第五章 愈傷組織培養(yǎng)

1、第五章 愈傷組織的培養(yǎng)n第一節(jié)第一節(jié) 愈傷組織的誘導(dǎo)和分化愈傷組織的誘導(dǎo)和分化n第二節(jié)第二節(jié) 愈傷組織中的形態(tài)發(fā)生愈傷組織中的形態(tài)發(fā)生n第三節(jié)第三節(jié) 人工種子人工種子第一節(jié)第一節(jié) 愈傷組織的誘導(dǎo)和分化愈傷組織的誘導(dǎo)和分化n1 愈傷組織的誘導(dǎo)愈傷組織的誘導(dǎo)n2 影響愈傷組織誘導(dǎo)形成的主要因素影響愈傷組織誘導(dǎo)形成的主要因素n愈傷組織愈傷組織(callus)：離體組織離體組織或器官進行離體培養(yǎng)時，進或器官進行離體培養(yǎng)時，進行細胞分裂，形成一種高度行細胞分裂，形成一種高度液泡化的無定形的薄壁細胞。液泡化的無定形的薄壁細胞。From embryo cultureFrom root1 愈傷組織的誘導(dǎo)愈傷組

2、織的誘導(dǎo) 2 愈傷組織的形成愈傷組織的形成n從外植體脫分化形成從外植體脫分化形成典型的典型的愈傷組織大致愈傷組織大致可分為三個時期：可分為三個時期：愈傷組織形成愈傷組織形成起始期起始期分裂期分裂期形成期形成期2. 1 起始期：起始期：n細胞準備進行分裂的時期。細胞準備進行分裂的時期。n外植體的細胞處在外植體的細胞處在靜止?fàn)顟B(tài)靜止?fàn)顟B(tài)。n一些一些刺激因素刺激因素(如機械損傷、改變光照強度、增加氧如機械損傷、改變光照強度、增加氧等等)和激素的誘導(dǎo)和激素的誘導(dǎo)作用，使外植體細胞的合成代謝活作用，使外植體細胞的合成代謝活動加強，蛋白質(zhì)和核酸的合成動加強，蛋白質(zhì)和核酸的合成, 誘導(dǎo)細胞開始分裂誘導(dǎo)細胞開

3、始分裂。起始期細胞內(nèi)發(fā)生的變化起始期細胞內(nèi)發(fā)生的變化n激素的誘導(dǎo)作用，使外植體細胞的合成代謝活激素的誘導(dǎo)作用，使外植體細胞的合成代謝活動加強，蛋白質(zhì)和核酸的合成增加動加強，蛋白質(zhì)和核酸的合成增加, 誘導(dǎo)細胞誘導(dǎo)細胞開始分裂。開始分裂。n每個細胞的蛋白質(zhì)總增加量可達每個細胞的蛋白質(zhì)總增加量可達200 %n酶活性增強，氣體交換增加，如氧氣的吸收增酶活性增強，氣體交換增加，如氧氣的吸收增加加n細胞的大小細胞的大小沒有多大改變沒有多大改變2. 2 分裂期分裂期:分裂期：分裂期：外植體細胞經(jīng)過誘導(dǎo)以后外植體細胞經(jīng)過誘導(dǎo)以后脫分化脫分化，不斷，不斷分分裂增生裂增生子細胞的過程。子細胞的過程。脫分化：脫分化

4、：細胞由靜止期進入分裂期，恢復(fù)分裂機能細胞由靜止期進入分裂期，恢復(fù)分裂機能分裂期外植體的特征分裂期外植體的特征:細胞分裂快，結(jié)構(gòu)疏松，細胞分裂快，結(jié)構(gòu)疏松，缺少有組織的結(jié)構(gòu)，維持缺少有組織的結(jié)構(gòu)，維持其不分化的狀態(tài)，顏色淺其不分化的狀態(tài)，顏色淺而透明。而透明。n外層細胞在外源激素的作用下，迅速分裂，外層細胞在外源激素的作用下，迅速分裂，使得外層細胞數(shù)目增加，使得外層細胞數(shù)目增加，n細胞體積縮小，細胞的核和核仁增大到最大。細胞體積縮小，細胞的核和核仁增大到最大。逐步回到逐步回到分生組織狀態(tài)。分生組織狀態(tài)。n 隨著細胞不斷分裂和生長，細胞總干重、蛋隨著細胞不斷分裂和生長，細胞總干重、蛋白質(zhì)和核酸量

