大孔樹脂純化茶皂素的動(dòng)力學(xué)、熱力學(xué)過程特性(共32頁)

1、 畢業(yè)論文(b y ln wn)（設(shè)計(jì)） 題 目 大孔樹脂純化(chn hu)茶皂素的動(dòng)力學(xué)、熱力學(xué)過程特性 學(xué)生(xu sheng)姓名 張東 學(xué)號(hào) 0912024013 所在院(系） 生物科學(xué)與工程學(xué)院 專業(yè)班級(jí) 生工091 指導(dǎo)教師 馮自立 完成地點(diǎn) 生物科學(xué)與工程學(xué)院實(shí)驗(yàn)室 2013年6月6日陜西理工學(xué)院畢業(yè)設(shè)計(jì)大孔樹脂純化茶皂素的動(dòng)力學(xué)、熱力學(xué)過程(guchng)特性張東（陜理工學(xué)院生物科學(xué)與工程學(xué)院生物工程(shn w n chn)091班，陜西 漢中 723000）指導(dǎo)(zhdo)教師：馮自立 摘 要實(shí)驗(yàn)考察了茶皂素在AB-8及D-101C大孔樹脂上的吸附特征，確定了等溫吸附模型

2、、熱力學(xué)參數(shù)和吸附動(dòng)力學(xué)模型。結(jié)論：可用Langmuir方程較好地?cái)M合等溫吸附熱力學(xué)過程，吸附是一個(gè)自發(fā)、放熱、快速的物理吸附過程，可用擬二級(jí)動(dòng)力學(xué)方程較好地描述吸附動(dòng)力學(xué)過程，在180min左右達(dá)到吸附平衡。AB-8及D-101大孔樹脂廉價(jià)并且適合茶皂素的吸附生產(chǎn)。本文為AB-8及D-101大孔樹脂純化茶皂素的擴(kuò)大應(yīng)用提供數(shù)據(jù)參考。 關(guān)鍵詞茶皂素；AB-8大孔樹脂；D-101C大孔樹脂；吸附熱力學(xué)；吸附動(dòng)力學(xué)Study on the Adsorption Thermodynamics and Kinetics of Water Soluble Saponins from the tea se

3、edZhang Dong（(Grade09,Class2,Major Biological Engineering,School of Biological Sciences & Engineering,Shaanxi University of Technology,Hanzhong 723000,Shaanxi)Tutor：Feng ZIliAbstract: To study on adsorption isotherm curves and adsorption kinetic curves of water soluble saponins from the tea seed on

4、D-101 and AB-8 resin, and then the adsorption thermodynamics and kineticsparameters were determined. The results showed that the adsorption isotherm curves could bedescribed well by Langmuir isotherm model, and the adsorption was considered a spontaneous physical adsorption process with heat releasi

5、ng and fast. The adsorption kinetics behavior is well described by the pseudo second order equation, the adsorption reached equilibrium after 180min. The D-101 and AB-8 resin is cheaply and are appropriate adsorption for water soluble saponins from the tea seed Key words : Tea seed; Tea Saponins; AB

6、-8 Resin；D-101 Resin; Adsorption Thermodynamics；Adsorption Kinetics. 目錄(ml)TOC o 1-3 h u HYPERLINK l _Toc27787 1 引言(ynyn) PAGEREF _Toc27787 1 HYPERLINK l _Toc32077 1.1茶皂素(zo s)的性質(zhì) PAGEREF _Toc32077 1 HYPERLINK l _Toc15680 1.2 茶皂素的表面活性 PAGEREF _Toc15680 1 HYPERLINK l _Toc21806 1.3茶皂素的生物活性 PAGEREF _To

7、c21806 2 HYPERLINK l _Toc15044 1.2.1 溶血和魚毒作用 PAGEREF _Toc15044 2 HYPERLINK l _Toc9171 1.3.2 抗菌活性 PAGEREF _Toc9171 2 HYPERLINK l _Toc30050 1.3.3 炎與抗氧化作用 PAGEREF _Toc30050 2 HYPERLINK l _Toc3052 1.3.4 抗高血壓的作用 PAGEREF _Toc3052 2 HYPERLINK l _Toc21082 1.3.5 制酒精吸收和保護(hù)腸胃的作用 PAGEREF _Toc21082 2 HYPERLINK l

8、_Toc7650 1.4茶皂素的應(yīng)用 PAGEREF _Toc7650 2 HYPERLINK l _Toc26632 1.5茶皂素的提取純化研究進(jìn)展 PAGEREF _Toc26632 3 HYPERLINK l _Toc10186 1.6實(shí)驗(yàn)?zāi)康募凹夹g(shù)路線 PAGEREF _Toc10186 4 HYPERLINK l _Toc24725 1.6.1實(shí)驗(yàn)?zāi)康?PAGEREF _Toc24725 4 HYPERLINK l _Toc5616 1.6.2技術(shù)路線 PAGEREF _Toc5616 4 HYPERLINK l _Toc16091 2 實(shí)驗(yàn)原理 PAGEREF _Toc16091

9、4 HYPERLINK l _Toc28823 2.1吸附機(jī)理 PAGEREF _Toc28823 4 HYPERLINK l _Toc32665 2.2熱力學(xué)及動(dòng)力學(xué)原理 PAGEREF _Toc32665 4 HYPERLINK l _Toc10470 3 實(shí)驗(yàn)材料與方法 PAGEREF _Toc10470 4 HYPERLINK l _Toc8500 3.1實(shí)驗(yàn)材料與儀器 PAGEREF _Toc8500 4 HYPERLINK l _Toc13853 3.2實(shí)驗(yàn)過程 PAGEREF _Toc13853 4 HYPERLINK l _Toc11926 3.2.1茶皂素標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 PAG

10、EREF _Toc11926 4 HYPERLINK l _Toc19841 3.2.2茶皂素顯色后最大吸收波長的確定 PAGEREF _Toc19841 5 HYPERLINK l _Toc3562 3.2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 PAGEREF _Toc3562 5 HYPERLINK l _Toc4773 3.2.4樹脂預(yù)處理及篩選 PAGEREF _Toc4773 5 HYPERLINK l _Toc6720 3.2.5動(dòng)力學(xué)及熱力學(xué)實(shí)驗(yàn) PAGEREF _Toc6720 5 HYPERLINK l _Toc19192 4 結(jié)果與分析 PAGEREF _Toc19192 6 HYPERLINK

