第二章天然產物有效成分的提純分離與結構鑒定

1、天然產物有效成分的提純分離與結構天然產物有效成分的提純分離與結構鑒定鑒定第二章第二章 教學目的與要求：教學目的與要求：掌握天然產物化學成分提取分離的原理及方法了解用波譜法測定天然產物化學成分結構的一般方法1主要內容主要內容一、天然產物有效成分提取方法的原理溶劑提取法與水蒸氣蒸餾法的原理、操作及其特點二、天然產物有效成分分離與精制天然產物有效成分各種分離方法的原理三、化合物的純度測定四、結構研究的主要程序五、結構研究中采用的主要方法 UV IR MS NMR2第一節(jié)第一節(jié) 天然有效成分的提取天然有效成分的提取 溶劑法溶劑法水蒸氣蒸餾法水蒸氣蒸餾法 升華法升華法 3一、溶劑提取法一、溶劑提取法 1

2、、溶劑提取法及其原理 根據(jù)“相似相溶”原理，選擇與化合物極性相當?shù)娜軇⒒衔飶闹参锝M織中溶解出來，同時，由于某些化合物的增溶或助溶作用，其極性與溶劑極性相差較大的化合物也可溶解出來。 溶劑提取法是根據(jù)天然產物中各種成分在溶劑中的溶解性質，選用對活性成分溶解度大，對不需要溶出成分溶解度小的溶劑，而將有效成分從藥材組織內溶解出來的方法。 4 2、常用溶劑的特點、常用溶劑的特點 環(huán)己烷,石油醚,苯,氯仿,乙醚,乙酸乙酯,正丁醇,丙酮,乙醇,甲醇極性：小 大親脂性：大 小 親水性：小 大 5比水重的有機溶劑：氯仿與水分層的有機溶劑：環(huán)己烷 正丁醇能與水分層的極性最大的有機溶劑：正丁醇與水可以以任意比

3、例混溶的有機溶劑：丙酮 甲醇極性最大的有機溶劑：甲醇極性最小的有機溶劑：環(huán)己烷介電常數(shù)最小的有機溶劑：石油醚常用來從水中萃取苷類、水溶性生物堿類成分 的有機溶劑：正丁醇溶解范圍最廣的有機溶劑：乙醇6運用溶劑提取法的關鍵，是選擇適當?shù)娜軇?。溶劑選擇適當，就可以比較順利地將需要的成分提取出來。選擇溶劑要注意以下三點：溶劑對有效成分溶解度大，對雜質溶解度??；溶劑不能與中藥的成分起化學變化；溶劑要經濟、易得、使用安全等。3 3、溶劑的選擇、溶劑的選擇74 4、各種溶劑提取法、各種溶劑提取法 連續(xù)回流提取法等 浸漬法滲漉法煎煮法回流提取法8浸漬法浸漬法：浸漬法系將天然產物粉末或碎塊裝人適當?shù)娜萜髦?，加?/p>

4、適宜的溶劑（如乙醇、稀醇或水），浸漬藥材以溶出其中成分的方法。滲漉法滲漉法：滲漉法是將天然產物粉末裝在滲漉器中，不斷添加新溶劑，使其滲透過藥材，自上而下從滲漉器下部流出浸出液的一種浸出方法。901 溶劑罐02 變頻物料泵 03 快速滲漏機 04 流量計 05 滲濾液罐 06 可調試電加熱水箱 07 熱水泵 08 高效旋轉薄膜蒸發(fā)器 09 濃縮液罐 10 冷凝器 11 冷卻器 12 受卻器 13 真空泵 14 控制柜 SLNS-快速滲漉提取濃縮機組工藝流程圖快速滲漉提取濃縮機組工藝流程圖 10SLNS-快速滲漉提取濃縮機組快速滲漉提取濃縮機組11煎煮法煎煮法：煎煮法是我國最早使用的傳統(tǒng)的浸出方法

