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1、液相色譜基礎(chǔ)知識(shí)Waters LC School 培訓(xùn)教材蒸餾離心電泳過濾超濾色譜常見的分離方式色譜法的分類HPLC分離的機(jī)理典型的儀器配置液相色譜的應(yīng)用（一）“分析型液相色譜”定性及定量分析靈敏度的要求樣品的復(fù)雜性樣品量的要求精度及準(zhǔn)確度的要求容易使用液相色譜的應(yīng)用（二）“制備型液相色譜”分離及純化化合物的穩(wěn)定性樣品的復(fù)雜性制備量的要求純度的要求，及純度的鑒定方法的安全性開發(fā)液相色譜方法問題什么樣的分離結(jié)果是好的?分辨率?什么是色譜的分辨率？分辨率的公式：影響分辨率的因素：K，a，N分辨率的方程 k 是容量因子，表達(dá)了樣品與柱填料的作用強(qiáng)弱。 a 是選擇性系數(shù)，描述兩化合物分離的好壞程度。是

2、化學(xué)因素。 N 是理論塔板數(shù)，描述色譜峰的譜帶展寬程度。色譜柱的柱效 N理論塔板數(shù)計(jì)算公式：Ws 方法Wtan16切線法Wh5.54半峰高W3s9 3sW4s16 4sW5s25 5sInjectInject用“切線”法計(jì)算柱效 不好的色譜柱的柱效反而比好色譜柱的要高，因?yàn)槠渫衔膊糠譁y(cè)不出來Good ColumnBad ColumnInjectInject用“5”法計(jì)算柱效提高柱效的方法色譜柱本身減小填料的顆粒度找到最佳的流速(根據(jù)不同內(nèi)徑)合適的溫度降低溶劑的粘度增加柱長(zhǎng)其他影響柱效的因素柱外效應(yīng) 連接管路 進(jìn)樣器、檢測(cè)器進(jìn)樣體積進(jìn)樣量容量因子 k改變k值的方法調(diào)節(jié)流動(dòng)相的極性、pH、離子強(qiáng)度等梯度淋洗與峰高的關(guān)系與R的關(guān)系選擇性系數(shù) a定義 a =1 時(shí)兩組分分不開，改變a的途徑 改變固定相 改變流動(dòng)相 改變溫度 改變樣品的本身性質(zhì)a ，k，N如何控制分辨率?液相色譜的檢測(cè)模式靈敏度、選擇性、及適應(yīng)能力色譜條件的優(yōu)化開發(fā)液相色譜方法分辨率是色譜分離中主要考慮的因素在開發(fā)色譜方法時(shí)，有很多因素是很重要的。除分辨率之

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