11、 l _Toc1896 4.1茶皂素標(biāo)準(zhǔn)品顯色后最大波長的確定 PAGEREF _Toc1896 6 HYPERLINK l _Toc14014 4.2茶皂素標(biāo)準(zhǔn)曲線 PAGEREF _Toc14014 6 HYPERLINK l _Toc18815 4.3 樹脂篩選 PAGEREF _Toc18815 7 HYPERLINK l _Toc736 4.4大孔樹脂吸附茶皂素動(dòng)力學(xué)及熱力學(xué) PAGEREF _Toc736 7 HYPERLINK l _Toc17922 4.4.1 大孔樹脂吸附茶皂素動(dòng)力學(xué) PAGEREF _Toc17922 7 HYPERLINK l _Toc8763 4.4.2

12、 大孔樹脂吸附茶皂素?zé)崃W(xué) PAGEREF _Toc8763 9 HYPERLINK l _Toc615 5 結(jié)論 PAGEREF _Toc615 11 HYPERLINK l _Toc4685 致謝 PAGEREF _Toc4685 11 HYPERLINK l _Toc25737 參考文獻(xiàn) PAGEREF _Toc25737 11 HYPERLINK l _Toc28283 附錄A PAGEREF _Toc28283 13 HYPERLINK l _Toc31594 附錄(fl)B PAGEREF _Toc31594 22陜西理工學(xué)院畢業(yè)設(shè)計(jì)第 頁1 引言(ynyn) 茶粕又稱茶籽粕、茶餅

13、，是油茶籽及茶葉籽壓榨生產(chǎn)茶油后的廢渣，加工過程中產(chǎn)生的數(shù)量(shling)大概相當(dāng)于茶油產(chǎn)量的3倍。茶粕組成為：茶皂素9% 15%、粗蛋白15%、粗脂肪5%、糖類40%、粗纖維6%、灰分6%、單寧2%、咖啡堿0.95%、水分14%。茶籽皂素基本結(jié)構(gòu)由齊墩果烷母核與糖鏈、有機(jī)酸而成，呈乳白色或淡黃色固體無定形粉末，熔點(diǎn)為223224，相對分子質(zhì)量約為1203，可被酸、堿或酶水解成糖與齊墩果烷型茶皂素元，其茶皂素元約有7種。茶皂素廣泛存在于茶科植物中，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明茶皂素具有抗癌、殺菌、抗?jié)B消炎、鎮(zhèn)痛、抗高血壓、抑制酒精吸收和保護(hù)腸胃化痰止咳和魚毒等作用。以茶皂素為表面活性劑配成的洗滌劑其起

14、泡力優(yōu)于上等肥皂或合成洗滌劑，是毛紡品、絲織品、棉紡品的優(yōu)良洗滌劑。以茶皂素為原料合成的系列衍生物，起泡力及穩(wěn)泡性優(yōu)于茶皂素，HBL值高，是優(yōu)良的農(nóng)藥助劑。茶籽皂素目前常采用(ciyng)水提-沉淀法、水提-醇萃法等工藝進(jìn)行提取，但其純度主要集中在6585%之間，制備高純度茶皂素較為困難。我省陜南循環(huán)經(jīng)濟(jì)產(chǎn)業(yè)發(fā)展規(guī)劃（20092020年）中指出：以減量化、再利用、資源化為原則，以提高資源生產(chǎn)率和減少廢棄物排放為目標(biāo)，走科技含量高、經(jīng)濟(jì)效益好、資源消耗低、環(huán)境污染少的新型工業(yè)化道路。在列出的陜南循環(huán)經(jīng)濟(jì)產(chǎn)業(yè)重點(diǎn)科技攻關(guān)項(xiàng)目中包括:木本食用油加工及茶葉資源綜合利用與產(chǎn)品深度開發(fā)技術(shù)。茶油加工是我省

15、近年來發(fā)展起來的新的農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)，其資源綜合利用問題是急需解決的新問題。近年來采用大孔樹脂吸附層析純化茶皂素由于其產(chǎn)品純度高日益受到重視，而其中熱力學(xué)和動(dòng)力學(xué)的探究已顯現(xiàn)出重要性，此方面的理論問題鮮見文獻(xiàn)報(bào)道。本文針對茶籽皂素純化工藝，選取工業(yè)應(yīng)用廣泛的AB-8及D101C大孔吸附樹脂，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)而對其熱力學(xué)及動(dòng)力學(xué)相關(guān)性質(zhì)進(jìn)行研究。1.1茶皂素的性質(zhì)茶皂素基本結(jié)構(gòu)由是由齊墩果烷母核（oleanane）與糖鏈（glycosidic linkage）及結(jié)構(gòu)有機(jī)酸（organic acid）結(jié)合而成，乳白色或淡黃色固體無定形粉末，熔點(diǎn)為223224，分子式為C57H90O26，相對分子質(zhì)量為1203如圖

16、1.1。可被酸、堿或酶水解成糖與皂苷單元，皂苷單元的碳原子數(shù)為30，皂苷配基(sapgening)有7種。茶皂素屬于齊墩果烷型五環(huán)三萜類化合物，E環(huán)為六元環(huán)，3位鏈有-羥基，28位有羧基基團(tuán)，18位的氫為構(gòu)型。近30年來人們對其表面活性、生物活性及藥理活性的開發(fā)研究進(jìn)展很快，同時(shí)促進(jìn)了對其化學(xué)性質(zhì)的研究開發(fā)，而其藥理活性的研究開發(fā)成果最令人關(guān)心和矚目，也成為近幾年研究的熱點(diǎn)。圖1.1 茶皂苷結(jié)構(gòu)圖Fig 1.1 Tea SaponinsStructure1.2 茶皂素(zo s)的表面活性茶皂素分子具有親水性的糖體和疏水性性的配基，是一種天然非離子型表面(biomin)活性劑，具有良好的乳化、