5、。所用容器一般為陶器、砂罐或銅制、搪瓷器皿，不宜用鐵鍋，以免藥液變色。直火加熱時最好時常攪拌，以免局部藥材受熱太高，容易焦糊。有蒸汽加熱設備的藥廠，多采用大反應鍋、大銅鍋、大木桶，或水泥砌的池子中通入蒸汽加熱。還可將數(shù)個煎煮器通過管道互相連接，進行連續(xù)煎浸。 回流提取法回流提取法：應用有機溶劑加熱提取，需采用回流加熱裝置，以免溶劑揮發(fā)損失。小量操作時，可在圓底燒瓶上連接回流冷凝器。溶劑浸過藥材表面約12cm。在水浴中加熱回流，一般保持沸騰約1小時后放冷過濾，再在藥渣中加溶劑，作第二、三次加熱回流分別約半小時，或至基本提盡有效成分為止。此法提取效率較冷浸法高，大量生產中多采用連續(xù)提取法。 12連

6、續(xù)回流提取法連續(xù)回流提取法：應用揮發(fā)性有機溶劑提取天然產物有效成分，不論小型實驗或大型生產，均以連續(xù)提取法為好，而且需用溶劑量較少，提取成分也較完全。實驗室常用脂肪提取器或稱索氏提取器。連續(xù)提取法，一般需數(shù)小時才能提取完全。提取成分受熱時間較長，遇熱不穩(wěn)定易變化的成分不宜采用此法。 13 提取方法溶劑操作提取效率使用范圍備注浸漬法水 或 有 機溶劑不加熱效率低各類成分 ，尤遇熱不 穩(wěn)定成分出膏率低，易發(fā)霉，需加防腐劑滲漉法有機溶劑不加熱脂溶性成分消耗溶劑量大，費時長煎煮法水直火加熱水溶性成分易揮發(fā)、熱不穩(wěn)定不宜用回流提取法有機溶劑水浴加熱脂溶性成分熱不穩(wěn)定不宜用，溶劑量大連續(xù)回流提取法有機溶劑

7、水浴加熱節(jié)省溶劑、效率最高親脂性較 強成分用索氏提取器，時間長14二、二、 水蒸氣蒸餾法水蒸氣蒸餾法 水蒸氣蒸餾法，適用于能隨水蒸氣蒸餾而不被破壞的天然產物成分的提取。此類成分的沸點多在100以上，與水不相混溶或僅微溶，且在約100時存一定的蒸氣壓。當與水在一起加熱時，其蒸氣壓和水的蒸氣壓總和為一個大氣壓時，液體就開始沸騰，水蒸氣將揮發(fā)性物質一并帶出。 15三三 、升華法升華法 固體物質受熱直接氣化，遇冷后又凝固為固體化合物，稱為升華。天然產物中有一些成分具有升華的性質，故可利用升華法直接自天然產物中提取出來。 例如樟木中升華的樟腦（camphor），在本草綱目中已有詳細的記載，為世界上最早應

8、用升華法制取藥材有效成分的記述。 茶葉中的咖啡堿在178以上就能升華而不被分解。游離羥基蒽醌類成分，一些香豆素類，有機酸類成分，有些也具有升華的性質。 16四、影響提取效果的因素四、影響提取效果的因素 溶劑提取的效果主要取決于選擇合適的溶劑和提取方法。此外，原料的粉碎程度，提取溫度，濃度差，提取時間，操作壓力，原料與溶劑的相對運動等因素也不同程度地影響提取效果。 原料的粉碎程度：原料的粉碎程度：原料經粉碎后粒度變小，表面能增加，浸出速度加快，但粉碎度過高，樣品粉粒表面積過大，吸附作用增強，反而影響擴散速度，并不利于浸出，一般而言粒度以2060目為適。 17浸出溫度：浸出溫度：溫度增加可增大可溶

