病原微生物及免疫學融合實驗：盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)致多細菌感染膿毒癥_第1頁
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文檔簡介

1、 盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)致多細菌感染膿毒癥(二)實驗2樣品的收集與細菌接種1.手術(shù)器械：剪刀、鑷子；2.長頭滴管、PBS 、15ml無菌離心管；3.電子天平、組織研磨器；4.培養(yǎng)基：腦心浸液瓊脂平板（N）、 胰蛋白胨大豆瓊脂平板(Y)；5.厭氧袋；6.其他：抗凝管、無菌EP管、無菌生理鹽水、三角刮刀、酒精、移液器等。實驗材料小鼠外周血1.樣品收集（1）血漿、血清：挖眼取血，2-3滴(0.1ml)于抗凝管中用于細菌涂布，其余至無菌EP管中制作血清（靜止1h，3000rpm 15min），-80度保存，備細胞因子檢測；（2）腹膜灌洗液：引頸法處死小鼠；剪開腹腔（1cm），用長頭滴管加入3ml無菌PBS，于

2、腹腔內(nèi)左右兩側(cè)各沖洗2次，吸出灌洗液，存放于2個EP管中，其中一個EP管用于細菌涂布，另一EP管1500rpm離心5min，取上清，-80度保存，備細胞因子、MPO檢測。（3）解剖小鼠，取出一部分肝臟(0.05g)+1ml 0.5%CTAB溶液。實驗步驟2.細菌培養(yǎng)（每只老鼠）：（1）樣品稀釋：用無菌生理鹽水對樣本進行10倍系列稀釋，混勻后取以下稀釋度樣本用于接種： 血漿 1:10,1:100； 腹膜灌洗液 1:100,1:1000；（2）接種：用移液器各取某一稀釋度的樣品0.1ml，分別加入腦心浸液瓊脂平板和胰蛋白胨大豆瓊脂平板中央，三角刮刀沾無水乙醇點燃滅菌，冷卻后將樣品涂布均勻。（3）培養(yǎng)：涂布后的腦心浸液瓊脂平板放入?yún)捬醮校蜷_還原劑，封閉厭氧袋；胰蛋白胨大豆瓊脂平板與厭氧袋中的腦心浸液瓊脂平板37度倒置培養(yǎng)，至觀察到菌落。3.組織樣本處理（1）肝稱重；（2）取少量肝組織加入 0.5%CTAB溶液（50mg：1ml）（3）使用組織勻漿器研磨

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