果膠酶活力的測(cè)定

1、生物產(chǎn)品檢驗(yàn)技術(shù)課程單元教學(xué)設(shè)計(jì)卡一、教案頭課程單元果膠酶活力的測(cè)定授課對(duì)象生物技術(shù)專(zhuān)業(yè)單元學(xué)時(shí)2授課教師授課地點(diǎn)授課時(shí)間教 學(xué) 目 標(biāo)能力（技能）日標(biāo)知識(shí)目標(biāo)素質(zhì)目標(biāo)掌握分光光度法測(cè) 定的果膠酶活力的操 作流程；掌握果膠酶酶液、 底物母液、緩沖液的 配制方法；掌握分光光度計(jì)的 使用方法；能夠精確完成半乳 糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)曲線繪 制；酶活力的計(jì)算。掌握還原法測(cè)定果膠 酶活力的原理；掌握還原法測(cè)定果膠 酶活力的方法；養(yǎng)成認(rèn)真主動(dòng)學(xué)習(xí)的習(xí) 慣；能掌握常用儀器的使用 和保養(yǎng)方法；養(yǎng)成完成實(shí)訓(xùn)后及時(shí)整 理實(shí)訓(xùn)場(chǎng)所的良好職業(yè) 素養(yǎng)；養(yǎng)成良好的團(tuán)隊(duì)合作精 神。能力訓(xùn)練任務(wù)還原法測(cè)定果膠酶活力教 學(xué) 重 占 八、

2、 與 難 點(diǎn)重點(diǎn)難點(diǎn)分光光度法測(cè)定的果膠酶活力 的操作流程；酶活力的計(jì)算方法。1.半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制；教 學(xué)任務(wù)一1.果膠酶的性質(zhì)2.果膠酶的生產(chǎn)流程任務(wù)二還原法測(cè)定果膠酶活力的原理還原法測(cè)定果膠酶活力的操作流程還原法測(cè)定果膠酶活力的操作要點(diǎn)酶活力的計(jì)算過(guò)程設(shè)計(jì)時(shí)間教 學(xué) 設(shè) 計(jì) 與 組 織（一）導(dǎo)入新課通過(guò)闡述果膠酶組成、特性、應(yīng)用，使同學(xué)們認(rèn)識(shí)到果膠酶 活力測(cè)定的重要性。組成：含酯酶、水解酶和裂解酶三種成分，分別對(duì)果膠質(zhì)起 解酯、水解、裂解作用，生成半乳糖醛酸和低聚半乳糖醛酸、不 飽和半乳糖醛酸和低聚半乳糖醛酸等。特性：熱穩(wěn)定性較差，以果膠為底物，60C保溫15min,酶 活力剩余23

3、%O酶作用的最適溫度為4550C,若低于此溫度， 作用時(shí)間要相應(yīng)延長(zhǎng)。Fe Ca Zn、Sn等離子對(duì)酶有抑制作用， 在應(yīng)用時(shí)應(yīng)注意容器的選擇。應(yīng)用：果汁澄清、橘子去囊衣、蓮子脫內(nèi)皮、蒜脫皮、中藥 成分的提取等。（二）介紹果膠酶的生產(chǎn)流程斜面培養(yǎng)種子培養(yǎng)熏珂莓板野和云衣留生產(chǎn)果膠酶工 藝流程（三）還原法測(cè)定罪蠢也喂驗(yàn)原理？PE、PG和PMG yXJ膠質(zhì)起解酯作用產(chǎn)生甲醇和果膠酸； 水解作用產(chǎn)生半乳臀醛矗寡聚半乳糖醛酸；裂解作用產(chǎn)生不飽 和醛酸和寡聚半乳 銅離子共熱，使其生成藍(lán)色物質(zhì)。根史嘔糖醛酸顯色反應(yīng)確定產(chǎn)物量，表示 酶活力。壓濾炫些產(chǎn)物的醛基在堿性溶液中與兩價(jià) 化亞銅沉淀。氧化亞銅與砰鉗酸反

