濕熱滅菌器以及濕熱滅菌工藝的驗(yàn)證指南課件

1、濕熱滅菌器以及濕熱滅菌工藝的驗(yàn)證指南協(xié)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)的編制背景及內(nèi)容上海市食品藥品監(jiān)督管理局上海市食品藥品包裝材料測(cè)試所驗(yàn)證部徐敏鳳7/27/20221整理課件有關(guān)濕熱滅菌協(xié)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)編制背景“欣弗”和“齊二藥”的啟示國家審評(píng)中心的相關(guān)規(guī)定GMP的改版國際國內(nèi)的發(fā)展趨勢(shì)起草單位7/27/20222整理課件編制協(xié)會(huì)的參考依據(jù)歐盟醫(yī)藥產(chǎn)品管理法規(guī)第四卷 歐盟有關(guān)人用和獸用醫(yī)藥產(chǎn)品GMP指南 （2008年3月）以及：附錄1 無菌藥品的生產(chǎn)附錄20 質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理FDA的CGMP（2004年9月）Validation of Aseptic Pharmaceutical Processes, Frederick J.

2、 Carleton & James P. Agalloco 1998ISO 11134 Sterilization of health care products- Requirements for validation and routine control- Industrial moist heat sterilization ISO 17665 Sterilization of health care products- Moist heatISO 13408.1Aseptic processing of health care products Part 1 : General re

3、quirementsISO 11138 Sterilization of health care products- Biological indicators其他相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)7/27/20223整理課件指南的結(jié)構(gòu)范圍目的定義產(chǎn)品與設(shè)備滅菌工藝的開發(fā)和驗(yàn)證附錄7/27/20224整理課件指南的內(nèi)容常用的蒸汽滅菌器及滅菌程序FDA與歐盟、ISO在濕熱滅菌器驗(yàn)證方面的內(nèi)容EN285EN554CGMP、ISO以及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)DQ、IQ、OQ、PQ關(guān)于濕熱滅菌選擇決策樹歐盟PDA7/27/20225整理課件指南的內(nèi)容關(guān)于濕熱滅菌工藝驗(yàn)證以及方法學(xué)的研究各國CGMP以及藥典ISO 11134；ISO17665P

4、DA Validation of Moist Heat Sterilization Processes: Cycle Design, Development Qualification and Ongoing ControlFDA 滅菌工藝檢查指南 過度殺滅法和生物負(fù)載法（殘存概率法）定義D值測(cè)試方法與評(píng)價(jià)濕熱滅菌工藝驗(yàn)證的內(nèi)容DQ、IQ、OQ、PQ相關(guān)測(cè)試文件及培訓(xùn)等質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)管理7/27/20226整理課件目的濕熱滅菌驗(yàn)證的目的，就是通過一系列驗(yàn)證試驗(yàn)提供足夠的數(shù)據(jù)和文件依據(jù)，從而找到最有效最合理的滅菌參數(shù)，并把已經(jīng)驗(yàn)證過的飽和蒸汽滅菌設(shè)備和滅菌工藝參數(shù)應(yīng)用到藥品生產(chǎn)的除菌過程中去，以證明用

5、于藥品生產(chǎn)過程中的每一臺(tái)飽和蒸汽滅菌設(shè)備都能起到滅菌的效果，并且對(duì)不同滅菌物品的滅菌過程和滅菌效果具有可靠性和重現(xiàn)性，即驗(yàn)證結(jié)果必須證明生產(chǎn)中所采用的滅菌過程對(duì)經(jīng)過滅菌的物品能夠保證殘存微生物污染的概率或可能性低于百萬分之一。7/27/20227整理課件目的滅菌效果是通過飽和蒸汽、空氣-蒸汽混合物或過熱水等滅菌介質(zhì)所含的熱量與滅菌物品的熱傳遞和產(chǎn)生冷凝水的水合作用來實(shí)現(xiàn)的。冷凝水是在蒸汽回到它的能量較低的液態(tài)時(shí)形成的。這種相變需要蒸汽潛熱向周圍環(huán)境的轉(zhuǎn)化，這樣就加熱了滅菌器和滅菌物品。選擇一種適合的蒸汽滅菌方式，能在滿足產(chǎn)品本身性能的情況下取得滿意的滅菌效果，但是任何一種滅菌方法，都必須在實(shí)際

6、應(yīng)用前予以驗(yàn)證。7/27/20228整理課件定義濕熱滅菌周期的設(shè)計(jì)和開發(fā)與蒸汽滅菌器的性能以及被滅菌產(chǎn)品的適用性有關(guān)。 空氣蒸汽混合氣體（air-steam mixture） 預(yù)真空過程過熱水過程無菌保證水平（Sterility Assurance Level, SAL） 7/27/20229整理課件D VALUED值在基礎(chǔ)溫度下減少一個(gè)Log菌數(shù)所需的時(shí)間。就是在一定溫度下，將微生物殺滅90（即下降一個(gè)對(duì)數(shù)單位）所需的時(shí)間。6543210-1-2-3-4-5-61 2 3 4 5 6 7 8 9 10Log # ofSurvivors殘存物L(fēng)og數(shù)Minutes at 121.1 oC 在1

7、21.1 oC 時(shí)的分鐘D value = 1D值 = 1Thermal death curve熱殺死曲線7/27/202210整理課件D VALUED值微生物名稱 溫度介質(zhì) D值（分）嗜熱芽胞桿菌1055葡萄糖 87.8嗜熱芽胞桿菌1105葡萄糖 32.0嗜熱芽胞桿菌1155葡萄糖 11.7嗜熱芽胞桿菌1215葡萄糖 2.4嗜熱芽胞桿菌 1215葡萄糖乳酸液2.1嗜熱芽胞桿菌121注射用水 3.0嗜熱芽胞桿菌1055葡萄糖 1.3嗜熱芽胞桿菌105注射用水 13.7嗜熱芽胞桿菌115注射用水 2.17/27/202211整理課件Z VALUEZ值Z值是指使某一種微生物的D值下降一個(gè)對(duì)數(shù)單位時(shí)

