人衛(wèi)版DNA的生物合成

1、生物化學(xué)與分子生物學(xué)1第十四章DNA的生物合成DNA Biosynthesis ( Replication )2復(fù)制(replication) 是以DNA為模板的DNA合成，是基因組的復(fù)制過(guò)程。在這個(gè)過(guò)程中，親代DNA作為合成模板，按照堿基配對(duì)原則合成子代分子，其化學(xué)本質(zhì)是酶促脫氧核苷酸聚合反應(yīng)。 復(fù)制親代DNA子代DNA3本章主要內(nèi)容： DNA復(fù)制的基本特征 DNA復(fù)制的酶學(xué)和拓?fù)鋵W(xué)變化 原核生物DNA復(fù)制過(guò)程真核生物DNA生物合成過(guò)程 逆轉(zhuǎn)錄和其他復(fù)制方式 4DNA復(fù)制的基本特征Basic Rules of DNA Replication第 一 節(jié)5半保留復(fù)制(semi-conservat

2、ive replication)雙向復(fù)制(bidirectional replication)半不連續(xù)復(fù)制(semi-discontinuous replication) DNA復(fù)制的主要特征 6一、 DNA以半保留方式進(jìn)行復(fù)制 DNA生物合成時(shí)，母鏈DNA解開(kāi)為兩股單鏈，各自作為模板(template)按堿基配對(duì)規(guī)律，合成與模板互補(bǔ)的子鏈。子代細(xì)胞的DNA，一股單鏈從親代完整地接受過(guò)來(lái)，另一股單鏈則完全從新合成。兩個(gè)子細(xì)胞的DNA都和親代DNA堿基序列一致。這種復(fù)制方式稱(chēng)為半保留復(fù)制。半保留復(fù)制的概念:7子鏈繼承母鏈遺傳信息的幾種可能方式: 全保留式 半保留式 混合式 8密度梯度實(shí)驗(yàn): 實(shí)驗(yàn)

3、結(jié)果支持半保留復(fù)制的設(shè)想。含15N-DNA的細(xì)菌培養(yǎng)于普通培養(yǎng)液 第一代繼續(xù)培養(yǎng)于普通培養(yǎng)液 第二代梯度離心結(jié)果9按半保留復(fù)制方式，子代DNA與親代DNA的堿基序列一致，即子代保留了親代的全部遺傳信息，體現(xiàn)了遺傳的保守性。半保留復(fù)制的意義:遺傳的保守性，是物種穩(wěn)定性的分子基礎(chǔ)，但不是絕對(duì)的。10AGGTACTGCCACTGGTCCATGACGGTGACCCCACTGGGGTGACCAGGTACTGTCCATGACTCCATGACAGGTACTGAGGTACTGCCACTGGTCCATGACGGTGACCAGGTACTGCCACTGGTCCATGACGGTGACC+母鏈DNA復(fù)制過(guò)程中形成的復(fù)制

4、叉子代DNA11原核生物基因組是環(huán)狀DNA，只有一個(gè)復(fù)制起點(diǎn)（origin）。復(fù)制從起點(diǎn)開(kāi)始，向兩個(gè)方向進(jìn)行解鏈，進(jìn)行的是單點(diǎn)起始雙向復(fù)制。二、DNA復(fù)制從起點(diǎn)向兩個(gè)方向延伸復(fù)制中的放射自顯影圖象12A. 環(huán)狀雙鏈DNA及復(fù)制起始點(diǎn)B. 復(fù)制中的兩個(gè)復(fù)制叉C. 復(fù)制接近終止點(diǎn)(termination, ter)oriterA B C13真核生物每個(gè)染色體有多個(gè)起始點(diǎn)，是多復(fù)制子的復(fù)制。習(xí)慣上把兩個(gè)相鄰起始點(diǎn)之間的距離定為一個(gè)復(fù)制子(replicon) 。復(fù)制子是獨(dú)立完成復(fù)制的功能單位。 53oriorioriori531453oriorioriori535533553復(fù)制315三、DNA復(fù)制反

