第2章藥物質量控制與分析方法驗證

1、L/O/G/O第四章第四章藥物的含量測定方法與驗證藥物的含量測定方法與驗證2022-6-272第四章第四章藥物的含量測定方法與驗證藥物的含量測定方法與驗證 定量分析方法的分類與特點定量分析方法的分類與特點 1樣品分析的前處理方法樣品分析的前處理方法 2藥品質量標準分析方法驗證藥品質量標準分析方法驗證 32022-6-273第一節(jié)第一節(jié)定量測定方法的分類與特點定量測定方法的分類與特點 一、容量分析法一、容量分析法二、光譜分析法二、光譜分析法 三、色譜分析法三、色譜分析法 2022-6-274兩個注意點兩個注意點 含量測定的內容： 原料藥：主成分量占取樣量的百分比，百分含量百分含量；（小于100%

2、） 制劑：單位制劑中所含有效成分的量占標示量的百分比，標示量百分含量；標示量百分含量； （可能大于100%） 標示量標示量: : 藥品標注的單位制劑所含有效成分的量藥品標注的單位制劑所含有效成分的量 生物樣本：測定藥物在生物基質中的濃度生物樣本：測定藥物在生物基質中的濃度 定量分析： 精密稱定：精確到稱樣量的千分之一。精密稱定：精確到稱樣量的千分之一。 對天平的要求：對天平的要求： 稱樣稱樣0.1g:0.1g:天平精確到天平精確到0.1mg0.1mg，萬分之一天平；，萬分之一天平；稱樣稱樣10mg:10mg:天平精確到天平精確到0.01mg0.01mg，十萬分之一天平；，十萬分之一天平；稱樣稱

3、樣1mg:1mg:天平精確到天平精確到0.001mg0.001mg，百萬分之一天平；，百萬分之一天平；2022-6-275一、容量分析法一、容量分析法(一一) 特點與適用范圍特點與適用范圍 (1) 方法簡便易行 (2) 方法耐用性高 (3) 測定結果準確 (4) 方法專屬性差 適用于原料藥含量測定(二二) 有關計算有關計算:1. 滴定度與滴定度計算滴定度與滴定度計算2. 含量計算含量計算 (1) 直接滴定法 (2) 間接滴定法 生成物滴定法 剩余量滴定法 也稱滴定法也稱滴定法: 將已知濃度滴定液滴加至將已知濃度滴定液滴加至 被測藥物溶液中被測藥物溶液中,至滴定終點至滴定終點,根據滴根據滴 定液

4、的濃度定液的濃度,體積和滴定度體積和滴定度,計算含量計算含量 容量容量分析法分析法2022-6-276(二二) 相關計算相關計算每每1ml規(guī)定濃度的滴定液所相規(guī)定濃度的滴定液所相當的被測藥物的質量當的被測藥物的質量, mg 1. 滴定度每每1ml碘滴定液碘滴定液(0.05mol/L)相當于相當于8.806mg的的C6H8O6 D C B A dcbaBBAAbMWaMWABBABABBAMbaVmMbanaMbMWWBAVTWMbamT）（mg/mlHI 2 OHC I OHC6662686）（mg/ml 806. 813.1761105. 0T2022-6-2771. 滴定度滴定度 溴酸鉀法

5、測定異煙肼溴酸鉀法測定異煙肼(C6H7N3O=137.14)的含量的含量, 溴酸鉀滴定液濃度為溴酸鉀滴定液濃度為0.01667mol/L (KBrO3為單元為單元) 反應式反應式: 每每1ml溴酸鉀滴定液溴酸鉀滴定液(0.01667mol/L) 相當于相當于3.429mg的異煙肼的異煙肼(C6H7N3O) OH 3 KBr 2 N 3 NOHC 3 KBrO 2 ONHC 3222563376滴定度滴定度:）（mlmg 429. 314.1372316670 . 0T2022-6-2782. 含量測定含量測定 直接滴定法直接滴定法 生成物滴定法生成物滴定法 剩余量滴定法剩余量滴定法 (1)(2