9、性成分的溶解度、擴散系數(shù)。擴散速度加快有利于浸提，并且溫度適當升高，可使原料中的蛋白質凝固、酶破壞而增加浸提液的穩(wěn)定性，但溫度過高，會破壞不耐熱的成分，并且導致浸提液的品質劣變。提取的雜質含量增高，給后道精制工序帶來困難，一般浸出溫度控制在60100。 浸提時間浸提時間: :原料中的成分隨提取時間延長，提取的得率增加，但時間過長，雜質成分溶解也隨之增加，給后序提取精制造成困難，一般而言，熱提13h，乙醇加熱回流提取12h。 濃度差濃度差: :濃度差是原料組織內的濃度與外周溶液的濃度差異。濃度差越大，擴散推動力越大，越有利于提高浸出效率。 18第二節(jié)第二節(jié) 天然產物有效成分天然產物有效成分 的分

10、離與精制的分離與精制 根據(jù)物質溶解度差別進行分離 根據(jù)物質在兩相溶劑中的分配系數(shù)不同進行分離 根據(jù)物質的吸附性差別進行分離 19一、根據(jù)物質溶解度差別進行分離一、根據(jù)物質溶解度差別進行分離 1 1、結晶、結晶結晶是利用溫度不同引起溶解度的改變而使有效成分以晶體的形式析出以達到分離物質的目的。（1）雜質的除去）雜質的除去：天然產物經過提取分離所得到的成分，大多仍然含有雜質，或者是混合成分。有時即使有少量或微量雜質存在，也能阻礙或延緩結晶的形成。所以在制備結晶時，必須注意雜質的干擾，應力求盡可能除去。 （2）溶劑的選擇）溶劑的選擇：制備結晶，要注意選擇合宜的溶劑和應用適量的溶劑。合宜的溶劑，最好是

11、在冷時對所需要的成分溶解度較小，而熱時溶解度較大。溶劑的沸點亦不宜太高。 20（3）結晶溶液的制備）結晶溶液的制備 ：制備結晶的溶液，需要成 為過飽和的溶液。 （4）制備結晶操作）制備結晶操作（5）重結晶及分步結晶）重結晶及分步結晶：晶態(tài)物質可以用溶劑溶解再次結晶精制。這種方法稱為重結晶法。結晶經重結晶后所得各部分母液，再經處理又可分別得到第二批、第三批結晶。這種方法則稱為分步結晶法或分級結晶法。 （6）結晶純度的判定）結晶純度的判定：化合物的結晶都有一定的結晶形狀、色澤、熔點和熔距，一可以作為鑒定的初步依據(jù)。 212 2、溶劑沉淀：、溶劑沉淀： 在溶液中加入另一種溶劑以改變混合溶劑的極性，使

12、一部分物質沉淀析出，從而實現(xiàn)分離。 3 3、沉淀劑沉淀：、沉淀劑沉淀：（1）金屬離子沉淀；（2）酸堿沉淀；（3）非離子型聚合物沉淀；（4）均相沉淀。4 4、鹽析沉淀、鹽析沉淀 22二、根據(jù)物質在兩相溶劑中的分配比二、根據(jù)物質在兩相溶劑中的分配比 不同進行分離不同進行分離 1、液、液-液萃取與分配系數(shù)液萃取與分配系數(shù)K值值 K=CU/CL （2-1） 2、分離難易與分離因子分離難易與分離因子 分離因子表示 A、B 兩種溶質在同一溶劑系統(tǒng)中分配系數(shù)的比值。即： =KA/KB( 注：KA KB ) （2-2） 233、 分配比與分配比與pH HA+H2O A-+H3O+ )32(3HAOHAKa)4

13、2(lgHAAPKpHa若使該酸性物質完全離解 ，則：)52(2) 1/100lg(lgaaapKpHpKHAApKpH故：24使該酸性物質完全游離，即使A-均轉變成HA，則： ) 62 (2apKpH因為酚類化合物的pKa值一般為9.210.8，羧酸類化合物的pKa值約為5，故pH值為3以下，大部分酚酸性物質將以非離解形式（HA）存在，易分配于有機溶劑中；而pH12以上，則將以離解形式（A-）存在，易分配于水中。同理，對于堿性物質（B）： )72(lgBHBPKpHaKa為堿性物質（B）的共軛酸（BH+）的離解常數(shù)。 25一般 pH12,則酸性物質呈離解狀態(tài)(A-)、堿性物質則呈非離解狀態(tài)(

