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1、禽流感防制知識(shí)講座-禽流感間接ELISA診斷和治療技術(shù)應(yīng)用 禽流感AIV是影響?zhàn)B禽業(yè)開(kāi)展的重要疾病之一,高致病性AIV被國(guó)際獸疫局列為I類烈性傳染病,我國(guó)為一類動(dòng)物疫病。1878 年首次報(bào)道于意大利,目前遍布全世界。近期得到前所未有的關(guān)注。禽流感做為一種人禽共患的政治、經(jīng)濟(jì)病,嚴(yán)重地威脅著我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)的開(kāi)展、對(duì)外貿(mào)易及人類健康。禽流感概況禽流感的病原 1901年別離到,1955年被確定為正粘病毒科、流感病毒屬、A型流感病毒。負(fù)鏈單股RNA病毒,呈球形,直徑為80120nm,平均為100nm。具囊膜,在囊膜外表有許多放射狀的纖突。病毒基因組由8個(gè)獨(dú)立片段組,分別編碼10病毒蛋白:依賴性聚合酶蛋白P
2、A、PB1、PB2、核蛋白NP、非結(jié)構(gòu)蛋白NS1、NS2、基質(zhì)蛋白M1、M2及病毒外表的血凝素蛋白HA及神經(jīng)氨酸酶蛋白NA。我國(guó)公開(kāi)報(bào)道的禽流感的幾個(gè)事件97香港流感事件, 18人感染H5N1亞型禽流感病毒,6人死亡,約150萬(wàn)只雞、鴨、鵝和鴿子被撲殺,直接耗資6000萬(wàn)港幣,用于對(duì)養(yǎng)禽業(yè)的補(bǔ)助達(dá)10億港幣。據(jù)估算,僅廣東一省的損失達(dá)人民幣15億元以上。1999年3月,香港衛(wèi)生署從2個(gè)生病兒童身上別離到H9N2亞型AIV。我國(guó)從人群中分出5株H9N2毒株。3. 2001年5月,香港再次發(fā)生5N1禽流感并展開(kāi)殺雞行動(dòng),港方銷毀120萬(wàn)只家禽,涉及賠償及有關(guān)開(kāi)支金額達(dá)8000萬(wàn)元。隨后,澳門(mén)市政部
3、門(mén)證實(shí)在一批禽鳥(niǎo)樣本中發(fā)現(xiàn)兩只鵝受到H5N1禽流病毒感染,展開(kāi)了歷年來(lái)首次的全澳門(mén)“殺雞行動(dòng),銷毀約二萬(wàn)只家禽。4. 2001年6月4日,韓國(guó)農(nóng)林部宣布從中國(guó)上海大盈禽聯(lián)公司出口的禽肉中檢測(cè)出H5N1 HPAIV,禁止從中國(guó)進(jìn)口家禽及禽類產(chǎn)品。6月8日,日本僅依據(jù)韓國(guó)提供的情況,也宣布暫停從中國(guó)進(jìn)口禽類產(chǎn)品。5. 2002年2月,香港因發(fā)生禽流感第三次展開(kāi)殺雞行動(dòng),銷毀約30多萬(wàn)只。6. 2003年1-2月,香港再次爆發(fā)禽流感,涉及22個(gè)禽場(chǎng),共殺禽86萬(wàn)只。我國(guó)禽流感的流行情況禽流感的診斷 流行病學(xué)診斷 臨床病癥診斷 病理變化診斷 組織學(xué)病變?cè)\斷 病原學(xué)診斷 血清學(xué)診斷禽流感的流行特點(diǎn) 禽流
4、感是一種急性高度接觸性傳染病,一年四季均可發(fā)生,但以冬季和春季較為嚴(yán)重。 宿主廣泛,雞、火雞、鴨、鵝、鵪鶉、雉雞和鴿等多種類型的家禽和野禽均易感。但發(fā)病和危害最大的主要是雞和火雞,鴨、鵝、鴿多為隱性感染或帶毒,但近年發(fā)現(xiàn)鴨、鵝出現(xiàn)由H5亞型病毒引起的嚴(yán)重疾病,死亡率很高。 水禽特別是野鴨、海歐、岸基鳥(niǎo)在流行病學(xué)中有十分重要的作用。 各種日齡的雞均易感,但以40日齡左右的肉雞、產(chǎn)蛋頂峰期的種雞和商品蛋雞較常發(fā)生。 傳染源可以是臨床表現(xiàn)正常的帶毒水禽和海鳥(niǎo),病毒可長(zhǎng)期在污染的糞便、水中存活。禽類發(fā)病后,病毒大量繁殖,通過(guò)病禽的糞便、呼吸道分泌物,也可以通過(guò)污染的飼料、水、設(shè)備和墊草等傳播。禽流感的