5、應(yīng)呈半不連續(xù)特征3535解鏈方向35335領(lǐng)頭鏈(leading strand)后隨鏈(lagging strand)16順著解鏈方向生成的子鏈，復(fù)制是連續(xù)進(jìn)行的，這股鏈稱(chēng)為領(lǐng)頭鏈(leading strand) 。另一股鏈因?yàn)閺?fù)制的方向與解鏈方向相反，不能順著解鏈方向連續(xù)延長(zhǎng)，這股不連續(xù)復(fù)制的鏈稱(chēng)為后隨鏈(lagging strand) 。復(fù)制中的不連續(xù)片段稱(chēng)為岡崎片段(okazaki fragment)。 領(lǐng)頭鏈連續(xù)復(fù)制而隨從鏈不連續(xù)復(fù)制，就是復(fù)制的半不連續(xù)性。 17DNA復(fù)制的酶學(xué)和拓?fù)鋵W(xué)變化第 二 節(jié)The Enzymology and Topology of DNA Replicat

6、ion18參與DNA復(fù)制的物質(zhì):底物(substrate): dATP, dGTP, dCTP, dTTP；聚合酶(polymerase): 依賴(lài)DNA的DNA聚合酶，簡(jiǎn)寫(xiě)為 DNA-pol；模板(template): 解開(kāi)成單鏈的DNA母鏈；引物(primer): 提供3-OH末端使dNTP可以依次聚合；其他的酶和蛋白質(zhì)因子。19(dNMP)n + dNTP (dNMP)n+1 + PPiRNA引物RNA引物子代DNA20聚合反應(yīng)的特點(diǎn):DNA 新鏈生成需RNA引物和模板； 新鏈的延長(zhǎng)只可沿5 3方向進(jìn)行。21一、DNA聚合酶催化脫氧核苷酸間的聚合全稱(chēng)：依賴(lài)DNA的DNA聚合酶 (DNA-d

7、ependent DNA polymerase)簡(jiǎn)稱(chēng)：DNA-pol活性：1. 53 的聚合活性2. 核酸外切酶活性225 A G C T T C A G G A T A 3 | | | | | | | | | | |3 T C G A A G T C C T A G C G A C 53 5外切酶活性:5 3外切酶活性:?能切除突變的 DNA片段。能辨認(rèn)錯(cuò)配的堿基對(duì)，并將其水解。核酸外切酶活性: 23（一）原核生物有3種DNA聚合酶DNA-pol DNA-pol DNA-pol 24原核生物的DNA聚合酶25個(gè)核心酶1個(gè)-復(fù)合物（、 6種亞基）1對(duì)-亞基（可滑動(dòng)的DNA夾子）DNA聚合酶全酶

8、結(jié)構(gòu)全酶結(jié)構(gòu)包括：26亞基（130 000）主要功能是合成DNA亞基具有35外切酶活性（復(fù)制保真性所必需）亞基可增強(qiáng)其活性亞基可能起組裝作用核心酶由、和亞基組成：兩側(cè)的亞基發(fā)揮夾穩(wěn)DNA模板鏈，并使酶沿模板滑動(dòng)的作用272個(gè)-亞基分別和1個(gè)核心酶相互作用，其柔性連接區(qū)可以確保在復(fù)制叉1個(gè)全酶分子的2個(gè)核心酶能夠相對(duì)獨(dú)立運(yùn)動(dòng)，分別負(fù)責(zé)合成前導(dǎo)鏈和后隨鏈。功能：有促進(jìn)全酶組裝至模板上及增強(qiáng)核心酶活性的作用 -復(fù)合物由6種亞基組成：、28功能：DNA-pol （109kD）對(duì)復(fù)制中的錯(cuò)誤進(jìn)行校讀，對(duì)復(fù)制和修復(fù)中出現(xiàn)的空隙進(jìn)行填補(bǔ)。29323個(gè)氨基酸小片段5 核酸外切酶活性大片段/Klenow 片段

9、604個(gè)氨基酸DNA聚合酶活性 5 核酸外切酶活性N 端C 端木瓜蛋白酶DNA-pol Klenow片段是實(shí)驗(yàn)室合成DNA，進(jìn)行分子生物學(xué)研究中常用的工具酶。 30DNA-pol （120kD）DNA-pol II基因發(fā)生突變，細(xì)菌依然能存活。DNA-pol 對(duì)模板的特異性不高，即使在已發(fā)生損傷的DNA模板上，它也能催化核苷酸聚合。因此認(rèn)為，它參與DNA損傷的應(yīng)急狀態(tài)修復(fù)。31（二）常見(jiàn)的真核細(xì)胞DNA聚合酶有5種DNA-pol 起始引發(fā)，有引物酶活性。延長(zhǎng)子鏈的主要酶，有解螺旋酶活性。參與低保真度的復(fù)制 。在復(fù)制過(guò)程中起校讀、修復(fù)和填補(bǔ)缺口的作用。在線(xiàn)粒體DNA復(fù)制中起催化作用。DNA-po

