USP35-1116中文

1、1116無(wú)菌工藝環(huán)境的微生物控制和監(jiān)測(cè)在藥品行業(yè)，微生物控制環(huán)境有多種用途。本章節(jié)提供了關(guān)于通過(guò)無(wú)菌工藝控制微生物污染的環(huán)境的信息和建議。在這些環(huán)境中生產(chǎn)的產(chǎn)品包括無(wú)菌制劑、無(wú)菌原料藥、無(wú)菌中間體、輔料和部分藥用器械。從患者風(fēng)險(xiǎn)的角度來(lái)說(shuō)，無(wú)菌工藝環(huán)境比其他生產(chǎn)操作的控制環(huán)境要重要的多，例如設(shè)備和備件的準(zhǔn)備、非無(wú)菌產(chǎn)品的生物負(fù)荷限度控制和最終滅菌產(chǎn)品工藝。本章節(jié)中的無(wú)菌工藝環(huán)境有人和無(wú)人操作應(yīng)區(qū)別對(duì)待。一個(gè)高級(jí)無(wú)菌工藝是不需要和禁止穿常規(guī)潔凈服的操作人員直接接觸敞口容器或暴露的產(chǎn)品接觸表面的。（注意：本章所用的術(shù)語(yǔ)在章節(jié)最后的目錄里有解釋。）本章節(jié)給出了指導(dǎo)意見(jiàn)和潔凈室、限制進(jìn)入隔離系統(tǒng)（RA

2、BS）和隔離器等無(wú)菌工藝的微生物評(píng)價(jià)的監(jiān)控參數(shù)，其他不要求在無(wú)菌條件下生產(chǎn)的無(wú)菌產(chǎn)品的生產(chǎn)環(huán)境的污染控制要求可以根據(jù)ISO環(huán)境分類(lèi)執(zhí)行。非無(wú)菌產(chǎn)品的生產(chǎn)環(huán)境要有不同的微生物控制等級(jí)。大部分標(biāo)有無(wú)菌的產(chǎn)品是在無(wú)菌工藝條件下生產(chǎn)的而不是最終滅菌。因?yàn)闊o(wú)菌工藝不僅生產(chǎn)過(guò)程中將微生物從生產(chǎn)用蒸汽中排除，并在空的容器進(jìn)入時(shí)也阻止微生物的進(jìn)入，還將生產(chǎn)環(huán)境的生物負(fù)荷作為一個(gè)控制微生物污染的重要參數(shù)。無(wú)菌和滅菌并不是一個(gè)同義詞。滅菌指的是將全部的微生物或組織進(jìn)行殺滅，有復(fù)活的可能性。從純粹的微生物意義上說(shuō)，一個(gè)無(wú)菌工藝可以通過(guò)排除微生物的方式防止污染。在現(xiàn)代無(wú)菌藥品制造業(yè)，無(wú)菌指的是在一個(gè)設(shè)計(jì)好的受控環(huán)境中

3、處理已滅菌的物料使微生物污染處于風(fēng)險(xiǎn)最小的已知水平。在有人進(jìn)行操作的任何環(huán)境中，微生物污染在一定程度上是不可避免的。如果有人員存在的話(huà)，即使最謹(jǐn)慎的潔凈室環(huán)境設(shè)計(jì)和操作也不能避免微生物的掉落。因此在所有無(wú)菌生產(chǎn)工藝操作過(guò)程的所有場(chǎng)所達(dá)到零污染在技術(shù)上是不可能的并且也是不現(xiàn)實(shí)的。去證明一個(gè)無(wú)菌生產(chǎn)工藝的環(huán)境和在這個(gè)環(huán)境中產(chǎn)品接觸的表面是已消毒的是沒(méi)有意義的。應(yīng)當(dāng)根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估確定監(jiān)測(cè)點(diǎn)。雖然生產(chǎn)者會(huì)經(jīng)常對(duì)環(huán)境監(jiān)測(cè)結(jié)果進(jìn)行回顧以確保生產(chǎn)操作在受控的驗(yàn)證狀態(tài)，但是監(jiān)測(cè)結(jié)果不能證明無(wú)菌或非無(wú)菌。因?yàn)楸O(jiān)測(cè)的局限性，所以生產(chǎn)者不能直接依據(jù)監(jiān)測(cè)、統(tǒng)計(jì)或定期的無(wú)菌工藝模擬來(lái)確定滅菌的安全水平。環(huán)境監(jiān)測(cè)通常由人來(lái)

