6.蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能133

1、liguofu1結(jié)構(gòu)生物學 簡介研究員PI周愛武， 43歲，漢族，江蘇東臺人學習經(jīng)歷：1989.9-1993.7南京大學 生物化學系 生化專業(yè)學士1993.9-1996.2南京大學 生物化學系 生化專業(yè)碩士1996.2-1997.7南京大學 生物化學系 生化專業(yè)博士中國人2工作經(jīng)歷1997年12月-2003年12月劍橋大學血液學系 Research Associate2004年1月 -2005年12月劍橋大學血液學系 Senior Research Associate2006年1月 -2010年12月劍橋大學血液學系 BHF Basic Science Lecturer, 2011年1月 -2

2、015年12月劍橋大學血液學系 BHF Senior Research Fellow,2011年5月 -現(xiàn)在上海交大醫(yī)學院 細胞分化與凋亡重點實驗室 PI 3蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)（構(gòu)象、高級結(jié)構(gòu)）蛋白質(zhì)分子中所有原子在三維空間的排列分布和肽鏈的走向。構(gòu)型：指一個不對稱的化合物中不對稱中心上的幾個原子或基團的空間排布方式。如單糖的、構(gòu)型，氨基酸的D、L構(gòu)型。當從一種構(gòu)型轉(zhuǎn)換成另一種構(gòu)型的時候，會牽涉及共價鍵的形成或破壞。構(gòu)象：指一個分子結(jié)構(gòu)中的一切原子繞共價單鍵旋轉(zhuǎn)時產(chǎn)生的不同空間排列方式。一種構(gòu)象變成另一種構(gòu)象不涉及共價鍵的形成或破壞。 4研究蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)的意義？5內(nèi)容：一，研

3、究蛋白的方法二，維持三維結(jié)構(gòu)的作用力三，多肽折疊的空間限制四，蛋白的二級結(jié)構(gòu)五，纖維蛋白 （角蛋白，膠原蛋白）六，蛋白的超二級結(jié)構(gòu)和結(jié)構(gòu)域七，球狀蛋白與三級結(jié)構(gòu)八，蛋白質(zhì)的四級結(jié)構(gòu)6必須掌握的內(nèi)容：20種氨基酸的結(jié)構(gòu)，名稱，縮寫Alpha 螺旋，Beta 折疊, -轉(zhuǎn)角 的特點，常用結(jié)構(gòu)分析軟件的使用7常用工具軟件：pDRAWPymolwinCOOTCCP4PDBePISA (Protein Interfaces, Surfaces and Assemblies)8一.研究蛋白質(zhì)構(gòu)象的方法X射線衍射法研究溶液中蛋白質(zhì)構(gòu)象的光譜學方法9 The Nobel Prize in Physics 19

4、01for their theories, developed independently, concerning the course of chemical reactions Wilhelm Conrad Roentgen Germany Munich UniversityMunich, Germany1845 - 1923倫琴10 1901年獲諾貝爾物理獎 W.C. (Wilhelm Conrad Roentgen 18451923)主要成就：從1876年開始研究各種氣體比熱，證實氣體中電磁旋光效應(yīng)存在。1888年實驗證實電介質(zhì)能產(chǎn)生磁效應(yīng)，最重要在1895年11月8日在實驗中發(fā)現(xiàn)：當

5、克魯克斯管接高壓電源，會放射出一種穿透力極強的射線，他命名為X射線。X射線在晶體結(jié)構(gòu)分析，金相材料檢驗，人體疾病透視檢查即治療方面有廣泛應(yīng)用，因此而獲得1901年諾貝爾物理獎。 倫琴11The Nobel Prize in Physics 1914for their theories, developed independently, concerning the course of chemical reactions Max von Laue Germany Frankfurt UniversityFrankfurt-on-the Main, Germany1879 - 1960勞厄12T

6、he Nobel Prize in Physics 1915for their theories, developed independently, concerning the course of chemical reactions Sir William Henry Bragg Great Britain London UniversityLondon, Great Britain1862 - 1942布拉格13紫外差光譜熒光和熒光偏振 圓二色性核磁共振(2)研究處于溶液中蛋白質(zhì)構(gòu)象的光譜學方法141952年諾貝爾物理學獎：布洛赫(Felix Bloch ) & 珀賽爾 (Edward

