核醫(yī)學其它體外分析分子核進展PPT實用教案

1、 方法：競爭性與方法：競爭性與RIA相同相同 優(yōu)點：這些蛋白天然存在，來源豐富，制備簡單，省時，方法學成熟易建優(yōu)點：這些蛋白天然存在，來源豐富，制備簡單，省時，方法學成熟易建立。立。 缺點：缺點： 比 抗 體 的 特 異 性 差 、 靈 敏 度 也 差 ， 為 了 提 高 特 異 性 ， 須 在 樣 品 比 抗 體 的 特 異 性 差 、 靈 敏 度 也 差 ， 為 了 提 高 特 異 性 ， 須 在 樣 品(yngpn)制備上下功夫。如純化，清除干擾物等，不夠方便。制備上下功夫。如純化，清除干擾物等，不夠方便。 該類蛋白種類有限，應用范圍受限，已有很多被該類蛋白種類有限，應用范圍受限，已有很

2、多被RIA和和IRMA取代。取代。 第1頁/共28頁第一頁，共29頁。 二、放射受體分析二、放射受體分析RRA RRA與與RBA的區(qū)別的區(qū)別 含義：以受體為結合劑，利用含義：以受體為結合劑，利用(lyng)競爭結合原理對配體進行體外分析。競爭結合原理對配體進行體外分析。 受體的分類：受體的分類： 膜膜R：一般為水溶性配體（肽類激素、兒茶酚胺等）：一般為水溶性配體（肽類激素、兒茶酚胺等） 胞內胞內R：（漿：（漿or核），一般為脂溶性的配體（甲狀腺素，類固醇）核），一般為脂溶性的配體（甲狀腺素，類固醇） 受體樣品的制備：與受體樣品的制備：與RBA相同。相同。 第2頁/共28頁第二頁，共29頁。標記

3、品的要求：標記品的要求： 要求配體標記前后生物活性不受要求配體標記前后生物活性不受影響。因為標記配體在影響。因為標記配體在RRA時活性往往是時活性往往是降低的。如降低的。如125I標上一個不影響，如果有標上一個不影響，如果有二個二個125I標上就有變化了。標上就有變化了。RRA的優(yōu)點：的優(yōu)點： 1、R與與L的結合反應快、瞬間的結合反應快、瞬間完成、比完成、比RIA出結果出結果(ji gu)快?？?。 2、能反應、能反應L的生物學活性。如的生物學活性。如冬眠靈有多種衍生物，它們均能與特異抗冬眠靈有多種衍生物，它們均能與特異抗體結合，但只有有生物活性的衍生物才能體結合，但只有有生物活性的衍生物才能與

4、受體結合，這種測定反應與受體結合，這種測定反應L的生物學活性，的生物學活性，而不是免疫活性。所以研究物質結合與功而不是免疫活性。所以研究物質結合與功能能RRA占有相當的地位。占有相當的地位。第3頁/共28頁第三頁，共29頁。RRA的缺點：的缺點： 1、靈敏度比、靈敏度比RIA小小10100倍，這是因為不同組織間得來的倍，這是因為不同組織間得來的受體對配體的親和力有差異，又難以受體對配體的親和力有差異，又難以尋找高親和力的受體。尋找高親和力的受體。 2、反應條件和環(huán)境嚴格，、反應條件和環(huán)境嚴格，離子強度，溫度、離子強度，溫度、PH值要求高。值要求高。 3 、 N S B 結 合 容 量結 合 容

5、 量(rngling)大，親和力又小，大，親和力又小，NSB較大較大第4頁/共28頁第四頁，共29頁。臨床應用：臨床應用： 1、利用受體來測體內配體的含量。、利用受體來測體內配體的含量。 2、測定、測定(cdng)體內抗受體抗體體內抗受體抗體的量。的量。 有些疾病發(fā)現體內存在著抗有些疾病發(fā)現體內存在著抗R的抗的抗體 （ 自 身 抗 體 ） ， 如體 （ 自 身 抗 體 ） ， 如 G t r a v e s disease(TSH、甲狀腺素、甲狀腺素R的抗體的抗體)；Insulin B型抗癥（型抗癥（Ins R-Ab）、重癥肌無）、重癥肌無力（乙酰膽鹼受體抗體）。力（乙酰膽鹼受體抗體）。這類受