4、進(jìn)行，需要操作者的參與，所以環(huán)境監(jiān)測(cè)也能增加污染的風(fēng)險(xiǎn)和得到假陽(yáng)性的結(jié)果。因此密集的監(jiān)測(cè)是不必要的，尤其是在無(wú)菌生產(chǎn)工藝最關(guān)鍵的的IS05級(jí)（B級(jí)）的環(huán)境中。在無(wú)菌生產(chǎn)工藝的微生物狀態(tài)和環(huán)境控制和評(píng)價(jià)中需要用到一系列的取樣方法?，F(xiàn)在幾乎所有的方法都依賴(lài)微生物的生長(zhǎng)和回收，這些方法中的大多數(shù)都是在環(huán)境應(yīng)力導(dǎo)致的受損的狀態(tài)下進(jìn)行的，因此是很難恢復(fù)的。本章節(jié)中的空氣、表面和人員的監(jiān)測(cè)數(shù)值不用來(lái)作為限度或指標(biāo)的要求，只是嚴(yán)格的報(bào)告數(shù)據(jù)。鑒于微生物取樣工具和方法的多樣性，沒(méi)有充分的理由證明獲得這些數(shù)值就能證明微生物的到了控制，或短暫的超出這些數(shù)值，微生物就失去了控制。在一個(gè)有意義的周期內(nèi)，必須進(jìn)行和生產(chǎn)

5、環(huán)境有關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。在任何情況下，均應(yīng)在回顧實(shí)際生產(chǎn)調(diào)查的基礎(chǔ)上確定污染回收率指數(shù)。為了促進(jìn)改善，應(yīng)當(dāng)用污染回收率追蹤每個(gè)使用者連續(xù)進(jìn)行的性能和確定微生物控制程序。當(dāng)達(dá)到一個(gè)設(shè)備最有利的操作條件時(shí)，污染回收率水平典型地變?yōu)橄鄬?duì)穩(wěn)定地在一個(gè)正常區(qū)間內(nèi)變化。沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)的空氣采樣方法，也沒(méi)有可查閱到的文獻(xiàn)方法，表明空氣采樣方法具有高度的可變性。不能假設(shè)相似的采樣體積在不同的方法下能得到相似的回收率。許多參數(shù)都能影響微生物回收率和存活率，不同的空氣采樣器生產(chǎn)商的設(shè)計(jì)可能也使他們的系統(tǒng)滿(mǎn)足不同的要求。微生物采樣時(shí)樣品間的差異也是很大的。藥品無(wú)菌生產(chǎn)工藝監(jiān)測(cè)方法的準(zhǔn)確度、靈敏度精密度和檢測(cè)限的限值是可以得到

6、的。表面采樣方法同樣也沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)化。使用不同的介質(zhì)，在干法、濕法和接觸碟法時(shí)能得到不同的數(shù)據(jù)。重復(fù)采樣的接觸碟被認(rèn)為在相同條件下能得到相似的結(jié)果，但是有報(bào)道稱(chēng)回收率比期望值低并且具有高度的可變性?？傊词乖跇?biāo)準(zhǔn)取樣片上具有相對(duì)高的接種水平，表面監(jiān)測(cè)方法的回收率也不到50%。在實(shí)際的生產(chǎn)環(huán)境中，微生物因?yàn)閼?yīng)力而具有變化的情況下，回收率可能會(huì)更低。高級(jí)無(wú)菌技術(shù)高級(jí)無(wú)菌技術(shù)可以被定義為在生產(chǎn)過(guò)程中不依賴(lài)人為操作直接干預(yù)的無(wú)菌技術(shù)?，F(xiàn)在，隔離器技術(shù)、吹灌封一體技術(shù)和封閉的限制進(jìn)入隔離系統(tǒng)（RABS）（在設(shè)置和操作時(shí)新打開(kāi)）可以被認(rèn)為高級(jí)無(wú)菌技術(shù)，這些技術(shù)在生產(chǎn)過(guò)程中，不允許更衣人員進(jìn)行直接干預(yù)。近年來(lái)