8、，滅菌溫度應(yīng)升高的度數(shù)。 Z值對(duì)于比較不同滅菌過程溫度的標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間F0值計(jì)算是必須的 10121.1111.1131.110.1Log ofD ValueD值的Log數(shù)Z Value = 10 oCZ 值 = 10 oCTemperature oC 溫度7/27/202212整理課件Z VALUEZ值 嗜熱芽胞桿菌在不同溶液中的Z值溶液 Z值（）5葡萄糖水溶液 10.3注射用水 8.45葡萄糖乳酸液 11.3PH7磷酸鹽緩沖液 7.6平均 9.47/27/202213整理課件F值F值可用于衡量滅菌的有效性。F(T,z)是采用一定的Z值計(jì)算得到的一個(gè)容器或一個(gè)產(chǎn)品在T度下的等效滅菌時(shí)間?？筛鶕?jù)

9、挑戰(zhàn)的微生物數(shù)、微生物懸浮液的類型、D值和F一起，來評(píng)估滅菌程序殺滅微生物的有效性。當(dāng)Z取10，溫度為121.1時(shí)，滅菌過程的殺滅力（process lethality）則為Fo。采用以下公式，或許多公開的參考文獻(xiàn)中可方便地計(jì)算出滅菌的殺滅力。7/27/202214整理課件LETHALITY （F0值）溫度對(duì)F0值的影響For each minute at:每一分鐘在111.1 oC115.0 oC118.0 oC119.0 oC120.0 oC121.1 oC122.0 oC131.1 oCequivalent F0 *:相應(yīng)的 F0： 0.1 minute at 121.1 oC0.25

10、在121.1 oC時(shí)的分鐘 0.50.630.7611.2610*注：滅菌溫度為 121.1 oC， Z =107/27/202215整理課件定義 初始菌（bioburden） 生物指示劑（biological indicator） 化學(xué)指示劑 無菌 滅菌 工藝驗(yàn)證過程 7/27/202216整理課件產(chǎn)品與設(shè)備產(chǎn)品以及包裝的蒸汽滅菌適用性 滅菌選擇決策樹產(chǎn)品的包裝適用性蒸汽滅菌器的安裝、驗(yàn)證和維護(hù)對(duì)蒸汽或過熱水等滅菌介質(zhì)的建議用于驗(yàn)證的測(cè)試儀器7/27/202217整理課件關(guān)于蒸汽滅菌器的標(biāo)準(zhǔn)HIM 1020EN 285EN 554ISO 11134（GB 18278)ISO 17665其他P

11、DA或ISPE指南7/27/202218整理課件濕熱滅菌器驗(yàn)證的國際標(biāo)準(zhǔn)濕熱滅菌的國際標(biāo)準(zhǔn)一般比較詳盡和具備可操作性，并且也代表了目前最先進(jìn)的安裝、運(yùn)行、性能確認(rèn)理念。它們將滅菌過程的驗(yàn)證和常規(guī)控制的有關(guān)內(nèi)容作了更詳細(xì)、更明確的規(guī)定，包括滅菌設(shè)備的確認(rèn)、安裝檢查、包裝適用性、裝載試驗(yàn)、空氣過濾器的檢查、蒸汽的質(zhì)量及管理、真空檢查和再驗(yàn)證周期等等內(nèi)容。7/27/202219整理課件蒸汽滅菌器的DQDQ在選用蒸汽滅菌器時(shí)，首先應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的工藝來考慮蒸汽滅菌器的選型，主要是裝量的大小、滅菌溫度與時(shí)間的可控制性、滅菌程序的可選擇性、滅菌時(shí)腔室內(nèi)溫度的一致性、升溫與降溫速率的穩(wěn)定性、控制及記錄系統(tǒng)的可靠

12、性等。 7/27/202220整理課件蒸汽滅菌器的IQ/OQ/PQ對(duì)蒸汽滅菌設(shè)備的各項(xiàng)控制內(nèi)容詳細(xì)定義：排水報(bào)警；空氣去除；自動(dòng)控制器；生物指示劑設(shè)備腔室的深度、寬度和高度；滅菌周期的設(shè)計(jì)、極限挑戰(zhàn)周期的確認(rèn)；蒸汽供應(yīng)管路的檢查； 門的壓力試驗(yàn)；等效滅菌時(shí)間、最小滅菌時(shí)間以及雙倍最小滅菌時(shí)間；失效的風(fēng)險(xiǎn)以及管理；參考測(cè)點(diǎn)的位置；壓力試驗(yàn)（真空度）、泄漏率；安裝偏差以及處理；7/27/202221整理課件蒸汽滅菌器的IQ/OQ/PQ設(shè)備本身有足夠的產(chǎn)熱能力（容量），以便有利于滅菌周期的設(shè)計(jì)和極限挑戰(zhàn)周期的確認(rèn)；有利于研究等效滅菌時(shí)間、最小滅菌時(shí)間以及雙倍最小滅菌時(shí)間。例如：對(duì)蒸汽供應(yīng)管路有相應(yīng)的

13、規(guī)定，并制訂行之有效的檢查指南；對(duì)門的壓力試驗(yàn)有相應(yīng)的規(guī)定，并制訂行之有效的檢查指南；各類報(bào)警失效的風(fēng)險(xiǎn)分析以及管理；參考測(cè)點(diǎn)位置的確認(rèn)；壓力試驗(yàn)（真空度）、泄漏率；安裝偏差以及處理等等。選擇空氣過濾器也必須考慮它的過濾效率，一般應(yīng)不小于99.5%（0.3m）。7/27/202222整理課件蒸汽滅菌器的IQ/OQ/PQ如果選擇預(yù)真空或脈動(dòng)真空滅菌器，則應(yīng)確認(rèn)真空度的范圍和控制指標(biāo)。對(duì)蒸汽滅菌器的溫度顯示也有詳細(xì)的規(guī)定，例如：溫度顯示可以是數(shù)字的或其他類似物，范圍在50150K，精度不小于1；溫度若數(shù)字顯示，則不能小于0.1K；溫度測(cè)量點(diǎn)的響應(yīng)時(shí)間不大于5s；滅菌時(shí)間顯示的精度應(yīng)在2.5%(5分

