實驗四、細(xì)菌的生理生化及腸桿菌科的鑒別2

1、實驗四細(xì)菌的生理生化試驗及腸桿菌科的鑒別、理化因素及生物因素對微生物的影響1一、目的要求掌握細(xì)菌鑒定中常用生理生化反應(yīng)的原理、方法、結(jié)果判定以及在診斷中的運(yùn)用 熟悉大腸桿菌和沙門菌主要培養(yǎng)特性和常 規(guī)微生物學(xué)診斷方法通過本實驗加深理化因素及生物因素對微生物的影響的概念2二、實驗材料 菌種：大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、枯草桿菌、巴氏桿菌 培養(yǎng)基：葡萄糖高層瓊脂、普通瓊脂斜面、水瓊脂斜面、氧化-發(fā)酵培養(yǎng)基（小生化管）、普通平板、麥康凱平板、淀粉平板、三糖鐵斜面、各類生化反應(yīng)管等 器械：砂輪、試管架、接種環(huán)、接種針、滅菌吸管、滅菌刻度移液管、滅菌棉簽、膠頭、滅菌液體石蠟、酒精燈、廢報紙等3三

2、、實驗內(nèi)容1、細(xì)菌對空氣（氧氣）的需要菌種：大腸桿菌、枯草桿菌方法：用吸管將兩種菌各加入兩支己溶化的葡萄糖深層瓊脂管中，培養(yǎng)基：葡萄糖深層瓊脂（己溶化）2、細(xì)菌對營養(yǎng)的要求菌種：大腸桿菌、巴氏桿菌培養(yǎng)基：斜面（水瓊脂、普通瓊脂）方法：劃線的方法（一）細(xì)菌的生理生化試驗43、細(xì)菌氧化型與發(fā)酵型（O/F）的測定菌種：大腸桿菌、枯草桿菌培養(yǎng)基：加有葡萄糖和指示劑（1%溴麝香草酚藍(lán)）的微型發(fā)酵管方法：用接種針將兩種菌各加入兩支發(fā)酵管中，從不同菌里各取一管加入滅菌的液體石蠟，37 正置培養(yǎng)。產(chǎn)酸（淺綠色 黃色 ）54、淀粉水解試驗菌種：大腸桿菌、枯草桿菌培養(yǎng)基：普通營養(yǎng)瓊脂平板方法：一塊平板上，一邊劃大

3、腸桿菌，一邊劃枯草桿菌，第二天長出菌后，在菌落上滴加碘液。5、觸酶（過氧化氫酶）試驗菌種：大腸桿菌、枯草桿菌培養(yǎng)基：普通營養(yǎng)瓊脂平板方法：一塊平板上，一邊劃大腸桿菌，一邊劃枯草桿菌，第二天長出菌后，在菌落上滴加H2O26（二）腸桿菌科的鑒別（大腸桿菌&沙門菌）78腸桿菌科的生化試驗1、麥康凱瓊脂平板（乳糖、膽鹽、指示劑：1%中性紅）方法：劃線，分解乳糖 菌落變紅2、三糖鐵瓊脂斜面（葡萄糖、蔗糖、乳糖、硫酸亞鐵銨、指示劑：0.5%酚紅）方法：先劃斜面再穿刺93、糖分解試驗微量發(fā)酵管：葡萄糖、乳糖、甘露醇、蔗糖方法：用接種針挑取菌種后接入發(fā)酵管內(nèi)，用報紙包好口，置培養(yǎng)箱培養(yǎng)。發(fā)酵糖產(chǎn)酸：指示劑溴甲

4、酚藍(lán)由紫色 黃色4、吲哚（靛基質(zhì)）試驗培養(yǎng)基：蛋白胨水微量管原理：細(xì)菌分解蛋白質(zhì)中的色氨酸產(chǎn)生吲哚，吲哚與對位二甲基氨基苯甲醛作用形成玫瑰吲哚而成紅色。方法：接種針接種，培養(yǎng)12-24 h后，加入試劑顯色105、甲基紅（MR）試驗培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水原理：甲基紅試驗： 分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，進(jìn)一步分解為甲酸、乙酸、乳酸等使pH下降，含甲基紅指示劑的培養(yǎng)基變紅 6、VP試驗：葡萄糖蛋白胨水原理：某些菌發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸經(jīng)多脫羧、氧化等反應(yīng)生成二乙酰，其與蛋白胨中精氨酸胍基作用產(chǎn)生粉紅色化合物117、枸櫞酸鹽（檸檬酸鹽）利用試驗培養(yǎng)基：Simmon氏枸櫞酸鈉微量發(fā)酵管原理：細(xì)菌若能以枸

5、櫞酸鈉為唯一碳源，磷酸銨為唯一氮源，則可利用枸櫞酸鈉產(chǎn)生碳酸鹽，與利用銨鹽產(chǎn)生的NH3反應(yīng)，形成NH4OH，使培養(yǎng)基變堿，pH升高，指示劑溴麝香草芬藍(lán)由草綠色變?yōu)樯钏{(lán)色。8、脲酶培養(yǎng)基：尿素微量發(fā)酵管（指示劑：酚紅）原理：細(xì)菌分解尿素產(chǎn)生2分子NH4，使pH升高，指示劑變紅。129、硫化氫試驗培養(yǎng)基：營養(yǎng)瓊脂中含F(xiàn)eSO4的微量反應(yīng)管原理：凡細(xì)菌能分解含硫氨基酸，產(chǎn)生H2S者，其所產(chǎn)生的H2S會使培養(yǎng)基中的醋酸鉛或FeCl3形成黑色的硫化鉛或硫化鐵。10、運(yùn)動力試驗培養(yǎng)基：半固體瓊脂微量反應(yīng)管方法：穿刺接種13（三）理化因素及生物因素對微生物的影響1.紫外線與殺菌試驗菌種： 大腸桿菌、枯草桿菌方法：取營養(yǎng)瓊脂平板2個，一個涂大腸桿菌，另一個涂枯草桿菌。在其涂有細(xì)菌的表面貼上以剪出不同圖案的硬紙片，然后在紫外燈下距離30厘米照射20分鐘，照射完畢將硬紙片取走蓋回原來平皿蓋，于37培養(yǎng)24小時觀察結(jié)果。142.藥敏試驗：圓紙片擴(kuò)散法菌種： 大腸桿菌、金黃色葡萄球菌培養(yǎng)基：營養(yǎng)瓊脂平板方法：153.消毒劑抑菌和殺菌試驗菌種：大腸桿菌、枯草桿菌方法：與藥敏試驗方法是一樣的（紙片擴(kuò)散法）16將以上接好細(xì)菌的培養(yǎng)基置37培養(yǎng)箱培養(yǎng)。經(jīng)1824h培養(yǎng)觀察細(xì)菌生長情況。有一些生化管則需要加試劑后觀察其顏色變化，做好實驗結(jié)果記錄并記錄抑菌圈大小。17腸桿菌科細(xì)菌的鑒別三糖鐵瓊脂斜面斜