5、大大增加，新細胞壁合成極快。白質(zhì)和核酸量大大增加，新細胞壁合成極快。n細胞分裂快，結(jié)構(gòu)疏松，缺少有組織的結(jié)構(gòu)，細胞分裂快，結(jié)構(gòu)疏松，缺少有組織的結(jié)構(gòu)，維持其不分化的狀態(tài)，顏色淺而透明。維持其不分化的狀態(tài)，顏色淺而透明。 細胞的主要表現(xiàn)細胞的主要表現(xiàn):2. 3 形成期：形成期：n指在分裂期的末期，細胞內(nèi)開始出現(xiàn)一系列形指在分裂期的末期，細胞內(nèi)開始出現(xiàn)一系列形態(tài)和生理上的變化，從而使愈傷組織內(nèi)產(chǎn)生不態(tài)和生理上的變化，從而使愈傷組織內(nèi)產(chǎn)生不同形態(tài)和功能的細胞。同形態(tài)和功能的細胞。細胞分裂部位和方向發(fā)生改變：細胞分裂部位和方向發(fā)生改變：內(nèi)部細胞發(fā)生內(nèi)部細胞發(fā)生分裂，形成像維管束或類似分生組織，組成的分

6、裂，形成像維管束或類似分生組織，組成的鳥巢狀結(jié)構(gòu)。鳥巢狀結(jié)構(gòu)。細胞的體積相對穩(wěn)定，不再減少。細胞的體積相對穩(wěn)定，不再減少。出現(xiàn)了各種類型的細胞：如管胞、纖維細胞、出現(xiàn)了各種類型的細胞：如管胞、纖維細胞、薄壁細胞、分生細胞、色素細胞等。薄壁細胞、分生細胞、色素細胞等。生長旺盛的愈傷組織呈乳白色、白色或淺綠色，生長旺盛的愈傷組織呈乳白色、白色或淺綠色，老化的多轉(zhuǎn)化為黃色或褐色。老化的多轉(zhuǎn)化為黃色或褐色。 細胞特點：細胞特點： RedWhite callusGreen callusYellow callus根據(jù)愈傷色澤劃分為：根據(jù)愈傷色澤劃分為：愈傷組織的分類愈傷組織的分類 易碎的愈傷易碎的愈傷 堅

7、硬的愈傷堅硬的愈傷 生根的愈傷生根的愈傷 滲出粘性多糖的愈傷滲出粘性多糖的愈傷 根據(jù)愈傷質(zhì)地劃分為：根據(jù)愈傷質(zhì)地劃分為：文心蘭的根（文心蘭的根（a）莖（）莖（b）葉（）葉（c）誘導(dǎo)的愈傷組織）誘導(dǎo)的愈傷組織根據(jù)愈傷發(fā)生部位：根據(jù)愈傷發(fā)生部位：胚性愈傷組織胚性愈傷組織表面呈顆粒狀、組織結(jié)構(gòu)緊湊、表面呈顆粒狀、組織結(jié)構(gòu)緊湊、再生力強。再生力強。 非胚性愈傷組織非胚性愈傷組織表面粗糙、組織結(jié)構(gòu)疏松。表面粗糙、組織結(jié)構(gòu)疏松。根據(jù)愈傷難易程度：根據(jù)愈傷難易程度：胚性愈傷組織容易形成胚狀體胚性愈傷組織容易形成胚狀體非胚性愈傷組織誘導(dǎo)率可達非胚性愈傷組織誘導(dǎo)率可達100，胚性愈傷組織誘導(dǎo)率相對較低。，胚性愈

