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文檔簡介

1、家畜組織胚胎學第一章 緒論第一節(jié) 家畜組織胚胎學的研討內(nèi)容和意義組織胚胎學包括組織學和胚胎學兩部分。組織學histology是研討動物體微細構(gòu)造及功能的科學。動物體是由各種器官系統(tǒng)構(gòu)成的,每個器官都包括幾種不同的組織,而每一種組織又是由細胞和細胞間質(zhì)構(gòu)成的。因此,組織學的研討內(nèi)容包括細胞、根本組織和器官組織三個部分。胚胎學embryology是研討動物個體胚胎發(fā)育的科學。胚胎學的研討內(nèi)容包括配子發(fā)生、受精、卵裂、原腸胚和神經(jīng)胚構(gòu)成、胎膜和胎盤以及器官發(fā)生等。組織胚胎學屬于動物科學和醫(yī)學專業(yè)的專業(yè)根底課。只需掌握了動物的正常形狀構(gòu)造和胚胎發(fā)育規(guī)律,才干進一步了解動物的生理活動規(guī)律,并利用這些規(guī)律

2、去合理地豢養(yǎng)、繁衍和改良動物以及防治各種疾病。因此,學好組織學與胚胎學是學好生理學、繁衍學、豢養(yǎng)學、動物消費學、病理學、免疫學和臨床醫(yī)學等課程所必不可少的根底。第二節(jié) 組織胚胎學研討方法及根本原理一切的組織胚胎學研討方法均需將有機體的器官和組織經(jīng)過特殊處置,再運用各種顯微鏡進展察看研討后得出科學的結(jié)果。1.組織學制片技術(shù)普通是先把組織制成薄片,最常用的是石蠟切片,其制備方法是:取材與固定:把新穎組織放到甲醛溶液等固定液中,使蛋白質(zhì)等成分迅速凝固,盡能夠堅持其活體時的構(gòu)造形狀。脫水與透明:為使石蠟浸入組織內(nèi),把固定好的資料用乙醇逐級70%-100%脫水。用二甲苯或乙醚等石蠟溶劑使組織浸透,便于浸

3、蠟。一、固定組織研討法浸蠟與包埋:把組織放入融化58-60的石蠟中,進展浸透和包埋成蠟塊,目的是使石蠟進入細胞間隙和細胞內(nèi),以添加組織的硬度,便于切片。切片與貼片:將蠟塊用切片機切成5-10m厚的組織切片,并鋪展粘到載玻片上。染色與封固:把粘好的切片脫蠟后,用適當?shù)娜玖线M展染色。染色后,再經(jīng)脫水和透明,最后把組織用樹膠和蓋片封片。除了石蠟切片外,血液可以制成血涂片,疏松結(jié)締組織和腸系膜等薄層組織可制成鋪片,骨組織可制成磨片,然后固定和染色。 最常用的染色方法是蘇木精hematoxylin和伊紅eosin染色的染色方法,簡稱H.E.染色。 蘇木精是堿性染液,可以使細胞核內(nèi)的染色質(zhì)和細胞質(zhì)中的核糖

4、體等成分染成藍紫色,故這些成分被說成是嗜堿性著色的。伊紅是酸性染料,可使多數(shù)細胞的細胞質(zhì)染成粉紅色,這些細胞質(zhì)被稱為嗜酸性的。對堿性和酸性染料親和力都不強的構(gòu)造,稱為嗜中性的。染色方法染色方法HE染色蘇木精伊 紅嗜堿性構(gòu)造:細胞核粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)游離核糖體等嗜酸性構(gòu)造:細胞質(zhì)基質(zhì)溶酶體、線粒體等細胞器膠原纖維等染色方法HE染色法以外的一切染色法,通常是為了顯示某些用HE染色法顯示不出的細胞和構(gòu)造。如:蘇丹法顯示脂肪鍍銀法顯示神經(jīng)細胞、嗜銀顆粒鐵蘇木素法顯示心肌閏盤馬氏三色法顯示胰島細胞甲苯胺藍法顯示糖胺多糖 特殊染色鍍銀染色,顯示大腦皮質(zhì)神經(jīng)元氯化金染色,顯示運動終板Hemalum染色,顯示心肌纖維