5、臨床病癥1.慢性型:非高致病性AIV毒株感染或高致病性毒株感染已有一定免疫力的家禽引起的。 主要表現(xiàn)為產(chǎn)蛋量突然下降,有時(shí)有輕微呼吸道病癥,死亡率正?;蚵杂猩仙?。潛伏期長(zhǎng),最長(zhǎng)可達(dá)21天。2. 急性型:多由H5、H7亞型HPAIV引起。-潛伏期短,病程12天,死亡率可達(dá)100%。有時(shí)沒(méi)有明顯病癥即可見(jiàn)到雞只死亡。-雞冠發(fā)紺呈暗紅色或紫黑色,頭和顏面部水腫,腳鱗出現(xiàn)紫色出血斑。-局部病雞及水禽出現(xiàn)頭頸和腿部麻痹、抽搐等神經(jīng)病癥。禽流感的病理變化 剖檢病變:HPAI主要表現(xiàn)為各臟器、粘膜廣泛出血。 組織學(xué)病變:主要表現(xiàn)為皮膚及內(nèi)臟器官肝、脾、胰、肺、腎的出血、充血和壞死。實(shí)驗(yàn)室診斷病原學(xué)診斷血清學(xué)
6、診斷病毒別離和鑒定技術(shù)PCR技術(shù)捕捉ELISA直接免疫熒光技術(shù)HI試驗(yàn)AGP試驗(yàn)間接ELISA斑點(diǎn)ELISA NASBA技術(shù)雞新城疫與雞禽流感的鑒別診斷及防治 雞新城疫、雞禽流感都是由病毒引起的具有高度傳染性的疾病,一年四季均可發(fā)病,且都以冬春兩季多發(fā),現(xiàn)就其鑒別診斷介紹如下。 一、易感動(dòng)物1雞新城疫:是由副粘病毒引起,易感動(dòng)物是雞,死亡率高于雞禽流感。 2雞禽流感:由A型流感病毒引起,具有快速流行、持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)等特點(diǎn),對(duì)禽類都有一定的互感性,雞、鴨、鵝等禽類均易感染 二、臨床病癥1雞新城疫:(1)呼吸有羅音,并發(fā)出咯咯喘鳴聲;(2)腿部麻痹,頭部顫抖;(3)食欲和飲水量下降,糞便呈綠色。 2雞
7、禽流感:(1)頭部腫大,雞冠、肉髯發(fā)紺,腳鱗出現(xiàn)紫色出血斑;(2)腹瀉,糞便呈綠色或黃綠色水樣,死亡率5-30不等是特征性病癥;(3)有的雞群以呼吸障礙為主,呼吸有羅音且雛雞的呼吸病癥更嚴(yán)重。 三、剖檢變化1雞新城疫:(1)腺胃粘膜乳頭出血;(2)十二指腸潰瘍,小腸粘膜有圓形或棗核狀壞死潰瘍病灶,泄殖腔充血、出血;(3)盲腸扁桃體潰瘍。 2雞禽流感:(1)心肌灰白色壞死;(2)胰腺有灰白色壞死點(diǎn);(3)消化道有類似新城疫病變,特別是腺胃乳頭腫大出血,但與新城疫不同的是十二指腸、盲腸扁桃體未見(jiàn)潰瘍;(4)產(chǎn)蛋雞成熟卵泡囊充血、出血,腹腔內(nèi)常見(jiàn)有卵黃滲出或破裂、卵泡血腫和變形等特異性病變。 四、鑒
8、別診斷根據(jù)兩者的流行情況、臨床病癥及剖檢變化得到初步的鑒別診斷。另外,采用紅細(xì)胞血凝試驗(yàn)可作定性鑒別,即雞紅細(xì)胞血凝試驗(yàn)兩者均凝集,山羊紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)雞新城疫不凝集,雞禽流感凝集。 五、防治措施1杜絕病原侵入雞群、嚴(yán)格執(zhí)行消毒制度。消毒劑應(yīng)選擇重信譽(yù)、講品質(zhì)廠家生產(chǎn)的具有殺菌譜廣、作用快、無(wú)腐蝕性、殘留少、使用方便者。如百毒殺、農(nóng)福五號(hào)等。 2合理制訂雞群免疫程序,做好預(yù)防接種工作。可分別選用雞新城疫I系或系苗、雞禽流感多價(jià)滅活苗屢次強(qiáng)化免疫以增強(qiáng)雞群的抵抗力。 五、防治措施3一旦發(fā)現(xiàn)可疑疫病,及時(shí)檢測(cè)診斷和做好病死雞的處理工作。并對(duì)受威脅雞群進(jìn)行緊急防治,以預(yù)防疫情蔓延和繼發(fā)感染??蛇x用:(