10、l DNA-pol DNA-pol DNA-pol 32真核生物和原核生物DNA聚合酶的比較 E.Coli真核細(xì)胞 功能填補(bǔ)復(fù)制中的DNA空隙，DNA修復(fù)和重組復(fù)制中的校對(duì)，DNA修復(fù)DNA修復(fù)線(xiàn)粒體DNA合成前導(dǎo)鏈合成DnaG引物酶后隨鏈合成33真核生物的DNA聚合酶34二、DNA聚合酶的堿基選擇和校對(duì)功能實(shí)現(xiàn)復(fù)制的保真性復(fù)制按照堿基配對(duì)規(guī)律進(jìn)行，是遺傳信息能準(zhǔn)確傳代的基本原理。此外還需酶學(xué)的機(jī)制來(lái)保證復(fù)制的保真性。35遵守嚴(yán)格的堿基配對(duì)規(guī)律；聚合酶在復(fù)制延長(zhǎng)時(shí)對(duì)堿基的選擇功能；復(fù)制出錯(cuò)時(shí)有即時(shí)校對(duì)功能。DNA復(fù)制的保真性至少要依賴(lài)三種機(jī)制：36（一）復(fù)制的保真性依賴(lài)正確的堿基選擇利用“錯(cuò)配

11、”實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，DNA pol 對(duì)核苷酸的參入（incorporation）具有選擇功能。 DNA pol 對(duì)嘌呤的不同構(gòu)型表現(xiàn)不同親和力，因此實(shí)現(xiàn)其選擇功能。 37（二）聚合酶中的核酸外切酶活性在復(fù)制中辨認(rèn)切除錯(cuò)配堿基并加以校正核酸外切酶(exonuclease)是指能從核酸鏈的末端把核苷酸依次水解出來(lái)的酶，外切酶是有方向性的。 38A：DNA-pol的外切酶活性切除錯(cuò)配堿基；并用其聚合活性摻入正確配對(duì)的底物。B：堿基配對(duì)正確， DNA-pol不表現(xiàn)活性。DNA pol 的校讀功能39三、復(fù)制中的解鏈伴有DNA 分子拓?fù)鋵W(xué)變化DNA分子的堿基埋在雙螺旋內(nèi)部，只有把DNA解成單鏈，它才能起模板作用

12、。 40（一）多種酶參與DNA解鏈和穩(wěn)定單鏈狀態(tài)41E. Coli 基因圖42解螺旋酶(helicase)利用ATP供能，作用于氫鍵，使DNA雙鏈解開(kāi)成為兩條單鏈。引物酶(primase) 復(fù)制起始時(shí)催化生成RNA引物的酶。單鏈DNA結(jié)合蛋白(single stranded DNA binding protein, SSB) 在復(fù)制中維持模板處于單鏈狀態(tài)并保護(hù)單鏈的完整。 43108局部解鏈后（二）DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶改變DNA超螺旋狀態(tài)復(fù)制過(guò)程正超螺旋的形成：44解鏈過(guò)程中正超螺旋的形成45既能水解 、又能連接磷酸二酯鍵。 拓?fù)洚悩?gòu)酶 拓?fù)洚悩?gòu)酶拓?fù)洚悩?gòu)酶分類(lèi)：拓?fù)洚悩?gòu)酶作用特點(diǎn)：46拓?fù)洚悩?gòu)酶

13、切斷DNA雙鏈中一股鏈，使DNA解鏈旋轉(zhuǎn)不致打結(jié)；適當(dāng)時(shí)候封閉切口，DNA變?yōu)樗沙跔顟B(tài)。反應(yīng)不需ATP。拓?fù)洚悩?gòu)酶切斷DNA分子兩股鏈，斷端通過(guò)切口旋轉(zhuǎn)使超螺旋松弛。利用ATP供能，連接斷端， DNA分子進(jìn)入負(fù)超螺旋狀態(tài)。作用機(jī)制：47拓?fù)涿傅淖饔梅绞剑?8四、DNA連接酶連接復(fù)制中產(chǎn)生的單鏈缺口連接DNA鏈3-OH末端和相鄰DNA鏈5-P末端，使二者生成磷酸二酯鍵，從而把兩段相鄰的DNA鏈連接成一條完整的鏈。 DNA連接酶(DNA ligase)作用方式：49HO5335DNA連接酶ATPADP5353DNA連接酶的作用：50DNA連接酶在復(fù)制中起最后接合缺口的作用。在DNA修復(fù)、重組及剪接