14、B)存在。據(jù)此,可采用圖1-1所示在不同pH的緩沖溶液與有機溶劑中進行分配的方法,使酸性、堿性、中性及兩性物質得以分離。 2627兩相溶劑萃取在操作中還要注意以下幾點：1）先用小試管猛烈振搖約1分鐘，觀察萃取后二液層分層現(xiàn)象。如果容易產生乳化，大量提取時要避免猛烈振搖，可延長萃取時間。如碰到乳化現(xiàn)象，可將乳化層分出，再用新溶劑萃??；或將乳化層抽濾，或將乳化層稍稍加熱；或較長時間放置并不時旋轉，令其自然分層。乳化現(xiàn)象較嚴重時，可以采用二相溶劑逆流連續(xù)萃取裝置。 2） 水提取液的濃度最好在比重1.11.2之間，過稀則溶劑用量太大，影響操作。 3） 溶劑與水溶液應保持一定量的比例，第一次提取時，溶劑

15、要多一些，一般為水提取液的1/3，以后的用量可以少一些，一般1/4-1/6。 284）一般萃取34次即可。但親水性較大的成分不易轉入有機溶劑層時，須增加萃取次數(shù)，或改變萃取溶劑。 4、超臨界流體萃取技術、超臨界流體萃取技術 超臨界流體萃取是以某一介質作為萃取劑，在其臨界溫度和臨界壓力之上的條件下，從液體或固體物料中萃取出待分離的組分的一種方法。 超臨界流體由于接近液體的密度使之具有較高溶解度,由于接近氣體的粘度, 使之具有良好的流動性能,擴散系數(shù)介于氣液之間,使之對待萃取的物料組織有良好的滲透性,這些特征大大提高了溶質進入超臨界流體的傳質速率。 29( (1 1) ) 超臨界流體萃取的特點超臨

16、界流體萃取的特點 萃取過程在較低溫度范圍內進行,特別適用于具有熱敏性或易氧化的成分。萃取介質通常選用二氧化碳,二氧化碳化學性質穩(wěn)定,無腐蝕性、無毒性、不易燃、不易爆,萃取后容易從分離成分中脫除,不會造成污染,適用于食品和醫(yī)藥行業(yè)。 工藝條件容易控制,通過對溫度和壓力進行調節(jié), 可以實現(xiàn)選擇性萃取和分離。 萃取產物的理化性質保持良好,產品質量好,且無溶劑殘留問題,萃取介質循環(huán)利用,無環(huán)境污染問題。 超臨界流體萃取需要冷媒和高壓支持且生產量較小,操作成本大。 30（2 2）超臨界流體萃取的應用）超臨界流體萃取的應用 由于超臨界流體萃取技術上有許多元可替代的優(yōu)點,近年來獲得高度的重視和廣泛的應用,例

17、如中藥有效成分的提??；菌體生成物的分離；香精香料色素的提??；動植物脂肪、脂溶性成分、植物堿、甾醇類物質等成分的提??；有機溶劑以及有害有毒物質的脫除等。 315. 5. 逆流分溶法逆流分溶法(CCD)(CCD) 液-液萃取分離中經常遇到的情況是分離因子值較小, 故萃取及轉移操作常須進行幾十次乃至幾百次。此時簡單萃取已不能滿足需要, 而要采用逆流分溶法( countercurrent distribution,簡稱CCD)。 32CCD 法因為操作條件溫和、試樣容易回收,故特別適于中等極性、不穩(wěn)定物質的分離。另外,溶質濃度越低,分離效果越好。但是,試樣極性過大或過小,或分配系數(shù)受濃度或溫度影響過大

