動物生化實驗實驗一、生化實驗基本知識10課件

1、西南大學(xué)榮昌校區(qū)動物生物化學(xué)實驗動物生物化學(xué)實驗室2011.2西南大學(xué)榮昌校區(qū)生物化學(xué)實驗室簡介生物化學(xué)是研究生命的化學(xué)。是研究組成生物體物質(zhì)的結(jié)構(gòu)及其功能、代謝及其中的能量代謝、信號物質(zhì)的信號傳導(dǎo)、生命遺傳物質(zhì)的遺傳及變異和表達(dá)調(diào)控、以及疾病發(fā)生和治療相關(guān)的生物化學(xué)問題等的科學(xué)。學(xué)科研究領(lǐng)域廣泛，研究的最大特點(diǎn)是學(xué)科的前沿性及極強(qiáng)的交叉性，并能為相關(guān)學(xué)科的研究提供必需的生物化學(xué)技術(shù)，是現(xiàn)代養(yǎng)殖技術(shù)不可或缺的支撐學(xué)科。生物化學(xué)教研室現(xiàn)有教師5名，其中副教授2名，講師一名，博士二人，碩士一人。承擔(dān)校區(qū)各專業(yè)的生物化學(xué)教學(xué)。同時開展科研工作，以動物生化和生化制藥為主要研究方向，旨在為現(xiàn)代養(yǎng)殖教育事

2、業(yè)的發(fā)展培育新人。實驗一、生物化學(xué)實驗基本操作第一部分生物化學(xué)實驗基本要求一、實驗?zāi)康?培養(yǎng)學(xué)生實事求是的科學(xué)作風(fēng)，獨(dú)立工作能力及思維方法。2學(xué)習(xí)基礎(chǔ)的生物化學(xué)實驗方法，為今后的學(xué)習(xí)與研究準(zhǔn)備更好的條件。3培養(yǎng)學(xué)生愛護(hù)國家財物、愛護(hù)集體、團(tuán)結(jié)互助的優(yōu)良道德品質(zhì)。4培養(yǎng)學(xué)生的書面及口頭表達(dá)能力。 二、實驗的總要求1按教研室予先公布的實驗進(jìn)度表，了解各次實驗的具體內(nèi)容，并認(rèn)真做好預(yù)習(xí)。弄清各 步驟的意義，避免教條或機(jī)械式做實驗。2進(jìn)行實驗不僅要求結(jié)果良好，而且要求敏捷高效。為達(dá)到此目的，實驗者應(yīng)注意：一切步驟都按操作進(jìn)行；樣品與試劑勿過量取用；宜粗者勿細(xì)（例如粗天平移物即足夠準(zhǔn)確時，不用分析天平，

3、用量筒取液足夠準(zhǔn)確時，不用吸量管）；試劑、儀器及實驗環(huán)境的整潔，防止污染及破損；注意力集中，避免差錯。3實驗中觀察要仔細(xì)，記錄要詳盡、及時與客觀，不得于實驗后追記，應(yīng)直接記在實驗報 告本中，而且無論實驗成功與失敗，都應(yīng)記下。對于失敗的實驗要分析其原因。4實驗室是集體學(xué)習(xí)與工作的場所，實驗時應(yīng)保持肅靜，不得大聲喧嘩，以免影響他人的工作與思考。對師長尊敬，對同學(xué)要團(tuán)結(jié)友愛。實驗后應(yīng)清洗用過的儀器及清理自己的實驗場所，教師準(zhǔn)許后才能離開實驗室。 三、實驗報告 實驗報告的書寫是培養(yǎng)學(xué)生書面表達(dá)能力和科學(xué)作風(fēng)的重要手段之一，實驗者應(yīng)該重視。實驗報告的內(nèi)容包括下列各項：1.實驗名稱、實驗日期、實驗?zāi)康?、?/p>

