反向遺傳學(xué)及其相關(guān)技術(shù)76頁P(yáng)PT課件

1、反向遺傳學(xué)及其相關(guān)技術(shù)幽默來自智慧，惡語來自無能第四章反向遺傳學(xué)及其相關(guān)技術(shù)概述(一)遺傳研究的二條途徑1、表里:正向遺傳學(xué)研究雜交或誘變表型觀察遺傳規(guī)律確定存在的基因及數(shù)目基因的功能及作用性質(zhì)。這一途徑是從生物體的性狀、表型變化來研究遺傳物質(zhì)的組成、分布與傳遞規(guī)律,屬于正向遺傳學(xué)采用的研究方法里表:反向遺傳學(xué)研究在已知DNA序列的基礎(chǔ)上,通過DNA重組、定點(diǎn)突變、插入/缺失等遺傳修飾手段創(chuàng)造突變體并研究突變所造成的表型效應(yīng),從而研究基因的生物學(xué)功能,闡明生命的本質(zhì)現(xiàn)象與規(guī)律與反向遺傳學(xué)相關(guān)的遺傳操作技術(shù)為反向遺傳學(xué)技術(shù)。二)RNA病毒的反向遺傳學(xué)采用病毒的遺傳材料,在培養(yǎng)細(xì)胞或易感宿主中重新

2、拯救出活病毒或類似病毒物質(zhì)能夠拯救病毒的遺傳材料稱為感染性克隆,一般是在細(xì)菌質(zhì)粒中含有整個(gè)病毒基因組的cDNA拷貝,使得cDNA本身或從cDNA體外轉(zhuǎn)錄所得的RNA具有感染性。RNA病毒的反向遺傳系統(tǒng)通過定向修飾病毒的基因組序列,檢測被拯救的人工改造病毒的表型,可以在體內(nèi)( In vivo)有效地研究病毒基因結(jié)構(gòu)、功能和病毒-宿主相互作用。RNA病毒的反向遺傳操作RT-PCR構(gòu)建RNA病毒的全長cDNA,并進(jìn)行遺傳修飾與RNA聚合酶啟動子結(jié)合體外轉(zhuǎn)錄病毒RNA轉(zhuǎn)錄物RNA感染哺乳動物細(xì)胞拯救到活病毒拯救病毒的表型變化病毒基因組的表達(dá)、調(diào)控、致病機(jī)理病毒與宿主細(xì)胞互作、疫苗制造等單正股RNA病毒

3、:正股RNA與負(fù)股RNA病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒RNA菜合酶,|+結(jié)構(gòu)蛋白+|子代正股RNAmRNA中間型+單負(fù)股RNA病毒:RNA聚合酶二結(jié)構(gòu)蛋白+|子代負(fù)股RNA逆轉(zhuǎn)錄病毒逆轉(zhuǎn)錄酶宿主RNA/DNA DNA/DNARNA中間體子代RNA(三)真核生物的反向遺傳學(xué)采用反向遺傳學(xué)鑒定基因功能是真核生物功能基因組學(xué)的主要內(nèi)容。研究手段包括基因的互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)、超表達(dá)、反義抑制、基因敲除/基因打靶、基因陷阱、基因激活等手段。利用基因敲除或基因沉默而產(chǎn)生的功能變化研究基因功能是主要的反向遺傳學(xué)技術(shù)反向遺傳學(xué)相關(guān)技術(shù)1、基因的同源重組2、基因的位點(diǎn)突交廣基因敲除3、基因沉默1、基因的同源重組利用DNA轉(zhuǎn)化技術(shù),將含有目的基因和靶基因同源片段的重組載體導(dǎo)入靶細(xì)胞,通過載體與靶細(xì)胞染色體上同源序列間的重組,將外源基因整合入內(nèi)源基因組內(nèi),使外源基因得以表達(dá)。通過研究靶細(xì)胞或者個(gè)體在目的基因插入前后遺傳特性的改變,達(dá)到研究基因功能的目的。基因敲除完全敲除條件敲除特定組織/時(shí)間基因敲除完全敲除:通過同源重組直接將靶基因在細(xì)胞或者動物個(gè)體中的活性完全消除。條件敲除:將某個(gè)基因的修飾限制于特定類型的細(xì)胞或個(gè)體發(fā)育特定的階段36、自己的鞋子，自己知道緊在哪里。西班牙37、我們唯一不會改正的缺點(diǎn)是軟弱。拉羅什?？?8、我這個(gè)人走得很慢，但是我從不后退。亞伯拉