植物染色體的人工加倍技術(shù)

1、二、技術(shù)原理三、前期準(zhǔn)備 四、多倍體的誘導(dǎo)五、觀察與鑒定一、技術(shù)優(yōu)勢(shì)技 術(shù) 優(yōu)勢(shì)（1 1）克服雜種分離，縮短雜交育種年限）克服雜種分離，縮短雜交育種年限（2 2）排除顯、隱性基因干擾，提高選擇效率）排除顯、隱性基因干擾，提高選擇效率（3 3）單倍體是誘變育種的良好材料）單倍體是誘變育種的良好材料（4 4）能克服遠(yuǎn)緣雜交的不孕性，創(chuàng)造生物新類型）能克服遠(yuǎn)緣雜交的不孕性，創(chuàng)造生物新類型（5 5）利用單倍體對(duì)栽培品種進(jìn)行純化）利用單倍體對(duì)栽培品種進(jìn)行純化 植物染色體的人工加倍技術(shù)是一種新型育種方法，一般采用秋水仙素作為誘導(dǎo)劑，在植物細(xì)胞分裂的后期利用秋水仙素阻止紡錘體的形成，使已經(jīng)縱裂的染色體在后期

2、不能分開到兩個(gè)子細(xì)胞中去，完成染色體加倍的加倍計(jì)劃。技 術(shù) 原 理有籽有籽西瓜西瓜父本父本母本母本去雄授粉去雄授粉種下去種下去無(wú)籽西瓜無(wú)籽西瓜花粉刺激花粉刺激備用材料：萌動(dòng)的玉米，黑麥，蠶豆種子備用藥品：秋水仙堿溶液（0.1%、0.05%），乙醇（95%，80%，70%）用具：鑷子，解剖剪，培養(yǎng)皿，吸水紙，指形管，燒杯，卡諾固定液，顯微鏡，顯微測(cè)微尺，載玻片，蓋玻片，鑷子，燒杯，恒溫水浴鍋，吸水紙，1mol/L HCl ，1% I2-KI溶液，醋酸大麗紫，席夫試劑前 期 準(zhǔn) 備多 倍 體 的 誘 導(dǎo) 秋水仙素秋水仙素：在多倍體誘導(dǎo)中因秋水仙素作誘導(dǎo)處理具有普遍有效 性和使用簡(jiǎn)便，危害小等優(yōu)勢(shì)而

3、多被選用。植物狀態(tài)植物狀態(tài)：同時(shí)為使秋水仙素處理達(dá)到較好效果，被處理的植物組織 當(dāng)處于生長(zhǎng)狀態(tài)為宜，有盡可能多的細(xì)胞正處分裂過(guò)程中。為了減少二倍與多倍性組織嵌合現(xiàn)象的發(fā)生，被處理的組織數(shù)目越少越好。為此，通常是用秋水仙堿的稀溶液處理正在萌動(dòng)的種子，幼芽。處理方法處理方法：涂抹法，滴液法，注射法，噴霧法，熏蒸法，浸泡法等。多 倍 體 的 誘 導(dǎo) 、玉米多倍體的誘導(dǎo)：1 玉米種子催生發(fā)芽至芽長(zhǎng)0.3-1.0cm2 將1操作中的種芽放入含0.1%秋水仙素溶液的脫脂棉培養(yǎng)皿中，室 溫下處理2-4d（20左右2-3d）3 將處理后的種苗用清水沖洗2-3次，剪取根尖，用卡諾液固定。4 剪除根尖和未剪除根尖

4、的種苗繼續(xù)用流水沖洗2-3h后播于實(shí)驗(yàn)實(shí)訓(xùn)地生長(zhǎng)。觀察記錄5 取未經(jīng)處理的玉米種子在實(shí)驗(yàn)實(shí)訓(xùn)地中種植作為對(duì)照組，觀察記錄多 倍 體 的 誘 導(dǎo) 、蠶豆多倍體的誘導(dǎo)：1 將萌動(dòng)的蠶豆種子浸在0.05%秋水仙素溶液中，置于25條件下處理24h。2 用清水將秋水仙素處理后的種子沖洗1-3h，再將種子放到裝有少許水并墊有兩層吸水紙的培養(yǎng)皿內(nèi)，上面蓋兩層的吸水紙，置25條件下培養(yǎng)。3 待0根尖0.5-1.0cm時(shí)，剪下根尖，固定于卡諾液中。4 將處理后的種子均播于試驗(yàn)地，觀察記錄。5 取未經(jīng)處理的蠶豆種子在實(shí)驗(yàn)實(shí)訓(xùn)地中種植作為對(duì)照組，觀察記錄多 倍 體 的 誘 導(dǎo) 、黑麥多倍體的誘導(dǎo)：1 將剛剛張口發(fā)芽

5、的種子浸入到0.1%的秋水仙堿溶液中，在25下處理24小時(shí)。2 用清水沖洗2h，將根尖剪下固定在卡諾液中取5株種苗用清水浸泡 24h。3 將上處理過(guò)的植株用清水沖洗2h，均播于實(shí)驗(yàn)實(shí)訓(xùn)地，觀察記錄5 取未經(jīng)處理的黑麥種子在實(shí)驗(yàn)實(shí)訓(xùn)地中種植作為對(duì)照組，觀察記錄觀 察 與 鑒 定 直接鑒定法直接鑒定法：取被處理并固定的根尖，用植物根尖壓片法制片，然后找中期圖像，檢查染色體數(shù)。如果要進(jìn)行快速檢查，可采用醋酸大麗紫染色法，如準(zhǔn)備制成固定片，可采用席夫試劑染色法。間接鑒定法間接鑒定法：植物隨著染色體數(shù)目的增加，某些組織器官的外形大小有相應(yīng)增大的特征，這種被稱為多倍體的巨大性。它主要表現(xiàn)在氣孔、花器、花粉粒、果實(shí)、種子的增大，以及莖稈變粗，葉片加厚，花粉發(fā)芽孔增多等方面。除巨大性外，還普遍可以觀察到單位葉面積上氣孔數(shù)的變化，穗粒數(shù)的變化和株高變化等異常變化。間接鑒定法花粉粒大小的鑒定：取經(jīng)過(guò)加倍處理和對(duì)照的花粉（新鮮或固定的均可），涂于載玻片上，滴一滴1%I2-KI，加蓋玻片，吸去多余染液，鏡檢并用顯微鏡測(cè)花粉粒的大小和