8、傷組織誘導(dǎo)率相對較低。愈傷組織生長周期愈傷組織生長周期n愈傷組織生長周期為愈傷組織生長周期為24周周。n在培養(yǎng)基上生長一段時間以后，由于營養(yǎng)物質(zhì)在培養(yǎng)基上生長一段時間以后，由于營養(yǎng)物質(zhì)枯竭，水分散失，枯竭，水分散失，或有毒代謝物的積累，導(dǎo)致愈或有毒代謝物的積累，導(dǎo)致愈傷組織停止生長，甚至老化變黑、死亡。傷組織停止生長，甚至老化變黑、死亡。n轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基：轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基：定期地將它們分成小塊，接定期地將它們分成小塊，接種到新鮮的培養(yǎng)基上，可以長期保持旺盛的生長。種到新鮮的培養(yǎng)基上，可以長期保持旺盛的生長。第一節(jié)第一節(jié) 愈傷組織的誘導(dǎo)和分化愈傷組織的誘導(dǎo)和分化n1 愈傷組織的誘導(dǎo)愈傷組織的誘

9、導(dǎo)n2 影響愈傷組織誘導(dǎo)形成的主要因素影響愈傷組織誘導(dǎo)形成的主要因素（1）不同植物和外植體誘導(dǎo)愈傷組織能力的差異。）不同植物和外植體誘導(dǎo)愈傷組織能力的差異。不同植物種類、同一植物不同器官來源及其生理狀況、不同植物種類、同一植物不同器官來源及其生理狀況、年齡的外植體的脫分化（形成愈傷組織）能力有很大年齡的外植體的脫分化（形成愈傷組織）能力有很大差別。差別。n煙草、胡蘿卜等植物的脫分化比較容易，禾本科植物煙草、胡蘿卜等植物的脫分化比較容易，禾本科植物的脫分化比較難；的脫分化比較難；n花的脫分化比較容易，莖、葉的脫分化比較難；花的脫分化比較容易，莖、葉的脫分化比較難；n幼嫩組織的脫分化比較容易，成熟

10、的老組織脫分化比幼嫩組織的脫分化比較容易，成熟的老組織脫分化比較難。較難。2 影響愈傷組織誘導(dǎo)形成的主要因素影響愈傷組織誘導(dǎo)形成的主要因素（2）培養(yǎng)基種類對愈傷組織誘導(dǎo)的影響。）培養(yǎng)基種類對愈傷組織誘導(dǎo)的影響。 誘導(dǎo)愈傷組織常用的培養(yǎng)基為誘導(dǎo)愈傷組織常用的培養(yǎng)基為MS和和B5。（3）外源激素對愈傷組織誘導(dǎo)的影響）外源激素對愈傷組織誘導(dǎo)的影響-重要因素。重要因素。（4）培養(yǎng)條件對愈傷組織誘導(dǎo)的影響）培養(yǎng)條件對愈傷組織誘導(dǎo)的影響: 濕度條件、濕度條件、溫度條件、光照條件。溫度條件、光照條件。 2,4-D和和BA濃度對銀膠菊莖段愈傷組織生長的影響濃度對銀膠菊莖段愈傷組織生長的影響處理（處理（2,4-

11、D:BA）愈傷組織形成情況愈傷組織形成情況0: 0僅有，不生長僅有，不生長0: 0.1有限的生長，顯綠色有限的生長，顯綠色0：0.2生長不良生長不良0.05: 0大塊、綠色，平均直徑為大塊、綠色，平均直徑為10mm0.05: 1生長不良，稍帶褐色生長不良，稍帶褐色0.05: 2生長不良，稍帶褐色生長不良，稍帶褐色0.1: 0大塊，綠色至淺褐色大塊，綠色至淺褐色0.1: 0.1大塊，綠色至淺褐色大塊，綠色至淺褐色0.1: 0.2稍小于稍小于0.1:0.1比例，變褐比例，變褐 各種生長素對黃瓜各外植體愈傷組織誘導(dǎo)的效應(yīng)各種生長素對黃瓜各外植體愈傷組織誘導(dǎo)的效應(yīng)（各種生長素濃度為（各種生長素濃度為1