5、及閏盤2、組織化學技術(shù)組織化學 ( histochemistry ) : 經(jīng)過化學或物理反響原理顯示組織或細胞內(nèi)化學成分,通常是使其構(gòu)成有色終末產(chǎn)物,以便在鏡下察看,可進展定位和定量。1普通組織化學術(shù) 是利用化學試劑與組織內(nèi)的某些物質(zhì)進展化學反響,在部分構(gòu)成可以在顯微鏡下察看到的沉淀物。例如,過碘酸雪夫氏反響periodic acid chiffs reaction, PAS反響的根本原理是經(jīng)過過碘酸的氧化作用,使多糖生成醛基,后者與雪夫氏試劑中的無色堿性品紅反響,在反響部位構(gòu)成紫紅色沉淀,從而證明細胞內(nèi)含有糖原或粘多糖成分。 HIO4 Shiff試劑多糖 醛 紫紅色沉淀物 氧化 堿性品紅組織

6、化學術(shù)PAS反響,顯示小腸上皮杯狀細胞的粘原顆粒組織化學術(shù) 免疫組織化學術(shù)immunocytochemistry) 利用組織化學技術(shù)的原理,再結(jié)合免疫學方法,那么為免疫細胞化學術(shù)。主要的檢測對象為肽和蛋白質(zhì)。組織化學術(shù)免疫組織化學,顯示胰島B細胞組織化學術(shù) 原位雜交術(shù)in situ hybridization) 為核酸DNA和RNA組織化學術(shù)。 用帶有標志物的知堿基順序的核酸探針,與細胞內(nèi)待測的核酸結(jié)合雜交,從而在原位顯示該核酸。原位雜交,顯示臍靜脈內(nèi)皮細胞的心房鈉尿肽陽性組織化學術(shù)活體組織研討法二、其它研討方法自學細胞培育術(shù)細胞交融組織工程術(shù)細胞電泳新的研討方法 放射自顯影術(shù) 圖像分析術(shù) 流

7、式細胞術(shù)光學顯微鏡light microscope LM電子顯微鏡 electron microscope EM三、顯微鏡一光學顯微鏡光鏡普通光學顯微鏡light microscope的分辨率為0.2m,可放大1000倍左右,能察看組織和細胞的普通構(gòu)造。分辨率是指可以分辨兩顆粒之間的最小間隔。顯微鏡下常用的長度單位在光鏡下所見的組織和細胞的構(gòu)造叫做普通微細構(gòu)造,而在電鏡下所見的構(gòu)造那么稱之為超微構(gòu)造。在光鏡和電鏡下進展察看時,常用的計量單位有:1m微米,micrometer= 1/1000mm毫米,millimeter1nm納米,nanometer= 1/1000m1pm皮米 1/1000nm

8、光鏡光學顯微鏡的分類1、生物顯微鏡2、熒光顯微鏡3、相差顯微鏡4、暗視野顯微鏡5、偏光顯微鏡6、激光共聚焦顯微鏡光鏡光鏡光鏡大鼠附睪上皮細胞微絲肌動蛋白及細胞核光鏡二 電子顯微鏡技術(shù)常用的電鏡有透射電鏡和掃描電鏡兩種。與光鏡比較,電鏡的根本原理是以電子束替代光線,以電磁透鏡替代光學透鏡。電鏡透射電鏡TEM的分辨率已到達0.2nm左右,可放大幾萬到幾十萬倍。其任務原理是,電子束透過樣品后,投射到熒光屏上,構(gòu)成物像。由于電子易散射和被物體吸收,所以必需制備超薄切片90-100nm。電鏡樣品的制備過程:取小資料塊1mm3以內(nèi)用戊二醛和鋨酸雙重固定環(huán)氧樹脂包埋超薄切片機切片鉛鈾重金屬電子染色電鏡察看。被金屬鹽所染的部位,因透過的電子束少而在熒光屏上顯得暗,稱為電子密度高,反之那么稱為電子密度低。透 射 電 鏡電鏡電鏡掃描電鏡SEM是用極細的電子束在樣品外表進展掃描并用特定的探測器搜集所發(fā)生的二次電子,構(gòu)成電信號傳送到顯像管,在熒光屏上顯現(xiàn)出物體外表的立體圖象。掃描電鏡的樣品制備方法:將較大的組織塊用戊二醛和鋨酸雙重固定,經(jīng)脫水和枯燥后,再于樣品外表上噴涂一薄層金,以添加二次電子數(shù)。電鏡電鏡電鏡電鏡技術(shù)細胞側(cè)面的嚴密銜接電鏡技術(shù) 脾紅髓第三節(jié) 家畜組織胚胎學的研討方法學習組胚的思想方式1.實際聯(lián)絡實踐2.形狀聯(lián)絡

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