17、分散、濕潤、發(fā)泡、穩(wěn)泡及去污等性能。本草綱目也有記載：“條籽搗仁洗農(nóng)除油膩”。對蛋白質(zhì)、纖維素?zé)o損傷，特別對絲、毛、羽絨的洗滌效果良好。茶皂素親水親油平衡值(HLB值)為16，是制備水包油型(O/W)乳液的良好乳化劑，對固體微粒分散作用明顯。起泡力幾乎不受水質(zhì)硬度的影響，在pH410范圍內(nèi)發(fā)泡正常且泡沫穩(wěn)定持久，具有較好的濕潤性。茶皂素與水振蕩后產(chǎn)生蜂窩狀泡沫，據(jù)報(bào)道，0.05茶皂素水溶液，振蕩后產(chǎn)生的泡沫可以保持 30min而不消散，而優(yōu)等肥皂 006的水溶液振蕩后產(chǎn)生的泡沫在 14min內(nèi)就消散了。實(shí)驗(yàn)表明，茶皂素能夠顯著地降低液體的表面張力，在濃度為 0.011.00的范圍內(nèi)，加茶皂素水

18、溶液的表面張力即從76mN/m下降到46mN/m。在水質(zhì)硬度為 0-146.94retool的范圍內(nèi)，加茶皂素水溶液的表面活性幾乎不受水質(zhì)硬度影響。以茶籽皂素軟化(runhu)石蠟，其乳化力強(qiáng)，分散性良好，乳液顆粒度在 1.54 m左右，穩(wěn)定性好，能在室溫下長時(shí)間存放而不分層。1.3茶皂素的生物活性1.2.1 溶血和魚毒作用 通常所說的皂苷毒性，就是指皂苷類成分的溶血作用。茶皂素對動(dòng)物紅血球有破壞作用，產(chǎn)生溶血現(xiàn)象。通常認(rèn)為茶皂素的溶血機(jī)理是它能引起含膽固醇的細(xì)胞膜通透性改變，使細(xì)胞質(zhì)外滲，從而使紅細(xì)胞解體。茶皂素的魚毒作用已經(jīng)應(yīng)用在水產(chǎn)養(yǎng)殖上作為魚塘和蝦池的清潔劑，清除其中敵害魚類。1.3.

19、2 抗菌活性 茶皂素的抗菌作用已在茶籽餅作為防治某些皮膚病的應(yīng)用中得到體現(xiàn)。熊文淑等的研究結(jié)果表明茶皂素有較好的抗菌作用，茶皂素對白色念球菌、大腸桿菌均有一定的抑制作用。據(jù)報(bào)道1,2，茶皂素對多種致病菌有抑制作用。Yuji Yalnauehi3等試驗(yàn)了茶皂素對六種不的酵母的抑菌作用，證明茶皂素有很強(qiáng)的抑制酵母生長的活性。Tomita4等研究表明，在低濃度茶皂素能殺死嗜鹽接合酵母菌。在茶皂素存在況下，酵母細(xì)胞原生質(zhì)體的ATP酶活性發(fā)生改變，分析認(rèn)為，這種改變是由于茶皂素在NaCl高滲環(huán)境下對酵母細(xì)胞的甘油通透性產(chǎn)生影響所致。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，茶皂苷E1，表現(xiàn)出這種性能而E2卻無此作用。另據(jù)日本專利報(bào)道5

20、，從茶葉中提取出的茶皂素成分可抑制食品、衣物、內(nèi)霉菌的生長，且安全無毒。1.3.3 炎與抗氧化作用 Sagesaka等6發(fā)現(xiàn)茶葉皂素對由角叉膠誘發(fā)的大鼠足浮腫有顯著的抑制，實(shí)驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)，大鼠口服劑量2000mg/kg時(shí)沒有發(fā)生任何中毒癥狀。Kitagawa等7也證明從茶葉中提取出的茶皂試B，具有抗炎和抗過敏作用。Sur P等8從茶根（Camellia:sinensis（L.）O.Kuntze）提取的茶皂素具有消抗氧化作用。從茶根提取物（TRE）中分離出兩組茶皂素TS1和TS2，在體外實(shí)驗(yàn)中被證明有抗氧化和抗炎作用。這些研究顯示前人研究的TRE腫瘤活性可能是通過清除自由基和抗炎作用來實(shí)現(xiàn)的。1.

21、3.4 抗高血壓的作用 Sagesaka等6用茶葉皂素分別對幼稚自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）連續(xù)給一次性給藥的降壓實(shí)驗(yàn)。證明了茶葉皂素抗高血壓的作用。另外，實(shí)驗(yàn)證明了茶皂素對血管緊縮素I誘發(fā)的豚鼠血管收縮有抑制作，而對血管緊縮素誘發(fā)的血管收縮沒有作用。1.3.5 制酒精吸收(xshu)和保護(hù)腸胃的作用 STsukamoto等9四對茶皂素在酒精吸收和新陳代謝中的作用進(jìn)行了動(dòng)物驗(yàn)。發(fā)現(xiàn)茶皂素能抑制酒精的吸收，茶皂素有助于因飲酒過量(guling)而造成的肝傷等后作用。Kawaguchi M等10對長期服用茶皂素進(jìn)行了安全性評價(jià)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)口服(kuf)150mg/kg/day的茶皂素對雌雄實(shí)驗(yàn)鼠都未產(chǎn)

22、生任何副作用。并且即使是每天口服500mg/kg茶皂素，其毒性也遠(yuǎn)低于相當(dāng)劑量的皂樹皮皂素。因此，茶皂素作為食品添加劑是安全的。1.4茶皂素的應(yīng)用 茶皂素具有消痰鎮(zhèn)痛、抗散、抗癌等功效，可用于治療腹瀉、水腫和老年性支氣管炎等疾病。本草綱目中記載：“茶籽，苦寒香毒（皂素），主治喘急咳嗽，去疾垢”。據(jù)臨床實(shí)驗(yàn), 茶籽姜蜜糖漿對治療單純型老年支氣管痰有效率達(dá)87.7%, 喘急性支氣管痰有效率達(dá)89.7%11。藥理學(xué)研究表明：油茶皂苷同時(shí)具有抗炎、抗氧化、降血壓等作用。Vogel G等通過對不同類型發(fā)炎的動(dòng)物模擬試驗(yàn)顯示茶皂素的明顯抗?jié)B漏與抗炎癥特性，主要表現(xiàn)在炎癥初起階段使受障礙的毛細(xì)血管透過性正常