4、應(yīng)沉淀干燥5min.lOmin（四）材料用具1）材料商品果膠酶。2）試劑5min10min（1）甲試劑：稱(chēng)取純酒石酸鉀鈉12 g,無(wú)水碳酸鈉24 g,加 水250 ml,攪勻，向此液中緩慢加入10%硫酸銅溶液40 ml,碳 酸氫鈉16 g。另取500 ml熱水，加入無(wú)水硫酸銅180 g,煮沸驅(qū) 逐溶存氣體。冷卻后，注入1 L容量瓶中，兩液混合定容至1 L。 長(zhǎng)期存放后，如有少量紅色氧化亞銅沉淀，應(yīng)予以過(guò)濾，濾液可 在室溫下長(zhǎng)期保存。（2）乙試劑：稱(chēng)取鑰酸（NH4）Mo4024 - 4H2025 g 溶于 450 ml 水中，再緩慢加入濃硫酸21 mlo另取25 ml水，溶解純結(jié)晶碑 酸二鈉（N

5、a2HAsO4. 7H20） 3 g（可用碑酸 1.28 g,以 1 mol / L NaOH 19. 24 ml溶解，再加水4. 75 ml代替此液）。然后，充分混合， 在37C放置24-48 h,溶液逐漸變黃色，移至棕色細(xì)口瓶中保存。（3）100M-g/ml半乳糖醛酸鈉溶液：稱(chēng)取半乳糖醛酸鈉0. 1 g, 先用少量蒸餡水溶解后，再加水定容至1 000ml。（4）酶液制備：將酶粉適當(dāng)稀釋?zhuān)^(guò)濾備用，參考實(shí)訓(xùn)一。果 實(shí)均質(zhì)后，離心取上清液。稀釋備用。3）器具分析天平、變溫電爐、恒溫水浴鍋、分光光度計(jì)、秒表等。（五）操作流程lOmin（六）操作要點(diǎn)1.繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 取100ptg/ml半乳糖醛酸

6、鈉0.2, 0.4, 0.6,0. 8, 1. 0 ml,再分別加水至1 mlo向各管加甲液試劑1 ml,置 沸水浴煮沸10 min,冷至不燙手時(shí)加乙試劑1 ml,稀釋至12. 5 mlo 在波長(zhǎng)620 nm處比色。以吸光度值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，半乳糖醛酸鈉微 克數(shù)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。各管半乳糖醛酸鈉含量見(jiàn)下表。管號(hào)空白12345半乳糖醛酸鈉溶液，ml00. 20.40.60. 81. 0甲試劑/ ml111111乙試劑/ml111111半乳糖醛酸鈉/ug0204060801002.酶樣測(cè)定取果膠溶液0.5 ml,在50C水浴中保溫3 min平衡后，加稀 釋酶液0.5 mlo保溫3 min后立即加入

7、甲試劑1 ml,沸水浴煮沸 10 min,冷卻，加乙試劑1ml,加水定容至12.5 ml。在波長(zhǎng)620 nm處比色。查標(biāo)準(zhǔn)曲線確定0. 5ml稀釋液作用后生成的產(chǎn)物微克 數(shù)。（七）酶活力的計(jì)算酶的比活力定義：在一定條件下，每小時(shí)由底物產(chǎn)生1 mg半 乳糖醛酸的酶量定為1個(gè)酶活力單位。D=SX60XnX 1H- （0. 5X30X 1000）式中，D酶的比活力單位，U/g;30反應(yīng)時(shí)間，min；SA62。相當(dāng)?shù)陌肴樘侨┧嵛⒖藬?shù)；60換算為lh；0. 5酶液的體積ml;n酶液的稀釋倍數(shù)；30min30min1/1000由ug換算成mgo（八）單元課小結(jié)由果膠酶的性質(zhì)應(yīng)用引入，使同學(xué)了解學(xué)習(xí)測(cè)定果膠酶活力的目的、意義。掌握正確的學(xué)習(xí)方法。安排下節(jié)課的學(xué)習(xí)任務(wù)。建立班級(jí)學(xué)習(xí)小組，每4人組成一個(gè)學(xué)習(xí)小組，由班長(zhǎng)、 學(xué)習(xí)委員和小組長(zhǎng)組織學(xué)習(xí)興趣小組，協(xié)助代課老師組 織教學(xué)。思考討論布置思考題。5min.lOmin5min教 學(xué) 儀 器 設(shè) 備恒溫水浴鍋。分光光度計(jì)。變溫電爐。分析天平。秒表。教 學(xué) 資 料教材：生物產(chǎn)品分析與檢驗(yàn)技術(shù)，王苴主編，華中科技大學(xué)出版社，2012 年1月教學(xué)