9、1)雞新城疫、禽流感高免卵黃抗體,按每公斤體重肌注2-3mL,連用2-3d;(2)利毒威 混飲:每100g本藥治療量?jī)?00kg水,連飲2-4d;(3)感泰克混飲:按體重給藥,治療量每千克體重02-03mL。呼啦殺 混飲:每100g本藥治療量?jī)?20kg飲水。 病毒別離 病毒別離不僅是目前對(duì)發(fā)病禽群最確切診斷的一種方法,也是免疫禽群的主要監(jiān)測(cè)手段。如果采集及處理樣品的方法得當(dāng),別離病毒是診斷禽流感的一種敏感而實(shí)用的方法。相對(duì)于PCR、免疫熒光、ELISA以及電鏡觀察等其他直接檢測(cè)病原的方法或手段,病毒別離的一個(gè)主要的優(yōu)點(diǎn)就是可以測(cè)定病毒的致病性,而且可以對(duì)病毒做進(jìn)一步抗原特性分析試驗(yàn)和基因特性
10、的研究,同時(shí)可用于疫苗制備及藥物敏感性實(shí)驗(yàn)等。 病毒別離 不僅是發(fā)病禽確實(shí)切診斷方法,而且是免疫禽群的主要監(jiān)手段。病料的采集 可以從活體或尸體進(jìn)行病原的別離和鑒定。用棉拭子法??蓮幕铙w的氣管和泄殖腔中別離到病毒,特別是從泄殖腔中別離到病毒的時(shí)機(jī)較多,為此可用不同大小的棉拭子擦取氣管或泄殖腔,盡量使棉拭子擦到深部,并能刮取泄殖腔粘膜外表的濾泡,以獲得足量的材料。病料的采取時(shí)間很重要,一般在感染初期或發(fā)病急性期采取。如轉(zhuǎn)為后期那么因機(jī)體已形成足夠的抗體而不易別離到病毒。死禽采集氣管、脾、肺、肝、腎和腦等組織樣品。小珍禽用拭子取樣易造成損傷,可取而代之以采集新鮮糞便。病料的保存 病料應(yīng)放在含有抗菌素
11、的pH值7.07.4的等滲PBS內(nèi)無(wú)PBS可用25%50%的甘油鹽水,假設(shè)短時(shí)間內(nèi)不能處理可于低溫條件下凍存。 瓊脂擴(kuò)散AGP試驗(yàn) AGP試驗(yàn)用抗原是用所有A型禽流感病毒共有的核蛋白NP抗原制成的,可以用來(lái)檢測(cè)所有A型流感病毒目前有15種血凝素亞型產(chǎn)生的抗體。該方法只適用于未免疫雞群禽流感抗體的監(jiān)測(cè),方法簡(jiǎn)單、操作方便,但敏感性稍差。注意:1、該方法不適用于水禽血清抗體的檢測(cè),水禽禽流感抗體檢測(cè)應(yīng)該用HI試驗(yàn)。2、配瓊脂時(shí)應(yīng)先將瓊脂充分溶化后再放入鹽,否那么瓊脂不易溶解。AGP試驗(yàn)結(jié)果1234567 血凝HA血凝抑制HI試驗(yàn) 該方法適用于禽流感病毒血凝素亞型的鑒定以及感染或免疫后血清中抗體的檢
12、測(cè),敏感性比AGP試驗(yàn)高,但只有當(dāng)抗原和抗體的血凝素亞型完全一致時(shí)才會(huì)出現(xiàn)HI現(xiàn)象。 進(jìn)行禽流感的監(jiān)測(cè)時(shí),當(dāng)HI抗體在判定標(biāo)準(zhǔn)的可疑范圍之內(nèi)時(shí),需一周后再采血進(jìn)行檢測(cè)。 對(duì)于免疫雞,可以采集發(fā)病期及發(fā)病2-3周后的血清作比照檢查,測(cè)其抗體水平,如果康復(fù)期的血清抗體較發(fā)病初期升高4倍以上,可以認(rèn)為是禽流感發(fā)生。 進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)時(shí)首先要了解該雞群的免疫狀況,防止簡(jiǎn)單地將疫苗抗體誤認(rèn)為是感染抗體。注意:反響溫度不能太高,假設(shè)在37 如溫箱下進(jìn)行,會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果,應(yīng)在25 以下的室溫或在4冰箱中作用。NASBA、RT- PCR診斷技術(shù) NABSA方法可用來(lái)進(jìn)行H5禽流感病原的快速檢測(cè),香港在1997年