23、化及在刺激動(dòng)物體內(nèi)激素分泌的作用；同時(shí)茶皂素能增加血糖的含量，可促進(jìn)糖元異生和葡萄糖新生, 抑制血糖的利用13；茶皂素對治療各種類型的水腫病和老年支氣管炎有較好的療效，還可用作利尿劑、乳白魚肝油的乳化劑等14。金繼曙等15研究表明茶皂素對淺表真菌感染具有治療效果，對紅色毛癬菌、石膏樣癬菌、斷發(fā)癬菌、黃色癬菌、紫色癬菌、絮狀表皮癬菌取得了較好的療效。茶皂素對多種皮膚瘙癢有抑制作用，制成的茶皂素營養(yǎng)霜、花露水、奶液等系列化妝品，經(jīng)醫(yī)院臨床證明對濕疹、蕁麻疹、夏日皮炎等多種皮膚疾病均有療效16-17。茶皂素具有抗菌作用，熊文淑18研究發(fā)現(xiàn)，茶皂素對白色念珠菌、大腸桿菌均有抑制作用。茶皂素同時(shí)具有去污

24、、去頭屑、止癢等功能，開發(fā)茶皂素洗滌劑，具有養(yǎng)發(fā)護(hù)膚功能，特別是伸長彈性和摩擦系數(shù)優(yōu)于其他產(chǎn)品19，可作頭發(fā)生長促進(jìn)劑，每天服20mg茶皂素，可使頭發(fā)茂盛，一年之內(nèi)可使50%白發(fā)變黑20。茶皂素具有抑制酒精吸收的作用，T sukamoto S等12對茶皂素在酒精吸收及新陳代謝中的作用進(jìn)行了動(dòng)物試驗(yàn)，表明茶皂素是酒精吸收的抑制劑和酒精消化的促進(jìn)劑。日本已開發(fā)出含茶皂素的飲料、冰淇淋和藥片等專利技術(shù)，該項(xiàng)研究也為喝茶醒酒提供了新的證據(jù)；據(jù)日本專利報(bào)道，將其改性為-糖基茶皂素，可用于多種藥物或保健飲料及食品中21。在植物病害防治方面，茶皂苷具有抑制茶炭疽病或輪斑病菌的分生孢子發(fā)芽的作用，還使稻瘟病菌

25、、水稻胡麻斑病菌、柑桔黑斑病菌、茶葉灰色霉菌、茶葉枯病菌、蘋果輪斑病菌、梨黑斑病菌等的孢子產(chǎn)生異常發(fā)芽22-23。茶皂素具有溶血作用，溶血指數(shù)約為100000，僅對血紅細(xì)胞(包括有核的魚血、雞血和無核的人血等紅細(xì)胞)產(chǎn)生溶血，而對白細(xì)胞則無影響；茶皂素對魚有毒性作用，而對對蝦無毒性作用。山田等24以健壯的癐魚為材料，研究結(jié)果表明，茶皂素對魚的半致死劑量為LD50=3.8mg/L，魚毒活性隨水溫的升高而增強(qiáng)，海水中48h以后即自然降解而失去活性。經(jīng)東海、黃海、渤海三大海域的海岸線數(shù)百公頃對蝦塘應(yīng)用，均取得了良好的效果；張楚霜等25用茶皂素對釘螺的成螺、幼螺和螺卵進(jìn)行浸殺和噴殺試驗(yàn)，結(jié)果表明茶皂素

26、浸殺成螺、幼螺和螺卵均有較好殺滅效果，5mg/L浸殺釘螺效果達(dá)100%。茶皂素是天然非離子型表面活性劑，分子中有親水性的糖體和疏水性的配基團(tuán)，具有多種表面活性，尤其具有很好的發(fā)泡和穩(wěn)泡能力，且不受水質(zhì)硬度的影響?？勺髌【乒I(yè)的發(fā)泡劑和穩(wěn)泡劑26；茶皂素用于清涼飲料和酒類中，加入2450mg/L可防止酵母生長，使酒質(zhì)穩(wěn)定。茶皂素易生物降解不污染環(huán)境，是日用化工行業(yè)難得的表面活性劑原料，其性能柔和，其水溶液呈微酸性，以茶皂素為表面活性劑配成的洗滌劑其起泡力優(yōu)于上等肥皂或合成洗滌劑27，是毛紡品、絲織品、棉紡品的優(yōu)良洗滌劑。茶皂素具有泡沫低、酸性弱、擴(kuò)散快、易清洗、揮發(fā)快的特點(diǎn)。用它配制的洗滌劑，洗

27、滌后的織物在色澤鮮艷性等方面優(yōu)于國產(chǎn)合成毛紡洗滌劑。將質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.12%茶皂素作為化纖織物的活性染料用于印花漂洗，各項(xiàng)指標(biāo)均可達(dá)到國家標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定，在白度和鮮艷度上優(yōu)于雷米邦A(yù)28。近年來進(jìn)行茶皂素改性促進(jìn)表面活性提高的研究趨于活躍。楊磊等29以茶皂素為原料，合成了一種新型表面活性劑茶皂素單乙醇酰胺琥珀酸單酯硫酸鈉。結(jié)果表明，該新型表面活性劑HLB值為19.06，表面張力低于茶皂素，起泡力及穩(wěn)泡性優(yōu)于茶皂素。宋冰蕾等30以茶皂素為原料，通過胺解反應(yīng)獲得了脫酯基茶皂素。與茶皂素相比，表現(xiàn)出了更強(qiáng)的聚集能力，脫酯基茶皂素新生成的兩個(gè)羥基進(jìn)一步增強(qiáng)了與水分子的相互作用，使液膜內(nèi)水分不易流失，泡沫高度

