新版文件培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗(yàn)證

1、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗(yàn)證方案目錄1、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗(yàn)證計(jì)劃2、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗(yàn)證小組3、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗(yàn)證方案4、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗(yàn)證培訓(xùn)5、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗(yàn)證附屬6、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗(yàn)證7、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗(yàn)證合格硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗(yàn)證計(jì)劃根據(jù)我公司認(rèn)證小組的要求及驗(yàn)證的安排，對硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法進(jìn)行驗(yàn)證，具體安排如下：一、年月日年月日，制定驗(yàn)證方案，由硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗(yàn)證小組組長負(fù)責(zé)起草。二、年

2、月日年月日，驗(yàn)證方案、修改、審批和培訓(xùn)。三、年月日年月日，驗(yàn)證工作實(shí)施。四、年月日年月日，根據(jù)驗(yàn)證情況與，書寫驗(yàn)證。五、年月日年月日，驗(yàn)證審核批準(zhǔn)，合格證。硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗(yàn)證小組組長： 成員：一、 目的通過驗(yàn)證驗(yàn)證所采用的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法，適合于我公司硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的，為質(zhì)量控制試驗(yàn)提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基。并培養(yǎng)基配制和滅菌的操作方法，為培養(yǎng)基配制和滅菌程序化。二、 適用范圍提供正確的操作方法，使培養(yǎng)基配制和滅菌標(biāo)準(zhǔn)化、本方案適用于本公司硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的配制和滅菌方法的驗(yàn)證。三、 內(nèi)容1. 概述培養(yǎng)基是微生物試驗(yàn)的基礎(chǔ)，直接影響微生物試驗(yàn)結(jié)果。適宜的培

3、養(yǎng)基貯藏條件和質(zhì)量控制試驗(yàn)是提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基的保證。方法、使用商品化脫水配制，如質(zhì)量/體積、培養(yǎng)基培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格按照培養(yǎng)基廠商提供的使用說明、條件、滅菌條件和操作步驟等。培養(yǎng)基若采用不適當(dāng)?shù)募訜岷蜏缇鷹l件，有可能引起顏色變化、降低、的改變。因此，培養(yǎng)基應(yīng)采用驗(yàn)證的滅菌程序滅菌，培養(yǎng)基滅菌方法和條件，應(yīng)通過適用性檢查試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。此外，對高壓滅菌器的蒸汽循環(huán)系統(tǒng)也要加以驗(yàn)證，以保證在一定的裝載方式下的正常熱分布。溫度緩慢上升的高壓滅菌器可能導(dǎo)致培養(yǎng)基的過熱，過度滅菌可能會(huì)破壞絕大多數(shù)的細(xì)菌和真菌培養(yǎng)基促生長的質(zhì)量。滅菌器中的培養(yǎng)基的容積和裝載方式也將影響加熱的速度。因此，應(yīng)根據(jù)滅菌培養(yǎng)基的特性，

4、進(jìn)行全面的滅菌程序驗(yàn)證。根據(jù)培養(yǎng)基的特性，按制定的方法進(jìn)行配制和滅菌，根據(jù)驗(yàn)證結(jié)果判斷是否符合驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)。若符合，按驗(yàn)證的方法和條件進(jìn)行培養(yǎng)基的配制和滅菌，若不符合，重新制定方案，再進(jìn)行驗(yàn)證，直至驗(yàn)證結(jié)果符合設(shè)立的驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)。2. 驗(yàn)證項(xiàng)目及認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證內(nèi)容驗(yàn)證項(xiàng)目驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)配制滅菌前的7.2-7.4滅菌滅菌溫度121滅菌時(shí)間15 分鐘滅菌效果（F0 值）12滅菌后值6.9-7.3滅菌后外觀性狀符合規(guī)定適用性檢查靈敏度檢查符合規(guī)定無菌性檢查符合規(guī)定連續(xù)驗(yàn)證 3 次配制的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基。驗(yàn)證依據(jù)3.1. SN/T1538.1-2005 培養(yǎng)基制定指南藥品生產(chǎn)驗(yàn)證指南（2003 版）（國家食品藥品