14、中也起縫合缺口作用。也是基因工程的重要工具酶之一。功能：51提供核糖3-OH提供5-P結(jié)果DNA聚合酶引物或延長(zhǎng)中的新鏈游離dNTP去PPi(dNTP)n+1連接酶復(fù)制中不連續(xù)的兩條單鏈不連續(xù)連續(xù)鏈拓?fù)涿盖袛?、整理后的兩鏈改變拓?fù)錉顟B(tài)DNA聚合酶，拓?fù)涿负瓦B接酶催化3,5-磷酸二酯鍵生成的比較 52原核生物DNA復(fù)制過(guò)程The Process of DNA Replication in Prokaryotes第 三 節(jié)53起始是復(fù)制中較為復(fù)雜的環(huán)節(jié)，在此過(guò)程中，各種酶和蛋白因子在復(fù)制起始點(diǎn)處裝配引發(fā)體，形成復(fù)制叉并合成RNA引物。 需要解決兩個(gè)問(wèn)題：1. DNA解開(kāi)成單鏈，提供模板。2. 形成

15、引發(fā)體，合成引物，提供3-OH末端。一、復(fù)制的起始54E.coli復(fù)制起始點(diǎn) oriC GATTNTTTATTT GATCTNTTNTATT GATCTCTTATTAG 1 13 17 29 32 44 TGTGGATTA-TTATACACA-TTTGGATAA-TTATCCACA58 66 166 174 201 209 237 245 串聯(lián)重復(fù)序列 反向重復(fù)序列5353（一） DNA的解鏈55原核生物的復(fù)制起始部位及解鏈 56 Dna A Dna B、 Dna CDNA拓?fù)洚悩?gòu)酶引物酶SSB3535（二）引物合成和引發(fā)體形成含有解螺旋酶、DnaC蛋白、引物酶和DNA復(fù)制起始區(qū)域的復(fù)合結(jié)構(gòu)稱(chēng)

16、為引發(fā)體。573535引物是由引物酶催化合成的短鏈RNA分子。引物3 HO5引物酶58引發(fā)體和復(fù)制叉的生成 5960二、DNA鏈的延長(zhǎng)復(fù)制的延長(zhǎng)指在DNA-pol催化下，dNTP以dNMP的方式逐個(gè)加入引物或延長(zhǎng)中的子鏈上，其化學(xué)本質(zhì)是磷酸二酯鍵的不斷生成。 61 5 35dATPdGTPdTTPdCTPdTTPdGTPdATPdCTPOH 33DNA-pol62領(lǐng)頭鏈的合成：領(lǐng)頭鏈的子鏈沿著53方向可以連續(xù)地延長(zhǎng)。63后隨鏈的合成64 在復(fù)制叉同時(shí)合成前導(dǎo)鏈和后隨鏈65復(fù)制過(guò)程簡(jiǎn)圖66原核生物基因是環(huán)狀DNA，雙向復(fù)制的復(fù)制片段在復(fù)制的終止點(diǎn)(ter)處匯合。oriter E.coli823

17、2 ori terSV40500三、復(fù)制的終止67555RNA酶OHP5DNA-pol dNTP55PATP ADP+Pi55DNA連接酶 子鏈中的RNA引物被取代6869真核生物DNA生物合成過(guò)程The Process of DNA Biosynthesis in eukaryotes第 四 節(jié)70真核生物復(fù)制子多、岡崎片段短、復(fù)制叉前進(jìn)速度慢等；DNA復(fù)制從引發(fā)進(jìn)入延伸階段發(fā)生DNA聚合酶/轉(zhuǎn)換；切除岡崎片段RNA引物的是核酸酶RNAse H和FEN1等。 真核生物與原核生物DNA復(fù)制的差異：71哺乳動(dòng)物的細(xì)胞周期DNA合成期G1G2SM細(xì)胞能否分裂，決定于進(jìn)入S期及M期這兩個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)。G1