28、開始明顯下降的時(shí)間達(dá)到1360min，表現(xiàn)出更為持久的泡沫穩(wěn)定性。經(jīng)茶皂素改性有機(jī)硅季銨鹽，它能明顯增強(qiáng)頭發(fā)的干、溫梳理性能，且光澤較好，泡沫豐富。1.5茶皂素的提取(tq)純化研究進(jìn)展 我國于1979年首次以工業(yè)方法從脫脂茶籽餅中分離(fnl)出茶皂素。目前國內(nèi)外提取茶皂素的方法主要有水浸法和有機(jī)溶劑法以及在此基礎(chǔ)上推廣開來的新方法。水浸法是我國早在20世紀(jì)50年代就有人對水浸法提取茶皂素進(jìn)行過研究31-32，收率為12%13%，純度為70%，用該法生產(chǎn)的茶皂素只能用作農(nóng)藥、瀝青乳化劑，不能用于化妝品、生產(chǎn)試劑等方面；有機(jī)溶劑法：常用含水甲醇(ji chn)或含水乙醇作浸提劑，有人設(shè)計(jì)了用單

29、一的含水低碳醇33-34，采用梯度浸取方法，一步提取餅粕中的油脂和茶皂素，收率為18%19%，純度為95%。有機(jī)溶劑法溶劑消耗大，成本高，工藝復(fù)雜，設(shè)備要求高，用該法生產(chǎn)的茶皂素可用作生化試劑和醫(yī)藥原料，可供出口；水提取-沉淀法是用熱水作為浸提劑，并在浸提劑中加入一定量的沉淀劑CaO，使茶皂素轉(zhuǎn)化為沉淀，從而與雜質(zhì)分離，再將分離出的沉淀物用離子轉(zhuǎn)換劑轉(zhuǎn)沉淀，釋放出純的茶皂素35，收率為12%13%，純度為80%作用。水提-沉淀法較有機(jī)溶劑法簡單，但產(chǎn)品純度依然較低；水提-醇萃法具有工藝較為簡單、投資少，是目前較為理想的生產(chǎn)工藝36，用該法生產(chǎn)茶皂素的收率為15%16%。樹脂吸附法，具有物化穩(wěn)定

30、性高、吸附選擇性好、不受無機(jī)物存在的影響，生產(chǎn)周期短，降低了精制茶皂素的成本，該法所得產(chǎn)品色澤明顯優(yōu)于傳統(tǒng)工藝。1.6實(shí)驗(yàn)?zāi)康募凹夹g(shù)路線1.6.1實(shí)驗(yàn)?zāi)康?一方面，對大孔吸附樹脂的動(dòng)力學(xué)和熱力學(xué)研究，篩選出最佳的茶皂素吸附純化樹脂，得出最佳的吸附條件。另一方面，通過吸附條件及特性的研究，得出吸附特性數(shù)據(jù)，為茶皂素的大規(guī)模高純度生產(chǎn)提供科學(xué)依據(jù)。1.6.2技術(shù)路線 （1）進(jìn)行靜態(tài)吸附來對樹脂進(jìn)行篩選，獲得最優(yōu)樹脂。 （2）用最優(yōu)樹脂進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，一方面測定在同一濃度、轉(zhuǎn)速、pH下不同時(shí)間的吸附量，一方面測定在同一濃度、pH、轉(zhuǎn)速下不同溫度下的吸附及解吸附量，最后測同一溫度、pH、轉(zhuǎn)速不同濃度的吸附及

31、解吸附量，來了解樹脂吸附茶皂素的內(nèi)在過程，尋求最佳的吸附條件。2 實(shí)驗(yàn)(shyn)原理2.1吸附(xf)機(jī)理 通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)(fxin)，對于茶皂素在AB-8和D101C兩種樹脂上的吸附過程，在吸附的初始階段，吸附量隨著吸附時(shí)間的延長而快速增大，而后逐漸變慢，直至達(dá)到平衡濃度?？梢哉J(rèn)為，茶皂素在兩種樹脂上的吸附包含了以下幾個(gè)步驟： (1) 茶皂素分子通過液膜擴(kuò)散，進(jìn)入樹脂表面。 (2) 茶皂素分子進(jìn)一步通過顆粒內(nèi)擴(kuò)散，進(jìn)入樹脂顆粒內(nèi)部微孔結(jié)構(gòu)中。 (3) 茶皂素分子與位于樹脂顆粒內(nèi)部微孔結(jié)構(gòu)中的活性位點(diǎn)作用37。2.2熱力學(xué)及動(dòng)力學(xué)原理在吸附過程中，通過對吸附過程的研究，利用Lagergren

32、一級(jí)動(dòng)力學(xué)吸附方程和Kannan顆粒內(nèi)擴(kuò)散模型對吸附數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合若擬合結(jié)果良好，則可以判斷出其受顆粒內(nèi)擴(kuò)散阻力影響還是受液膜擴(kuò)散阻力影響。同時(shí)，利用等溫吸附模型中的單分子層吸附理論Langm-uir方程和半經(jīng)驗(yàn)式的Freundlich方程對吸附過程進(jìn)行數(shù)學(xué)模型的擬合，進(jìn)而對大孔樹脂吸附茶皂素過程進(jìn)行更為詳細(xì)的描述和預(yù)測38。3 實(shí)驗(yàn)材料與方法3.1實(shí)驗(yàn)材料與儀器 茶皂素標(biāo)準(zhǔn)品（純度98%），（購自西安小草植物科技有限責(zé)任公司）；香草醛、硫酸均為市售分析純(水為實(shí)驗(yàn)自制純水）；D-101C型及AB-8型大孔吸附樹脂(購于西安藍(lán)曉新材料股份有限公司)。紫外-可見分光光度計(jì)（UV-2550上海精密儀

33、器科技有限公司）；恒溫水浴鍋（HH-系列恒溫水浴鍋，上海浦東光光學(xué)儀器廠）；電子天平（AB204-S，瑞士梅特勒公司）；恒溫振蕩培養(yǎng)箱（SHZ-82A，江蘇省金壇市醫(yī)療儀器廠）；10ml容量瓶；玻璃棒；50ml容量瓶；10ml移液管；1ml移液管；100ml量筒；50ml三角瓶等儀器（均為當(dāng)?shù)夭Ａx器廠生產(chǎn)）。3.2實(shí)驗(yàn)過程3.2.1茶皂素標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 茶皂素標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：配置標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為1mg/ml，精密稱取烘干至恒重的茶皂素標(biāo)準(zhǔn)品50mg用50%乙醇（無水乙醇稀釋（天津市富宇精細(xì)化工有限公司）溶液溶解，置于50ml容量瓶中定容。 8%香草醛溶液配制：精密稱取0.8g香草醛，小心倒入10m