7、隔離器技術(shù)在制藥業(yè)的得到了廣泛的認(rèn)可。隔離器和封閉的限制進(jìn)入隔離系統(tǒng)（RABS）有效地將操作者和關(guān)鍵無(wú)菌生產(chǎn)環(huán)境隔離開(kāi)來(lái)。因?yàn)檫@些系統(tǒng)大大地降低了污染的風(fēng)險(xiǎn)，所以它們的微生物控制水平比傳統(tǒng)的同等潔凈度級(jí)別的潔凈室微生物控制水平高，如IS05級(jí)（B級(jí)）。無(wú)菌生產(chǎn)工藝環(huán)境的潔凈室級(jí)別IS014644系列闡述了潔凈室和環(huán)境控制區(qū)的設(shè)計(jì)和建造。這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)用單位體積的總粒子濃度表示潔凈環(huán)境的性能。IS014644-1規(guī)定了不同空氣質(zhì)量級(jí)別的潔凈環(huán)境允許的總粒子數(shù)。讀者可以據(jù)此來(lái)考慮設(shè)計(jì)參數(shù)和建立潔凈環(huán)境。在注射藥品生產(chǎn)過(guò)程中藥品生產(chǎn)人員介入了非活體粒子污染（見(jiàn)微粒物質(zhì)788）。在微生物污染中，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)證明

8、人是唯一重要的來(lái)源，而非活體粒子則不同，既可以由人引入，也可以由生產(chǎn)設(shè)備中引入。研究表明，更衣人員脫落的微粒和微生物污染的比例是相當(dāng)穩(wěn)定的。但是生產(chǎn)設(shè)備脫落的活體和非活體污染之間不存在這樣的關(guān)系。當(dāng)設(shè)備時(shí)微粒的主要來(lái)源時(shí)，微粒主要是非活體?！皾崈羰抑械目偭Ｗ訑?shù)越少，空氣中存在微生物的可能性越小”這種說(shuō)法，只有當(dāng)人是微粒的來(lái)源時(shí)才能成立。機(jī)械操作造成的背景總微粒污染和人員引入的微粒污染之間并不能進(jìn)行清楚地區(qū)分。因此，潔凈室環(huán)境監(jiān)測(cè)由總微粒數(shù)部分和微生物數(shù)部分組成這種做法是比較常見(jiàn)的，也是比較合適的。表1給出了制藥企業(yè)常見(jiàn)的潔凈室等級(jí)。在無(wú)菌生產(chǎn)工藝中，一般會(huì)用到IS014644-1中的5-8級(jí)。

9、表1不同潔凈級(jí)別的總微粒數(shù)ISO等級(jí)0.5口m的微粒數(shù)/m3ISO53520ISO635200ISO7352000ISO83520000注：此表來(lái)源于ISO國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)14644第一部分，由國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)于1999年5月印刷。ISO14644-1的這四個(gè)等級(jí)與美國(guó)聯(lián)邦標(biāo)準(zhǔn)209E的等級(jí)是一致的，分別是IS05/100級(jí)，ISO6/1000級(jí)，ISO/10000級(jí)，ISO8/100000級(jí)。隔離器和封閉的限制進(jìn)入隔離系統(tǒng)（RABS）則體現(xiàn)了不同的情況，因?yàn)槿藛T通過(guò)厚的柔軟的塑料（如聚氯乙烯或半合成橡膠）制成的手套和袖管組合和半套衣服進(jìn)行操作，從而被排除在無(wú)菌生產(chǎn)工藝環(huán)境之外。人對(duì)隔離器中物品的影響遠(yuǎn)