18、時則不易采用此法分離。易于乳化的萃取溶劑系統(tǒng)也不宜采用。 33346、液液分配色譜柱、液液分配色譜柱 將兩相溶劑中的一相涂覆在硅膠等多孔載體上,作為固定相,填充在色譜管中,然后加入與固定相不相混溶的另一相溶劑 (流動相)沖洗色譜柱。這樣,物質同樣可在兩相溶劑中相對作逆流移動,在移動過程中不斷進行動態(tài)分配而得以分離。這種方法稱之為液-液分配柱色譜法。 （1 1）正相色譜與反相色譜正相色譜與反相色譜：分離水溶性或極性較大的成分如生物堿、苷類、糖類、有機酸等化合物時,固定相多采用強極性溶劑,如水、緩沖溶液等,流動相則用氯仿、乙酸乙醋、丁醇等弱極性有機溶劑,稱之為正相色譜；但當分離脂溶性化合物,如高級

19、脂肪酸、油脂、游離甾體等時,則兩相可以顛倒,固定相可用石蠟油,而流動相則用水或甲醇等強極性溶劑,故稱之為反相分配色譜 (reverse phase partition chromatography)。 35（2 2）加壓液相柱色譜）加壓液相柱色譜特點特點：加壓液相色譜用的載體多為顆粒直徑較小、機械強度及比表面積均大的球形硅膠微粒，因而柱效率大大提高。 36三、根據(jù)物質的吸附性質差別進行分離三、根據(jù)物質的吸附性質差別進行分離 物理吸附物理吸附 (physical absorption) 也叫表面吸附,是因構成溶液的分子(含溶質及溶劑)與吸附劑表面分子的分子間力的相互作用所引起。 特點特點：是無選

20、擇性、吸附與解吸過程可逆、 可快速進行。故在實際工作中用得最廣。如采用硅膠、氧化鋁及活性炭為吸附劑進行的吸附色譜即屬于這一類型。 37化學吸附化學吸附(chemical absorption),如黃酮等酚酸性物質被堿性氧化鋁吸附,或生物堿被酸性硅膠吸附等吸附質與吸附劑之間要發(fā)生化學反應的一類吸附。特點特點：具有選擇性、 吸附十分牢固、有時甚至不可逆,故用得較少。半化學吸附半化學吸附(semi-chemical absorption),如聚酰胺對黃酮類、醌類等化合物之間的氫鍵吸附,力量較弱,介于物理吸附與化學吸附之間的一類吸附。381. 1. 物理吸附基本規(guī)律物理吸附基本規(guī)律 （2）被分離的物質

21、與吸附劑、洗脫劑共同構成吸附過程中的三要素，彼此緊密相連。（1）物理吸附過程一般無選擇性，但吸附強弱大體遵循“相似者易于吸附” 的經驗規(guī)律。硅膠、氧化鋁因均為極性吸附劑,故有以下特點: (1)對極性物質具有較強的親和能力,極性強的溶質將被優(yōu)先吸附。(2)溶劑極性越弱,則吸附劑對溶質將表現(xiàn)出較強的吸附能力。溶劑極性增強,則吸附劑對溶質的吸附能力即隨之減弱。39(3)溶質即使被硅膠、氧化鋁吸附,但一旦加入極性較強的溶劑時,又可被后者置換洗脫下來?；钚蕴恳驗槭欠菢O性吸附劑,故與硅膠、氧化鋁相反,對非極性物質具有較強的親和能力,在水中對溶質表現(xiàn)出強的吸附能力。溶劑極性降低,則活性炭對溶質的吸附能力也隨

22、之降低。故從活性炭上洗脫被吸附物質時,洗脫溶劑的洗脫能力將隨溶劑極性的降低而增強。 402 2、 極性及其強弱判斷極性及其強弱判斷 極性強弱是支配物理吸附過程的主要因素極性強弱是支配物理吸附過程的主要因素。所謂極性乃是一種抽象概念,用以表示分子中電荷不對稱(asymmetry)的程度，并大體上與偶極矩(dipole moment)、極化度（polarizability）及介電常數(shù)（dielectric constant）等概念相對應。 （1）官能團的極性按下列官能團的順序增強： CH2CH2，CH2=CH2，OCH3，COOR， C=O，CHO，NH2，OH，COOH （2）化合物的極性則由分