34、l容量瓶中，用無水乙醇定容，搖勻備用。77%H2SO4的配制：將95%濃H2SO4 77ml加入到23ml去離子水中，至冰水中冷卻備。3.2.2茶皂素顯色后最大吸收波長的確定取茶皂素標(biāo)準(zhǔn)溶液1ml置于具塞比色管中，取8%香草醛溶液0.5ml，于冰水中加入77% H2SO44ml，用超純水定容至10ml，搖勻，于60水浴中加熱反應(yīng)15min,后置于冰水中（或置于冰箱中）冷卻10min終止反應(yīng)，取出放至室溫。所用試劑為空白，用1cm比色皿在紫外-可見分光光度計(jì)上掃描（波長范圍為可見光區(qū)400nm-800nm測兩次）。3.2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線(qxin)繪制精確(jngqu)取2中的茶皂素標(biāo)準(zhǔn)溶液0.2，

35、0.4，0.6，0.8，1.0,，1.2,，1.4ml分別置于10ml具塞試管中，取8%香草醛溶液0.5ml，于冰水中加入77% H2SO44ml，用超純水定容至10ml，搖勻，于60水浴中加熱反應(yīng)(fnyng)15min,后置于冰水中（或置于冰箱中）冷卻10min終止反應(yīng)，取出放至室溫。，以試劑為空白，在最大吸收波長下測定吸光度，并以吸光度對濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出回歸方程及相關(guān)系數(shù)。3.2.4樹脂預(yù)處理及篩選 （1）樹脂預(yù)處理 取各樹脂1.5g（LX-2000；LSA-700；LX-20B；D101、D101C、AB-8、HPD-300、HPD-600、HPD-100、HPD-700），樹脂

36、篩選完后另取篩選的樹脂10g；均用95%乙醇浸泡1:1（mg/ml）比例，并超聲處理1h(或浸泡24h),過濾后用蒸餾水洗至無醇味，然后加入2%的NaOH溶液等體積浸泡6h，用水洗至中性，再加入2%HCl溶液（與NaOH等體積）浸泡6h后水洗至中性備用。 （2）樹脂篩選 動(dòng)態(tài)吸附篩選：將與處理后抽干的樹脂各取1.0g置于50ml三角瓶中，分別加入30ml茶皂素標(biāo)準(zhǔn)溶液（3mg/L）。在25下，將三角瓶封口并置于恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩24h，轉(zhuǎn)速110r/min，待吸附平衡后對溶液進(jìn)行紫外檢測，棄去溶液，將充分抽干后的樹脂置于50ml三角瓶中，加95%乙醇30mL，封口后在25下振蕩解析24h,后

37、對溶液進(jìn)行紫外檢測（每組測三次）。(預(yù)先制備3mg/ml茶皂素標(biāo)準(zhǔn)溶液約300ml左右備用)。吸附量qe和吸附解吸率D計(jì)算：計(jì)算公式：qe=V(C0-C1)/W39D=(V1C2)/（V(C0-C1)）%； qe-吸附容量mg/g； D-吸附解吸率%； C0-初始溶液濃度mg/mL； C1-解析液濃度mg/mL； C2-洗脫液濃度mg/mL；V-初始溶液的體積mL；V1-解析液體積mL； W-樹脂質(zhì)量g。3.2.5動(dòng)力學(xué)及熱力學(xué)實(shí)驗(yàn) （1）動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)稱取篩選出的兩種樹脂各1g，分別置于50ml的三角瓶中，并加入30ml3.17mg/ml的茶皂素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，在溫度為25，轉(zhuǎn)速為100r/min下

38、振蕩吸附，分別在30min、60min、90min、120min、150min、210min、300min、420min時(shí)取樣（每次取樣多于0.8ml,每組實(shí)驗(yàn)平行進(jìn)行三個(gè)），顯色后檢測其吸光度。 （2）熱力學(xué)實(shí)驗(yàn)稱取篩選(shixun)出的兩種樹脂各1g,分別置于50ml的三角瓶中，并加入30ml3.17mg/ml的茶皂素標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別在溫度為25、30、35、40、45下，轉(zhuǎn)速為100r/min下振蕩吸附7h取樣。稱取篩選出的兩種樹脂各1g,分別置于50ml的三角瓶中，在25、100r/min的轉(zhuǎn)速下分別用1.36mg/ml、2.131mg/ml、2.96mg/ml、3.87mg/ml的濃

39、度的茶皂素進(jìn)行吸附，振蕩7h后取樣。4 結(jié)果(ji gu)與分析4.1茶皂素標(biāo)準(zhǔn)品顯色(xin s)后最大波長的確定茶皂素標(biāo)準(zhǔn)品顯色后在紫外-可見分光光度計(jì)上掃描所得的光譜如圖4.1。圖 4.1茶皂素顯色后光譜掃描圖Fig Tea saponin after the color spectrum scan 最大吸收值為0.39914時(shí)的波長為435nm，所以其顯色后的最大吸收波長為435nm。4.2茶皂素標(biāo)準(zhǔn)曲線茶皂素標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖4.2。 圖 4.2 茶皂素含量測定標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig 4.2 The standard of tea sponin 以茶皂素濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，繪制的標(biāo)準(zhǔn)(

40、biozhn)曲線如上圖 ，其回歸方程為：Y=2.57X-0.0122，R2=0.9973。4.3 樹脂(shzh)篩選 樹脂(shzh)篩選結(jié)果如表4.1及圖4.3所示。表 4.1幾種樹脂的吸附及解吸附量Table 4.1 Several resin adsorption and desorption capacity LX-2000LAS-700LX-2BD101D101C吸附量（mg/g）85.72570.98672.957383.535988.0593解吸附量（mg/g）41.955810.044133.539.455836.5882AB-8HPD-300HPD-600HPD-100H

41、PD-700吸附量（mg/g）82.22458.359983.90186.308576.095解吸附量（mg/g）35.485233.205842.470537.691143.7205圖 4.3 幾種樹脂的吸附及解吸附量對比圖Fig 4.3 Several resin adsorption and desorption comparison chart 吸附量最大的樹脂為：D101C、HPD-100、LX-2000、LX-20B、HPD-600、D101、AB-8、LX-20B、LSA-700、HPD-300。而解吸附量最大的分別是：HPD-700、HPD-600、LX-2000、D101、H