14、鐘以下)和1（5分鐘以上含5分鐘）等。對(duì)于一個(gè)完整的滅菌器使用的溫度探頭，除了溫度探頭外還有一個(gè)不能忽視的地方是它的導(dǎo)線部分，導(dǎo)線外面的硅膠管是抗高溫，壓力和濕度的。當(dāng)導(dǎo)線的軟管部分對(duì)于高溫，壓力，水蒸氣的抗性不好的時(shí)候，水蒸氣就會(huì)進(jìn)入軟管內(nèi)部，對(duì)里邊的導(dǎo)線的電阻產(chǎn)生影響從而產(chǎn)生較大的漂移，而導(dǎo)致測(cè)量誤差超過我們規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。7/27/202223整理課件滅菌介質(zhì)和其他輔助設(shè)施對(duì)蒸汽質(zhì)量的測(cè)試項(xiàng)目：過熱值(Superheat)；蒸汽干燥值（Dryness value）；不冷凝氣體（non-condensable gases）；清潔蒸汽測(cè)試（化學(xué)項(xiàng)目，含藥典注射用水項(xiàng)下的絕大部分內(nèi)容）SVMSSt

15、eam Quality Test Apparatus Kit用于驗(yàn)證的測(cè)試儀器 具備進(jìn)行熱均勻性試驗(yàn)的驗(yàn)證裝置并符合規(guī)定要求：測(cè)量?jī)x器的精度大于被測(cè)滅菌設(shè)備的允差范圍（一般小于0.5）7/27/202224整理課件滅菌工藝的開發(fā)及驗(yàn)證兩種滅菌方法 過度殺滅法殘存概率法用于注射劑生產(chǎn)的輔助物料的滅菌工藝 用于注射劑的滅菌工藝 滅菌工藝驗(yàn)證的方法滅菌驗(yàn)證形成的相關(guān)文件 7/27/202225整理課件細(xì)菌的耐熱性濕熱滅菌耐熱性強(qiáng)的孢子主要有二個(gè)屬：梭菌屬 Clostridium，它一般是嚴(yán)格的厭氧菌(anaerobe)；芽孢桿菌屬 Bacillus是需氧菌(aerobe)，它可能是兼性厭氧菌。最常用

16、的菌是Bacillus subtilis,枯草芽孢桿菌；Geobacillus stearothermophilus嗜熱脂肪芽孢桿菌，Bacillus coagulans (ATCC51232)凝結(jié)芽孢桿菌，Clostridium sporogenes梭狀芽孢桿菌，和Clostridium thermosaccharolyticum糖梭菌。 7/27/202226整理課件過度殺滅法工業(yè)上蒸汽滅菌工藝的開發(fā)，滅菌周期的設(shè)定和應(yīng)用，一般使用過度殺滅法（the overkill method）。使用過度殺滅法的目標(biāo)是確保達(dá)到一定程度的無菌保證，而不管裝載物的實(shí)際負(fù)載生物的數(shù)量多少和耐熱性如何。 SA

17、L（無菌保證水平）7/27/202227整理課件過度殺滅法F0D121（LogN0Log NF）12分鐘很少發(fā)現(xiàn)自然生成的微生物擁有超過0.5分鐘的D121值。過度殺滅法假設(shè)的微生物負(fù)載數(shù)量和抵抗力都要高于實(shí)際。大多數(shù)微生物的耐熱性都要比這低，因此能夠提供很高程度的無菌保證。即便采用濕熱滅菌工藝為過度殺滅法（the overkill method），仍然需要對(duì)被滅菌產(chǎn)品的初始菌進(jìn)行周期監(jiān)測(cè)，并最好定期采用生物指示劑測(cè)試。國際法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)簡(jiǎn)述7/27/202228整理課件WHO GMP 20065.1 Whenever possible, products should preferably be

18、 terminally sterilized by heat in their final container. Where it is not possible , a decision should be taken to use an alternative method of terminal sterilization following filtration and/or aseptic processing.5.2 Sterilization can be achieved by the use of moist or dry heat, .Where possible & pr

19、acticable, heat sterilization is the method of choice.5.1 可能條件下，采用最終容器中進(jìn)行熱力滅菌的方法是無菌藥品首選的滅菌法。如無法在最終容器中采用熱力方法滅菌時(shí)，則應(yīng)在無菌操作和/或除菌過濾后采用其他可選用的最終滅菌方法。5.2 可使用濕熱、干熱滅菌 。只要條件允許，就應(yīng)選用熱力滅菌法。7/27/202229整理課件WHO Sterilization by moist heat6.4 Sterilization by moist heat is suitable only for water-wettable materials an

20、d aqueous formulations. . The temperature recorder should normally be independent of the controller, and there should be an independent temperature indicator, the reading from which should be routinely checked against the chart recorder during the sterilization period. For sterilizers fitted with a

21、drain at the bottom of the chamber, it may also be necessary to record the temperature at this position throughout the sterilization period. There should be regular leak tests on the chamber when a vacuum phase is part of the cycle.6.4 濕熱滅菌法僅適用于水浸潤(rùn)性材料或水溶液。程序控制系統(tǒng)應(yīng)獨(dú)立于溫度記錄儀表，并配置獨(dú)立的溫度顯示器。滅菌過程中，溫度顯示器的讀數(shù)應(yīng)

22、與滅菌曲線記錄對(duì)照。腔室底部裝有排水口的滅菌柜，有必要測(cè)定并記錄該點(diǎn)在滅菌全過程中的溫度數(shù)據(jù)。如滅菌程序中含抽真空，則應(yīng)定期對(duì)腔室進(jìn)行檢漏試驗(yàn)。7/27/202230整理課件WHO Sterilization by moist heat6.5 The items to be sterilized, other than products in sealed containers, should be wrapped in a material that allows the removal of air and the penetration of steam but prevents rec

23、ontamination after sterilization. All parts of the load should be in contact with water or saturated steam at the required temperature for the required time.6.5 如被滅菌品不是最終滅菌產(chǎn)品，則應(yīng)使用合適的材料將其適當(dāng)包扎，所用材料及包扎方式應(yīng)利于排除空氣，有利于蒸汽穿透并能防止滅菌后的二次污染。在規(guī)定的滅菌溫度和滅菌時(shí)間內(nèi)，所有被滅菌品應(yīng)與水或飽和蒸汽相接觸.蒸汽的潛熱為540卡/克，有空氣處滅菌效果差，脈動(dòng)真空水噴淋等就是要解決潛熱問