12、0mol/L）生長素生長素愈傷組織形成愈傷組織形成種子種子下胚軸下胚軸果皮果皮IBA無愈傷組織形成無愈傷組織形成愈傷組織增殖強愈傷組織增殖強IBA濃度為濃度為1mol/L時愈時愈傷組織生長良好傷組織生長良好NAA無愈傷組織形成無愈傷組織形成所有外植體均產(chǎn)生所有外植體均產(chǎn)生愈傷組織愈傷組織愈傷組織增殖強愈傷組織增殖強2,4-D所有外植體均產(chǎn)所有外植體均產(chǎn)生愈傷組織生愈傷組織2,4-D濃度為濃度為1mol/L時時愈傷組織生長良好愈傷組織生長良好愈傷組織增殖強愈傷組織增殖強NOA萘氧乙酸萘氧乙酸無愈傷組織形成無愈傷組織形成愈傷組織增殖中等愈傷組織增殖中等愈傷組織增殖中等愈傷組織增殖中等NOP萘氧丙酸

13、萘氧丙酸無愈傷組織形成無愈傷組織形成愈傷組織增殖中等愈傷組愈傷組織增殖中等愈傷組織增殖強織增殖強愈傷組織增殖強愈傷組織增殖強第五章 愈傷組織的培養(yǎng)n第一節(jié)第一節(jié) 愈傷組織的誘導(dǎo)和分化愈傷組織的誘導(dǎo)和分化n第二節(jié)第二節(jié) 愈傷組織中的形態(tài)發(fā)生愈傷組織中的形態(tài)發(fā)生n第三節(jié)第三節(jié) 人工種子人工種子1 愈傷組織形態(tài)愈傷組織形態(tài) 發(fā)生方式發(fā)生方式愈傷組織器官發(fā)生愈傷組織器官發(fā)生通過通過體細胞胚胎體細胞胚胎/胚胚狀體狀體途徑再生植株途徑再生植株第二節(jié)第二節(jié) 愈傷組織中的形態(tài)發(fā)生愈傷組織中的形態(tài)發(fā)生2 愈傷組織器官發(fā)生愈傷組織器官發(fā)生 n先不定芽，在莖基部長根先不定芽，在莖基部長根n先長根先長根 后長芽后長芽

14、n在不同部位分別形成根和芽在不同部位分別形成根和芽 無機鹽混合物類無機鹽混合物類 營養(yǎng)條件營養(yǎng)條件 有機物類有機物類 植物激素類植物激素類 天然復(fù)合物類天然復(fù)合物類 外因外因 滲透壓滲透壓 酸堿度酸堿度影響因子影響因子 環(huán)境條件環(huán)境條件 濕度濕度 溫度溫度 光照光照 內(nèi)因內(nèi)因 遺傳性遺傳性 生理狀態(tài)生理狀態(tài) 影響愈傷組織器官發(fā)生的因素：影響愈傷組織器官發(fā)生的因素： 植物激素的作用植物激素的作用 外植體自身因素外植體自身因素（1）外植體自身因素外植體自身因素（內(nèi)因）（內(nèi)因）母體植株的遺傳基礎(chǔ)母體植株的遺傳基礎(chǔ)n被子植物比裸子植物容易，被子植物中茄科、被子植物比裸子植物容易，被子植物中茄科、秋海棠