4、驗原理、實驗步驟，實驗記錄、計算（定量測定、解釋）、討論或小結(jié)。2.實驗記錄除應(yīng)包括“實驗總要求”的第3項要求外，還應(yīng)包括原始記錄。原始記錄是隨做隨記的第一手記錄，應(yīng)由指導(dǎo)教師簽字認(rèn)可。3.書寫實驗報告要字跡工整，語句通順。書寫工整的實驗報告，是尊師的重要表現(xiàn)之一。 四、組織與分組1每一實驗室推選學(xué)生課代表一名，負(fù)責(zé)下列工作：實驗報告的收集與分發(fā)；安排清掃值日名單；反映同學(xué)學(xué)習(xí)情況及對教學(xué)工作的意見；其它臨時性的工作。2一般實驗都為每個學(xué)生單獨(dú)進(jìn)行。有的實驗要兩人一組，由相鄰兩學(xué)生組成固定小組。五、儀器1每次實驗前，實驗者應(yīng)根據(jù)黑板上公布本實驗使用的儀器種類與數(shù)目，檢查。 分發(fā)在實驗桌上的各種

5、儀器，如有缺損應(yīng)于清洗前立即向準(zhǔn)備室負(fù)責(zé)老師補(bǔ)換。實驗中如有破損，則必須登記，按學(xué)院規(guī)定處理。實驗后應(yīng)將完整儀器洗滌清潔，點(diǎn)交管理人員。2公用儀器（包拈貴重儀器，如光電比色計、電動離心機(jī)等）使用時時間不宜過長，以免妨礙他人工作。設(shè)有使用登記薄的儀器，使用后必須登記，以示負(fù)責(zé)。對于不熟悉之儀器，切勿隨意亂動應(yīng)請教師指導(dǎo)之。 六、試劑1每2-3人合用一份試劑，在一般情況下，使用的試劑應(yīng)該固定。2取試劑瓶塞與量取用具（如吸管或滴管）不應(yīng)分開，用后應(yīng)立即放回原處，量取用具應(yīng)按規(guī)定放置。瓶塞與量具一旦弄錯，試劑即受損壞、污染，實驗就可能失敗。3標(biāo)準(zhǔn)試劑不應(yīng)用潮濕之吸管與之直接接觸，取出后不得再放入原瓶。

6、 七、玻璃儀器的洗滌1.一般玻璃儀器用肥皂或去污粉以毛刷洗滌即足以滿足要求洗 后應(yīng)將肥皂或去污粉仔細(xì)沖掉，將水傾去后，器壁不掛珠， 視為合格。2.鉻酸洗液僅用于毛刷不能洗凈的儀器，切勿濫用普通玻璃儀 器之洗滌。使用鉻酸洗液時，儀器應(yīng)干燥；過多的水份將洗 液迅速失效。用過之鉻酸洗液須加以保存以反復(fù)使用，直至 變?yōu)榫G色后方可舍棄；其舍棄法與濃硫酸液相同。用洗液浸 洗過的玻璃儀器，應(yīng)先用自來水沖洗，然后再用蒸餾水或去 離子水清洗，清洗時，宜采用“少量多次”原則以節(jié)約蒸餾 水，同時清洗的效率也高。八、舍棄物的處理 舍棄物必須依照其性質(zhì)作適當(dāng)之處理。以免造成實驗材料之浪費(fèi)，損壞水槽及下水管道，或污染實驗

7、環(huán)境。1所有固體舍棄物（例如用過的濾紙、損壞的軟木塞及橡皮物、玻璃渣、火柴梗等）。必須放入廢物筒或簍中，切勿丟水槽中。2廢硫酸或洗液，應(yīng)先傾入大量水中，再倒入水槽中，并以大量水沖走。3實驗完成后的沉淀或混合物，若含有可提取或收回的貴重物品者，不可隨意舍棄，應(yīng)放入教師指定的回收器中。 第二部分生物化學(xué)實驗基本操作和儀器使用一、生物化學(xué)實驗基本知識與操作1.液體體積的度量儀器及使用方法 生化實驗中玻璃器皿分為兩類，容器和量器。 液體體積的度量根據(jù)精度和需要有：量筒、容量瓶、吸管、及移液器。其中容量瓶、吸管、及移液器為準(zhǔn)確量器。 吸量管的使用 吸量管種類刻度吸管：管壁有多個刻度，刻度分為從上往下或從