23、子中所含官能團的種類、數(shù)目及排列方式等綜合因素所決定。 （3）、大體上溶劑極性的大小可以根據(jù)介電常數(shù)() 的大小來判斷。介電常數(shù)越大，則極性越大。一般溶劑的介電常數(shù)按下列順序增大： 環(huán)己烷（1.88），苯（2.29），無水乙醚（4.47），氯仿（5.20），乙酸乙酯（6.11），乙醇（26.0），甲醇（31.2），水（81.0） 41一葉萩堿curinine 本品系由大戟科植物一葉萩葉中提取的一種生物堿，現(xiàn)已人工合成?！拘誀睢科湎跛猁}為白色或微粉紅色粉末，味苦，能溶于水?！舅幚砑皯谩孔饔门c士的寧相似。但毒性較低。能興奮脊髓。增強反射及肌肉緊張度。體內代謝較快，無蓄積。動物實驗表明，小量能增強

24、心肌收縮，并有抑制膽堿酯酶作用。用于治療小兒麻痹癥及其后遺癥、面神經麻痹，對神經衰弱、低血壓、植物神經功能紊亂所引起的頭暈以及耳鳴、耳聾等有一定療效。3. 簡單吸附法進行物質的濃縮與精制簡單吸附法進行物質的濃縮與精制 簡單吸附，如在結晶及重結晶過程中加入活性炭進行的脫色、脫臭等操作，在物質精制過程中應用很廣。 424. 4. 吸附柱色譜法用于物質的分離吸附柱色譜法用于物質的分離 吸附色譜法中硅膠、氧化鋁柱色譜在實際工作中用得最多。有關注意事項如下: (1) 硅膠、氧化鋁吸附柱色譜過程中,吸附劑的用量一般為試樣量的3060倍。試樣極性較小、難以分離者,吸附劑用量可適當提高至試樣量的100200倍

25、。 據(jù)此可選用適當規(guī)格的色譜管, 實驗室中常用色譜管的規(guī)格如下所示，其高度與直徑比約為(15:1) (20:1)。 色譜管內徑(cm):0.5 1.0 1.5 2.0 3.0 4.0 6.0 8.0 10 長度 (cm):10 15 30 45 60 75 90 120 15043(2) 硅膠、氧化鋁吸附柱色譜,應盡可能選用極性小的溶劑裝柱和溶解試樣,以利試樣在吸附劑柱上形成狹窄的原始譜帶。 (3) 洗脫用溶劑的極性宜逐步增加,但跳躍不能太大。實踐中多用混合溶劑,并通過巧妙調節(jié)比例以改變極性,達到梯度洗脫分離物質的目的。 (4) 為避免發(fā)生化學吸附,酸性物質宜用硅膠、堿性物質則宜用氧化鋁進行分

26、離。 (5) 如液-液分配色譜中所述,吸附柱色譜也可用加壓方式進行,溶劑系統(tǒng)可通過 TLC進行篩選。 445. 5. 聚聚酰胺酰胺吸附色譜法吸附色譜法 聚酰胺(polyamide)吸附屬于氫鍵吸附,是一種用途十分廣泛的分離方法,極性物質與非極性物質均可適用,但特別適合分離酚類、醌類、黃酮類化合物。 (1) 聚酰胺的性質及吸附原理 45一般認為是通過分子中的酰胺羰基與酚類、黃酮類化合物的酚羥基,或酰胺鍵上的游離胺基與醌類、脂肪羧酸上的羰基形成氫鍵締合而產生吸附。至于吸附強弱則取決于各種化合物與之形成氫鍵締合的能力。通常在含水溶劑中大致有下列規(guī)律: 形成氫鍵的基團數(shù)目越多,則吸附能力越強。 成鍵位