6、)(3)2022-6-279(1) 直接滴定法直接滴定法% 100(%) WTV含量規(guī)定摩爾濃度實際摩爾濃度F%100%100100%(%) WFTVWTVWTV含量注意掌握滴定反應的原理, 藥物與滴定劑在反應中的摩爾比正確計算滴定度和百分含量 2022-6-2710 精密稱取阿司匹林0.3972g，用氫氧化鈉（0.1021 mol/L）滴定,消耗反應體積21.35 ml。計算每1ml標準氫氧化鈉滴定液（0.1 mol/L）的滴定度，以及阿司匹林的含量。（分子式C9H8O4 分子量180.2）(98.89%)2022-6-2711(2) 生成物滴定法生成物滴定法%100%100100%(%)

7、WFTVWTVWTV含量注意摩爾比的替換藥物與A作用生成B, 用滴定液滴定B百分含量計算方法與直接滴定法相同 2022-6-2712(2) 生成物滴定法生成物滴定法滴定度23-5I Sb I 2 Sb-264-2322OS I 2 OS 2 I 葡萄糖酸銻鈉含量測定: 本品約0.3g, 加水100ml、鹽酸15ml與碘化鉀試液10ml,暗處放置10分鐘,用硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴定每1ml硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)相當于6.088mg銻(Sb)反應式:）（mg/ml 088. 676.121211 . 0MbamT2022-6-2713(3) 剩余量滴定法剩余量滴定法(

8、回滴法回滴法)加入定過量滴定液A, 用滴定液B滴定剩余的A注意: 滴定度為滴定液A的滴定度%100)(%) ABBAAWTFVFV含量%100)(%) ABS BOBWTFVV含量無空白進行空白校正2022-6-2714%100)(%) ABBAAWTFVFV含量（1）滴定液）滴定液A（V總總=VAFA）一部分與待測藥物反應（）一部分與待測藥物反應（ V ）；）；（2）剩余的體積）剩余的體積(V剩剩)與滴定液與滴定液B反應，所以反應，所以V = VAFA- V剩剩 （3）A與與B反應為反應為aA + Bb， 那么那么a/（CA V剩剩 ）=b/（CB VBFB ）； 當當a:b=CA:CB時，

9、時， V剩剩= VBFB，（4）與待測藥物反應的滴定液）與待測藥物反應的滴定液A體積體積V = VAFA- VBFB無空白校正無空白校正2022-6-2715有空白校正有空白校正%100)(%) ABS BOBWTFVV含量前提：前提：A與與B反應為反應為aA + Bb，當當a:b=CA:CB時時（1）空白實驗時）空白實驗時A與與B完全反應，滴定液完全反應，滴定液A總體積 V總總= VB0FB（2）滴定時，待測藥物消耗的滴定液）滴定時，待測藥物消耗的滴定液A體積為體積為 V = V總總- VBSFB= VB0FB VBSFB 2022-6-2716(3) 剩余量滴定法剩余量滴定法 司可巴比妥鈉

10、含量測定: 本品約0.1g, 加水10ml溶解, 精密加溴滴定液(0.05mol/L)25ml, 再加鹽酸5ml, 放置15分鐘, 加碘化鉀試液10ml, 用硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴定, 滴定的結果用空白試驗校正 W=0.1022g; 硫代硫酸鈉滴定液 F=1.038; 供試品消耗硫代硫酸鈉滴定液15.73ml;空白23.21ml 2022-6-2717(3) 剩余量滴定法剩余量滴定法滴定度(mg/ml) 01.1327.260111 . 0MbamT司可巴比妥鈉M=260.27, 與溴摩爾比為1:1 %8 .98%10010001022. 001.13038. 1)73.152