15、科、景天科、苦苣苔科和十字花科植物秋海棠科、景天科、苦苣苔科和十字花科植物成功報道最多；成功報道最多；n無性繁殖植物比有性繁殖植物的容易；無性繁殖植物比有性繁殖植物的容易；n同種植物不同品種（基因型）的培養(yǎng)效果不同同種植物不同品種（基因型）的培養(yǎng)效果不同 外植體的類型外植體的類型 影響培養(yǎng)的難易：影響培養(yǎng)的難易：一般生理狀態(tài)年輕，來源一般生理狀態(tài)年輕，來源于生長活躍或生長潛力大的組織和器官的細胞于生長活躍或生長潛力大的組織和器官的細胞容易培養(yǎng)。容易培養(yǎng)。 例：百合：例：百合：鱗莖的鱗片分化能力：外層鱗莖的鱗片分化能力：外層中層中層內(nèi)層內(nèi)層 高：有利于根的形成和愈傷組織的形成；高：有利于根的形成

16、和愈傷組織的形成； 適中：有利于根芽的分化；適中：有利于根芽的分化；低：有利于芽的形成低：有利于芽的形成生長素生長素細胞分裂素細胞分裂素適宜的植物激素配比在器官分化中有著重要的作用。適宜的植物激素配比在器官分化中有著重要的作用。 （2）植物激素的作用（外因）植物激素的作用（外因）蘆薈的植物組織培養(yǎng)過程蘆薈的植物組織培養(yǎng)過程1 2 3 4 56 7 8 910 11芽（單芽、叢芽）芽（單芽、叢芽）1 愈傷組織形態(tài)愈傷組織形態(tài) 發(fā)生方式發(fā)生方式愈傷組織器官發(fā)生愈傷組織器官發(fā)生通過通過體細胞胚胎體細胞胚胎/胚胚狀體狀體途徑再生植株途徑再生植株第二節(jié)第二節(jié) 愈傷組織中的形態(tài)發(fā)生愈傷組織中的形態(tài)發(fā)生3.

17、1 3.1 胚狀體胚狀體/ /體細胞胚體細胞胚（embryoidembryoid） ：指植物指植物細胞、組織或器官的離體培養(yǎng)中，起始于一個細胞、組織或器官的離體培養(yǎng)中，起始于一個非合子細胞，并經(jīng)過胚胎發(fā)育過程分化出的非合子細胞，并經(jīng)過胚胎發(fā)育過程分化出的類類似胚似胚一樣的細胞群。一樣的細胞群。 經(jīng)過：球形胚心形胚魚雷形胚成熟胚經(jīng)過：球形胚心形胚魚雷形胚成熟胚3 3 體細胞胚發(fā)生途徑體細胞胚發(fā)生途徑Development of the Arabidopsis Embryo 石龍芮胚狀體發(fā)生的過程石龍芮胚狀體發(fā)生的過程 香蕉心形體細胞胚 玫瑰心形體細胞胚 3.2 體細胞胚的產(chǎn)生方式體細胞胚的產(chǎn)生方

18、式n1）直接在器官上發(fā)生）直接在器官上發(fā)生n2） 懸浮培養(yǎng)細胞發(fā)生途徑懸浮培養(yǎng)細胞發(fā)生途徑n3）愈傷組織發(fā)生途徑）愈傷組織發(fā)生途徑 : 幼胚、胚和子葉幼胚、胚和子葉n4）單細胞發(fā)生途徑：）單細胞發(fā)生途徑：花藥培養(yǎng)中的小孢子發(fā)育成花藥培養(yǎng)中的小孢子發(fā)育成n4）原生質(zhì)體發(fā)生途徑）原生質(zhì)體發(fā)生途徑胚性愈傷組織胚性愈傷組織1）生長素）生長素2）其他植物生長物質(zhì)的作用）其他植物生長物質(zhì)的作用3）氨源形態(tài)的影響）氨源形態(tài)的影響4）其他培養(yǎng)條件對胚狀體發(fā)生的影響）其他培養(yǎng)條件對胚狀體發(fā)生的影響3.3 體細胞胚狀體誘導(dǎo)的影響因素3.4 體細胞胚狀體誘導(dǎo)的影響因素1）生長素）生長素n形成體細胞胚的關(guān)鍵形成體細胞