6、體的抗體有兩類特征：這類受體的抗體有兩類特征： 1、受體結合部位抗體（、受體結合部位抗體（RAb）：）：當當R與與Ab成復合物時，復合物中的成復合物時，復合物中的R可再與可再與配體結合，即配體結合，即R的結合位點保留，但復合物的結合位點保留，但復合物卻抑制配體與單獨存在的游離卻抑制配體與單獨存在的游離R相結合。相結合。 2、受體非結合部位抗體（、受體非結合部位抗體（Ab）：）：它的特征是復合物對配體與它的特征是復合物對配體與R的結合無抑制的結合無抑制作用。作用。 第5頁/共28頁第五頁，共29頁。舊單位：舊單位：U；1 U=16.67kat符號：底物用符號：底物用S表示，表示， S*指標指標記

7、的底物記的底物 酶用酶用E表示表示 P產物產物(chnw)反應式：反應式：*S+E E*S E*P *P+E經過一般時間，從反應液中分離經過一般時間，從反應液中分離出出*P，測放。，測放。第6頁/共28頁第六頁，共29頁。 *P的CPS 酶活性（力）的計算（kat）=- SAte *P的CPS 酶的比活力（kat/g）=- SAtew 可知以下幾個量：t（分）：*P的放射性CPS；SA標記(bioj)物的比活度；e儀器效率；W參加反應的酶的蛋白量（mg）。 第7頁/共28頁第七頁，共29頁。優(yōu)點優(yōu)點:1、靈敏度高（放射性標記品）、靈敏度高（放射性標記品）2、特性性強，由酶的專一性決定。、特性性

8、強，由酶的專一性決定。3、適用、適用(shyng)廣，絕大多數酶廣，絕大多數酶可用此法?？捎么朔āＨ秉c缺點:1、需高質量的定位標記物、需高質量的定位標記物2、分離方法復雜，難以自動化。、分離方法復雜，難以自動化。酶液制備：酶液制備：標記物制備與選擇標記物制備與選擇PH、激活或抑制劑的使用、溫度、激活或抑制劑的使用、溫度、時間等（自學）時間等（自學）第8頁/共28頁第八頁，共29頁。 2、酶促同位素衍生物分析：實際上分析底物、酶促同位素衍生物分析：實際上分析底物(d w)含量。含量。反應：標記試劑反應：標記試劑+待測底物待測底物 標記衍生物標記衍生物 E舉例：舉例：32PrATP+膽鹼膽鹼 32

9、P一磷酰膽鹼一磷酰膽鹼+ADP激酶激酶膽鹼膽鹼 衍生物的放射性強弱衍生物的放射性強弱標記試劑比活度標記試劑比活度可計算可計算(j sun)待測物量待測物量 （底物）（底物）注意：需要知道一個分子待測物能與標記試劑結合的分子比。如果用雙同位素標記注意：需要知道一個分子待測物能與標記試劑結合的分子比。如果用雙同位素標記可以可以(ky)更準確。更準確。 第9頁/共28頁第九頁，共29頁。3、酶的激動劑和抑制劑測定法：、酶的激動劑和抑制劑測定法： 原理：激動或抑制劑可加快或減慢原理：激動或抑制劑可加快或減慢(jin mn)酶促反應的速率，用系列濃酶促反應的速率，用系列濃度的激動或抑制劑與酶進行定時反應

10、，度的激動或抑制劑與酶進行定時反應，分離產物測放射性，可計算出激動劑分離產物測放射性，可計算出激動劑或抑制劑的量。或抑制劑的量。如磷酸吡哆醛能使酪氨酸脫羧基產如磷酸吡哆醛能使酪氨酸脫羧基產生生Co2，14C標記酪氨酸經磷酸吡哆醛標記酪氨酸經磷酸吡哆醛作用產生作用產生14Co2，可計算磷酸吡哆醛的，可計算磷酸吡哆醛的量。量。第10頁/共28頁第十頁，共29頁。 該法類同該法類同RIARIA的競爭，不同之處是的競爭，不同之處是E E不斷從不斷從E E* *S S和和ESES中釋放出來而再去與中釋放出來而再去與S S反應，如果反應時間足夠長，因反應，如果反應時間足夠長，因* *S S與與S S為同一

11、為同一(tngy)(tngy)物，會均被轉化為產物，失去競爭之間的函數關系，所以不能象物，會均被轉化為產物，失去競爭之間的函數關系，所以不能象RIARIA那樣等待反應平衡，那樣等待反應平衡，而應該在一定時間就得分離測定。而應該在一定時間就得分離測定。這是它的關鍵（特點之一）這是它的關鍵（特點之一） 5 5， ELISA ELISA：固相酶標記：固相酶標記- -免疫分析免疫分析 待測抗原固相化，然后與酶標記的抗體結合形成復合物，最后不測放射性而是讓酶顯色計算物質含量。待測抗原固相化，然后與酶標記的抗體結合形成復合物，最后不測放射性而是讓酶顯色計算物質含量。第11頁/共28頁第十一頁，共29頁。6