24、題7/27/202231整理課件WHO Sterilization by dry heat6.7 Sterilization by dry heat may be suitable for non-aqueous liquids or dry powder products. The process include air circulation within the chamber and the maintenance of a positive pressure to prevent the entry of non-sterile air. If air is supplied, it

25、 should be passed through a microorganism retaining filter . Where sterilization by dry heat is also intended to remove pyrogens, challenge tests using endotoxins will be required as part of the validation.6.7 干熱滅菌適用于非水性液體或干粉狀產(chǎn)品。滅菌過程中腔室內(nèi)的空氣需循環(huán)并保持正壓，以阻止非無菌空氣的進(jìn)入；干熱滅菌如有送風(fēng)，則空氣應(yīng)通過除菌過濾器（HEPA）過濾。當(dāng)干熱滅菌用于去除熱

26、原時(shí)，驗(yàn)證應(yīng)包括內(nèi)毒素挑戰(zhàn)試驗(yàn)7/27/202232整理課件歐盟CGMP中對(duì)蒸汽滅菌的規(guī)定原則為降低微生物、微粒和熱原污染的風(fēng)險(xiǎn)，無菌藥品的生產(chǎn)應(yīng)有各種特殊要求。這在很大程度上取決于生產(chǎn)人員的技能、所接受的培訓(xùn)及其工作態(tài)度。質(zhì)量保證極為重要，無菌藥品的生產(chǎn)必須嚴(yán)格按照精心制訂并經(jīng)驗(yàn)證的方法及規(guī)程進(jìn)行。產(chǎn)品的無菌或其它質(zhì)量特性絕不能僅依賴于任何形式的最終操作或成品檢驗(yàn)。7/27/202233整理課件歐盟CGMP中對(duì)蒸汽滅菌的規(guī)定無菌藥品生產(chǎn)所需的潔凈區(qū)一般可分為4個(gè)級(jí)別：A級(jí)高風(fēng)險(xiǎn)操作區(qū)，如：灌裝區(qū)，放置膠塞桶、敞口安瓿瓶、敞口西林瓶的區(qū)域及無菌裝配/連接操作的區(qū)域。通常用層流操作臺(tái)/罩來維護(hù)該

27、區(qū)的環(huán)境狀態(tài)。層流系統(tǒng)在其工作區(qū)域必須均勻送風(fēng)，風(fēng)速為0.36-0.54m/s（指導(dǎo)值）。應(yīng)有數(shù)據(jù)證明層流的狀態(tài)并須驗(yàn)證。在密閉的隔離操作器或手套箱內(nèi)，可使用單向流或較低的風(fēng)速。B級(jí)指無菌配制和灌裝A級(jí)區(qū)所處的背景區(qū)域。C級(jí)和D級(jí)指生產(chǎn)無菌產(chǎn)品過程中重要程度較次的清潔操作區(qū)。7/27/202234整理課件歐盟CGMP中對(duì)蒸汽滅菌的規(guī)定最終滅菌產(chǎn)品28原料和大多數(shù)產(chǎn)品的準(zhǔn)備/配制至少應(yīng)在D級(jí)區(qū)進(jìn)行，以降低粒子和微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)，并與過濾及滅菌操作的要求相適應(yīng)。微生物污染風(fēng)險(xiǎn)比較高時(shí)，如容易長(zhǎng)菌的產(chǎn)品、配制后要等相當(dāng)長(zhǎng)時(shí)間方可滅菌的產(chǎn)品或因故主要不在密閉容器內(nèi)進(jìn)行配制操作的產(chǎn)品，配制必須在C級(jí)環(huán)境

28、中進(jìn)行。29最終滅菌產(chǎn)品的灌裝應(yīng)至少在C級(jí)區(qū)進(jìn)行。30當(dāng)環(huán)境對(duì)產(chǎn)品污染的風(fēng)險(xiǎn)比較大時(shí)，例如灌裝速度慢或容器是廣口瓶、或是須暴露數(shù)秒鐘后方可壓塞的產(chǎn)品，必須在C級(jí)區(qū)內(nèi)局部A級(jí)條件下灌封。軟膏、霜?jiǎng)?、懸濁液以及乳劑一般?yīng)在C級(jí)區(qū)配制和灌封，然后作最終滅菌。7/27/202235整理課件歐盟CGMP中對(duì)蒸汽滅菌的規(guī)定80應(yīng)監(jiān)控滅菌前產(chǎn)品的微生物污染水平并確立控制標(biāo)準(zhǔn)，此標(biāo)準(zhǔn)與所采用滅菌方法的效果相關(guān)。必要時(shí)，還應(yīng)監(jiān)控?zé)嵩?。可能情況下，應(yīng)在緊挨灌裝點(diǎn)的位置，用除菌過濾器將所有藥液，尤其是大容量注射劑進(jìn)行除菌過濾。81無菌操作所需的物料、容器、設(shè)備和任何其它物品都應(yīng)滅菌，并通過與墻密封的雙扉滅菌柜進(jìn)入無

29、菌操作區(qū)，或以其它方式進(jìn)入無菌操作區(qū)，但不得引入污染。非燃性氣體應(yīng)通過除菌過濾器進(jìn)入潔凈區(qū)。82任何新的工藝都須驗(yàn)證其有效性。應(yīng)根據(jù)工藝及設(shè)備的實(shí)際運(yùn)行情況，定期進(jìn)行再驗(yàn)證，確認(rèn)已驗(yàn)證的狀態(tài)，或在工藝及設(shè)備有重要變更后，進(jìn)行再驗(yàn)證。7/27/202236整理課件歐盟CGMP中對(duì)蒸汽滅菌的規(guī)定滅菌83所有的滅菌工藝都應(yīng)驗(yàn)證。應(yīng)特別注意那些在現(xiàn)行的歐洲藥典中沒有收載的滅菌方法或者被滅菌產(chǎn)品不是一種簡(jiǎn)單的水溶液或油溶液時(shí)所采用滅菌方法。可能條件下，應(yīng)盡量采用熱力滅菌法。任何情況下，所采用的滅菌工藝必須同時(shí)獲得注冊(cè)和安監(jiān)這個(gè)部門的認(rèn)可。84任何滅菌工藝在投入使用前，都必須通過物理檢測(cè)手段和必要時(shí)的生物

