5.3血紅蛋白的提取及分離(1)

1、課題3 : 血紅蛋白的提取和分離 PCR反應(yīng)需提供的條件1:緩沖液中進(jìn)行2:DNA模板3:分別與兩條模板鏈相結(jié)合的兩種引物4:四種脫氧核苷酸5：耐熱的DNA聚合酶6：同時通過控制溫度使DNA復(fù)制在體外反復(fù)進(jìn)行 5引物15引物2第二次復(fù)制第一次復(fù)制55 55 5 5模板DNA55 555 5 552530 次循環(huán)（復(fù)制）后，模板DNA的含量可以擴(kuò)大100萬（220）倍以上。體內(nèi)DNA復(fù)制與PCR的技術(shù)區(qū)別：體內(nèi)復(fù)制PCR技術(shù)解旋引物一般用DNA片段DNA聚合酶細(xì)胞自身的DNA聚合酶（不耐高溫）TaqDNA聚合酶復(fù)制特點(diǎn)半保留復(fù)制，邊解旋邊復(fù)制，多起點(diǎn)復(fù)制。半保留復(fù)制，完全解旋后復(fù)制，從模板鏈的一

2、端開始復(fù)制。復(fù)制的方向子鏈的5端向 3端延伸子鏈的5端向 3端延伸在解旋酶作用下，細(xì)胞提供ATP，部分解開加熱到94oC,雙鏈全部解開，不需解旋酶一小段RNA血紅蛋白介紹： 血紅蛋白是高等生物體內(nèi)負(fù)責(zé)運(yùn)載氧的一種蛋白質(zhì)，是使血液呈紅色的蛋白。血紅蛋白是由574個氨基酸脫水縮合而成的含有四條肽鏈的蛋白質(zhì)（兩條鏈和兩條鏈，每一條鏈有一個包含一個鐵原子的環(huán)狀血紅素）。氧氣結(jié)合在鐵原子上，被血液運(yùn)輸。因含血紅素血紅蛋白呈紅色。血紅蛋白占紅細(xì)胞干重97%、總重的35%。平均每克血紅蛋白可結(jié)合1.34ml的氧氣，是血漿溶氧量的70倍。一個哺乳動物血紅蛋白分子可以結(jié)合最多四個氧分子。 血紅蛋白也參與其他氣體

3、的轉(zhuǎn)運(yùn)：它能攜帶機(jī)體的部分二氧化碳（大約10%）?；貞洠旱鞍踪|(zhì)基本單位？合成場所？蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)具有多樣性的直接原因？根本原因？蛋白質(zhì)的功能？思考： 蛋白質(zhì)的分離和提取的原理是什么？根據(jù)蛋白質(zhì)各種特性的差異，如分子的形狀和大小、所帶電荷的性質(zhì)和多少、溶解度和吸附的性質(zhì)和對其他分子的親和力等等，可以用來分離不同蛋白質(zhì)。主要功能實(shí)例組成細(xì)胞的結(jié)構(gòu)成分細(xì)胞膜中的蛋白質(zhì)，染色體中的蛋白質(zhì)等運(yùn)輸功能細(xì)胞膜上的載體蛋白、運(yùn)輸氧氣的血紅蛋白等催化功能胃蛋白酶、纖維素酶等調(diào)節(jié)功能生長激素、胰島素等激素免疫功能B 淋巴細(xì)胞受到抗原刺激后產(chǎn)生的抗體一、基礎(chǔ)知識： 凝膠色譜法（分配色譜法）： 1、凝膠：一些微小多

4、孔的球體（內(nèi)含許多貫穿的通道，由多糖類構(gòu)成如葡聚糖、瓊脂糖） 2、概念：根據(jù)相對分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的方法3、原理：當(dāng)不同的蛋白質(zhì)通過凝膠時，相對（ ）的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程（ ），移動速度（ ），而（ ）的蛋白質(zhì)無法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，只能在（ ）移動，路程（ ），移動速度（ ），相對分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)因此得以分離。相對分子質(zhì)量較小較長較慢相對分子質(zhì)量較大凝膠外部較短較快（分子篩效應(yīng)）用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)時，分子量大的蛋白質(zhì) ( )A路程較長，移動速度較慢 B路程較長，移動速度較快C路程較短，移動速度較慢 D路程較短，移動速度較快4、具體過程D相對分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)在

5、凝膠中的進(jìn)行過程可表示為圖中哪一個B 緩沖溶液：2、作用： 能夠抵制（ ） 對溶液的（ ）的影響，維持PH 基本不變。外界的酸或堿PH值1、組成： 由弱酸和相應(yīng)的強(qiáng)堿弱酸鹽組成如:H2CO3/NaHCO3;CH3COONa/CH3COOH，NaH2PO4/Na2HPO4; KH2PO4/K2HPO4等3、緩沖溶液的配制:通常由1-2種緩沖劑溶解于水中配制而成。 電泳：1、概念： 2、原理：指帶電粒子在電場作用下發(fā)生遷移的過程。 不同蛋白質(zhì)的帶電性質(zhì)、電量、形狀和大小不同，在電場中受到的作用力大小、方向、阻力不同，導(dǎo)致不同蛋白質(zhì)在電場中的運(yùn)動方向和運(yùn)動速度不同。從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種不同蛋白質(zhì)分子的分離。3.分類：瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳。測定（ ）通常用 SDS聚丙