13、發(fā)生H5禽流感感染人事件后,加強(qiáng)了對(duì)該病的監(jiān)測(cè),在世界上率先使用這一方法,在全國(guó)獸醫(yī)界,浙江率先使用。RT-PCR靈敏度相對(duì)較差,從病料中的檢出率較低,但檢測(cè)尿囊液有足夠的靈敏度,并且可以通過(guò)對(duì)HA裂解位點(diǎn)的序列分析對(duì)毒株的致病性做出初步判斷,以便爭(zhēng)取時(shí)間在短時(shí)間內(nèi)采取措施。同時(shí),對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行序列分析,可以進(jìn)行禽流感病毒分子遺傳變異的比較。 禽流感的預(yù)防和控制疫苗免疫 疫情監(jiān)測(cè)及檢疫 及時(shí)發(fā)現(xiàn)和撲滅疫情 綜合防治 疫苗免疫概述疫苗免疫是預(yù)防和控制禽流感最經(jīng)濟(jì)、最有效的途徑。 禽流感病毒抗原具有多樣性,各亞型之間的抗原性存在一定的差異,亞型間缺乏堅(jiān)強(qiáng)的交叉保護(hù)作用。 我國(guó)主要流行的是H5和H
14、9亞型禽流感,目前必須而且只需做好H9和H5亞型禽流感的預(yù)防工作。 對(duì)雞群進(jìn)行大范圍的免疫、增強(qiáng)對(duì)外來(lái)病毒侵襲的抵抗能力的同時(shí),必須做好水禽H5亞型禽流感的防疫工作,不僅可以減少水禽本身的發(fā)病率和死亡率,而且可以減少帶毒水禽對(duì)環(huán)境的污染及對(duì)雞的傳播。 出口肉禽原那么上是不能進(jìn)行禽流感疫苗免疫的(香港除外)。所用疫苗必須是經(jīng)農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)使用的禽流感疫苗H5、H9,由省級(jí)動(dòng)物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)統(tǒng)一組織供給。 影響疫苗免疫效果的因素 疫苗質(zhì)量是疫苗保護(hù)率上下的決定性因素,主要包括疫苗中血凝素抗原的含量、乳化劑的選擇及乳化的生產(chǎn)工藝等;對(duì)于禽流感疫苗來(lái)講,最重要的是所用疫苗中病毒的血凝素亞型必須與當(dāng)?shù)亓餍兄甑?/p>
15、亞型相一致,才能發(fā)揮該疫苗的高效免疫保護(hù)作用。 雞群健康狀況是影響疫苗免疫效果的又一重要因素,當(dāng)雞群曾經(jīng)或正在感染某些疾病,尤其是一些免疫抑制病如法氏囊、網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥、禽白血病和雞傳染性貧血等病會(huì)嚴(yán)重干擾疫苗的免疫效果。 雞的日齡和品種的不同,對(duì)疫苗免疫的敏感性也不一致,HI抗體產(chǎn)生的時(shí)間和所能到達(dá)的高度也存在差異。禽種苗別第一次免疫第二次免疫第三次免疫第四次免疫日齡劑量ml/只日齡劑量日齡劑量日齡劑量蛋雞、種雞H5、H9140.3420.5120-1400.5260-2800.5商品、肉雞H5、H9100.3250.5種鴨H5140.5421.0120-1401.0260-2801.0