18、S及G2M的調(diào)節(jié)，與蛋白激酶活性有關(guān)。 蛋白激酶通過(guò)磷酸化激活或抑制各種復(fù)制因子而實(shí)施調(diào)控作用。 72真核生物每個(gè)染色體有多個(gè)起始點(diǎn)，是多復(fù)制子復(fù)制。復(fù)制有時(shí)序性，即復(fù)制子以分組方式激活而不是同步起動(dòng)。 復(fù)制的起始需要DNA-pol （引物酶活性）和pol （解螺旋酶活性）參與。還需拓?fù)涿负蛷?fù)制因子(replication factor, RF)。 一、真核生物復(fù)制的起始與原核基本相似73酵母復(fù)制起點(diǎn)為自主復(fù)制序列（autonomously replicating sequences，ARS）： 酵母染色體含有多個(gè)復(fù)制起點(diǎn)。元件A(富含A/T的共有序列)：結(jié)合一個(gè)特異的蛋白質(zhì)復(fù)合物復(fù)制起點(diǎn)識(shí)別

19、復(fù)合物(ORC)。 3個(gè)序列(B1、B2和B3)可以增加復(fù)制起點(diǎn)的效率，其中B2的9個(gè)堿基與上述ARS共有序列相同。酵母復(fù)制起始點(diǎn)74增殖細(xì)胞核抗原（proliferation cell nuclear antigen，PCNA）在復(fù)制起始和延長(zhǎng)中起關(guān)鍵作用。PCNA為同源三聚體，具有與E.coli DNA 聚合酶的亞基相同的功能和相似的構(gòu)象，即形成閉合環(huán)形的可滑動(dòng)DNA夾子，在RFC的作用下PCNA結(jié)合于引物模板鏈；并且PCNA使pol獲得持續(xù)合成能力。PCNA水平也是檢驗(yàn)細(xì)胞增殖的重要指標(biāo)。75拓?fù)洚悩?gòu)酶，去除負(fù)超螺旋（使解旋酶容易解旋），去除復(fù)制叉前方產(chǎn)生的正超螺旋Tol和TolDNA雙

20、螺旋解鏈，參與組裝引發(fā)體DNA解旋酶連接岡崎片段DNA連接酶核酸酶，切除RNA引物RNAse H核酸酶，切除RNA引物FEN1DNA復(fù)制，核苷酸切除修復(fù)，堿基切除修復(fù)Pol /合成RNA-DNA引物Pol /引發(fā)酶有依賴(lài)DNA的ATPase活性，結(jié)合于引物-模板鏈，激活DNA聚合酶， 促使PCNA結(jié)合于引物-模板鏈RFC激活DNA聚合酶和RFC的ATPase活性PCNA單鏈DNA結(jié)合蛋白，激活DNA聚合酶，使解旋酶容易結(jié)合DNARPA功 能蛋白質(zhì)真核DNA復(fù)制叉主要蛋白質(zhì)的功能76DNA-pol 和pol 分別兼有解螺旋酶和引物酶活性。在復(fù)制叉及引物生成后，DNA-pol 通過(guò)PCNA的協(xié)同作

21、用，逐步取代pol ，在RNA引物的3-OH基礎(chǔ)上連續(xù)合成領(lǐng)頭鏈。隨從鏈引物也由pol 催化合成。然后由PCNA協(xié)同，pol 置換pol ，繼續(xù)合成DNA子鏈。 二、真核生物復(fù)制的延長(zhǎng)發(fā)生DNA聚合酶/轉(zhuǎn)換77前導(dǎo)鏈：出現(xiàn)在引發(fā)后期后隨鏈：發(fā)生于每個(gè)岡崎片段合成之際發(fā)生DNA聚合酶/轉(zhuǎn)換的原因是Pol 不具備持續(xù)合成能力。DNA聚合酶/轉(zhuǎn)換的關(guān)鍵蛋白是RFC。DNA聚合酶/轉(zhuǎn)換78真核DNA聚合酶轉(zhuǎn)換和后隨鏈合成793553領(lǐng)頭鏈3535親代DNA后隨鏈引物核小體三、真核生物DNA合成后立即組裝成核小體80染色體DNA呈線(xiàn)狀，復(fù)制在末端停止。復(fù)制中岡崎片段的連接，復(fù)制子之間的連接。染色體兩端D

22、NA子鏈上最后復(fù)制的RNA引物，去除后留下空隙。四、端粒酶參與解決染色體末端復(fù)制問(wèn)題81切除引物的兩種機(jī)制82前導(dǎo)鏈產(chǎn)生完整的子染色單體。后隨鏈3端留下縮短的未復(fù)制的ssDNA區(qū)。8353355335+533335584端粒（telomeres）由富含TG的重復(fù)序列組成。人的端粒重復(fù)序列為5-(TnGn)x-3。這些重復(fù)序列多為雙鏈，但每個(gè)染色體的3端比5端長(zhǎng)，形成單鏈ssDNA。這一特殊結(jié)構(gòu)可解決染色體末端復(fù)制問(wèn)題。85端粒酶(telomerase)端粒酶RNA (human telomerase RNA, hTR)端粒酶協(xié)同蛋白(human telomerase associated pr