42、PD-100、D101C、AB-8、HPD-300、LX-20B、LSA-700。 綜合各種因素選取AB-8及D101C兩種樹脂進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 4.4大孔樹脂吸附茶皂素動(dòng)力學(xué)及熱力學(xué)4.4.1 大孔樹脂吸附茶皂素動(dòng)力學(xué) 圖4.4為茶皂素初始濃度為3.17mg/ml時(shí)，于25、10r/min、PH為6.18時(shí)在大孔樹脂AB-8及D101C上的吸附動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)。圖 4.4 AB-8及D101C樹脂(shzh)在不同時(shí)間的吸附量Fig 4.4 D101C resin AB-8, and the adsorption capacity at different times 一般而言，樹脂的吸附行為主要受液膜

43、擴(kuò)控制或顆粒擴(kuò)撒按控制。為了(wi le)確定茶皂素在兩種樹脂上的吸附動(dòng)力學(xué)而行為，本文利用Lagergren 一級(jí)動(dòng)力學(xué)吸附方程及Kannan顆粒內(nèi)擴(kuò)散模型來研究兩種樹脂對茶皂素的吸附速率，主要是在同一溫度下確定吸附過程中的控制情況，并計(jì)算擴(kuò)散速率。 （1）Lagergren一級(jí)動(dòng)力學(xué)吸附(xf)方程如果被吸附的物質(zhì)在樹脂上的吸附量qt隨時(shí)間t的變化曲線呈指數(shù)形式，即表明了其一級(jí)吸附動(dòng)力學(xué)特征，則可采用Lagergren一級(jí)動(dòng)力學(xué)吸附方程來計(jì)算其吸附速率40， （2）或 (3)令F=，則（3）式可以用以下的線性關(guān)系進(jìn)行描述： (4) （2）Kannan 顆粒內(nèi)擴(kuò)散模型 發(fā)生在快速攪動(dòng)間歇反應(yīng)

44、器內(nèi)的吸附過程往往屬于顆粒內(nèi)擴(kuò)散控制過程41。Kannan等采用如下顆粒內(nèi)擴(kuò)散模型對過程進(jìn)行描述42: (5) 當(dāng)吸附過程為液膜擴(kuò)散控制時(shí)，t與成直線關(guān)系，并通過坐標(biāo)原點(diǎn)；當(dāng)吸附過程為顆粒擴(kuò)散控制時(shí),應(yīng)與成直線關(guān)系。表 4.2 AB-8及D101C樹脂在不同時(shí)間的吸附量Table 4.2 D101C resin AB-8, and the adsorption capacity at different times30min60min90min120min150min210min300min420minAB-8(mg/g)15.06644.01657.4570.17975.62178.0127

45、9.44380.349D101C(mg/g)18.3944.05855.92359.71566.19570.13477.86878.451 表 4.3 AB-8和D101C吸附茶皂素(zo s)的擬Lagergren一級(jí)動(dòng)力學(xué)吸附方程Table 4.3 AB-8 and D101C adsorption tea saponin intended Lagergren first order kinetics 動(dòng)力學(xué)方程(fngchng) Qe (mg/g) K(/min) R2AB-8 ln(Qe-Qt)=4.4526-0.0163t 80.349 0.0163 0.9973D101C ln(Q

46、e-Qt)=4.6762-0.0156t 78.4512 0.0156 0.9918 表 4.4 AB-8和D101C吸附茶皂素在不同(b tn)時(shí)間下的Ln(1-qt/qe)值Table 4.4 AB-8 and D101C adsorption tea saponin at different times of the Ln (1-qt/qe) value30min60min90min120min150min210min300minAB-8-0.20764798107309-0.793653227348336-1.25528640507092-2.06693743649489-2.8328

47、7736645156-3.53751159099864-4.48509561949451D101C-0.2671127330536-0.824617905008581-1.24770891765203-1.43201929399372-1.85644484402622-2.24415111569936-4.90170187371685表 4.5 AB-8和D101C吸附茶皂素在不同時(shí)間下的 Ln(1-qt/qe)與t的關(guān)系Table 4.5 AB-8 and D101C adsorption tea saponin at different times of the Ln (1-qt/qe)

48、value. Ln(1-qt/qe)與t的方程 截距 R2AB-8 Ln(1-qt/qe)=0.0163t+0.066 0.066 0.9673D101C Ln(1-qt/qe)=0.0156t+0.3139 0.3139 0.9317 根據(jù)表4.5可知大孔樹脂AB-8及D101C吸附茶皂素過程符合Lagergren一級(jí)動(dòng)力學(xué)吸附 方程，且R2具有很好的說明意義。并且其用Kannan 顆粒內(nèi)擴(kuò)散模型描述時(shí)t與ln(1-/)成直線關(guān)系，且直線截距均不為零，說明吸附過程不光為液膜擴(kuò)散控制，同時(shí)顆粒擴(kuò)散也對吸附過程起到阻礙作用。4.4.2 大孔樹脂吸附茶皂素?zé)崃W(xué) （1）不同溫度下的吸附表 4.6

49、同溫度下兩種樹脂的平衡吸附量及平衡濃度Table 4.6 Different temperatures the equilibrium adsorption capacity of the two resins and equilibrium concentration2530354045AB-8平衡吸附量（mg/g）80.34980.49379.3678.5176.65平衡濃度(mg/ml)0.49170.48690.52460.5530.615D101C平衡吸附量（mg/g）78.451280.32181.20679.23578.214平衡濃度（mg/ml）0.554960.49260.4

50、6310.52880.5628 如表4.6可以看出AB-8和D101C兩種樹脂的平衡吸附量隨著溫度的上升先出現(xiàn)增大的趨勢，而后隨著溫度的進(jìn)一步上升，平衡吸附兩開始減小，所以可以大概的判斷出茶皂素在兩種樹脂上的吸附屬于放熱過程，溫度的上升有利于吸附的進(jìn)行，但是隨著溫度的進(jìn)一步上升則是對樹脂吸附茶皂素的過程出現(xiàn)抑制(yzh)的過程，所以高溫不利于茶皂素在AB-8和D101C茶皂素在兩種樹脂上的吸附，而適當(dāng)?shù)臏囟饶艽龠M(jìn)茶皂素的吸附。 （2）同一溫度(wnd)不同濃度下的吸附表 4.7 不同(b tn)濃度下的平衡吸附量及平衡濃度及平衡吸附量Table 4.7 Different concentrat