7、Purcell)因發(fā)展了核磁精密測量的新方法及由此所作的發(fā)現(xiàn)核磁共振。布洛赫(Felix Bloch )珀賽爾 (Edward Purcell)151991年諾貝爾化學獎：恩斯特R.R.Ernst（1933） 瑞士物理化學家他的主要成就在于他在發(fā)展高分辨核磁共振波譜學方面的杰出貢獻。這些貢獻包括： 一.脈沖傅利葉變換核磁共振譜 二.二維核磁共振譜 三.核磁共振成像162003年諾貝爾醫(yī)學獎 :美國科學家保羅勞特布爾 (Paul Lauterbur)和英國科學家彼得曼斯菲爾德(Peter Mansfield )用核磁共振層析“拍攝”的腦截面圖象Peter17二.維持三維結(jié)構(gòu)的作用力18氨基酸的簡

8、寫符號192、 -氨基酸通式20按R基團的極性分：據(jù)pH=7時，R基團的帶電性 二、氨基酸的分類1、非極性氨基酸:丙纈異亮脯苯色蛋2、極性不帶電荷氨基酸：甘絲蘇半酪天谷3、極性帶負電荷氨基酸(酸性氨基酸)：天谷4、極性帶正電荷氨基酸(堿性氨基酸)：賴精組211、非極性氨基酸:丙纈異亮脯苯色蛋222、極性不帶電荷氨基酸：甘絲蘇半酪天谷233、帶負電荷氨基酸：天谷4、帶正電荷氨基酸：賴精組24氨基酸的性質(zhì) 除甘氨酸外，氨基酸均含有一個手性-碳原子，因此都具有旋光性。 1 、氨基酸的旋光性25判斷D、L構(gòu)型的方法262、氨基酸的光吸收構(gòu)成蛋白質(zhì)的20種氨基酸在近紫外區(qū)(220-300nm) 只有酪氨

9、酸（275nm)、苯丙氨酸(257nm)和色氨酸(280nm)有吸光能力。273、氨基酸的兩性性質(zhì)氨基酸在結(jié)晶形態(tài)或在水溶液中，離解成兩性離子。不同的pH下，兩性離子的狀態(tài): pH = 1 7 10凈電荷 +1 0 -1 正離子 兩性離子等電點PI 負離子 pH 小 大28294、氨基酸的等電點 氨基酸的等電點（pI）： 當溶液濃度為某一pH值時，氨基酸分子中所含的-NH3+和-COO-數(shù)目正好相等，凈電荷為0時的pH值。 30312) 酸性氨基酸：pI = (pK1 + pKR-COO- )/2 (Glu)中性氨基酸:pI = (pK1 + pK2 )/2323) 堿性氨基酸：pI = (p

10、K2 + pKR-NH2 )/2His33共價鍵次級鍵化學鍵 肽鍵一級結(jié)構(gòu)氫鍵二硫鍵二、三、四級結(jié)構(gòu)疏水鍵鹽鍵三、四級結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)分子中的共價鍵與次級鍵范德華力34蛋白質(zhì)分子中的非共價鍵(次級鍵) 1. 氫鍵：氫鍵(hydrogen bond)的形成常見于連接在一電負性很強的原子上的氫原子，與另一電負性很強的原子之間。氫鍵在維系蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)穩(wěn)定上起著重要的作用。氫鍵的鍵能較低(12kJ/mol)，因而易被破壞。 35蛋白質(zhì)分子中氫鍵的形成36非極性物質(zhì)在含水的極性環(huán)境中存在時，會產(chǎn)生一種相互聚集的力，這種力稱為疏水鍵或疏水作用力。蛋白質(zhì)分子中的許多氨基酸殘基側(cè)鏈也是非極性的，這些非極性的基團

11、在水中也可相互聚集，形成疏水鍵，如Leu，Ile，Val，Phe，Ala等的側(cè)鏈基團。2. 疏水鍵：37 離子鍵(salt bond)是由帶正電荷基團與帶負電荷基團之間相互吸引而形成的化學鍵。在近中性環(huán)境中，蛋白質(zhì)分子中的酸性氨基酸殘基側(cè)鏈電離后帶負電荷，而堿性氨基酸殘基側(cè)鏈電離后帶正電荷，二者之間可形成離子鍵。3. 離子鍵（鹽鍵）：38蛋白質(zhì)分子中離子鍵的形成4范德華氏（van der Waals)引力：原子之間存在的相互作用力。39蛋白質(zhì)多肽鏈空間折疊的限制因素： 1.肽鍵具有部分雙鍵性質(zhì)： A.肽鍵不能自由旋轉(zhuǎn) B.組成肽鍵的四個原子和與之相連的兩個碳原子C）都處于同一個平面內(nèi)，此剛性結(jié)