8、下往上，用前分清， 尖端殘余是否吹出根據(jù)實際而定。移液管：管中部有一圓柱狀空泡，只有一個刻度準(zhǔn)確性比刻度吸管大。尖 端殘余液體不應(yīng)吹出。奧氏吸管：管下端有一卵形空泡，上端有一容量刻度，主要用于粘度較大 的血液、組織液的吸取，尖端殘余液體必須吹出。 吸管移液管奧氏吸管洗滌 使用前用少量洗液潤洗后，依次用自來水洗三次、蒸餾水洗三次洗凈的移液管和吸量管整個內(nèi)壁和下部的外壁不掛水珠。 移取溶液前再用少量移取液洗三次。洗移液管時，為避免溶液稀釋或沾污，可將溶液轉(zhuǎn)移至小燒杯中吸取。首先吸入少量溶液至移液管中，將移液管慢慢放平，并旋轉(zhuǎn)使移液管內(nèi)壁全部洗過。然后將管直立，將管中液體沿?zé)瓋?nèi)壁放出，然后再將小燒

9、杯的液體沿管的外壁下部倒出（棄去）。這樣一次即可將移液管內(nèi)壁、小燒杯內(nèi)壁和移液管下端的外壁同時洗一遍。如此操作三次后，將移液管直接插入容量瓶中或?qū)⑷芤旱谷胄形《伎梢粤恕?吸量管的使用方法吸取溶液： 用吸量管移取溶液時，右手拇指和中指拿住管頸標(biāo)線的上部(右圖)，將移液管垂直插入液面以下12cm深度， 左手拿洗耳球?qū)⑷芤何牍軆?nèi)至標(biāo)線以上，拿去洗耳球，隨即右手食指按住管口。將移液管離開液面，靠在器壁上，稍微放松食指，同時輕輕轉(zhuǎn)動移液管，使液面緩慢下降，當(dāng)液面與標(biāo)線相切時，立即按緊食指使溶液不再流出。左手右手 放出溶液： 把吸量管的尖嘴靠在接收容器內(nèi)壁上，讓接收容器傾斜而移液管直立。放開食指

10、使溶液自由流出，如圖所示。待溶液不再流出時，等15s后再取出移液管。最后尖嘴內(nèi)余下的少量溶液，不必用力吹入接收器中，因原來標(biāo)定移液管體積時，這點(diǎn)體積已不在其內(nèi)（如移液管上有一個吹字，則一定要將尖嘴內(nèi)余下的少量溶液吹入接收容器中）。這樣從管中流出的溶液正好是管上標(biāo)明的體積。容量瓶 配制準(zhǔn)確濃度的溶液時要用容量瓶。它是細(xì)頸的平底瓶，配有磨口玻璃塞或塑料塞，容量瓶上標(biāo)明使用的溫度和容積，瓶頸上有刻線。容量瓶使用方法如下：1檢查瓶塞是否嚴(yán)密 在容量瓶內(nèi)加水，塞上瓶塞，右手食指按住瓶蓋，其余手指拿瓶頸標(biāo)線以上部分，左手用指尖托住瓶底邊緣，將瓶倒置2min，如不漏水，將瓶直立，瓶蓋旋轉(zhuǎn)180后再次檢漏，如

11、不漏水才能使用。為避免塞子打破或遺失，應(yīng)用橡皮套把塞子系在瓶頸上。2洗滌 容量瓶的洗滌方法與移液管相似。使用前用少量洗液潤洗后，依次用自來水洗三次、蒸餾水洗三次。 3.配制溶液 用容量瓶配制溶液，如是固體物質(zhì)，先要在燒杯內(nèi)溶解，再轉(zhuǎn)移到容量瓶中，轉(zhuǎn)移溶液時用攪拌棒引流。用蒸餾水沖洗燒杯幾次，洗滌液轉(zhuǎn)入容量瓶中。然后慢慢往容量瓶中加入蒸餾水，當(dāng)液面接近刻線約1cm時，稍停后待附在瓶頸上的水流下后，用洗瓶或用燒杯溶樣時所用的攪拌棒蘸水（盡量不用滴管）滴加水到水的彎月面與標(biāo)線相切。蓋好瓶塞，將容量瓶倒置搖動，重復(fù)幾次，使溶液混合均勻。轉(zhuǎn)移溶液到容量瓶中 容量瓶的翻動 如固體是經(jīng)加熱溶解的，溶液冷卻后