12、、整體酶活力測定、整體酶活力測定(cdng)及應用及應用二氧化碳呼氣試驗：二氧化碳呼氣試驗：用用14C或或13C等標記酶的底物，如經等標記酶的底物，如經過酶的作用，其產物中可收集到過酶的作用，其產物中可收集到CO2等，反映酶活力。等，反映酶活力。應用：幽門螺桿菌可產生尿素酶。應用：幽門螺桿菌可產生尿素酶。如果胃內有幽門螺桿菌，可將如果胃內有幽門螺桿菌，可將14C標標記的尿素分解為記的尿素分解為14CO2。因此有了。因此有了呼氣呼氣14CO2。檢測幽菌的檢驗。檢測幽菌的檢驗。第12頁/共28頁第十二頁，共29頁。7、其它體外分析的新進展、其它體外分析的新進展 化學發(fā)光分析（化學發(fā)光分析（CLIA

13、）：）：如發(fā)光劑魯米諾經氧化劑如發(fā)光劑魯米諾經氧化劑H2O2和催化劑和催化劑（HRP）作用下放出光子（發(fā)光）作用下放出光子（發(fā)光）特點：特點：a、用發(fā)光物質代替放素建立的免疫分析。、用發(fā)光物質代替放素建立的免疫分析。b、試劑盒穩(wěn)定性更好，發(fā)光物用特殊處理、試劑盒穩(wěn)定性更好，發(fā)光物用特殊處理后才發(fā)光。后才發(fā)光。c、無放射性污染、無放射性污染d、設備相對簡單（仍昂貴，但、設備相對簡單（仍昂貴，但RIA也貴）也貴）e、發(fā)光效率與溫度有關、發(fā)光效率與溫度有關(yugun)，須，須配備恒溫設備配備恒溫設備f、 臨床上可應用項目有限，價格高于臨床上可應用項目有限，價格高于RIA第13頁/共28頁第十三頁，

14、共29頁。時間分辨熒光免疫分析（時間分辨熒光免疫分析（TrFIA） 概念概念(ginin)：稀土元素：稀土元素不是土：稀土元素：稀土元素不是土,是周期表中是周期表中5771號元素的總號元素的總稱，現又新發(fā)現二個鈧、釔，共計稱，現又新發(fā)現二個鈧、釔，共計17個元素。個元素。 如果用稀土元素標記化合物，而這些稀土元素如如果用稀土元素標記化合物，而這些稀土元素如Eu（銪）、（銪）、Tb（鋱）（鋱）Te、Sm（釤）、（釤）、Dy（鏑）等可發(fā)射熒光，在紫外線激發(fā)下其發(fā)光能譜和發(fā)光時間相對集中而（鏑）等可發(fā)射熒光，在紫外線激發(fā)下其發(fā)光能譜和發(fā)光時間相對集中而穩(wěn)定。而干擾因素的本底發(fā)光壽命很短，可將標記物放

15、置短時間，待本底光暴光后再穩(wěn)定。而干擾因素的本底發(fā)光壽命很短，可將標記物放置短時間，待本底光暴光后再去測量稀土熒光，所以叫時間分辨。必要時其發(fā)光還可做些增效處理。去測量稀土熒光，所以叫時間分辨。必要時其發(fā)光還可做些增效處理。第14頁/共28頁第十四頁，共29頁。該方法優(yōu)點：該方法優(yōu)點：1、靈敏度高，特異性強、靈敏度高，特異性強2、出結果快、出結果快3、樣品熒光能重現、樣品熒光能重現4、無放射性污染、無放射性污染缺點缺點(qudin)：儀器價格：儀器價格貴貴 配套試劑制備困難配套試劑制備困難第15頁/共28頁第十五頁，共29頁。免疫免疫PCR原理：用原理：用DNA做標記物，用做標記物，用PCR法

16、擴增產物上的法擴增產物上的DNA，通量測定，通量測定DNA的量進行定的量進行定性性(dng xng)研究。研究?；痉磻夯痉磻?）將待測物抗原固化試管底部）將待測物抗原固化試管底部2）加入生物素標記的特異抗體）加入生物素標記的特異抗體Ab-b3）加入親和素）加入親和素A做為連接分子做為連接分子 Ag+Ab-b+AAgAb-b-A4）再加入生物素標記的）再加入生物素標記的DNA-b得得AgAb-b-A-b-DNA 引物引物 PCR擴增擴增 染色染色 記錄記錄PCR擴增的擴增的DNA量確定量確定Ab的含量。的含量。第16頁/共28頁第十六頁，共29頁。優(yōu)點：優(yōu)點：1） 特異性強（與特異性強（