51、ions of equilibrium adsorption capacity and adsorption equilibrium concentration and equilibrium1.36mg/ml2.13mg/ml2.96mg/ml3.87mg/mlAB-8平衡吸附量（mg/gl）38.3450.7676.4780.245平衡濃度(mg/ml)0.0820.4380.4111.19517D101C平衡吸附量（mg/g）39.41155.2974.63186.946平衡濃度（mg/ml）0.04630.2870.47230.9718 固-液吸附的Freundlich 吸附等溫方程4

52、3為:式中：Qe為平衡吸附量，Ce為平衡濃度，Kf為平衡吸附系數(shù)，表示吸附量的相對大小，n為特征常數(shù)，表明吸附劑表面的不均勻性和吸附強(qiáng)度的大小。其中以數(shù)據(jù)lnQe對lnCe作圖的直線可用reundlich 吸附等溫方程擬合，其中l(wèi)nKf為直線的截距，1/n為直線的斜率所擬合的直線及相關(guān)參數(shù)如表4.8。表 4.8 Freundlich擬合方程及參數(shù) Table 4.8 Freundlich fitting equation and parameters 擬合的方程 Kf n R2AB-8 lnQe=0.2645lnCe+4.2638 4.2638 3.78 0.9926D101C lnQe=0.

53、2628lnCe+4.4511 4.4511 3.8 0.9535 根據(jù)Vant Hoff 方程，等量吸附焓變Hm由如下公式計(jì)算：。式中Ce為在溫度T(K)時(shí)，吸附平衡濃度（mg/L-1），K0為吸附平衡常數(shù)，R為理想氣體常數(shù)。Hm可通過ln(1/Ce)對T-1。吸附Gibbs自由能變Gm用Freundlich方程帶入Gibbs方程并經(jīng)過推導(dǎo)整理后所得的Gm=nRT(n為Freundlich方程中的參數(shù))來計(jì)算。吸附熵變Sm可根據(jù)Gibbs-Helmholtz方程Sm=Hm（Gm）/T）計(jì)算出來44。表 4.9 AB-8及D101C對茶皂素的吸附熱力學(xué)參數(shù)Table 4.9 AB-8 and

54、D101C for tea saponin adsorption thermodynamic parameters 樹脂 T/K Hm/kJmol-1 Gm/kJmol-1 Sm/Jmol-1K-1 R 298 -8.5847 9.2447 7.6211 313 -9.176 9.836 7.7559AB-8 318 0.66 -8.5847 9.2447 7.1418 323 -8.583 9.243 7.03 328 -8.5846 9.2446 6.924 298 -8.63 8.58 7.6211 313 -9.2249 9.1749 7.7559D101C 318 -0.05 -8.

55、63 8.58 7.1418 323 -8.629 8.579 7.03 328 -8.63 8.58 6.924由表4.9可以看出(kn ch)，AB-8吸附中Hm0，表明(biomng)低溫有利于吸附。而D101C中的Hm接近于零表明在合適的溫度下茶皂素才會(huì)被樹脂(shzh)很好的吸附，兩者均需要在合適的溫度下進(jìn)行，高溫不利于吸附進(jìn)行，這與上面的猜想基本一致，其絕對值均小于30kJmol-1,說明該吸附過程為物理吸附過程，同時(shí)也反映出了這兩種樹脂可以洗脫再生重復(fù)利用。Gm0表明了溶液中存在未吸附完全的茶皂素，在吸附過程中溶質(zhì)的吸附是一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡過程，容劑在其中與溶質(zhì)分子存在競爭位點(diǎn)的作用，

56、雖然不強(qiáng)，但是對溶質(zhì)的吸附也有一定影響，使整個(gè)溶質(zhì)分子吸附過程存在了一定的隨機(jī)性。5 結(jié)論 茶皂素標(biāo)準(zhǔn)品顯色后最大波長為435nm,標(biāo)準(zhǔn)曲線為：Y=2.57X-0.0122 （R2=0.9973）；篩選的最佳樹脂為AB-8和D101C兩種樹脂；兩種樹脂吸附茶皂素的動(dòng)力學(xué)過程符合Lagergren一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程，且t與ln(1-qt/qe)成直線關(guān)系，且截距不為零，說明在兩種樹脂吸附茶皂素的吸附速率受液膜擴(kuò)散和顆粒擴(kuò)散兩重影響；兩種樹脂吸附茶皂素的過程為物理過程，吸附過程伴隨放熱，所以高溫不利于吸附進(jìn)行，溶質(zhì)吸附過程是隨機(jī)結(jié)合過程，振蕩有利于吸附進(jìn)行。致謝 在這次畢業(yè)設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)過程中我獲益匪淺，

57、熟悉了很多以前沒用過的實(shí)驗(yàn)儀器，學(xué)會(huì)了如何和對實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的問題進(jìn)行處理，發(fā)揮了在大學(xué)中所學(xué)習(xí)的知識(shí)技能。很感謝馮自立老師在這次試驗(yàn)過程中對我實(shí)驗(yàn)的支持和指導(dǎo)，很感謝趙學(xué)姐對我實(shí)驗(yàn)過程中的監(jiān)督和幫助，同時(shí)非常感謝我們實(shí)驗(yàn)室的王振、呂鵬娣、楊甜、楊嬌、趙月紅、周陽同學(xué)對我實(shí)驗(yàn)的支持和幫助，最后也非常感謝學(xué)校能給我這次檢驗(yàn)我大學(xué)期間學(xué)習(xí)技能的機(jī)會(huì)和院上老師的教導(dǎo)和支持。參考文獻(xiàn)1高仕英.油茶皂素的抗菌活性N.衡陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),1990,18(1):1-3.2金繼曙,都述虎.油茶籽餅抗菌活性成分的研究J.天然產(chǎn)物研究與開發(fā),1993,5(2):48-51.3Yuji Yalnauehi,KeikoA.,

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