30、指示劑試驗(yàn)，來驗(yàn)證其對(duì)產(chǎn)品的適用性及滅菌效果，即每種被滅菌品的所有部位都達(dá)到了設(shè)定的滅菌要求。應(yīng)對(duì)工藝的有效性定期進(jìn)行再驗(yàn)證（一年至少一次）。設(shè)備有重要變更后，應(yīng)進(jìn)行再驗(yàn)證。應(yīng)保存再驗(yàn)證的結(jié)果和記錄。85所有的被滅菌品均須按規(guī)定的要求處理，以獲得良好的滅菌效果，滅菌程序的設(shè)計(jì)應(yīng)確保滅菌完全。7/27/202237整理課件歐盟CGMP中對(duì)蒸汽滅菌的規(guī)定滅菌86應(yīng)通過驗(yàn)證確立所有滅菌程序的裝載方式。87應(yīng)將生物指示劑作為滅菌監(jiān)控的補(bǔ)充手段。應(yīng)按供貨商的要求保存和使用生物指示劑，并通過陽性對(duì)照試驗(yàn)來確認(rèn)其質(zhì)量。使用生物指示劑時(shí)，應(yīng)采取嚴(yán)格措施，防止由其所致的微生物污染。88應(yīng)當(dāng)有明確區(qū)分已滅菌產(chǎn)品和

31、未滅菌產(chǎn)品的方法。每一車（盤或其它裝載設(shè)備）產(chǎn)品或物料均應(yīng)貼簽，清晰地注明品名、批號(hào)并標(biāo)明是否已經(jīng)滅菌。必要時(shí)，可用濕熱滅菌指示帶來指示一批（或一個(gè)亞批）是否已滅過菌，但事實(shí)上，滅菌指示帶并不能確保該批的無菌特性。89每一個(gè)滅菌批次都應(yīng)有滅菌記錄。應(yīng)把滅菌記錄作為該批產(chǎn)品放行與否的一個(gè)依據(jù)。7/27/202238整理課件歐盟CGMP中對(duì)蒸汽滅菌的規(guī)定熱力滅菌90每次熱力滅菌均應(yīng)用適當(dāng)大小的記錄紙記錄滅菌過程的時(shí)間/溫度曲線。也可用具有適當(dāng)精確度和準(zhǔn)確度的其他設(shè)備記錄。應(yīng)通過驗(yàn)證確定監(jiān)控和/或記錄滅菌溫度探頭的位置?？赡軛l件下，在驗(yàn)證過程中，應(yīng)在同一部位安放另一支獨(dú)立的測(cè)溫探頭作對(duì)照。91可使用

32、化學(xué)或生物指示劑，但它們不得替代物理測(cè)試。92. 應(yīng)留有足夠時(shí)間保證所有被滅菌品都達(dá)到設(shè)定的滅菌溫度后，才開始計(jì)算滅菌時(shí)間。每種裝載方式所需升溫時(shí)間均須測(cè)定。93. 在滅菌高溫階段后，應(yīng)有措施防止冷卻過程中已滅菌品遭受污染。任何與產(chǎn)品相接觸的冷卻用液體或氣體都應(yīng)當(dāng)是滅過菌的，除非能證明任何滲漏的容器不可能被批準(zhǔn)投放市場(chǎng)。7/27/202239整理課件歐盟CGMP中對(duì)蒸汽滅菌的規(guī)定濕熱滅菌94. 濕熱滅菌程序監(jiān)控的參數(shù)應(yīng)包括滅菌溫度和壓力。程序控制儀表通常應(yīng)獨(dú)立于監(jiān)控及記錄儀表。如采用自控和監(jiān)測(cè)系統(tǒng)，該系統(tǒng)應(yīng)經(jīng)過驗(yàn)證，以確保符合關(guān)鍵工藝的要求。該系統(tǒng)應(yīng)能記錄系統(tǒng)本身以及工藝運(yùn)行過程中出現(xiàn)的故障，

33、操作人員應(yīng)監(jiān)控這類故障的發(fā)生。應(yīng)定期將獨(dú)立的溫度顯示器的讀數(shù)與滅菌過程中記錄獲得的圖譜對(duì)照。對(duì)腔室底部裝有排水口的滅菌柜而言，可能需要測(cè)定并記錄該點(diǎn)在滅菌全過程中的溫度數(shù)據(jù)。如滅菌程序中包括抽真空操作，則應(yīng)經(jīng)常對(duì)腔室作檢漏試驗(yàn)。95. 被滅菌品如果不是密封容器中的產(chǎn)品，則應(yīng)用合適的材料將其適當(dāng)包扎，所用材料及包扎方式應(yīng)有利于空氣排放、蒸汽穿透并在滅菌后能防止污染。在規(guī)定的溫度和時(shí)間內(nèi)，被滅菌物品所有部位均應(yīng)與滅菌劑充分接觸。96. 應(yīng)注意，滅菌用蒸汽應(yīng)達(dá)到適當(dāng)?shù)馁|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。蒸汽中含添加劑的量不應(yīng)給產(chǎn)品或設(shè)備造成污染。7/27/202240整理課件歐盟滅菌選擇決策樹歐洲藥典（2006年版）決策樹7

34、/27/202241整理課件歐盟EN285、EN554、EN866、CEN/TC 54、CEN/TC 269對(duì)濕熱滅菌的規(guī)定：IQ/OQ/PQ必須包含： 殺死率研究（Lethality）包含最小裝載、飽和裝載和大致裝載三種； 極限最低溫度與最大值相差不大于3K； 等效滅菌時(shí)間的偏差不大于15s（對(duì)最大的滅菌設(shè)備不大于30s）； 對(duì)于參考測(cè)點(diǎn)，在前60s內(nèi)溫度最大偏差不大于5K，在保溫段溫度最大偏差不大于2K（對(duì)于不同的裝載稍微有點(diǎn)細(xì)小變化）； 空氣過濾器的流速應(yīng)不大于0.13Kpa/min； 空氣移除速度的檢查； 生物指示劑的分層布置（建議滅菌物品的厚度不大于30mm）； 若必需，則需測(cè)物品的