17、與RIA相同）相同）2）靈敏度高（比酶標高）靈敏度高（比酶標高1000倍，倍，也高于也高于RIA）3）操作簡單）操作簡單缺點：缺點：1）假陽性高）假陽性高2）影響實驗）影響實驗(shyn)準確度的因準確度的因素多素多3）未商品化）未商品化第17頁/共28頁第十七頁，共29頁。還有化學發(fā)光酶免疫分析（CLEIA）p209 用鹼性磷酸酶標記Ab，反應的復合物帶有酶，加入(jir)底物金剛烷（dioxetane phosphate）后酶促底物斷裂而發(fā)光。電化學發(fā)光免疫分析（ECL） p209 第18頁/共28頁第十八頁，共29頁。8、活化分析： 基本原理，用粒子束（射線）照射樣品，使其中待測穩(wěn)定核素

18、發(fā)生核反應變?yōu)榉潘?，由于這些放素各具有一定的半衰期、固定的能量特征r射線或其它射線，測量其衰變出的射線能量和活度就可確定樣品中各元素(yun s)的種類和活度。臨床應用：微量元素(yun s)分析第19頁/共28頁第十九頁，共29頁?；罨治龅念愋停夯罨治龅念愋停?）中活化分析：）中活化分析：a、反應堆中子活化分析（廣泛）、反應堆中子活化分析（廣泛）b、中子高壓倍加器（啟動費用高）、中子高壓倍加器（啟動費用高）c、中子源，如、中子源，如Ra-Be中子源（中子源（Ra的的a粒子粒子轟擊轟擊Be可產生中子）可產生中子）d、自發(fā)裂變中子源、自發(fā)裂變中子源252Cf（價格貴），將（價格貴），將239

19、Pu在反應堆照射二年吸收在反應堆照射二年吸收13個中子個中子才能得到才能得到252Cf產額很低。產額很低。2）帶電粒子活化分析：一般將帶電子粒子）帶電粒子活化分析：一般將帶電子粒子如如P、d、a加速，然后轟擊待測元素，產加速，然后轟擊待測元素，產生新的放素或穩(wěn)定核素。如生新的放素或穩(wěn)定核素。如12C（p,r）13N3）r射線活化分析：較危險射線活化分析：較危險(wixin)，目前很少用。目前很少用。第20頁/共28頁第二十頁，共29頁?；罨治龅膬?yōu)點：活化分析的優(yōu)點：靈敏度高靈敏度高10-9克左右克左右沒有試劑污染沒有試劑污染可進行非破壞性分析可進行非破壞性分析一次可同時分析幾十種元素一次可同

20、時分析幾十種元素缺點：缺點：精確度低精確度低有干擾有干擾(gnro)反應（副反應）反應（副反應）方法不易普及方法不易普及不能測化合物的量和結構。不能測化合物的量和結構。第21頁/共28頁第二十一頁，共29頁。最常用最常用(chn yn)的計算公式（相對測量法）的計算公式（相對測量法） WX AX - = - WS AS第22頁/共28頁第二十二頁，共29頁。8、質子激發(fā)、質子激發(fā)X線發(fā)射分析線發(fā)射分析PIXEA 原理：用高速運動的質子轟原理：用高速運動的質子轟擊待測元素，待測元素原子核外電擊待測元素，待測元素原子核外電子被擊出，留下的空穴將被外層電子被擊出，留下的空穴將被外層電子來填補，多余子

21、來填補，多余(duy)的能量以的能量以特征特征X線放出。線放出。 特征（產生射線的能量與入特征（產生射線的能量與入射粒子無關，它只與被測元素的種射粒子無關，它只與被測元素的種類有關。不同的元素產生不同的特類有關。不同的元素產生不同的特征征X線。線。第23頁/共28頁第二十三頁，共29頁。分子分子(fnz)核醫(yī)學進展核醫(yī)學進展 內涵：利用示蹤技術觀察體內的生化過程并與相關基因聯(lián)系起來的一門內涵：利用示蹤技術觀察體內的生化過程并與相關基因聯(lián)系起來的一門(y mn)分支學科，分子識別是其分支學科，分子識別是其重要理論基礎。重要理論基礎。 研究領域：受體顯像研究領域：受體顯像 基因顯像基因顯像 重組單抗片段、肽類放射性藥物及微型抗體。重組單抗片段、肽類放射性藥物及微型抗體。 第24頁/共28頁第二十四頁，共29頁。使用(shyng)時，直接刪除本頁！精品課件，你值得(zh d)擁有！精品(jn