因（局麻）多卡因（局麻） 麻醉前應(yīng)禁食麻醉前應(yīng)禁食8h8h以上以上 麻醉前應(yīng)準(zhǔn)確稱體重麻醉前應(yīng)準(zhǔn)確稱體重 注意麻醉劑量注意麻醉劑量 麻醉

7、過程中注意觀察動(dòng)物的反應(yīng)情況麻醉過程中注意觀察動(dòng)物的反應(yīng)情況 注意保溫注意保溫 靜脈注射時(shí)必須緩慢，靜脈注射時(shí)必須緩慢， 在寒冷冬季，麻醉劑在注射前應(yīng)加熱至動(dòng)物體溫在寒冷冬季，麻醉劑在注射前應(yīng)加熱至動(dòng)物體溫水平水平是使用非揮發(fā)性麻醉藥對(duì)動(dòng)物進(jìn)行全是使用非揮發(fā)性麻醉藥對(duì)動(dòng)物進(jìn)行全麻術(shù)的方法麻術(shù)的方法3 3戊巴比妥鈉、注射器戊巴比妥鈉、注射器 用左手將大鼠捉持保定，使鼠腹部朝上，鼠頭略低于尾用左手將大鼠捉持保定，使鼠腹部朝上，鼠頭略低于尾部部 右手持注射器將針頭在下腹部靠近腹白線的兩側(cè)進(jìn)行穿右手持注射器將針頭在下腹部靠近腹白線的兩側(cè)進(jìn)行穿刺刺 針頭刺入皮下后進(jìn)針針頭刺入皮下后進(jìn)針3mm3mm左右，

8、接著使注射針頭與皮膚左右，接著使注射針頭與皮膚呈呈4545度角刺入腹肌，穿過腹肌進(jìn)入腹膜腔，當(dāng)針尖穿過度角刺入腹肌，穿過腹肌進(jìn)入腹膜腔，當(dāng)針尖穿過腹肌進(jìn)入腹膜腔后抵抗感消失腹肌進(jìn)入腹膜腔后抵抗感消失 固定針頭，保持針尖不動(dòng)，回抽針?biāo)?，如無回血、腸液固定針頭，保持針尖不動(dòng)，回抽針?biāo)?，如無回血、腸液和尿液后即可注射藥液和尿液后即可注射藥液 1.1.皮下注射給藥皮下注射給藥 2.2.皮內(nèi)注射給藥皮內(nèi)注射給藥 3.3.肌肉注射給藥肌肉注射給藥 4.4.靜脈注射給藥?kù)o脈注射給藥 5.5.腹腔注射給藥腹腔注射給藥是借器械將藥物直接灌入動(dòng)物胃內(nèi)的方法，此法可以是借器械將藥物直接灌入動(dòng)物胃內(nèi)的方法，此法可以準(zhǔn)

9、確控制給藥量，但如果操作不當(dāng)易造成動(dòng)物死亡準(zhǔn)確控制給藥量，但如果操作不當(dāng)易造成動(dòng)物死亡 將灌胃針連接在注射器上，吸入一定量的藥液 操作前，大致量一下從口到胃的距離，估計(jì)灌胃針頭插入的深度 左手捉持動(dòng)物，使頭部向上；右手持針，把灌胃針頭的前端放進(jìn)動(dòng)物的口腔，順著上腭部插入咽部，順咽后壁輕輕往下推，灌胃針會(huì)順著食管滑入動(dòng)物的胃內(nèi)， 用右手食指將針?biāo)聣?，將注射器中的藥液灌入?dòng)物的胃中1.皮下注射給藥 原理：將藥液注入皮下結(jié)締組織，經(jīng)毛細(xì)血原理：將藥液注入皮下結(jié)締組織，經(jīng)毛細(xì)血管、淋巴管吸收進(jìn)入血液循環(huán)管、淋巴管吸收進(jìn)入血液循環(huán) 器材：器材：1m11m1注射器注射器1 1支、生理鹽水、燒杯、酒

10、支、生理鹽水、燒杯、酒精、碘酒、棉球精、碘酒、棉球 注射部位：頸背部、腋下、腹側(cè)和后肢的皮下 常規(guī)消毒注射部位的皮膚，用注射針頭取一刺入皮下. . 將針頭輕輕向左右擺動(dòng)，則表示已刺入皮下，再輕輕，如無回血，可緩慢地將藥物注入皮下。 此法用于觀察皮膚血管通透性變化或皮膚反此法用于觀察皮膚血管通透性變化或皮膚反應(yīng)應(yīng) 注射部位：動(dòng)物背部，脫毛，用針頭平直進(jìn)注射部位：動(dòng)物背部，脫毛，用針頭平直進(jìn)入皮內(nèi)入皮內(nèi) 注射藥液后，皮膚表面鼓起小泡，停片刻拔注射藥液后，皮膚表面鼓起小泡，停片刻拔出針頭出針頭將藥液注入動(dòng)物的肌肉組織，經(jīng)毛細(xì)血將藥液注入動(dòng)物的肌肉組織，經(jīng)毛細(xì)血管吸收進(jìn)入血液循環(huán)管吸收進(jìn)入血液循環(huán) 1