12、構(gòu)的平面叫肽平面或酰胺平面。 2.二面角所決定的構(gòu)象能否存在，主要取決于兩個相鄰肽單位中，非鍵合原子之間的接近有無阻礙。三.多肽主鏈折疊的空間限制40 肽鍵中C-N鍵具有部分雙鍵性質(zhì)組成酰胺的原子處于同一平面 共 振 形 式4142酰胺平面與-碳原子的二面角（ 和 ） 二面角 兩相鄰酰胺平面之間，能以共同的C為定點而旋轉(zhuǎn)，繞C-N鍵旋轉(zhuǎn)的角度稱角，繞C-C鍵旋轉(zhuǎn)的角度稱角。和稱作二面角，亦稱構(gòu)象角。43多肽鏈：通過可旋轉(zhuǎn)的C連接的酰胺平面鏈這種旋轉(zhuǎn)是受到限制的44 和= 0時的主鏈構(gòu)象45拉氏構(gòu)象圖46蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)是指肽鏈的主鏈在空間的排列,或規(guī)則的幾何走向、旋轉(zhuǎn)及折疊。它只涉及肽鏈主鏈的

13、構(gòu)象。四.蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)氫鍵是穩(wěn)定二級結(jié)構(gòu)的主要作用力。主要有-螺旋、-折疊、-轉(zhuǎn)角、自由回轉(zhuǎn)(無規(guī)卷曲)。47（一）-螺旋 （-helix）1、-螺旋的結(jié)構(gòu)48螺距0.54nm每圈含3.6個AA殘基 每個AA殘基占0.15nm 繞軸旋轉(zhuǎn)100鏈內(nèi)形成氫鍵與軸平行多為右手螺旋49（1）又稱3.613螺旋（2）螺旋的偶極矩：由于每一肽鍵 N-H和CO的極性而產(chǎn)生（3）螺旋的手性左/右手螺旋都由L-AA殘基構(gòu)成 不是對映體右手螺旋空間位阻較小，構(gòu)象穩(wěn)定在肽鏈折疊中容易形成。2 、-螺旋的特點50 R基大?。狠^大的難形成，如多聚Ile R基的電荷性質(zhì)：不帶電荷易形成 Pro吡咯環(huán)的形成 C -N

14、/C -N不能旋轉(zhuǎn) 無法形成鏈內(nèi)氫鍵3 、影響-螺旋形成的因素5152-螺旋是蛋白質(zhì)中最常見，含量最豐富的二級結(jié)構(gòu)。-螺旋中的二面角和各自取同一數(shù)值，即=-57、 =-48 。蛋白質(zhì)中的-螺旋幾乎都是右手螺旋（也有例外） 。-螺旋的形成及其穩(wěn)定性與其氨基酸組成和順序有關(guān)。 -螺旋折疊過程中存在協(xié)同性。-螺旋的書寫形式為：3.613-螺旋C(NHCCO)3 NOHHR53310螺旋螺旋（4.416螺旋）4、其他類型的螺旋54由兩/多條幾乎完全伸展的肽鏈平行排列，通過鏈間的氫鍵交聯(lián)而形成。肽鏈主鏈呈鋸齒狀折疊構(gòu)象。（二） -折疊（ -pleated sheet）55C總是處于折疊的角上AA的R基團