16、種鵝H5140.5421.0150-1701.5260-2801.5禽流感疫苗參考免疫程序 關(guān)于禽流感疫苗的幾個(gè)問(wèn)題 抗體產(chǎn)生期:7天產(chǎn)生HI試驗(yàn)可檢測(cè)到的抗體,但21天才能產(chǎn)生堅(jiān)強(qiáng)的免疫保護(hù)力,對(duì)強(qiáng)毒攻擊的抗死亡保護(hù)率達(dá)100%。免疫后21天,H5亞型HI平均抗體價(jià)在5.5log2以上, H9亞型HI平均抗體價(jià)在6.0log2以上。 HI抗體保護(hù)的臨界值:HI抗體大于或等于5.0log2以上時(shí)可完全保護(hù),等于 4.0log2時(shí)大局部保護(hù)。 同一毒株制成的疫苗是否可以同時(shí)用于其它家禽: 首先,從抗原性分析及氨基酸序列分析上,不同宿主來(lái)源的H5亞型禽流感病毒并無(wú)明顯差異。其次,我們?cè)謩e用雞、鴨
17、和鵝源毒株制成疫苗,分別免疫雞后進(jìn)行交叉攻毒,各疫苗均具有堅(jiān)強(qiáng)的交叉免疫免疫力。疫情監(jiān)測(cè)及檢疫監(jiān)測(cè)方法未經(jīng)免疫區(qū)域:以流行病學(xué)調(diào)查、血清學(xué)監(jiān)測(cè)為主包括瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、血凝抑制試驗(yàn)等方法,結(jié)合病原別離和毒型鑒定、毒力鑒定進(jìn)行監(jiān)測(cè)。免疫區(qū)域:以病原學(xué)監(jiān)測(cè)為主,結(jié)合血清學(xué)監(jiān)測(cè)。 監(jiān)測(cè)對(duì)象:所有易感禽類。 產(chǎn)地監(jiān)測(cè):定期按比例抽樣檢測(cè)。流通環(huán)節(jié)監(jiān)測(cè):對(duì)交易市場(chǎng)、禽類屠宰廠場(chǎng)、異地調(diào)入的活禽和禽產(chǎn)品進(jìn)行不定期的病原學(xué)和血清學(xué)監(jiān)測(cè)。尤其要嚴(yán)格管理好活禽交易市場(chǎng),這是禽流感病毒非常好的蓄積地,這些市場(chǎng)集中了不同地區(qū)的各種家禽,是促進(jìn)不同種畜禽直接接觸感染的有效途徑;污染的雞籠、蛋箱等可攜帶病毒在市場(chǎng)和養(yǎng)雞場(chǎng)之
18、間不斷移動(dòng)而導(dǎo)致病毒的傳播,雞販子通過(guò)市場(chǎng)或集市販運(yùn)、販賣(mài)病淘雞,更可造成遠(yuǎn)距離的擴(kuò)散。 監(jiān)測(cè)中發(fā)現(xiàn)因使用未經(jīng)農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)的禽流感疫苗而造成血清學(xué)陽(yáng)性禽群,一律按發(fā)生禽流感疫情處理。引種檢疫 國(guó)內(nèi)異地引入種禽及精液、種蛋時(shí),應(yīng)領(lǐng)先到當(dāng)?shù)貏?dòng)物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)辦理檢疫審批手續(xù)且檢疫合格。引入的種禽必須隔離飼養(yǎng)21天以上,并由動(dòng)物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)進(jìn)行檢測(cè),合格前方可混群飼養(yǎng)。 從國(guó)外引入種禽及精液、種蛋時(shí),按國(guó)家有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。 及時(shí)發(fā)現(xiàn)和撲滅疫情疫情報(bào)告 任何單位或個(gè)人發(fā)現(xiàn)可疑高致病性禽流感疫情時(shí),必須立即向當(dāng)?shù)乜h級(jí)防治禽流感領(lǐng)導(dǎo)小組辦公室報(bào)告。疫情報(bào)告包括疫情發(fā)生的時(shí)間、地點(diǎn)、發(fā)病品種、日齡、死亡數(shù)量、臨床