11、ml1ml注射器注射器1 1支、生理鹽水、燒杯、酒精、支、生理鹽水、燒杯、酒精、碘酒、棉球碘酒、棉球一般選擇肌肉豐富而無大血管通過一般選擇肌肉豐富而無大血管通過的臀部或大腿外測(cè)，回抽無血即可注射的臀部或大腿外測(cè)，回抽無血即可注射 原理：將藥液注入小鼠的尾靜脈原理：將藥液注入小鼠的尾靜脈 器材：器材：1m11m1注射器注射器1 1支、生理鹽水、燒杯、金屬支、生理鹽水、燒杯、金屬籠或大小鼠器籠或大小鼠器 、酒精、碘酒、棉球、酒精、碘酒、棉球 將大小鼠放在金屬籠或?qū)⒋笮∈蠓旁诮饘倩\或小鼠固定器小鼠固定器中，通過金屬籠或中，通過金屬籠或的的孔拉出鼠尾巴孔拉出鼠尾巴 用左手捏住鼠尾巴中下部，用用左手捏住

12、鼠尾巴中下部，用7575酒精棉球反復(fù)擦拭尾部；酒精棉球反復(fù)擦拭尾部；注射時(shí)，以左手拇指和中指捏住鼠尾兩側(cè)，用食指從下面托起尾巴，以無名指夾住尾巴的末梢。 右手持4 4號(hào)針頭的注射器，使針頭與靜脈平行( (小于3030度角) )；從鼠尾巴下1/41/4處進(jìn)針，仔細(xì)觀察，如果無阻力，無白色皮丘出現(xiàn)，說明已刺入血管，即可注入藥物 拔出針頭后，用干棉球壓住注射部位約l-2minl-2min，防止出血體重將藥液注入大鼠的腹腔將藥液注入大鼠的腹腔注射器注射器1 1支、生理鹽水、燒杯支、生理鹽水、燒杯 用左手將大鼠捉持保定，使鼠腹部朝上，鼠頭略低用左手將大鼠捉持保定，使鼠腹部朝上，鼠頭略低于尾部；于尾部；右

13、手持注射器將針頭在下腹部靠近腹白線右手持注射器將針頭在下腹部靠近腹白線的兩側(cè)進(jìn)行穿刺的兩側(cè)進(jìn)行穿刺 針頭刺入皮下后進(jìn)針針頭刺入皮下后進(jìn)針3mm3mm左右，接著使注射針頭與左右，接著使注射針頭與皮膚呈皮膚呈4545度角刺入腹肌，穿過腹肌進(jìn)入腹膜腔，當(dāng)度角刺入腹肌，穿過腹肌進(jìn)入腹膜腔，當(dāng)針尖穿過腹肌進(jìn)入腹膜腔后抵抗感消失針尖穿過腹肌進(jìn)入腹膜腔后抵抗感消失 固定針頭，保持針尖不動(dòng)，回抽針?biāo)?，如無回血、固定針頭，保持針尖不動(dòng)，回抽針?biāo)ǎ鐭o回血、腸液和尿液后即可注射藥液腸液和尿液后即可注射藥液 注射量：注射量：體重體重 胸水胸水 腹水腹水 消化液消化液 骨髓液骨髓液 動(dòng)物精液動(dòng)物精液 乳汁乳汁此法較常

14、用于大、小鼠，成熟小鼠尿量此法較常用于大、小鼠，成熟小鼠尿量1-1-3ml/24h3ml/24h，大鼠為，大鼠為55-75ml/24h55-75ml/24h常用于雄兔、犬等動(dòng)物，要輕度麻醉，可以采到常用于雄兔、犬等動(dòng)物，要輕度麻醉，可以采到無污染的尿液無污染的尿液此法適用于兔、貓、犬等大動(dòng)物此法適用于兔、貓、犬等大動(dòng)物 眼眶后靜脈叢眼眶后靜脈叢( (竇竇) )取血取血 器材：毛細(xì)管器材：毛細(xì)管( (玻璃或塑料均可玻璃或塑料均可) )、1 1肝素溶肝素溶液、干燥皿、乙醚、試管、干棉球液、干燥皿、乙醚、試管、干棉球 先將毛細(xì)管浸泡在先將毛細(xì)管浸泡在1 1肝素溶液中數(shù)分鐘，取出干燥備肝素溶液中數(shù)分鐘

15、，取出干燥備用用 將大鼠進(jìn)行麻醉，使大鼠保持側(cè)臥位將大鼠進(jìn)行麻醉，使大鼠保持側(cè)臥位 左手拇指、食指抓住兩鼠耳之間的頸部頭皮，并輕輕向下壓迫頸部?jī)蓚?cè)，致大鼠靜脈血回流障礙，眼球外突，眶后靜脈叢充血 右手持毛細(xì)管由大鼠的目?jī)?nèi)眥部插入結(jié)膜，使毛細(xì)管與眶壁平行地向喉頭方向推進(jìn)，深度約 輕輕旋動(dòng)毛細(xì)管，使其穿破靜脈叢，讓血流順毛細(xì)管流出 采血量：次0.40.40.6ml0.6ml腦立體定位技術(shù) 某些顱外標(biāo)記與顱內(nèi)結(jié)構(gòu)具有相對(duì)固定的位置關(guān)系，確定腦內(nèi)功能核團(tuán)的位置 核團(tuán)微量注射 電位引導(dǎo) 核團(tuán)的刺激或損毀腦立體定位儀腦立體定位儀的調(diào)試:擺穩(wěn)定位儀，用水平儀測(cè)水平。檢驗(yàn)電極移動(dòng)架上各個(gè)軸向滑尺是否保持互相垂