15、處于折疊的棱角上并與之垂直兩個AA之間的軸心距為0.35nm1、-折疊結(jié)構(gòu)特點56氫鍵主要在鏈間/同一肽鏈不同部分間形成幾乎所有肽鍵都參與鏈內(nèi)氫鍵的交聯(lián)氫鍵與鏈的長軸接近垂直57平行式：所有肽鏈的N-端都在同一邊反平行式：相鄰兩條肽鏈的方向相反2、-折疊的類型5859（三） -轉(zhuǎn)角和凸起1、 轉(zhuǎn)角（ turn/bend/hairpin structure）肽鏈主鏈骨架180的回折結(jié)構(gòu)特點：由4個連續(xù)的AA殘基組成第一個殘基C=O第四個殘基NH形成氫鍵60 O （ 氫 鍵 ） H C（NHCHCO）2N R61比較穩(wěn)定的環(huán)狀結(jié)構(gòu)主要存在于球狀蛋白分子中多數(shù)處在蛋白質(zhì)分子的表面62反平行折疊片中的

16、一種不規(guī)則排列實質(zhì)上是多出來的一個AA殘基2、 凸起（ bugle）63無規(guī)卷曲是指多肽鏈主鏈部分形成的無規(guī)律的卷曲構(gòu)象。 酶的功能部位常包含此構(gòu)象，靈活易變。（四）無規(guī)卷曲64RNase的分子結(jié)構(gòu)-螺旋-折疊-轉(zhuǎn)角無規(guī)卷曲65 纖維狀蛋白質(zhì)廣泛地分布于動物體內(nèi)，脊椎動物體中50%以上是纖維狀蛋白質(zhì)，是動物體的基本支架和外表保護成分。 外形呈纖維狀或細棒狀，分子軸比(長軸短軸)大于10(小于10的為球狀蛋白質(zhì))。 分子是有規(guī)則的線型結(jié)構(gòu)，這與其多肽鏈的有規(guī)則二級結(jié)構(gòu)有關(guān)，而有規(guī)則的線型二級結(jié)構(gòu)是它們的氨基酸順序的規(guī)則性反映。五.纖維狀蛋白66纖維蛋白 不溶性纖維蛋白（角蛋白、膠原蛋白、彈性蛋白

17、）可溶性纖維蛋白（肌球蛋白 血纖蛋白原）硬蛋白67-角蛋白（一）-角蛋白 （Keratin）硬-角蛋白 強軟-角蛋白 弱皮膚與皮膚的衍生物主要由-螺旋構(gòu)象的多肽鏈組成68毛發(fā)的結(jié)構(gòu)69大纖維鱗狀細胞皮層細胞微纖維微原纖維初原纖維 螺旋70角蛋白在濕熱條件下伸展轉(zhuǎn)變?yōu)闃?gòu)象，冷卻干燥時可自發(fā)地恢復原狀。側(cè)鏈R基一般較大，不適于處在構(gòu)象螺旋多肽鏈間有著很多的二硫鍵交聯(lián)交聯(lián)鍵使外力解除后肽鏈恢復原狀卷發(fā)(燙發(fā))的生物化學基礎(chǔ)燙發(fā)時還原劑7172（二）-角蛋白7374絲蛋白的結(jié)構(gòu)751、組織分布與類型屬結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)使骨、腱、軟骨和皮膚具有機械強度（三）膠原蛋白(collagen)762、AA組成皮膚中膠原

18、蛋白肽鏈的96%是按 三聯(lián)體 (G1yxy)n順序重復排列 Gly數(shù)目占殘基總數(shù)1/3 X 常為Pro，y常為Hy-Pro/Hy-Lys 需Vc、是糖蛋白77Gly3、結(jié)構(gòu)7879804、膠原蛋白中的共價交聯(lián)分子內(nèi)交聯(lián)818283由肽組成至少有：l(I)/l(II)/l(III)/1(IV)和2膠原蛋白I：1(I)22三螺旋五種肽鏈AA順序不同，分子量介于95000到100000之間，含1000個殘基左右5、膠原蛋白的類型84由可溶性的單體合成是彈性蛋白纖維的基本單位含有各種各樣無規(guī)卷曲構(gòu)象（四）彈性蛋白（elastin85肌肉肌纖維束肌纖維肌原纖維（五）肌球蛋白和原肌球蛋白86六、蛋白質(zhì)的超