19、胚的關(guān)鍵是是除去或降低培除去或降低培養(yǎng)基中的生長素成分養(yǎng)基中的生長素成分（如（如2,4-D）。）。n愈傷組織在愈傷組織在生長素生長素0.51mg/L的培養(yǎng)的培養(yǎng)基上分化形成分生細胞團（稱胚性細基上分化形成分生細胞團（稱胚性細胞團）；胞團）；n轉(zhuǎn)移到生長素含量很低或沒有生長素轉(zhuǎn)移到生長素含量很低或沒有生長素的培養(yǎng)基上，就能發(fā)育為胚狀體。的培養(yǎng)基上，就能發(fā)育為胚狀體。n原因：原因：2,4-D等生長素可以誘導(dǎo)內(nèi)源乙烯（等生長素可以誘導(dǎo)內(nèi)源乙烯（Eth）產(chǎn)生；內(nèi)源產(chǎn)生；內(nèi)源Eth不影響愈傷增殖，但抑制愈傷不影響愈傷增殖，但抑制愈傷組織進一步分化成胚。組織進一步分化成胚。n乙烯也會導(dǎo)致纖維素酶或（和）果

20、膠酶活性的乙烯也會導(dǎo)致纖維素酶或（和）果膠酶活性的增強，從而破壞胚性細胞團，使原胚不能發(fā)生增強，從而破壞胚性細胞團，使原胚不能發(fā)生組織分化。組織分化。2）其他植物生長物質(zhì)的作用）其他植物生長物質(zhì)的作用細胞分裂素有利于胚狀體的形成細胞分裂素有利于胚狀體的形成n0.1gL-1 玉米素玉米素促進胡蘿卜體細胞胚發(fā)生。促進胡蘿卜體細胞胚發(fā)生。nGA3、ABA抑制成胚；抑制成胚；3）氨源形態(tài)的影響）氨源形態(tài)的影響n還原還原N（NH4+）n氧化氧化N（NO3-） n有機氮有機氮 （氨基酸、水解酪蛋白等）（氨基酸、水解酪蛋白等）n野生胡蘿卜葉柄節(jié)段的培養(yǎng)中，只有在含一定野生胡蘿卜葉柄節(jié)段的培養(yǎng)中，只有在含一定

21、數(shù)量數(shù)量還原態(tài)氮還原態(tài)氮的培養(yǎng)基時，才能有胚胎發(fā)生，的培養(yǎng)基時，才能有胚胎發(fā)生，n用用NH4+ 和水解酪蛋白優(yōu)于和水解酪蛋白優(yōu)于NO3- 或谷氨酰胺。或谷氨酰胺。4）其他培養(yǎng)條件對胚狀體發(fā)生的影響）其他培養(yǎng)條件對胚狀體發(fā)生的影響n液體培養(yǎng)液體培養(yǎng)n適宜適宜pH5-6n光照：不需要光或半天光照時間光照：不需要光或半天光照時間n溫度溫度25 左右左右光照強度光照強度50-60 E m2 s-1光照強度光照強度5-10 E m2 s-1( (圖圖 光對大豆不同品種子葉體細胞胚發(fā)生的影響光對大豆不同品種子葉體細胞胚發(fā)生的影響 ) )3.4 體細胞胚途徑再生植物的優(yōu)點體細胞胚途徑再生植物的優(yōu)點1）數(shù)量）

