王亞文-白假絲酵母菌臨床分離株的病性及耐藥結(jié)果分析

1、1白假絲酵母菌臨床分離(fnl)株的致病性及耐藥性研究 王亞文 2008級(jí) 臨床(ln chun)五年制 共二十三頁2 一、立項(xiàng)依據(jù)與設(shè)計(jì)思路(sl) 二、技術(shù)路線與方案 三、可行性與創(chuàng)新性共二十三頁3研究(ynji)對(duì)象白假絲酵母菌菌群失調(diào)機(jī)體免疫力降低異位定植白假絲酵母菌感染共二十三頁4臨床(ln chun)難題 診斷難，作為正常寄生菌，致病性的檢測(cè)具有(jyu)重要意義，現(xiàn)有的檢測(cè)方法耗時(shí)耗力。治療難，耐藥菌住的產(chǎn)生。 共二十三頁5研究進(jìn)展 1粘附因子2酸性蛋白酶Candida Albicans acid Proteinase 3形態(tài)及表型轉(zhuǎn)換共二十三頁6實(shí)驗(yàn)(shyn)目的驗(yàn)證白假絲酵

2、母菌的酸性蛋白酶活力作為致病性的評(píng)價(jià)指標(biāo)的可行性。了解本地區(qū)(dq)藥物敏感情況，希望指導(dǎo)臨 床用藥。 共二十三頁7 二、 技術(shù)路線(lxin)與方案共二十三頁8實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路(sl)收集、分離、鑒定致病性研究藥敏試驗(yàn)1.收集(shuj)標(biāo)本2.菌落培養(yǎng)3.涂片鏡檢4.顯色培養(yǎng)1.蛋白酶活力實(shí)驗(yàn)2.粘附性實(shí)驗(yàn)藥物敏感試驗(yàn)共二十三頁9病原菌分離(fnl)、培養(yǎng)、鑒定白假絲酵母菌收集臨床(ln chun)標(biāo)本120例轉(zhuǎn)種至顯色培養(yǎng)基35培養(yǎng) 48h，依菌落顏色鑒定鏡下可見G+性圓或橢圓形酵母菌，有時(shí)可見芽管分離菌落，格蘭染色，高倍鏡檢觀察菌落形態(tài)，有酵母樣念珠菌生長為培養(yǎng)陽性。標(biāo)本接于沙保弱培養(yǎng)基3

3、5培養(yǎng)24 72h共二十三頁A、B分為 假絲酵母菌菌落(jnlu)C、D分為高倍鏡下假絲酵母菌及其厚膜孢子 初步形態(tài)學(xué)鑒定(jindng)結(jié)果ABCD共二十三頁11 菌落呈翠綠色為白假絲酵母菌，粉紅色為克柔氏假絲酵母菌 ，灰藍(lán)色為熱帶(rdi) 念珠菌 。 80株假絲酵母菌中分離出白假絲酵母菌59株，構(gòu)成比最高為73.3圖5 念珠菌顯色培養(yǎng)(piyng)結(jié)果共二十三頁12產(chǎn)酶培養(yǎng)基37下培養(yǎng)(piyng)24h恢復(fù)產(chǎn)酶活力菌苔出現(xiàn)一個(gè)(y )透明圈，測(cè)量菌落及其周圍透明環(huán)直徑。37下培養(yǎng)48h菌懸液 10l點(diǎn)種于YGM-牛奶培養(yǎng)基酸性蛋白酶活力實(shí)驗(yàn)共二十三頁13 陰性(ynxng)白假絲酵母菌

4、產(chǎn)酶率為100%,其中(qzhng)高活力株68%，中活力株20%,低活力株占12%R=透明環(huán)直徑/菌落直徑R3為高活力，2R3為中活力，R2為低活力圖6 酸性蛋白酶實(shí)驗(yàn)結(jié)果共二十三頁14 小鼠尾靜脈注射0.2ml菌懸液，對(duì)照組注射(zhsh)等量生理鹽水小鼠死后做病理切片組織研磨(ynm)液培養(yǎng)。密切觀察小鼠生存情況，記錄小鼠生存時(shí)間菌株經(jīng)YEPD肉湯活化配制為1.8108/ml菌懸液健康小鼠隨機(jī)分4組 空白對(duì)照組、高中低活力組動(dòng)物實(shí)驗(yàn)步驟共二十三頁15動(dòng)物實(shí)驗(yàn)(shyn)結(jié)果圖7 鼠腎研磨(ynm)液培養(yǎng)菌落小鼠腎臟組織研磨液涂片白假絲酵母菌涂片圖8 鼠腎研磨液顯色培養(yǎng)圖9 小鼠腎、肺、脾

5、病理鏡下形態(tài)共二十三頁16死亡率平均生存時(shí)間（天）高活力組100%1中活力組75%3低活力組25%8空白對(duì)照組0白假絲酵母菌的蛋白酶活力(hul)與其致病性呈正相關(guān)(p0.01)表1 四組小鼠的死亡率與平均生存(shngcn)時(shí)間共二十三頁17藥敏試驗(yàn)(shyn)制霉菌素兩性霉素B氟康唑酮康唑伊曲康唑臨床常用抗真菌藥共二十三頁18藥敏試驗(yàn)(shyn)結(jié)果 1圖10 同一菌株對(duì)5種抗真菌藥物的不同(b tn)反應(yīng)判讀標(biāo)準(zhǔn)：抑菌環(huán)直徑19mm 為敏感14mm 為耐藥 共二十三頁19藥敏試驗(yàn)(shyn)結(jié)果 2表2 白色(bis)念珠菌對(duì)5種抗真菌藥物的敏感性共二十三頁20三、可行性與創(chuàng)新性共二十三

6、頁21可行性與創(chuàng)新性 實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示在一定范圍內(nèi)酸性蛋白酶可以作為評(píng)價(jià)白假絲酵母菌致病性的指標(biāo)。牛奶平板法檢測(cè)酸性蛋白酶活力(hul)具有簡(jiǎn)單，省時(shí)，經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)，適于在基層醫(yī)院推廣使用。 了解本地區(qū)白色念珠菌的藥物敏感情況，豐富了這方面的數(shù)據(jù)空缺，指導(dǎo)臨床用藥。共二十三頁22謝謝(xi xie)各位老師，請(qǐng)批評(píng)指正！共二十三頁內(nèi)容摘要1。診斷難，作為正常寄生菌，致病性的檢測(cè)具有重要意義，現(xiàn)有的檢測(cè)方法耗時(shí)耗力。Candida Albicans acid Proteinase。驗(yàn)證白假絲酵母菌的酸性蛋白酶活力作為致病性的評(píng)價(jià)指標(biāo)的可行性。了解本地區(qū)藥物敏感情況，希望指導(dǎo)臨 床用藥。收集(shuj)、分離、鑒定。病原菌分離、培養(yǎng)、鑒定。A、B分為 假絲酵母菌菌落C、D分為高倍鏡下假絲酵母菌及其厚膜孢子。菌落呈翠綠色為白假絲酵母菌，粉紅色為克柔氏假絲酵母菌 ，