19、二級結(jié)構(gòu)和結(jié)構(gòu)域(2) 結(jié)構(gòu)域 （structure domain）蛋白質(zhì)中相鄰的二級結(jié)構(gòu)單位（即單個螺旋或折疊或轉(zhuǎn)角）組合在一起，形成有規(guī)則的、在空間上能辯認的二級結(jié)構(gòu)組合體稱為蛋白質(zhì)的超二級結(jié)構(gòu)基本組合方式：；在二級結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，多肽進一步卷曲折疊成幾個相對獨立、近似球形的三維實體，再由兩個或兩個以上這樣的三維實體締合成三級結(jié)構(gòu)，這種相對獨立的三維實體稱為結(jié)構(gòu)域。 ()超二級結(jié)構(gòu) （ supersecondary structure ）87超二級結(jié)構(gòu)類型1 2 3 4 5 5 2 3 4 1 -鏈 -迂回回形拓撲結(jié)構(gòu)回形拓撲結(jié)構(gòu) -迂回88卵溶菌酶的三級結(jié)構(gòu)中的兩個結(jié)構(gòu)域-螺旋-轉(zhuǎn)角-折疊

20、二硫鍵結(jié)構(gòu)域1結(jié)構(gòu)域289七.球狀蛋白與三級結(jié)構(gòu) 多肽鍵在二級結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，通過側(cè)鏈基團的相互作用進一步卷曲折疊，借助次級鍵維系使螺旋、折疊片、轉(zhuǎn)角等二級結(jié)構(gòu)相互配置而形成特定的構(gòu)象。三級結(jié)構(gòu)的形成使肽鏈中所有的原子都達到空間上的重新排布。 實例：肌紅蛋白 核糖核酸酶90肌紅蛋白三級結(jié)構(gòu)91核糖核酸酶三級結(jié)構(gòu)示意圖NHis12CHis119Lys4192球狀蛋白三維結(jié)構(gòu)的特征：1.球狀蛋白分子含多種二級結(jié)構(gòu)元件；2.球狀蛋白三維結(jié)構(gòu)具有明顯的折疊層次；3.球狀蛋白分子是緊密的球狀或橢球狀實體；4.球狀蛋白質(zhì)疏水側(cè)鏈埋藏在分子內(nèi)部，親水側(cè)鏈暴露在分子表面；5.球狀蛋白分子的表面有一個孔穴。93八

21、.蛋白質(zhì)的四級結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)的四級結(jié)構(gòu)就是指由亞基按照一定排布方式聚合而成的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)（具有獨立的三級結(jié)構(gòu)的多肽鏈的空間排布和相互作用。）亞基(subunit)就是指參與構(gòu)成蛋白質(zhì)四級結(jié)構(gòu)的、每條具有三級結(jié)構(gòu)的多肽鏈。維系蛋白質(zhì)四級結(jié)構(gòu)的是氫鍵、鹽鍵、范氏引力、疏水鍵等非共價鍵。實例：血紅蛋白 94血紅蛋白四級結(jié)構(gòu)95liguofu96結(jié)構(gòu)生物學是以生物大分子特定空間結(jié)構(gòu)、結(jié)構(gòu)的特定運動與生物學功能的關(guān)系為基礎(chǔ)，來闡明生命現(xiàn)象及其應(yīng)用的科學. 結(jié)構(gòu)生物學的概念結(jié)構(gòu)生物學的內(nèi)容以結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的功能闡述（目的）97靜態(tài)結(jié)構(gòu) 晶體衍射X-ray衍射中子衍射電子衍射 透射電鏡 核磁共振(NMR).結(jié)構(gòu)生物學

22、的技術(shù)方法結(jié)構(gòu)變化園二色光譜 (CD)紅外/拉曼光譜熒光光譜差示量熱分析 (DSC)電子順磁共振 (EPR)核磁共振(NMR)原子力顯微鏡 (AFM)981。蛋白質(zhì)的大規(guī)模表達，2。 純化， 鑒定3。蛋白質(zhì)的結(jié)晶； 4。晶體的衍射5。晶體結(jié)構(gòu)的解析X-ray衍射結(jié)構(gòu)生物學常用方法991. Protein Expression BottleneckConsumers:Protein Biochemistrysoluble, purifiable proteinEnzymologysoluble, active protein0.1-10 mg of proteinCrystallographys

23、oluble, crystallizable protein5-100 mg of proteinExpression SystemsINFORS搖床（度）102Why HEK.EBNA Cells? The Principleintegrated Ad5E1a/E1b fragment in HEK 293 cells enhances trans-cription of CMVpromotor driventransgeneEBNA-1 protein drives episomal replication ofori-P containing plasmidsEBNA-1/ori-P b