16、直，微量注射器針尖是否光滑垂直。檢查定位儀各銜接部位的螺絲有無松動(dòng)。檢查頭部固定裝置兩側(cè)是否對(duì)稱。檢查耳桿使兩耳桿尖端相對(duì),以此判定耳桿固定的準(zhǔn)確程度。鼠顱的固定鼠顱的固定:將麻醉大鼠置于腦立體定位儀上，鼠顱依靠?jī)啥鷹U及切牙鉤三點(diǎn)固定。腦立體定位儀坐標(biāo)腦立體定位儀坐標(biāo)“0”點(diǎn)的測(cè)得點(diǎn)的測(cè)得:按照Paxinos大鼠腦立體定位圖譜，以顱骨前囟即冠矢點(diǎn)作為前后方向的“0”參照點(diǎn)，當(dāng)微量注射器的針尖對(duì)準(zhǔn)冠矢點(diǎn)時(shí),讀取立體定位儀三維坐標(biāo)上標(biāo)尺的數(shù)值，此數(shù)值即是“0”點(diǎn)坐標(biāo)。生物信號(hào)在體檢測(cè)遙控系統(tǒng)生物信號(hào)在體檢測(cè)遙控系統(tǒng)Illustration of the high fidelity recordin

17、g provided by the C10 telemeter, which allows for the accurate measurement of pulse pressures in mice despite their high heart rate (10 per second!).Bursts of renal sympathetic nerve activity made in a conscious, freely behaving rat 64 days following telemeter implantationPowerLab 系統(tǒng)Faraday cageVibr

18、ation Isolation TableMicroscopeMicro-Manipulators Remote ControllerAmplifiersCCD Camera膜片鉗系統(tǒng)膜片鉗系統(tǒng)Micro-ManipulatorsDAD-VC systemCCD Camera活體生物發(fā)光和熒光成像技術(shù)59理想的光源：螢火蟲熒光素酶（luciferase）基因、細(xì)胞、活體都可被熒光素酶基因標(biāo)記?；铙w生物發(fā)光成像系統(tǒng)原理活體生物發(fā)光成像系統(tǒng)原理遺傳學(xué)標(biāo)記實(shí)時(shí)、原位多波長(zhǎng)檢測(cè)標(biāo)記癌細(xì)胞標(biāo)記細(xì)菌標(biāo)記轉(zhuǎn)基因鼠60熒光素酶的表達(dá)熒光素酶的表達(dá) 將熒光素酶基因連接于啟動(dòng)子下游，穩(wěn)定整合到細(xì)胞染色體內(nèi)，使熒光

19、素酶得到持續(xù)表達(dá)。啟動(dòng)子染色體體內(nèi)表達(dá)外源注入底物活躍細(xì)胞體內(nèi)發(fā)光61活體成像技術(shù)的主要應(yīng)用活體成像技術(shù)的主要應(yīng)用 標(biāo)記細(xì)胞標(biāo)記細(xì)胞 癌癥及藥物研究癌癥及藥物研究 標(biāo)記病毒標(biāo)記病毒, , DNA, RNADNA, RNA 病毒學(xué)及基因治療病毒學(xué)及基因治療 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型蛋白質(zhì)相互作用、代謝、發(fā)育、內(nèi)分泌學(xué)，蛋白質(zhì)相互作用、代謝、發(fā)育、內(nèi)分泌學(xué)， 等等等等 標(biāo)記基因標(biāo)記基因 siRNAsiRNA研究的應(yīng)用研究的應(yīng)用 干細(xì)胞干細(xì)胞, , 免疫免疫 其它其它 細(xì)胞凋亡細(xì)胞凋亡 組織特異性基因表達(dá)組織特異性基因表達(dá) 標(biāo)記細(xì)菌標(biāo)記細(xì)菌62體內(nèi)藥物分析的生物發(fā)光檢測(cè)1x106 ，PC-3M-

20、Luc腫瘤細(xì)胞，皮下注射14天21天28天35天雄性SCID小鼠處理方式 細(xì)胞數(shù)無治療對(duì)照 2.2x1095- FU治療 2.8x108絲裂酶素 3.6x106治療 小鼠 #6 n=7 小鼠 #40 n=8(從第11天開始給藥) 小鼠 #31 n=8 (從第11天開始給藥)63乳腺癌原位接種乳腺癌原位接種64U87 U87 腦膠質(zhì)瘤成像腦膠質(zhì)瘤成像 cancer research cancer research 2011,82011,8PTAofU87humangliomasinmousebrains.A,representativebioluminescenceimagesofnudemicebe