5、監(jiān)督管理局）藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理指南（2010 版）3.4. 中民藥典（2010 年版二部）3.5. 中國藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（2010 年版）驗(yàn)證方法與內(nèi)容實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備器具：電磁爐（最大功率 2000W）、大燒杯（2000ml）、不銹鋼鍋、玻璃棒、25250ml試管、硅膠塞、細(xì)繩、牛皮紙、分析天平、藥匙、量筒（100ml、1000ml）等。設(shè)備4.1.3. 培養(yǎng)基及試劑名稱生產(chǎn)廠家批號純化水硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基氫氧化鈉稀鹽酸名稱生產(chǎn)廠家型號校驗(yàn)情況生化培養(yǎng)箱電熱恒溫培養(yǎng)箱自動(dòng)臺(tái)式滅菌器電子天平數(shù)字酸度計(jì)生物安全柜超凈工作臺(tái)有效期驗(yàn)證保存三周外觀性狀符合規(guī)定靈敏度檢查符合規(guī)

6、定無菌性檢查符合規(guī)定4.1.4. 驗(yàn)證用菌株來源于省藥品檢驗(yàn)所驗(yàn)證內(nèi)容執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)a. 配制容器及配套器具的嚴(yán)格按照玻璃器皿操作規(guī)程執(zhí)行。b. 培養(yǎng)基的配制嚴(yán)格按照培養(yǎng)基管理規(guī)程執(zhí)行。c. 自動(dòng)臺(tái)式滅菌器嚴(yán)格按照TMQ.R-3870 型臺(tái)式滅菌器使用保養(yǎng)操作規(guī)程執(zhí)行.d. 取同一批硫乙醇酸鹽流體干粉培養(yǎng)基配制三批進(jìn)行以下驗(yàn)證。4.2.2. 配制滅菌過程a. 稱量取硫乙醇酸鹽流體干粉培養(yǎng)基 29.25 克,加純化水 1000ml,加熱煮沸使其完全溶解。每次按照此處方量配制 8547ml。b. 滅菌前的值測定取已配制好的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 100ml，放冷至 25調(diào)節(jié)值至 7.2-7.4 范圍內(nèi)。以

7、此比例來調(diào)節(jié)剩下的培養(yǎng)基的值。c. 分裝將已調(diào)節(jié)好值的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基分裝至 25250ml 試管中，分裝的管數(shù)為 190200 管范圍，用牛皮紙按 40 管/捆的方式包扎結(jié)實(shí)。其中一管只裝約20ml，以備滅菌后最終值測定。d. 滅菌器中的培養(yǎng)基的數(shù)量及裝載方式（滿載）將分裝好的 5 捆（40 管/捆）培養(yǎng)基試管置于滅菌器中，按下圖A、B、C、D、 5 點(diǎn)放置。EABC滅菌器柜門驗(yàn)證菌株菌株代數(shù)培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度培養(yǎng)時(shí)間（小時(shí)）大腸金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉菌嗜熱脂肪芽胞菌（F012）DE指示菌的放置：將指示劑嗜熱脂肪芽孢菌（菌濃度：1.69106cfu/支）5 支各放入5 捆

8、培養(yǎng)基中間的其中一支試管，同時(shí)將已菌培養(yǎng)基試管內(nèi)，開始滅菌。的 5 支校正好的留點(diǎn)溫度計(jì)6 支待滅將已裝載好的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基在 121條件下滅菌 15 分鐘。滅菌結(jié)束后記錄各留點(diǎn)溫度計(jì)點(diǎn)溫度。同時(shí)取出 5滅菌嗜熱脂肪芽孢菌，直接置 5660培養(yǎng) 2448 小時(shí)，另取一支滅菌的嗜熱脂肪芽孢菌指示劑一起培養(yǎng)，作為陽性對照。根據(jù)顏色判斷滅菌效果，培養(yǎng)后全部保持紫色滅菌合格。若由紫色變?yōu)辄S色為不合格。對照管應(yīng)由紫色變?yōu)辄S色為該指示劑有效。e. 滅菌后的值的測定取 20ml 管已滅菌的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，放冷至 25測定值，應(yīng)在 6.9-7.3 范圍內(nèi)。f. 外觀性狀滅菌后培養(yǎng)基應(yīng)對其外觀性狀仔