35、微生物負(fù)載； 要做包裝適應(yīng)性研究； 以最小值為控制溫度；7/27/202242整理課件歐盟EN285、EN554、EN866、CEN/TC 54、CEN/TC 269對(duì)濕熱滅菌的規(guī)定：驗(yàn)證應(yīng)分為試運(yùn)行（OQ）和性能確認(rèn)（PQ），而PQ應(yīng)包含物理性能和微生物殺滅試驗(yàn)；OQ包含以上第3條的全部?jī)?nèi)容外，還應(yīng)有驗(yàn)證計(jì)劃（操作指令）、備品和維修資料檢查核實(shí)、測(cè)試規(guī)程、每種裝載的試驗(yàn)計(jì)劃、測(cè)試設(shè)備的校準(zhǔn)規(guī)程和自動(dòng)控制系統(tǒng)的性能確認(rèn)； OQ還包含：蒸汽、水的質(zhì)量控制、測(cè)量設(shè)備必須包含12個(gè)以上的溫度傳感器，并應(yīng)進(jìn)行至少3次的重復(fù)試驗(yàn)；真空度試驗(yàn)； PQ應(yīng)包含極限裝載試驗(yàn)、空氣探測(cè)器的檢查及報(bào)警、報(bào)警及處理、

36、再確認(rèn)程序等； 熱穿透試驗(yàn)的詳細(xì)記錄以及培訓(xùn)記錄 總體評(píng)價(jià)并指導(dǎo)最佳滅菌效果的裝載量。7/27/202243整理課件FDA 的CGMP對(duì)濕熱滅菌的規(guī)定 驗(yàn)證研究的目的是為了論證滅菌程序的效用。在一定的周期之后，必須進(jìn)行再驗(yàn)證。裝載產(chǎn)品的情況，生物指示劑以及溫度探頭的位置應(yīng)該被記錄在驗(yàn)證記錄中。根據(jù)驗(yàn)證中的裝載形式，用來指導(dǎo)并應(yīng)該記錄后續(xù)生產(chǎn)的所有批次的裝載情況。在蒸汽滅菌程序中，從滅菌腔體內(nèi)去除空氣是一個(gè)重要的環(huán)節(jié)。因?yàn)榭諝飧魺岬奶匦?，使得能量不容易傳遞，所以其得到的熱致死率比純蒸汽要小。同時(shí)必須注意到，微生物的熱抵抗能力隨著不同的被滅菌的物質(zhì)不同而不同。由于這個(gè)原因，在滅菌驗(yàn)證中，必須仔細(xì)考

37、慮包裹生物指示劑的材料的特性和類型，以保證其具有代表性。7/27/202244整理課件FDA 的CGMP對(duì)濕熱滅菌的規(guī)定應(yīng)該評(píng)估滅菌器或滅菌車（運(yùn)用于在線滅菌）內(nèi)熱量難以達(dá)到的潛在點(diǎn)。例如，在管道內(nèi)安裝過濾器會(huì)導(dǎo)致壓差的出現(xiàn)，這會(huì)顯著的導(dǎo)致在下游形成溫度降。我們推薦在過濾器下游使用生物指示劑?？蛰d驗(yàn)證是為了評(píng)估滅菌器內(nèi)各點(diǎn)的均勻性（如溫度、壓差）。對(duì)于均勻性的研究，應(yīng)該通過校驗(yàn)后的測(cè)量設(shè)備來完成。7/27/202245整理課件FDA 的CGMP對(duì)濕熱滅菌的規(guī)定熱穿透研究必須在在確定滅菌裝載后。在裝載后的腔體內(nèi)進(jìn)行滅菌驗(yàn)證可以論證熱量進(jìn)入滅菌物品的效率以及確認(rèn)潛在滅菌不足物品的熱穿透狀況。在包括

38、最難滅菌點(diǎn)的裝載物品中放置生物指示劑是一個(gè)確認(rèn)滅菌過程效能的最直接的途徑。一般來說，生物指示劑應(yīng)該貼近溫度探頭放置，以便來評(píng)估生物熱致死率與基于熱輸入而預(yù)測(cè)得出的熱致死率之間的關(guān)系。當(dāng)確定了最難滅菌的物質(zhì)后，就必須特別注意過濾器、填充材料、泵的滅菌情況。此外，還必須特別注意緊緊包裹的地方、厚厚打包的物品、考慮安全而系得很緊的材料、非常長(zhǎng)的管子、無菌過濾器、防潮濕過濾器，等等。 7/27/202246整理課件PDA的指南滅菌選擇決策樹D值的變化取決于以下因素：-挑戰(zhàn)試驗(yàn)所用的微生物種類-挑戰(zhàn)微生物的貯存條件-挑戰(zhàn)微生物培養(yǎng)與收集的條件-挑戰(zhàn)微生物的培養(yǎng)基或懸浮液的情況-挑戰(zhàn)微生物的恢復(fù)及培養(yǎng)條件

39、-滅菌柜的滅菌溫度-在D值測(cè)試時(shí)，挑戰(zhàn)微生物的起始溫度，如是從冰浴開始還是從室溫開始-挑戰(zhàn)微生物懸浮和恢復(fù)介質(zhì)的類型-挑戰(zhàn)微生物BI在滅菌后保持的溫度及時(shí)間-蒸汽的飽和程度-內(nèi)包裝材料及外包裝材料的情況。7/27/202247整理課件ISO 11134和ISO17665對(duì)濕熱滅菌的規(guī)定：確定滅菌設(shè)備的性能、公用設(shè)施、組件、輔助設(shè)備以及控制裝置的性能；公用設(shè)施包含蒸汽的純度和質(zhì)量；壓縮空氣應(yīng)不影響產(chǎn)品的安全；空氣過濾器、結(jié)構(gòu)組件的材質(zhì)應(yīng)符合規(guī)定；溫度、時(shí)間、壓力、溫度和壓力的改變速率應(yīng)自動(dòng)化控制并記錄；設(shè)置報(bào)警點(diǎn)用于驗(yàn)證的儀器精度應(yīng)高于滅菌設(shè)備控制器和記錄器的精度；應(yīng)進(jìn)行包裝適用性研究；7/27