27、置對吸附力也有影響。易形成分子內氫鍵者,其在聚酰胺上的吸附即相應減弱。46 分子中芳香化程度高者,則吸附性增強；反之,則減弱。如：以上是僅就化合物本身對聚酰胺的親和力而言。但吸附因為是在溶液中進行,故溶劑也會參加吸附劑表面的爭奪,或通過改變聚酰胺對溶質的氫鍵結合能力而影響吸附過程。顯然,聚酰胺與酚類或醌類等化合物形成氫鍵締合的能力在水中最強,在含水醇中則隨著醇濃庭的增高而相應減弱,在高濃度醇或其它有機溶劑中則幾乎不締合。 47（2）聚酰胺柱的洗脫在聚酰胺柱上的洗脫能力由弱至強,可大致排列成下列順序:水甲醇丙酮氫氧化納水溶液甲酰胺二甲基甲酰胺尿素水溶液 (3) 聚酰胺色譜的應用 聚酰胺對一般酚類

28、、黃酮類化合物的吸附是可逆的,分離效果好,加以吸附容量又大,故聚酰胺色譜特別適合于該類化合物的制備分離。此外,對生物堿、萜類、甾體、糖類、氨基酸等其它極性與非極性化合物的分離也有著廣泛的用途。 486. 6. 大孔吸附樹脂大孔吸附樹脂 (1) 大孔吸附樹脂的吸附原理 大孔吸附樹脂是吸附性和分子篩性原理相結合的分離材料,它的吸附性是由于范德華引力或產生氫鍵的結果。分子篩性是由于其本身多孔性結構的性質所決定。 (2) 影響吸附的因素 比表面積、表面電性、能否與化合物形成氫鍵（3）大孔吸附樹脂的應用 大孔吸附樹脂現(xiàn)在已被廣泛應用于天然化合物的分離和富集工作中,如苷與糖類的分離、生物堿的精制。在多糖、

29、黃酮、三萜類化合物的分離方面都有很好的應用實例。 49（4 4）洗脫液的選擇洗脫液的選擇 洗脫液可使用甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙脂等。根據(jù)吸附作用強弱選用不同的洗脫液或不同濃度的同一溶劑。對非極性大孔樹脂,洗脫液極性越小,洗脫能力越強。對于中等極性的大孔樹脂和極性較大的化合物來說,則選用極性較大的溶劑為宜。 50四、四、 根據(jù)物質分子大小差別進行分離根據(jù)物質分子大小差別進行分離 1、凝膠過濾法（Gel filtration） 凝膠過濾法也叫凝膠滲透色譜(Gel permeation chromatography)、分子篩過濾（molecular sieve filtration）、排阻色譜（ex

30、clusion chromatography），系利用分子篩分離物質的一種方法。其中所用載體，如葡聚糖凝膠，是在水中不溶、但可膨脹的球形顆粒，具有三維空間的網(wǎng)狀結構。（1）原理：分子篩原理。即利用凝膠的三維網(wǎng)狀結構的分子篩的過濾作用將化合物按分子量大小不同進行分離。 51（2）出柱順序：按分子由大到小順序先后流出并得到分離。 （3）常用的溶劑：堿性水溶液（0.1mol/L NH4OH）含鹽水溶液（0.5mol/L NaCl等）醇及含水醇，如甲醇、甲醇水其他溶劑：如含水丙酮，甲醇-氯仿52（4）凝膠的種類與性質 種類很多，常用的有以下兩種： Sephadex-G：葡聚糖凝膠，只適用于水中應用，且不同規(guī)格適合分離不同分子量的物質。 Sephadex LH-20：羥丙基葡聚糖凝膠，為Sephadex G-25經羥丙基化后得到的產物，具有以下兩個特點：具有分子篩特性，可按分子量大小分離物質；在由極性與非極性溶劑組成的混合溶劑中常常起到反相分配色譜的作用，適合于不同類型有機物的分離。應用最廣。 53交聯(lián)葡聚糖的化學結構 542、膜過濾法膜