9、細(xì)檢查，如發(fā)現(xiàn)破裂、水分浸入、色澤異常、棉塞被培養(yǎng)基沾染等、均應(yīng)挑出棄去。中培養(yǎng)基發(fā)生顏色變化、渾濁；固體培養(yǎng)基表面產(chǎn)生裂縫或漣漪等異?，F(xiàn)象，不符合使用規(guī)定時(shí)，應(yīng)停止使用，重新進(jìn)行配制和滅菌程序驗(yàn)證。硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的適用性檢查無菌檢查用的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基等應(yīng)符合培養(yǎng)基的無菌性檢查及靈敏度檢查的要求。本檢查可在供試品的無菌檢查前或與供試品的無菌檢查同時(shí)進(jìn)行。無菌性檢查每批培養(yǎng)基隨機(jī)取 5 支（瓶），培養(yǎng) 14 天，應(yīng)無菌生長。靈敏度檢查菌液接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，接種生孢梭菌的的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，

10、3035培養(yǎng) 1824 小時(shí)；上述培養(yǎng)物用 0.9%無菌氯化鈉溶液制成每 1ml含菌數(shù)小于 100cfu（菌落形成） 的菌懸液。菌液內(nèi)使用。后若在室溫下放置，應(yīng)在 2 小時(shí)內(nèi)使用，若保存在 28，可在 24 小時(shí)培養(yǎng)基接種取每管裝量為 12ml 的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 9 支，分別接種小于100cfu 的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌各 2 支，另 1 支不接種作為空白對照，培養(yǎng)三天，逐日觀察結(jié)果。結(jié)果判斷空白對照管應(yīng)無菌生長，若加菌的培養(yǎng)基生長良好，判該培養(yǎng)基的靈敏度檢查符合規(guī)定。組織實(shí)施驗(yàn)證機(jī)構(gòu)的組成5.2. 公司驗(yàn)證，負(fù)責(zé)所有驗(yàn)證工作的和組織、審批驗(yàn)證方案和驗(yàn)證、發(fā)

11、放驗(yàn)證。5.3. 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗(yàn)證工作小組，負(fù)責(zé)該驗(yàn)證項(xiàng)目的驗(yàn)證方案起草、實(shí)施、組織與協(xié)調(diào)實(shí)施，負(fù)責(zé)驗(yàn)證樣品檢測，完成各項(xiàng)果進(jìn)行評定、完成驗(yàn)證。，根據(jù)檢驗(yàn)和驗(yàn)證結(jié)四、 附件及相關(guān)表格文件部門部門職責(zé)責(zé)任人工作劃分質(zhì)量部方案起草、實(shí)施、書寫操作實(shí)施質(zhì)量部取樣、檢驗(yàn)、出操作實(shí)施驗(yàn)證方案審定、批準(zhǔn)、實(shí)施、驗(yàn)證合格證方案審核方案批準(zhǔn)硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗(yàn)證文件編碼：項(xiàng)目姓 名簽 名日期起草審核審核批準(zhǔn)生效日期年份一、 驗(yàn)證概述培養(yǎng)基是微生物試驗(yàn)的基礎(chǔ)，直接影響微生物試驗(yàn)結(jié)果。適宜的培養(yǎng)基貯藏條件和質(zhì)量控制試驗(yàn)是提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基的保證。方法、中民和滅菌程序行一次。藥典2

12、010 年版二部規(guī)定：在中，若采用已驗(yàn)證的配置培養(yǎng)基且過程受控，那么同一批脫水培養(yǎng)基的適用性檢查試驗(yàn)可只進(jìn)本公司采用的培養(yǎng)基均是三藥科技開發(fā)公司生產(chǎn)的市售脫水培養(yǎng)基。為規(guī)范生測實(shí)驗(yàn)在配制培養(yǎng)基時(shí)標(biāo)準(zhǔn)化、程序化并符合中民藥典2010 年版二部規(guī)定，特對培養(yǎng)基的配制程序進(jìn)行驗(yàn)證。驗(yàn)證組織與實(shí)施驗(yàn)證小組成員及職責(zé)分工1.2. 本驗(yàn)證由質(zhì)量部負(fù)責(zé)并由相關(guān)根據(jù)硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基配制和滅菌方法驗(yàn)證方案所規(guī)定的方法與步驟實(shí)施。2. 實(shí)施時(shí)間為：年月日年月日。二、 各項(xiàng)目驗(yàn)證結(jié)論1. 滅菌前后值日期：年月日2. 外觀性狀日期年 月日年月日結(jié)果判定配制批號滅菌后保存三周后配制批號滅菌前值滅菌后值結(jié)果判定部門部

