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文檔簡介
1、2022-6-301水產(chǎn)品中生物毒素及生物胺的水產(chǎn)品中生物毒素及生物胺的檢測檢測海產(chǎn)品衛(wèi)生檢疫2022-6-302(一)河豚毒素(一)河豚毒素(TTX)毒素的濃度由高到低依次為:卵巢、肝臟、腎臟、眼睛和皮膚,肌肉和血液中含量較少。2022-6-3032022-6-304毒性毒性 河豚毒素屬于小分子量、非蛋白質(zhì)的神經(jīng)性毒素, 毒性比劇毒的氰化鈉還要高1000多倍, 最低0. 5mg即可致人于死命,一般致死劑量為1-4mg。2022-6-305中毒癥狀:中毒癥狀: 發(fā)病急劇而劇烈,潛伏期10min-3h,最初口感覺渴,唇、舌、手指發(fā)麻,繼之以末端神經(jīng)麻木,胃腸道癥狀,四肢無力,發(fā)冷以及口、舌、指端
2、等處麻痹,言語不清、血壓、體溫下降,呼吸困難,最后死于呼吸衰竭窒息,其死亡率較高,并沒有特別的解藥。2022-6-306一、河豚毒素含量的檢測一、河豚毒素含量的檢測 (一)定量法GB/T23217-2008水產(chǎn)品中河豚毒素的測定 液相色譜-熒光檢測法適用對象:河豚魚、織紋螺、蝦、牡蠣、花蛤、魷魚2022-6-307(二)定性法(二)定性法1試樣的制備 取樣剪碎、磨碎取10g放入燒杯加25 ml 0.1%醋酸沸水浴10min(不斷攪拌)冷卻減壓過濾殘渣用0.1%醋酸溶液反復(fù)洗凈濾液和洗液合在一起定容50mL。 該提取液稱作原試液 1mL相當(dāng)于內(nèi)臟組織0.2g。2022-6-308(二)定性法(二
3、)定性法試驗動物為:小白鼠年齡出生后4周體重1921g健康狀況健康種系ICR系性別雄性對小白鼠的有哪些要求?2022-6-309(1)預(yù)備試驗預(yù)備試驗 腹腔注射原試液各1mL,以s為單位測定致死時間的平均值。 根據(jù)河豚毒素致死-小白鼠單位換算表換算原試液1mL中的毒量,再以該值配制稀釋到小白鼠在10min左右死亡的濃度 (在本試驗中使用0.1%醋酸水溶液作為稀釋液,記錄稀釋度。)2022-6-3010(2)正式試驗正式試驗 腹腔注射稀釋后的試液各1mL,測定致死的時間。 用0.1%醋酸溶液1.0mL注射兩只20g左右的小白鼠作陰性對照, 取1只不注射任何液體的正常小白鼠作空白觀察。2022-6
4、-3011(2)正式試驗正式試驗1 2 3 4 5 6 7 8 9 1011121314151617181920-0.1%醋酸溶液1.0mL2122232425262728293031323334353637383940稀釋后的試液各1mL2022-6-3012 (3)毒力計算和表示毒力計算和表示 求中間致死時間 在該試驗取得的3-5只小白鼠的致死時間也包括生存小白鼠從短時間開始排列,求中間致死時間2022-6-3013 (3)毒力計算和表示毒力計算和表示 求原檢樣1g的小白鼠單位MU(1MU表示對一只ICR系體重20g的雄性小白鼠腹腔注射后30min內(nèi)死亡的毒素劑量) 10g內(nèi)臟組織研磨物制
5、成50mL毒素提取原試液,提取比是5。 原檢樣1g的毒力(MU/g)中間致死時間試液的毒力 x 提取比 x 稀釋倍數(shù)2022-6-3014 二、組胺的檢測2022-6-3015二、組胺的檢測 當(dāng)組胺含量積蓄至4mg/g時,人體攝入組胺100mg以上時,易發(fā)生中毒。 組胺中毒是由于組胺使毛細(xì)血管擴張和支氣管收縮所致,中毒癥狀輕,主要是臉紅,胸部以及全身皮膚潮紅和眼結(jié)膜充血,同時還有頭痛、頭暈、胸悶等現(xiàn)象。 部分病人出現(xiàn)口、舌、四肢發(fā)麻以及惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉、蕁麻疹等。有的可出現(xiàn)支氣管哮喘、呼吸困難、血壓下降。病程大多為1-2天。愈后良好。2022-6-3016有色化合物 480nm一、原理:
6、呈色反應(yīng)重氮鹽比色法2022-6-3017重氮鹽的形成:甲:對硝基苯胺0.5g,加濃鹽酸5mL,溶解后,加水至200mL,冰箱儲存。乙:亞硝酸鈉0.5g,加水溶解至100mL(現(xiàn)用現(xiàn)配)2022-6-3018二、儀器與試劑二、儀器與試劑 10%三氯乙酸: 25%氫氧化鈉 重氮鹽試劑: 組胺標(biāo)準(zhǔn)儲備液:準(zhǔn)確稱取在硫酸干燥器中干燥24h的磷酸組胺27.67mg(分析純),用水溶解并定容至100mL容量瓶中。該溶液每毫升含組胺1mg。 組胺標(biāo)準(zhǔn)使用液:準(zhǔn)確吸取組胺標(biāo)準(zhǔn)儲備液 l.0mL于500mL容量瓶中,用水定容至刻度,該溶液每毫升含組胺為10ug。2022-6-3019三、試驗方法三、試驗方法
7、1、樣品處理 除去樣品中的非可食部分,將樣品搗碎、混勻,準(zhǔn)確稱取15g于50mL具塞三角瓶中,加入20mL三氯醋酸(10%),在60水浴中浸提30min,過濾。 殘渣用水洗2次(每次加水10mL )并過濾,合并濾液。用氫氧化鈉溶液(250g/L)中和濾液至pH5.0,再用水定容至100mL.2022-6-3020 2.抽提: (1)正戊醇抽提:取濾液1mL于分液漏斗中,加入25NaOH使其呈堿性。再加入3mL正戊醇,振搖分層提取,然后取正戊醇層。(2)酸液提取:取正戊醇液1mL,至于另一個漏斗中,加入3mLHCl(1mol/L),混合均勻,靜止5分鐘,分層,取下層鹽酸溶液。重復(fù)提取3次,合并提取液。水層:堿液正戊醇層:組胺酸液層:組胺的鹽酸鹽正戊醇層2022-6-3021取1.0-5.0mL鹽酸提取液于10ml比色管,加入3mLNa2CO3 (5%),偶氮試劑3mL,混勻,用水稀釋至10mL,混合后放置10分鐘,在480nm測光密度。3、呈色反應(yīng)、呈色反應(yīng)2022-6-30224、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:取組胺標(biāo)準(zhǔn)使用液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL,各加1mL HCl (1mol/L )、3mL Na2CO3 (5%)、偶氮試劑 3mL。同樣操作,測定吸光值。確定組胺濃度
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