11、1.23( %100)(%) 2322322BrOSNaOSNaS0WTFVV司可巴比妥含量2022-6-2718(3) 剩余量滴定法剩余量滴定法 滴定液A與滴定液B濃度是相當（a:b=CA:CB） 溴滴定液(0.05mol/L)與硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)相當， 因為溴(Br2)等摩爾轉化為碘(I2), 而碘(I2)與硫代硫酸鈉(Na2S2O3)反應的摩爾比為1:2, 所以溴滴定液與硫代硫酸鈉滴定液的濃度比也是1:2。 滴定液A與滴定液B經濃度校正后的消耗體積(V=VF)是相當的2022-6-2719二、光譜分析法二、光譜分析法定義定義分類分類 利用物質的光譜進行定性、定量和結構分

12、析的方法光譜分析法(flame photometry)2022-6-2720(一一) 紫外紫外-可見分光光度法可見分光光度法1. 特點與適用范圍特點與適用范圍 (1) 方法簡便易行 (2) 方法靈敏度高 (3) 結果準確度較高 (4) 方法專屬性較差 制劑含量測定2. 儀器校正和檢定儀器校正和檢定 (1) 波長 (2) 吸光度的準確度 (3) 雜散光 3. 測定法測定法 對照品比較, 吸收系數 計算光譜, 比色法基于對紫外光區(qū)基于對紫外光區(qū)(200400nm)和可見光區(qū)和可見光區(qū)(400760nm)單色光吸收特性的分析方法單色光吸收特性的分析方法 原理原理: UV-VisEclTA1lg202

13、2-6-2721(1) 對照品比較法對照品比較法原料藥原料藥 制劑制劑RRXXAcAc%100(%) XWDc含量%100(%) XBWWDc標示量 氟康唑片溶出度檢查: 取本品(規(guī)格:100mg), 鹽酸溶液(91000)1000ml為溶出介質, 經45分鐘時, 取溶液濾過; 取續(xù)濾液, 在261nmm波長處測定吸光度; 另取氟康唑對照品適量, 精密稱定, 加溶出介質溶解并定量稀釋制成每1ml中約含0.1mg 的溶液, 同法測定, 計算每片的溶出量%100%)( RRXBADcA標示量溶液濃度溶液濃度 2022-6-2722(2) 吸收系數法吸收系數法原料藥原料藥 制劑制劑%100(%) X

14、WDc含量%100(%) XBWWDc標示量溶液濃度溶液濃度 100)ml/g(%11cmXEAcX 鹽酸氯丙嗪注射液(規(guī)格：xx ml : xx mg)的含量測定：精密量取適量(V ml, 相當于鹽酸氯丙嗪50mg), 置200ml量瓶中, 用鹽酸溶液(91000)稀釋至刻度, 搖勻; 精密量取2ml, 置100ml 量瓶中, 用鹽酸溶液稀釋至刻度, 搖勻, 在254nm 的波長處測定吸光度, 按吸收系數( )為915計算 1%1cmE%1001001000(%) 1%1cm標示量標示量BVEVDA2022-6-2723 取標示量為25mg的鹽酸氯丙嗪片20片，除去糖衣后精密稱定，總重量為2

15、.4120g，研細，精密稱量片粉0.2368g，置500ml量瓶中，加鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置100ml量瓶中，加同一溶劑稀釋至刻度，搖勻，在254nm波長處測得吸收度為0.435，按百分吸收系數為915計算，求其標示量百分含量？(10分) 2022-6-2724三、色譜分析法三、色譜分析法特點與應用特點與應用分類分類 ：(1) 高靈敏度高靈敏度:ng-g/ml(2) 高專屬性高專屬性:選擇性檢測(3) 高效能與高速度高效能與高速度 復方制劑含量測定復方制劑含量測定的首選方法的首選方法 ： 2022-6-2725(一一) 高效液相色譜法高效液相色譜法1. 儀器(