10、小于對(duì)潔凈室環(huán)境中物品的影響。一些用戶(hù)選擇了一種允許開(kāi)放和直接人為干預(yù)的方式對(duì)RABS進(jìn)行操作。在一個(gè)開(kāi)放的操作狀態(tài)下，這些系統(tǒng)和普通的潔凈室環(huán)境相似，因此不能被認(rèn)為是高級(jí)無(wú)菌工藝系統(tǒng)。在一個(gè)開(kāi)放的RABS中，操作人員的能力對(duì)微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)的反作用比封閉的RABS或隔離器高。ISO14644和聯(lián)邦標(biāo)準(zhǔn)209E中都沒(méi)有包括對(duì)每小時(shí)換氣次數(shù)和風(fēng)速的規(guī)定。通常IS08/100000級(jí)設(shè)計(jì)的換氣次數(shù)不低于20次/小時(shí)，ISO10000級(jí)設(shè)計(jì)的換氣次數(shù)應(yīng)超過(guò)50次/小時(shí)，IS05/100級(jí)設(shè)計(jì)的換氣次數(shù)應(yīng)超過(guò)100次/小時(shí)。有些設(shè)施的設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)也有所不同。在無(wú)菌生產(chǎn)中，為了稀釋和消除污染物，可能需要用大

11、體積的氣體來(lái)降低潔凈室的生物負(fù)荷污染。因?yàn)橐徊糠治廴臼怯扇艘氲?，最適宜的條件也應(yīng)該隨著過(guò)程參數(shù)的不斷變化而變化。在潔凈室的設(shè)計(jì)和操作中，這些標(biāo)準(zhǔn)只能作為一個(gè)指導(dǎo)原則，因?yàn)檫€沒(méi)有令人滿(mǎn)意的實(shí)驗(yàn)?zāi)鼙砻髅啃r(shí)換氣次數(shù)、體積和微生物控制之間的精確聯(lián)系。生產(chǎn)者應(yīng)使?jié)崈舳葹?級(jí)的潔凈室保持一個(gè)明顯的單向流（垂直或水平方向），尤其是在產(chǎn)品、產(chǎn)品容器和封口物品暴露時(shí)。在潔凈室中評(píng)價(jià)氣流運(yùn)動(dòng)時(shí)，采用發(fā)煙裝置或者其他合適的方法肉眼觀察氣體的流向比單純地測(cè)量換氣體積和換氣次數(shù)的方法可能要有用的多。風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估模式也被認(rèn)為是一個(gè)可以降低污染風(fēng)險(xiǎn)的實(shí)用方法。在隔離器和封閉的RABS中換氣體積和換氣次數(shù)遠(yuǎn)不如在潔凈室中重要

12、，因?yàn)槿吮缓苄⌒牡嘏c產(chǎn)品、產(chǎn)品容器和封口用物品分離開(kāi)了。研究證明在隔離器中足夠的換氣體積和在RABS中合適的換氣體積一般低于有人存在的潔凈室中的換氣體積。隔離器中微粒對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量有影響的區(qū)域，可以保持一個(gè)明顯的垂直或水平方向的單向流。實(shí)驗(yàn)表明，控制良好的混合流或湍流在許多無(wú)菌工藝和隔離器的滅菌測(cè)試中也能達(dá)到滿(mǎn)意的效果（見(jiàn)滅菌測(cè)試-隔離器系統(tǒng)驗(yàn)證）。環(huán)境控制的微生物評(píng)價(jià)的重要性即使使用電子儀器對(duì)環(huán)境控制中的總微粒子數(shù)的進(jìn)行連續(xù)的監(jiān)測(cè)，也未能獲得環(huán)境中微生物濃度的報(bào)告。微粒計(jì)數(shù)器的根本限制是只能測(cè)量粒徑0.5pm或更大的粒子。然而，空氣中的微生物并不是自由漂浮或是單細(xì)胞的，它們通常附著在10到20p