12、才能轉(zhuǎn)入容量瓶內(nèi)。如果要把濃溶液稀釋，要用移液管吸取一定體積濃溶液放入容量瓶中，然后按上述操作加水稀至刻度線。 配好的溶液如需保存，應(yīng)轉(zhuǎn)移到清潔、干燥的磨口試劑瓶中。容量瓶用畢后應(yīng)立即用水沖洗干凈。如長期不用，磨口處應(yīng)洗凈擦干，并用紙片將磨口隔開。容量瓶不得在烘箱中烘烤，也不能用其它任何方法進(jìn)行加熱。量器的讀取方法 讀取量筒、移液管、滴定管等體積時，要使視線與管內(nèi)液面保持水平，讀取與彎月面相切的刻度，視線偏高和偏低都會造成誤差 2.溶液配制試劑的分類： 根據(jù)化學(xué)試劑的純度，可分為四級：一級試劑為優(yōu)質(zhì)純試劑，通常用GR表示；二級試劑為分析純試劑，通常用AR表示；三級試劑為化學(xué)純試劑，通常用CR表

13、示；四級試劑為實驗或工業(yè)試劑，通常用LR表示。 溶液濃度表示方法：重量濃度：每升溶液中所含溶質(zhì)的重量。（g/l、mg/l、ug/l）百分濃度：此表示法需注明 w/v、v/v、w/w、摩爾（mol/L）濃度：每升溶液中的摩爾數(shù)當(dāng)量濃度（N）：現(xiàn)在已不再使用。當(dāng)量濃度和摩爾濃度換算 1 mol/L = 1N X 離子價數(shù)百分濃度配制： 百分濃度的精度是1/10，所以配制百分濃度時，稱量溶質(zhì)只需用臺秤，溶劑體積用量筒量取。1.w/v百分濃度：100ml溶液中含有溶質(zhì)的克數(shù)。 例：怎樣配制10%Nacl溶液2.v/v百分濃度： 100ml溶液中含有溶質(zhì)的毫升數(shù)。 例：怎樣配5%醋酸溶液溶液的稀釋： 實

14、驗室常用高濃度的溶液稀釋成低濃度的溶液，或調(diào)整溶液的濃度，其計算方法是根據(jù)稀釋前后溶液的溶質(zhì)數(shù)不發(fā)生變化。1.稀釋 C1 X V1 = C2 X V2 例：怎樣將6mol/L的H2So4溶液稀釋成500ml的3mol/L的H2So4溶液 6 x V1 = 3 X 500 V1 =250 ml2.調(diào)整 C（V1 + V2）= C1 X V1 + C2 X V2例：現(xiàn)有2mol/L的NaoH溶液100 ml需加多少毫升4mol/L的NaoH才能調(diào)整為3mol/LNaoH溶液。 3 X （100 +V2 ） = 2 X 100 + 4 X V2 V2 = 100 ml 酸堿摩爾濃度配制： 實驗室常用

15、的酸、堿為液體，試劑瓶上標(biāo)有密度、濃度、分子量，其摩爾數(shù)計算 mol =濃度 x V x 密度 /分子量 例：怎樣配制1mol/LHCl溶液1000ml？ HCl摩爾數(shù)為：1 X 1 = 1mol 38% X 1.19 X V / 36.46 = 1 V = 80.63ml 固體其摩爾數(shù)計算 mol = W x 含量/分子量 例：怎樣配制1mol/L的NaOH溶液 W = 1 X 40 = 40g 二、常用生化儀器使用 離心機(jī) 離心技術(shù)（centrifugal technique）：根據(jù)顆粒作勻速圓周 運(yùn)動時受到一個外向的離心力的行為而發(fā)展起來 的一種分離技術(shù)。 離心技術(shù)應(yīng)用很廣，諸如分離出化