19、病癥、生產(chǎn)和免疫接種情況。 疫情通過(guò)專渠道上報(bào),縣級(jí)在接到報(bào)告并進(jìn)行初步診斷后,應(yīng)立即分別向同級(jí)人民政府和上級(jí)防治禽流感領(lǐng)導(dǎo)小組辦公室報(bào)告。在省級(jí)專家現(xiàn)場(chǎng)診斷及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)后,可判定為疑似病例。要求政府啟動(dòng)應(yīng)急預(yù)案,同時(shí)上報(bào)農(nóng)業(yè)部,采集病料送國(guó)家指定的參考實(shí)驗(yàn)室確診。及時(shí)報(bào)告,把疫情限制在最小范圍之內(nèi)。對(duì)于發(fā)生疫情的養(yǎng)殖者本身及其他養(yǎng)禽業(yè)者以及對(duì)于國(guó)家都是有利的。疫情公布國(guó)務(wù)院畜牧獸醫(yī)行政管理部門(mén)統(tǒng)一管理并公布全國(guó)動(dòng)物疫情。未經(jīng)許可,禁止其它任何單位和個(gè)人以任何形式對(duì)外發(fā)布疫情信息。 高致病性禽流感確實(shí)認(rèn)有以下情況之一的,可確認(rèn)為高致病性禽流感:1、有典型的臨床病癥和病理變化,發(fā)病急、死亡率高,
20、且能排除雞新城疫和中毒性疾病,血清學(xué)檢測(cè)陽(yáng)性。2、未經(jīng)免疫的家禽出現(xiàn)H5、H7亞型禽流感血清學(xué)陽(yáng)性。3、在禽群中別離到H5、H7亞型禽流感病毒株或其它亞型高致病力禽流感毒株。4、發(fā)生可疑疫情時(shí),由國(guó)家指定的2名或2名以上禽流感現(xiàn)場(chǎng)診斷專家到現(xiàn)場(chǎng)診斷確認(rèn)的。 疫情處理發(fā)現(xiàn)疑似高致病性禽流感疫情時(shí),畜主應(yīng)立即將病禽場(chǎng)隔離,并限制其移動(dòng)。當(dāng)?shù)貏?dòng)物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)接到疫情報(bào)告后,要在6小時(shí)內(nèi)趕赴現(xiàn)場(chǎng),進(jìn)行調(diào)查核實(shí),包括流行病學(xué)調(diào)查、臨床病癥檢查、病理解剖等作出初步診斷,并采取相應(yīng)措施;同時(shí)采集病料送有關(guān)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確診。必要時(shí)由國(guó)家指定省級(jí)現(xiàn)場(chǎng)診斷專家到現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行診斷確認(rèn)。 1、劃定疫點(diǎn)、疫區(qū)、受威脅區(qū)2 、封鎖3、撲殺4、無(wú)害化處理5、緊急免疫6、消毒 7、緊急監(jiān)測(cè)8、疫源分析與追蹤調(diào)查 9、封鎖令的解除 10、處理記錄 綜合防治 預(yù)防禽流感的發(fā)生,不應(yīng)該僅僅依賴于疫苗的免疫,平時(shí)還必須認(rèn)真實(shí)施、貫徹好綜合防治措施。加強(qiáng)飼養(yǎng)管理,提高環(huán)境控制水平 飼養(yǎng)、生產(chǎn)、經(jīng)營(yíng)場(chǎng)所必須符合動(dòng)物防疫條件,取得動(dòng)物防疫合格證。飼養(yǎng)場(chǎng)
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