22、數(shù)量比不定芽多比不定芽多2）獲得速度快）獲得速度快3）結(jié)構(gòu)完整）結(jié)構(gòu)完整4）胚狀體可制成人工種子，便于運輸和保存；）胚狀體可制成人工種子，便于運輸和保存；5）胚狀體的有性后代遺傳性更接近母體植株。）胚狀體的有性后代遺傳性更接近母體植株。第五章 愈傷組織的培養(yǎng)n第一節(jié)第一節(jié) 愈傷組織的誘導(dǎo)和分化愈傷組織的誘導(dǎo)和分化n第二節(jié)第二節(jié) 愈傷組織中的形態(tài)發(fā)生愈傷組織中的形態(tài)發(fā)生n第三節(jié)第三節(jié) 人工種子人工種子n人工種子是指外面包裹一層有機薄膜的植物胚狀體。人工種子是指外面包裹一層有機薄膜的植物胚狀體。n n胚狀體或芽胚狀體或芽：有生命的物質(zhì)結(jié)構(gòu)。有生命的物質(zhì)結(jié)構(gòu)。n人工胚乳：人工胚乳：供胚狀體維持生命力

23、。供胚狀體維持生命力。n人工種皮人工種皮：保護作用。：保護作用。1 定義與結(jié)構(gòu)定義與結(jié)構(gòu) 第三節(jié)第三節(jié) 人工種子人工種子1）結(jié)構(gòu)完整，體積小，便于貯藏與運輸，可直）結(jié)構(gòu)完整，體積小，便于貯藏與運輸，可直接播種，易于機械化操作；接播種，易于機械化操作；2）不受季節(jié)限制，不受環(huán)境制約，胚狀體數(shù)量）不受季節(jié)限制，不受環(huán)境制約，胚狀體數(shù)量多、繁殖快、有利于工廠化生產(chǎn)；多、繁殖快、有利于工廠化生產(chǎn)；人工種子的優(yōu)點人工種子的優(yōu)點:3) 有利于繁殖生育周期長、自交不親合、珍貴稀有利于繁殖生育周期長、自交不親合、珍貴稀有的一些植物，也可大量繁殖無病毒材料；有的一些植物，也可大量繁殖無病毒材料；4) 加入抗生素

24、、農(nóng)藥、菌肥等成分，提高人工種加入抗生素、農(nóng)藥、菌肥等成分，提高人工種子活力和品質(zhì)；子活力和品質(zhì)；5) 由無性繁殖體系產(chǎn)生胚，由無性繁殖體系產(chǎn)生胚， 固定雜種優(yōu)勢。固定雜種優(yōu)勢。 2 制作制作人工種子制作過程人工種子制作過程胚狀體胚狀體人工胚乳人工胚乳其他物質(zhì)其他物質(zhì)人工種皮人工種皮包埋包埋技術(shù)技術(shù)第一步胚狀體誘導(dǎo)n1）選取目標(biāo)植物）選取目標(biāo)植物n2）誘導(dǎo)愈傷組織）誘導(dǎo)愈傷組織n3）愈傷組織增生）愈傷組織增生n4）胚狀體誘導(dǎo)）胚狀體誘導(dǎo)胚狀體胚狀體同步增殖同步增殖：nDNA合成抑制劑合成抑制劑n低溫處理低溫處理n調(diào)節(jié)滲透壓調(diào)節(jié)滲透壓n分離過篩分離過篩n調(diào)節(jié)植物激素配比調(diào)節(jié)植物激素配比第二步人工胚乳制作人工胚乳的成分人工胚乳的成分n 無機鹽混合物無機鹽混合物 n 碳水化合物：淀粉和糖碳水化合物：淀粉和糖 n 蛋白質(zhì)蛋白質(zhì) n各種附加成分：如固氮細菌、殺蟲劑、殺菌各種附加成分：如固氮細菌、殺蟲劑、殺菌劑、除草劑和植物激素等劑、除草劑和植物激素等 2）包埋技術(shù)）包埋技術(shù) 用褐藻酸鈉等水溶性凝膠經(jīng)與用褐藻酸鈉等水溶性凝膠經(jīng)與Ca2+進進行