16、學(xué)反應(yīng)后的沉淀物，天然的生物大分子、無機(jī)物、有機(jī)物，在生物化學(xué)以及其它的生物學(xué)領(lǐng)域常用來收集細(xì)胞、細(xì)胞器及生物大分子物質(zhì)。離心機(jī)種類按用途： 有分析用、制備用及分析-制備分； 按結(jié)構(gòu)特點(diǎn)： 有管式、吊藍(lán)式、轉(zhuǎn)鼓式和碟式等； 按轉(zhuǎn)速： 有為常速（低速）、高速和超速三種。實驗室用普通低速離心機(jī)實驗室普通離心機(jī)使用方法1.將離心機(jī)放在堅實而平整的工作臺上；2.在適用的離心管中加入樣品，必須對稱配重，否則會損壞離心機(jī)；3.按離心機(jī)轉(zhuǎn)頭的離心管位置刻度所對應(yīng)孔插入，放下離心機(jī)頂蓋；4.檢查確認(rèn)調(diào)速鈕處于最低速位置；5.打開電源開關(guān)，調(diào)速到需要的轉(zhuǎn)速；6.選擇工作時間，調(diào)“選時”鈕到需要的位置。7.離心完

17、成，離心機(jī)自然停止。722分光光度計分光光度計的組成分光光度計種類很多，一般包括光源、單色器、吸收池、檢測器和指示器五大部件組成。 1.數(shù)字顯示器 2.吸光度調(diào)零旋鈕 3.選擇開關(guān) 4.吸光度調(diào)斜率電位器 5.組成量度旋鈕 6.光源室 7.電源開關(guān) 8.波長手輪 9.波長刻度窗 10.試樣拉手架 11.100%T旋鈕 12.0%T旋鈕 13.靈敏度調(diào)節(jié)旋鈕 14.干燥器1.光源： 是一種可以發(fā)射出供溶液或吸收物質(zhì)選擇性吸收的光。光源光強(qiáng)度應(yīng)大，有良好的穩(wěn)定性，在整個光譜區(qū)域內(nèi)光的強(qiáng)度不應(yīng)隨波長有明顯的變化。2.單色器： 將來自光源的光按波長的長短順序分散為單色光并能隨意改變波長的一種分光部件，

18、包括入口狹縫、色散元件、出口狹縫和準(zhǔn)直鏡四部分組成。 3. 吸收池： 又稱為比色皿或比色杯等。常用吸收池是用無色透明、耐腐蝕的玻璃或石英材料制成，前者用于可見光區(qū)，后者用于紫外光區(qū)，吸收池光程0.110cm不等，其中以1cm為最多。 4.檢測器： 檢測器的作用是檢測通過溶液后的光強(qiáng)度、并把光信號轉(zhuǎn)變成電信號。常見的檢測器有硒光電池、光電管和光電倍增管，后二者主要用于分光光度計。5.指示器： 常用儀器指示器有光點(diǎn)檢流計、微安表、記錄器和數(shù)字顯示器等。光點(diǎn)檢流計和微安表指示器的標(biāo)尺上刻有百分透光度（T%）和吸光度A。722型分光光度計使用方法1調(diào)整 A.在接通電源前，應(yīng)對儀器的安全性進(jìn)行檢查，電源

19、線接線應(yīng)牢固，接地線通地要良好，各個調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確，然后再接通電源。B.將靈敏度旋鈕調(diào)至“1”檔（放大倍率最?。?。調(diào)波長調(diào)節(jié)器至所需波長。C.開啟電源開關(guān)，指示燈亮，選擇開關(guān)置于“T”，調(diào)節(jié)透光率100%T旋鈕使數(shù)字顯示100.0左右，預(yù)熱20min .根據(jù)溶液濃度大小，選擇液層厚度合適的吸收池。2校正 A.打開吸收池暗室蓋（光門自動關(guān)閉），調(diào)節(jié)0% T旋鈕，使數(shù)字顯示為“00.0”，蓋上吸收池蓋，將參比溶液置于光路，使光電管受光，調(diào)節(jié)透光率100%T旋鈕，使數(shù)字顯示為“100.0”。B.如果顯示不到“100”，則可適當(dāng)增加電流放大器靈敏度檔數(shù)，但應(yīng)盡可能使用低檔數(shù)，這樣儀器將有更