40、/202248整理課件生物負(fù)載法（殘存概率法）通常來說不耐熱產(chǎn)品或物品的滅菌就不能使用過度殺滅法了。這就需要我們所建立的滅菌周期必須能恰當(dāng)?shù)貧缥⑸镓?fù)載，但是不能導(dǎo)致不可接受的產(chǎn)品分解。這樣的滅菌工藝的建立就有賴于研究產(chǎn)品上的微生物數(shù)量和耐熱能力。一旦微生物負(fù)載的數(shù)量和耐熱能力得以明確，就可以設(shè)計(jì)出一個(gè)能達(dá)到SAL小于10-6的滅菌周期。7/27/202249整理課件D值測(cè)試有二種主要的方法來確定D值：存活曲線法和陰性分?jǐn)?shù)法。存活曲線法：本法將挑戰(zhàn)生物指示劑部分滅菌，然后對(duì)存活菌進(jìn)行計(jì)數(shù)（孢子計(jì)數(shù)）陰性分?jǐn)?shù)法：陰性分?jǐn)?shù)法主要有二種，一種是Spearman-Karber Method，此法根據(jù)

41、平均存活時(shí)間來分析（9）；另一種是Stumbo,Murphy, and Cochran Method，最大可能數(shù)方法（10）。二種陰性分?jǐn)?shù)法的評(píng)估都要求數(shù)據(jù)在可計(jì)數(shù)的范圍，即結(jié)果應(yīng)當(dāng)可以分為二組，有些單元為陽性結(jié)果，另一些則為陰性結(jié)果。Spearman-Karber法要求測(cè)試中，至少一次全部為陽性，另一次則全部為陰性。7/27/202250整理課件D值測(cè)試以下情況需測(cè)定D值：-在開發(fā)滅菌程序過程中，當(dāng)采用生物負(fù)荷/生物指示劑或生物負(fù)荷下降法需確定產(chǎn)品分離菌的耐熱特性時(shí)-當(dāng)產(chǎn)品處方變更時(shí)-在常規(guī)生產(chǎn)監(jiān)控中，需要確定環(huán)境分離耐熱菌的耐熱特性時(shí)-確認(rèn)將用于驗(yàn)證試驗(yàn)的商業(yè)性生物指示劑（如孢子條、安瓿/

42、小瓶類生物指示劑）標(biāo)簽所示的D值-當(dāng)將耐熱孢子直接接種至物料或產(chǎn)品時(shí)，需要確定生物指示劑的D值時(shí)-確定產(chǎn)品耐熱分離菌（從環(huán)境中定期分離，通過篩選試驗(yàn)證明有耐熱性的微生物）7/27/202251整理課件生物負(fù)載法（殘存概率法）當(dāng)對(duì)一個(gè)給定注射劑溶液的滅菌程序進(jìn)行驗(yàn)證時(shí)，通常將孢子接種入需驗(yàn)證的藥液中，測(cè)試D值。測(cè)得D值后，有必要通過回收試驗(yàn)，如用被評(píng)估孢子的細(xì)菌/真菌抑制試驗(yàn)、過慮試驗(yàn)或由Blank和Cooney開發(fā)的方法(19)，來證明產(chǎn)品本身對(duì)挑戰(zhàn)菌無殺菌或抑菌作用。如回收試驗(yàn)證明注射劑產(chǎn)品有殺菌或抑菌作用，那可能有幾種處理方法。我們也許可以采用無殺菌或抑菌作的模擬品。模擬溶液的水的活度應(yīng)當(dāng)

43、與被滅菌品的相似。如果一個(gè)企業(yè)有一個(gè)模擬品能用于數(shù)個(gè)最終滅菌產(chǎn)品，則這一模擬品便稱為“master solution” -基準(zhǔn)溶液，用于以后的研究。7/27/202252整理課件常用的蒸汽滅菌器介紹下排式飽和蒸汽過熱水作為滅菌介質(zhì)噴淋式水浴式蒸汽/空氣混合物（SAM）作為滅菌介質(zhì)脈動(dòng)真空其他7/27/202253整理課件下排式蒸汽滅菌柜下排式蒸汽滅菌柜工作原理圖1、蒸汽進(jìn)入2、高溫度蒸汽比重小，在上部3、蒸汽不斷進(jìn)入4、冷凝水及低溫度空氣在底部被擠走Gravity Displacement AutoclaveAt equal temperature and pressure, air is i

44、n fact on the average 1.5 times denser than steam.7/27/202254整理課件下排式蒸汽滅菌柜-續(xù)蒸汽比同一溫度和壓力下的空氣輕一倍多，在加熱過程中，下排式蒸汽滅菌柜往往會(huì)出現(xiàn)難以排除空氣的問題。如被滅菌品是過濾器一類物品，濾芯中的空氣更難排除，就很容易出現(xiàn)滅菌不完全的情況。因此，設(shè)計(jì)了具有高真空及多次真空功能輔助手段的滅菌柜，以及水噴淋式滅菌柜7/27/202255整理課件水噴淋式滅菌柜示意圖循環(huán)泵冷卻水工業(yè)蒸汽滅菌柜腔 室水壓縮空氣沒標(biāo)出Water Cascade Sterilizers 7/27/202256整理課件過熱水噴淋滅菌柜管路

45、簡(jiǎn)圖Sterile filter：除菌過濾器Compressed air：壓縮空氣Circulating water：循環(huán)水Cooling water：冷卻水Steam：蒸汽Cooling water out：冷卻水出Condensate：冷凝水Heat exchanger：熱交換器Circulating pump：循環(huán)泵Spraying system：噴淋系統(tǒng)Level control：水位控制Pressure vessel：壓力容器Sterile filter安全閥7/27/202257整理課件過熱水噴淋/溫度-壓力曲線Temperature/Pressure ChartHot Water

46、 Shower ProcessTemperature (C)Pressure (bar)Time (min)02040601208010000.51.01.52.02.5140120100 80 60 40 20 0排氣Fo7/27/202258整理課件Hot water spray sterilizer 本圖為旋轉(zhuǎn)式噴淋滅菌柜水噴淋-高效熱交換，程序短可用于乳劑、氨基酸等配外部雙管板熱交換器過程：進(jìn)PW蒸汽加熱循環(huán)水 在過壓保護(hù)條件下 水噴淋產(chǎn)品 達(dá)到滅菌溫度-保溫冷卻平衡壓力-出料轉(zhuǎn)速：1-5轉(zhuǎn)/分產(chǎn)品溫差可控 -0.07MPa進(jìn)蒸汽： 運(yùn)行3次121保溫至設(shè)定的時(shí)間排氣抽真空干燥約15分