13、門職責(zé)責(zé)任人工作劃分質(zhì)量部方案起草、實(shí)施、書寫操作實(shí)施質(zhì)量部取樣、檢驗(yàn)、出操作實(shí)施驗(yàn)證方案審定、批準(zhǔn)、實(shí)施、驗(yàn)證合格證方案審核方案批準(zhǔn)3. 留點(diǎn)溫度計(jì)溫度日期：年月日4. 指示劑培養(yǎng)結(jié)果日期：年月日滅菌后培養(yǎng)基無菌性檢查配制批號：日期：年月日5.2. 配制批號：日期：年月日5.3. 配制批號：日期：年月日天數(shù)第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第8天第9天第10天第11天第12天第13天第14天結(jié)果判定天數(shù)第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第8天第9天第10天第11天第12天第13天第14天結(jié)果判定天數(shù)第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第8天第9天第10天第11天第12天

14、第13天第14天結(jié)果判定配制批號滅菌后指示劑顏色結(jié)果判定ABCDEABCDEABCDE陽性對照配制批號滅菌后溫度結(jié)果判定ABCDEABCDEABCDE6. 滅菌后培養(yǎng)基靈敏度檢查6.1. 菌液計(jì)數(shù)結(jié)果日期：年月日6.2. 培養(yǎng)基靈敏度檢查結(jié)果日期：年月日6.3. 培養(yǎng)基靈敏度檢查結(jié)果日期：年月日6.4. 培養(yǎng)基靈敏度檢查結(jié)果日期：年月日配制批號檢查項(xiàng)目第一天第二天第三天結(jié)果判定對照管金黃色葡萄球菌管配制批號檢查項(xiàng)目第一天第二天第三天結(jié)果判定對照管金黃色葡萄球菌管銅綠假單胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢桿菌管配制批號檢查項(xiàng)目第一天第二天第三天結(jié)果判定對照管金黃色葡萄球菌管銅綠假單胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢

15、桿菌管指示菌名稱菌液濃度（cfu/ml）標(biāo)準(zhǔn)濃度平板 1平板 2平均菌落數(shù)金黃色葡萄球菌 CMCC(B) 26 003100銅綠假單胞菌 CMCC(B) 10 104生孢梭菌 CMCC(B) 64 941枯草芽孢桿菌 CMCC(B) 63 501保存三周后培養(yǎng)基無菌性檢查培養(yǎng)基無菌性檢查結(jié)果配制批號：日期：年月日7.2. 培養(yǎng)基無菌性檢查結(jié)果配制批號：日期：年月日7.3. 培養(yǎng)基無菌性檢查結(jié)果配制批號：日期：年月日8. 保存三周后培養(yǎng)基靈敏度檢查8.1. 菌液計(jì)數(shù)結(jié)果日期：年月日指示菌名稱菌液濃度（cfu/ml）標(biāo)準(zhǔn)濃度平板 1平板 2平均菌落數(shù)天數(shù)第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第

16、8天第9天第10天第11天第12天第13天第14天結(jié)果判定天數(shù)第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第8天第9天第10天第11天第12天第13天第14天結(jié)果判定天數(shù)第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第8天第9天第10天第11天第12天第13天第14天結(jié)果判定銅綠假單胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢桿菌管8.2. 保存三周后培養(yǎng)基靈敏度檢查結(jié)果日期：年月日8.3. 保存三周后培養(yǎng)基靈敏度檢查結(jié)果日期：年月日8.4. 保存三周后培養(yǎng)基靈敏度檢查結(jié)果日期：年月日三、 建議、結(jié)果分析和驗(yàn)證總結(jié)1. 建議1.1. 加強(qiáng)生測室檢驗(yàn)的操作技能培訓(xùn)，使培養(yǎng)基配制和滅菌過程標(biāo)準(zhǔn)化，程序化。1.2. 當(dāng)硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基在日常無菌檢測時(shí)，應(yīng)對其外觀性狀進(jìn)行檢查，不符配制批號檢查項(xiàng)目第一天第二天第三天結(jié)果判定對照管金黃色葡萄球菌管銅綠假單胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢桿菌管配制批號檢查項(xiàng)目第一天第二天第三天結(jié)果判定對照管金黃色葡萄球菌管銅綠假單胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢桿菌管配制批號檢查項(xiàng)目第一天第二天第三天結(jié)果判定對照管金黃色葡萄球菌管銅綠假單胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢桿菌管金黃色葡萄球菌 CMCC(B) 26 003100銅綠假單胞菌 CMCC(B) 10 104生孢梭菌 CMCC