20、高的穩(wěn)定性。當(dāng)改變靈敏度 后必須重新校正“0”和“100”。C.按A連續(xù)幾次調(diào)整“00.0”和“100.0”后，如將選擇開關(guān)置于“A”，調(diào)節(jié)吸光度調(diào)零旋鈕，使數(shù)字顯示為“.000”，即可進(jìn)行下面吸光度A的測量；如將選擇開關(guān)置于“C”，將標(biāo)準(zhǔn)溶液推入光路，調(diào)節(jié)濃度旋鈕，使得數(shù)字顯示值為已知標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度數(shù)值，即可進(jìn)行下面濃度c的測量。3.測定 A. 吸光度的測量。將要測的試樣溶液推入光路，顯示值即為待測樣品的吸光度值。B. 濃度c的測量。將要測c試樣溶液推入光路，即可讀出待測樣品的濃度值c。4結(jié)束 測量完畢，關(guān)閉電源，將各調(diào)節(jié)旋鈕恢復(fù)至初始位置。取出吸收池洗凈，晾干，存于專用盒內(nèi)。5.注意事項：A

21、. 使用前，使用者應(yīng)該首先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和原理，以及各個旋鈕之功能。B.儀器接地要良好，否則顯示數(shù)字不穩(wěn)定。C.如果大幅度改變測試波長時，在調(diào)整“00.0”和“100”后稍等片刻（因光能量變化急劇，光電管受光后響應(yīng)緩慢，需一段光響應(yīng)平衡時間），當(dāng)穩(wěn)定后，重新調(diào)整“00.0”和“100”即可工作。D 儀器左側(cè)下角有一只干燥劑筒，應(yīng)保持其干燥，發(fā)現(xiàn)干燥劑變色應(yīng)立即更新或烘干后再用。E.當(dāng)儀器停止工作時，關(guān)掉電源，電源開關(guān)需同時切斷，并罩好儀器pHS智能酸度計儀器外型結(jié)構(gòu) l 機(jī)箱 2 顯示屏 3 鍵 4 電極梗座 5 電極梗 6 電極夾 7 電極儀器后面板 8 測量電極插座 9溫度電極插座 10

22、電源開關(guān) 11保險絲座 12電源插座操作步驟1.開機(jī)前的準(zhǔn)備A.將電極梗旋入電極梗固定座中；B.將電極夾插入電極梗中；C.將pH復(fù)合電極安裝在電極夾上；D.將pH復(fù)合電極下端的電極保護(hù)套套拔下，并且拉下電極上端 的橡皮套使其露出上端小孔；E. 用蒸餾水清洗電極。2.儀器的標(biāo)定 儀器下使用前首先要標(biāo)定。一般情況下儀器在連續(xù)使用時, 每天要標(biāo)定一次。 a) 將測量電極插座處拔掉Q9短路插頭； b) 在測量電極插座處插入復(fù)合電極； c) 打開電源開關(guān)，儀器進(jìn)入pH測量狀態(tài)；按“溫度”鍵，使儀器進(jìn)入溶液溫度調(diào)節(jié)狀態(tài)（此時溫度單位指示），按“”鍵或“”鍵調(diào)節(jié)溫度顯示數(shù)值上升或下降，使溫度顯示值和溶液溫度一致，然后按“確認(rèn)”鍵，儀器確認(rèn)溶液溫度值后回到pH測量狀態(tài)(溫度設(shè)置鍵在mV測量狀態(tài)下不起作用)； 注：當(dāng)接入溫度電極時“溫度”鍵不起作用，儀器自動進(jìn)入自動溫度補(bǔ)償，顯示的溫度即為溶液溫度（溫度電極須另配）。 e) 按“標(biāo)定”鍵，此時顯示 “標(biāo)定1”“4.00”及“mV”， 把用蒸餾水或去離子水清洗過的