實驗六放線菌的形態(tài)觀察

1、實驗六 放線菌的形態(tài)觀察 龐昕山東大學微生物技術(shù)國家重點實驗室一、目的要求 1. 掌握配制合成培養(yǎng)基的一般方法。2.學習并掌握觀察放線菌形態(tài)的基本方法。 3 .初步了解放線菌的形態(tài)特征。 二、基本原理培養(yǎng)基 高氏 I 號培養(yǎng)基是用來培養(yǎng)和觀察放線菌形態(tài)特征的合成培養(yǎng)基。此合成培養(yǎng)基的主要特點是含有多種化學成分已知的無機鹽，這些無機鹽可能相互作用而產(chǎn)生沉淀。因此，在混合培養(yǎng)基成分時，一般是按配方的順序依次溶解各成分，甚至有時還需要將二種或多種成分分別滅菌，使用時再按比例混合。此外，合成培養(yǎng)基有的還要補加微量元素，如高氏 I 號培養(yǎng)基中的FeSO47H2O的量只有0.00l ，因此在配制培養(yǎng)基時需

2、預先配成高濃度的 FeSO4H2O貯備液，然后再按需加入一定的量到培養(yǎng)基中。 二、基本原理 放線菌放線菌是指能形成分枝絲狀體或菌絲體的一類革蘭氏陽性細菌。常見放線菌大多能形成菌絲體，緊貼培養(yǎng)基表面或深入培養(yǎng)基內(nèi)生長的叫基內(nèi)菌絲 ( 簡稱“基絲” ) ，基絲生長到一定階段還能向空氣中生長出氣生菌絲 ( 簡稱“氣絲” ) ，并進一步分化產(chǎn)生孢子絲及孢子。有的放線菌只產(chǎn)生基絲而無氣絲。在顯微鏡下直接觀察時，氣絲在上層、基絲在下層，氣絲色暗，基絲較透明。孢子絲依種類的不同，有直、波曲、各種螺旋形或輪生。在油鏡下觀察，放線菌的孢子有球形、橢圓、桿狀或柱狀。能否產(chǎn)生菌絲體及由菌絲體分化產(chǎn)生的各種形態(tài)特征是

3、放線菌分類鑒定的重要依據(jù)。為了觀察放線菌的形態(tài)特征，入們設(shè)計了各種培養(yǎng)和觀察方法，這些方法的主要目的是為了盡可能保持放線菌自然生長狀態(tài)下的形態(tài)特征。本實驗介紹扦片法。 二、基本原理扦片法扦片法：將放線菌接種在瓊脂平板上，扦上滅菌蓋玻片后培養(yǎng)，使放線菌菌絲沿著培養(yǎng)基表面與蓋玻片的交接處生長而附著在蓋玻上。觀察時，輕輕取出蓋玻片，置于載玻片上直接鏡檢。這種方法可觀察到放線菌自然生長狀態(tài)下的特征，而且便于觀察不同生長期的形態(tài)。 三、實驗器材 1 菌種： 青色鏈霉菌 ( S glaucus ) ，弗氏鏈霉菌 ( S. fradiae ) 。 2 培養(yǎng)基：高氏 1 號瓊脂。 3 儀器或其他用具：平皿、玻

4、璃紙、蓋玻片、玻璃涂棒，以及載玻片，接種環(huán)，接種鏟，鑷子，石炭酸復紅染液，顯微鏡等。 四、操作步驟 培養(yǎng)基制備高氏 I 號培養(yǎng)基配方如下： 可溶性淀粉 20g NaCl 0.5g KNO 3 1g K2HPO4 3H2O 0.5g MgSO4 7H2O 0.5g FeSO47H2O 0.01g 瓊脂 15 25g 水 1000ml pH 7.47.6 1. 稱量和溶化 按配方先稱取可溶性溶粉、放入小燒杯中，并用少量冷水將淀粉調(diào)成糊狀，再加入少于所需水量的沸水中，繼續(xù)加熱，使可溶性淀粉完全溶化。然后再稱取其他各成分依次逐一溶化。對微量成分 FeSO47H2O可先配成高濃度的貯備液按比例換算后再加

5、入，方法是先在 100ml 水中加入 lg 的 FeSO47H2O配成 0.01 g /ml ，再在 1 000ml 培養(yǎng)基中加 1m 1 的 0.01 g ml 的貯備液即可。待所有藥品完全溶解后，補充水分到所需的總體積。2. pH 調(diào)節(jié)、分裝、包扎、滅菌及無菌檢驗 四、操作步驟 扦片法 (1) 倒平板 取融化并冷至大約 50 的高氏 1 號瓊脂約 20ml 倒平板，凝固待用。 (2) 接種 用接種環(huán)挑取菌種斜面培養(yǎng)物（孢子）在瓊脂平板上劃線接種。(3) 扦片 以無菌操作用鑷子將滅菌的蓋玻片以大約 45 角扦入瓊脂內(nèi) ( 扦在接種線上 )( 圖 IV 7) ，扦片數(shù)量可根據(jù)需要而定。 (4)

6、 培養(yǎng) 將扦片平板倒置， 28 培養(yǎng)，培養(yǎng)時間根據(jù)觀察的目的而定，通常 35d 。 (5) 鏡檢 用鑷子小心拔出蓋玻片，擦去背面培養(yǎng)物，然后將有菌的一面朝上放在載玻片上，直接鏡檢。觀察時，宜用略暗光線；先用低倍鏡找到適當視野，再換高倍鏡觀察。如果用 0.1% 美藍對培養(yǎng)后的蓋玻片進行染色后觀察，效果會更好。 四、操作步驟 關(guān)鍵步驟及注意事項1.倒平板要厚一些，接種時劃線要密。2.插片時要有一定角度并與劃線垂直。3.觀察時，宜用略暗光線；先用低倍鏡找到適當視野，更換高倍鏡觀察。 4.如果用0.1%美藍對培養(yǎng)后的蓋玻片進行染色后觀察，效果會更好。 五、實驗報告1 結(jié)果 繪圖說明你所觀察到的放線菌的主要形態(tài)特征。 2