47、鐘至設(shè)定的滅菌溫度進(jìn)過濾氣體平衡壓力程序結(jié)束7/27/202267整理課件高真空滅菌程序示意圖溫度真空高真空的目的：消除冷點(diǎn)，讓蒸汽與被滅菌品充分接觸High-Vacuum Sterilizers7/27/202268整理課件脈動(dòng)真空蒸汽滅菌程序溫度脈動(dòng)真空：抽真空-進(jìn)蒸汽-抽真空-進(jìn)蒸汽 預(yù)真空升溫保溫干燥降溫排氣結(jié)束123真空Steam-Pulsing Sterilizers1001217/27/202269整理課件高真空與脈動(dòng)程序比較高真空滅菌柜對(duì)設(shè)備的要求高象BI-生物指示劑測(cè)定時(shí)，就可能需要被滅菌品比較松散，抽真空起作用大滅菌時(shí)間較短，使用不普遍脈動(dòng)真空滅菌柜對(duì)設(shè)備的要求較低灌裝機(jī)部

48、件、過濾器、膠塞、器具、工作服、口罩等采用滅菌過程時(shí)間一般會(huì)要長(zhǎng)一些。三次抽真空后，殘留空氣量小，影響不大，如：0.1x0.1x0.1=0.1%7/27/202270整理課件汽水分離器/疏水器結(jié)構(gòu)-氣水分離氣水分離一進(jìn)二熱靜力膜盒-排放廢氣以浮球?yàn)殚y體高精磨浮球由316L制造，閥座為420F不銹鋼排廢氣、排冷水廢體=主要是空氣進(jìn)蒸汽，廢氣經(jīng)熱靜力膜盒的孔排出冷水從底部排放自由浮球 內(nèi) 置過濾網(wǎng) 熱靜力膜盒排放廢氣 閥孔 浮球冷時(shí)閥開浮球7/27/202271整理課件疏水器脈沖式運(yùn)行排冷凝水蒸汽進(jìn)，出現(xiàn)冷凝水熱靜力膜盒受熱膨脹，氣門關(guān)閉冷凝水水位上升，閥孔開啟，排冷凝水滅菌排氣水后，水位下降浮閥

49、關(guān)閉，排水停止保持蒸汽壓-滅菌閥孔關(guān)浮球小結(jié)：蒸汽滅菌應(yīng)有疏水器 氣水分離-自動(dòng)完成 7/27/202272整理課件用于注射劑生產(chǎn)的輔助物料的滅菌工藝 用于注射劑生產(chǎn)的部分輔助物料在生產(chǎn)過程中與藥品直接接觸，因此同樣需要滅菌。它們包括：過濾器、膠塞、膠管、服裝、不銹鋼器皿、填充機(jī)械部件、清潔用品等等。一般通過與飽和蒸汽直接接觸而實(shí)現(xiàn)滅活，濕熱蒸汽的能量通過傳導(dǎo)或?qū)α髯饔脗鬟f熱量。常用方法是建立能夠提供相同的最小滅菌保證水平的標(biāo)準(zhǔn)周期，再加上一定的安全系數(shù)，不管裝載物的內(nèi)容是什么。對(duì)于這類物品，獲得可重復(fù)和可預(yù)測(cè)無菌保證的最大障礙是物品中潛在的空氣，所以適合的滅菌過程是先采用預(yù)真空過程，然后飽和

50、蒸汽滅菌的方法。 7/27/202273整理課件用于注射劑生產(chǎn)的輔助物料的滅菌工藝對(duì)于多孔/堅(jiān)硬物質(zhì)的滅菌裝載方式，需要注意以下幾點(diǎn)：裝載物的類型和結(jié)構(gòu)要加以確認(rèn)并記錄在案；裝載物不能接觸到滅菌艙室內(nèi)壁；金屬箱表面與底座之間的接觸應(yīng)減小到最低程度，通常使用有孔的支架，必要時(shí)也可以用可調(diào)節(jié)的支架；為了便于空氣去除，冷凝水排出和蒸汽穿透，要明確地確定裝載物的方位并記錄在案；質(zhì)量大的裝載物應(yīng)放置在滅菌器中較低的架子上，以盡量減少被冷凝水弄濕；控制滅菌器中物品的數(shù)量，如果裝載物的大小能夠改變，則需要確定最小和最大的裝載物，確認(rèn)中間裝載物的合理插入法應(yīng)包括最低負(fù)載中的最難滅菌物品；如果確認(rèn)研究表明物品的

51、位置不影響滅菌效果，那么裝載的形式可能是可變的；裝載記錄可以作為操作人員的參考。7/27/202274整理課件用于注射劑的滅菌工藝 充滿液體的裝載物通常是同類型的，尺寸相同，容量相同，并來自于同一批產(chǎn)品。注射劑（液體）的滅菌工藝也根據(jù)產(chǎn)品的技術(shù)要求設(shè)計(jì)滅菌工藝或滅菌周期。如果產(chǎn)品不是水溶液（如一些油性產(chǎn)品），需要特別考慮是否適合采用濕熱滅菌法。注射劑的滅菌是通過能量由加熱介質(zhì)傳遞給包裝內(nèi)部水溶液的過程來實(shí)現(xiàn)的。對(duì)于懸浮液和乳濁液的滅菌，裝載物需要保持運(yùn)動(dòng)狀態(tài)（比如翻轉(zhuǎn)，選裝或一定角度的搖擺）來促進(jìn)內(nèi)部的熱循環(huán)。可以采用過熱水過程或空氣蒸汽混合滅菌程序來實(shí)現(xiàn)。7/27/202275整理課件用于注射劑的滅菌工藝所有這些循環(huán)過熱水方法都使用在滅菌過程中可以控制的空氣超壓，以保障產(chǎn)品的型態(tài)不致被破壞。循環(huán)水方法與其他的蒸汽滅菌法相比，最大的優(yōu)點(diǎn)之一是加熱和冷卻的速率容易控制，而且如果參