16、RP-HPLC) (1) 色譜柱: ODS最常用; 粒徑一般在3-10m; 溫度 40 (2) 檢測器: UV(DAD,PDA); Fluor, ELSD, RID, ECD, MS (3) 流動相: 首選甲醇-水(末端波長檢測:乙腈-水), 有機相 5%; pH2-8 2. 系統(tǒng)適用性試驗 (1) 色譜柱的理論板數(n) (2) 色譜峰的分離度(R) (3) 色譜系統(tǒng)的重復性(RSD%) (4) 色譜峰的拖尾因子(T)3. 測定法 (1) 內標法 (2) 外標法不得改變：固定相種類,流動相組分,檢測器類型可以改變：色譜柱內徑, 長度, 載體粒度 流動相流速, 混合流動相各組分的比例 柱溫;

17、進樣量; 檢測器的靈敏度HPLC2022-6-27262. 系統(tǒng)適用性試驗系統(tǒng)適用性試驗分離度分離度(R): 用于評價組分的分離程度用于評價組分的分離程度; 關鍵指標關鍵指標重復性重復性: 用于評價連續(xù)進樣系統(tǒng)響應的重復性能用于評價連續(xù)進樣系統(tǒng)響應的重復性能 拖尾因子拖尾因子(T): 用于評價色譜峰的對稱性用于評價色譜峰的對稱性理論板數理論板數(n): 用于評價色譜柱的分離效能用于評價色譜柱的分離效能n=(tR/)2=16(tR/W)2; n=5.54(tR/Wh/2)2212R1R)(2WWttR)(70. 1)(22/, 22/, 12R1RhhWWttR;RSD 1.51h05. 02d

18、WT 2022-6-27273. 測定法與計算測定法與計算(2) 外標法外標法氨酚待因片氨酚待因片(I)的含量測定的含量測定取本品20片, 精密稱定, 研細, 精密稱取適量, 置250ml量瓶中, 加水溶解并稀釋至刻度, 濾過, 取續(xù)濾液10l進樣; 另精密稱取磷酸可待因與對乙酰氨基酚對照品適量, 加水溶解并定量稀釋制成每1ml中約含磷酸可待因0.03mg和對乙酰氨基酚2mg的溶液, 同法測定RXRX)(AAcc含量WWDAAcRXR)(mg/ 片含量2022-6-2728(1) 內標法內標法RRSS)(CACAf校正因子SScAAfcXX)(含量2022-6-2729第二節(jié)第二節(jié)樣品分析的前

19、處理方法樣品分析的前處理方法一、不經有機破壞的前處理方法一、不經有機破壞的前處理方法 二、經有機破壞的前處理方法二、經有機破壞的前處理方法(一一) 水解法水解法; (二二) 還原法還原法(一一) 干法破壞干法破壞; (二二) 濕法破壞濕法破壞2022-6-2730需驗證的項目需驗證的項目驗證的內容驗證的內容準確度防腐劑溶出度,釋放度鑒別試驗雜質檢查含量測定第三節(jié)第三節(jié)藥品質量標準分析方法驗證藥品質量標準分析方法驗證 精密度 專屬性 檢測限 重復性中間精密度重現性 2022-6-2731八、驗證內容的選擇八、驗證內容的選擇 驗證內容驗證內容分析項目分析項目鑒別鑒別試驗試驗元素或雜質檢查元素或雜質

20、檢查含量測定及含量測定及溶出量測定溶出量測定限度限度定量定量準確度準確度 +精密度精密度重復性重復性 +中間精密度中間精密度 +專屬性專屬性+檢測限檢測限+ 定量限定量限 + 線性線性 +范圍范圍 +耐用性耐用性+2022-6-2732一、準確度一、準確度(一一) 含量測定方法含量測定方法 (二二) 雜質定量測定雜質定量測定 加入已知量雜質進行測試加入已知量雜質進行測試 (三三) 數據要求數據要求 9個測定結果個測定結果3個不同濃度個不同濃度(80,100,120)每個濃度各每個濃度各3份份v 準確度系指用該方法測定的結果與準確度系指用該方法測定的結果與 真實值或參考值接近的程度真實值或參考值