24、ased expression in Human Embryonic Kidney (293) cells (293 stably transformed with EBNA-1 gene)The cell line is available from ATCC and, until recently, also from Invitrogen103AKTA HPLC 自動化樣品收集器2. 蛋白質(zhì)純化系統(tǒng)：離子交換親和層析分子篩排阻層析疏水層析104Expression and Purification of CBG:1053. 蛋白質(zhì)的結(jié)晶； 106107Diffraction衍射108最終

25、結(jié)構(gòu)X射線晶體學的流程晶體生長晶體衍射母晶晶體重金屬衍生物傅里葉合成電子密度圖晶胞參數(shù)衍射強度和相位兩套以上不同的衍射數(shù)據(jù)根據(jù)結(jié)構(gòu)模型修正相位碳骨架走向氨基酸殘基指認結(jié)構(gòu)模型衍射強度修正后的相位109liguofu110電子密度圖（electron density map）分 辨 率的重要性1 resolution 6 resolution 1.02.53.04.01.0 ：可分辯單個原子（N比C大）2.5 ：可分辨環(huán)狀狀結(jié)構(gòu)3.0 ：不易可分辨環(huán)狀狀結(jié)構(gòu)4.0 ：很難確定是否環(huán)狀結(jié)構(gòu). 6.0 ：可分辨 a helix，不能分辨b sheet 8 ：只能分辨分子 liguofu1111.5

26、Angstrom resolution 最終結(jié)構(gòu)X射線晶體學的流程晶體生長晶體衍射母晶晶體重金屬衍生物傅里葉合成電子密度圖晶胞參數(shù)衍射強度和相位兩套以上不同的衍射數(shù)據(jù)根據(jù)結(jié)構(gòu)模型修正相位碳骨架走向氨基酸殘基指認結(jié)構(gòu)模型衍射強度修正后的相位112113主要結(jié)構(gòu)測定方法簡介X-ray衍射核磁共振 (NMR)透射電鏡 114自旋量子數(shù) I 不為零的核的自旋運動將產(chǎn)生磁矩,核磁共振的研究對象為具有磁矩的核。原子核可按 I 的數(shù)值分為以下三類中子數(shù)、質(zhì)子數(shù)均為偶數(shù)，I =0，如12C、 16O、32S（沒有核磁共振現(xiàn)象）中子數(shù)與質(zhì)子數(shù)其一為偶數(shù)，另一為奇數(shù)，則I為半整數(shù)（I1/2; 3/2)，如1H、1

27、3C、15N、19F、31P中子數(shù)、質(zhì)子數(shù)均為奇數(shù)，則I為整數(shù)，如2H、14N（I =1）核的自旋NMR115For I = nuclei have two spin statesM = -1/2M = +1/2The energy gap between states is small and corresponds to radio frequency wavesE = h 核磁共振的產(chǎn)生NMR116NMRNMR Spectroscopy117由NMR得到的結(jié)構(gòu)參數(shù)化學位移：電子對核自旋的屏蔽作用原子核在分子中的位置自旋耦合：核自旋間的相互作用原子核之間的鍵合關(guān)系化學鍵之間的夾角二面角NO

28、E效應(yīng): 核的空間距離弛豫速率：核自旋間能量交換原子核之間的距離分子運動的相關(guān)時間分子鏈段的柔性，及其勢壘NMR118liguofu119電鏡原理結(jié)構(gòu)測定使用的是透射電鏡 (TEM),還有一種電鏡稱為掃描電鏡 (SEM),可以獲得被觀察對象的表面形貌信息.透射電鏡外觀120TEM原理(從很多張平面照片中構(gòu)建立體結(jié)構(gòu))121總結(jié)/述評X-ray Crystallography是目前最主要的研究生物大分子結(jié)構(gòu)的手段,分辨率可以達到原子水平. 原則來說, 它沒有分子大小的限制, 但由于需要得到好的晶體才能解析晶體結(jié)構(gòu), 太大的分子復合體不易得到結(jié)晶, 目前還是有一定限制. 同步輻射光源的應(yīng)用提高了X-ray的衍射質(zhì)量. 樣品的結(jié)晶是一個瓶頸, 尤其是膜蛋白的結(jié)晶很難得到,因此,結(jié)晶方法的研究仍是努力