23、otein 1, hTP1)端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(human telomerase reverse transcriptase, hTRT) 組成：86端粒酶（telomerase）是一種核糖核蛋白（RNP），由RNA和蛋白質(zhì)組成。端粒酶以自己的RNA組分作為模板，以染色體的3端ssDNA（后隨鏈模板）為引物，將端粒序列添加于染色體的3端。這些新合成的DNA為單鏈。87端粒酶催化作用的爬行模型 88真核所有染色體DNA復(fù)制僅僅出現(xiàn)在細(xì)胞周期的S期，而且只能復(fù)制一次。五、真核生物染色體DNA在每個(gè)細(xì)胞周期中只能復(fù)制一次89前復(fù)制復(fù)合物在G1期形成而在S期被激活真核細(xì)胞DNA復(fù)制的起始分兩步進(jìn)行，即復(fù)制

24、基因的選擇和復(fù)制起點(diǎn)的激活。復(fù)制基因（replicator）是指DNA復(fù)制起始所必需的全部DNA序列。90復(fù)制基因的選擇出現(xiàn)于G1期，基因組的每個(gè)復(fù)制基因位點(diǎn)均組裝前復(fù)制復(fù)合物（pre-replicative complex，pre-RC）。復(fù)制起點(diǎn)的激活出現(xiàn)于細(xì)胞進(jìn)入S期以后，這一階段將激活pre-RC，募集若干復(fù)制基因結(jié)合蛋白和DNA聚合酶，并起始DNA解旋。在原核細(xì)胞中，復(fù)制基因的識(shí)別與DNA解旋、募集DNA聚合酶偶聯(lián)進(jìn)行。而在真核細(xì)胞中，這兩個(gè)階段相分離可以確保每個(gè)染色體在每個(gè)細(xì)胞周期中僅復(fù)制一次。91ORC至少募集兩種解旋酶加載蛋白Cdc6和Cdt1。復(fù)制起點(diǎn)識(shí)別復(fù)合物（origin

25、recognition complex，ORC）識(shí)別并結(jié)合復(fù)制基因。三種蛋白質(zhì)一起募集真核細(xì)胞解旋酶Mcm2-7。前復(fù)制復(fù)合物（pre-RC）的形成92pre-RC磷酸化導(dǎo)致在復(fù)制起點(diǎn)組裝其它復(fù)制因子并起始復(fù)制，復(fù)制因子包括3種DNA聚合酶。DNA聚合酶在復(fù)制起點(diǎn)按一定順序組裝：首先Pol 和Pol 結(jié)合，然后是Pol /引發(fā)酶。在S期，pre-RC被蛋白激酶（Ddk和Cdk）磷酸化，從而被激活。93pre-RC的激活和組裝真核DNA復(fù)制叉94（1）激活pre-RC，以起始DNA復(fù)制；（2）抑制形成新的pre-RC。CDK控制pre-RC的形成和激活真核細(xì)胞通過(guò)依賴(lài)細(xì)胞周期蛋白的蛋白激酶（cy

26、clin-dependent kinases，CDK）嚴(yán)格控制pre-RC的形成和激活。Cdk功能：95在每個(gè)細(xì)胞周期過(guò)程中，僅有一次機(jī)會(huì)形成pre-RC，也僅有一次機(jī)會(huì)激活pre-RC。pre-RC在被激活后即解體，所暴露的復(fù)制基因可形成新的pre-RC并迅速結(jié)合ORC。但在S、G2和M期，高活性的Cdk抑制pre-RC的其它組分結(jié)合ORC。只有當(dāng)染色體分離和細(xì)胞分裂完成時(shí)，Cdk的活性消失，新的pre-RC才能形成。96逆轉(zhuǎn)錄和其他復(fù)制方式Reverse Transcription & Other DNA Replication Ways第五節(jié)97雙鏈DNA是大多數(shù)生物的遺傳物質(zhì)。某些病毒的遺傳物質(zhì)是RNA。原核生物的質(zhì)粒，真核生物的線(xiàn)粒體DNA，都是染色體外存在的DNA。這些非染色體基因組，采用特殊的方式