21、接近的程度v 一般用回收率一般用回收率(%)表示表示 定義定義）（加入量本底量測得量）回收率（% 100%）（加入量測得量）回收率（% 100%2022-6-2733二、精密度二、精密度1.重復性重復性p 同一分析人員連續(xù)測定所得結果的精密度;p 也稱批內精密度或日內精密度 2.中間精密度中間精密度p 不同時間不同不同時間不同分析人員用不同分析人員用不同設備測定結果之設備測定結果之間的精密度間的精密度p 批批/日間精密度日間精密度 3.重現性重現性 p 在不同實驗室在不同實驗室不同人員測定結不同人員測定結果之間的精密度果之間的精密度p 法定標準采用的法定標準采用的分析方法進行分析方法進行 v同

22、一均勻供試品多次取樣測定所得同一均勻供試品多次取樣測定所得 結果之間的接近程度結果之間的接近程度 v標準偏差標準偏差(s,SD);相對標準偏差相對標準偏差(RSD)v數據要求同數據要求同“準確度準確度”定義定義2022-6-2734三、專屬性三、專屬性(一一) 鑒別反應鑒別反應 空白, 結構相似物或有關物質呈負反應(三三) 含量與雜質測定含量與雜質測定 含雜質或降解產物的試樣中各峰能獲得分離v 在其他成分在其他成分(雜質雜質,降解產物降解產物,輔料等輔料等)可能可能 存在下存在下,方法能正確測定出被測物的特性方法能正確測定出被測物的特性v 鑒別鑒別,雜質檢查和含量測定方法雜質檢查和含量測定方法

23、 定義定義與應用與應用2022-6-2735四、檢測限四、檢測限 適用于可用目視法直接評價結果的適用于可用目視法直接評價結果的 分析方法分析方法, 非儀器分析法非儀器分析法 鑒別的顯色法鑒別的顯色法;雜質檢查的雜質檢查的TLCl適用于能直觀顯示信號與基線噪聲適用于能直觀顯示信號與基線噪聲 水平的分析方法水平的分析方法, 如如HPLC法法 l 信噪比信噪比S/N=3(2)時的相應濃度或量時的相應濃度或量p 適用于不能直觀比較信噪比的儀器適用于不能直觀比較信噪比的儀器 分析方法分析方法, 如如UV-Vis法法 p 檢測限檢測限(limit of detection, LOD)是指試樣中被是指試樣中

24、被測物能被檢測出的最低濃度或量測物能被檢測出的最低濃度或量LOD是一種限度檢驗效能指標是一種限度檢驗效能指標,反映方法靈敏度反映方法靈敏度 1.目視法目視法 2.信噪比法信噪比法 3.標準偏差標準偏差法法 空樣樣空SACSfLOD332022-6-2736五、定量限五、定量限雜質和降解產物用定量方法研究時雜質和降解產物用定量方法研究時, 應確定應確定LOQ LOQ的測定方法與的測定方法與LOD相同相同相應的系數相應的系數(倍數倍數)不同不同, 如信噪比如信噪比S/N=10定量限定量限(limit of quantitation, LOQ )是指試樣是指試樣中被測物能被定量測定的最低量中被測物能被定量測定的最低量;反映方法的靈敏度反映方法的靈敏度測定結果應具有一定準確度和精密度測定結果應具有一定準確度和精密度 2022-6-2737六、線性與范圍六、線性與范圍范圍系指方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間范圍系指方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間在試驗研究開始前確定驗證的范圍和方法在試驗研究開始前確定驗證的范圍和方法在范圍內應能達到一定精密度在范圍內應能達到一定精密度,準確度和線性準確度和線性p線性系指在設計的線性系指在設計的“范圍范圍”內內, 響應值響應值(y)與被與被測物濃度測物濃度(x)直接呈正比關系的程度直接呈正比關系的程度 y = ax + b