13、m的微粒上?？刂骗h(huán)境內(nèi)的微粒計(jì)數(shù)也就是微生物計(jì)數(shù)隨著取樣點(diǎn)和取樣的不同方式而改變。非活性的微粒和微生物的環(huán)境監(jiān)控是一項(xiàng)重要的控制功能，因?yàn)橐献⑸鋭┲械目梢?jiàn)異物、不溶性微粒與無(wú)菌（注射劑）的要求，兩者的監(jiān)控都是很重要的。相對(duì)于傳統(tǒng)的潔凈室而言，在隔離器和封閉的RABS中總微粒數(shù)的監(jiān)測(cè)提供了一種更好的環(huán)境質(zhì)量評(píng)價(jià)方式。在隔離器中，非活性微粒比例增長(zhǎng)證明人的污染被很好地得到了隔離。隔離器中總微粒計(jì)數(shù)可能會(huì)提供一個(gè)污染水平變化的直接指示。微生物監(jiān)測(cè)程序應(yīng)該對(duì)清潔和消毒效果進(jìn)行評(píng)價(jià)，并且對(duì)監(jiān)測(cè)人員對(duì)控制環(huán)境的生物負(fù)載的影響進(jìn)行評(píng)價(jià)。由于隔離器使用自動(dòng)蒸汽或氣體發(fā)生系統(tǒng)進(jìn)行消毒，在進(jìn)行消除生物負(fù)荷的效

14、能評(píng)價(jià)時(shí)，微生物監(jiān)測(cè)并不十分重要。這些自動(dòng)消毒系統(tǒng)用合適的生物指示劑挑戰(zhàn)進(jìn)行直接驗(yàn)證，并控制常規(guī)使用時(shí)的暴露參數(shù)以確保可以達(dá)到持續(xù)的消毒狀態(tài)。在這些控制環(huán)境中的微生物監(jiān)測(cè)不能也無(wú)需進(jìn)行鑒別和量化所有的微生物污染。從技術(shù)上來(lái)講，潔凈室中的微生物學(xué)監(jiān)測(cè)是一個(gè)半量化的試驗(yàn)，因?yàn)橛捎谌悠骶叩木窒扌?，?duì)環(huán)境進(jìn)行真正的量化評(píng)價(jià)是不可能的。計(jì)數(shù)方法的缺乏和被有效監(jiān)測(cè)的采樣體積的限制意味著從環(huán)境監(jiān)測(cè)中得到無(wú)菌保證的定量信息是不充分的。分析員應(yīng)謹(jǐn)記：即使沒(méi)有活的微生物存在，也沒(méi)有一種取樣計(jì)劃能證明不存在污染。在一個(gè)微生物樣品中沒(méi)有生長(zhǎng)只說(shuō)明生長(zhǎng)沒(méi)有被觀察到，不代表環(huán)境沒(méi)有污染。常規(guī)的微生物監(jiān)測(cè)應(yīng)能提供足夠的信

15、息證明無(wú)菌工藝環(huán)境在一個(gè)適當(dāng)?shù)目刂茽顟B(tài)下運(yùn)行。微生物監(jiān)測(cè)計(jì)劃中的此項(xiàng)真實(shí)數(shù)據(jù)證明一直在持續(xù)、高質(zhì)量的環(huán)境條件下運(yùn)行。監(jiān)測(cè)計(jì)劃可以對(duì)污染回收率的變化進(jìn)行檢測(cè)，從而指示環(huán)境控制狀態(tài)的變化。由具有資格的人員進(jìn)行的環(huán)境微生物監(jiān)測(cè)和數(shù)據(jù)分析時(shí)，可幫助確保環(huán)境處于控制的合適狀態(tài)。為了得到有意義的、與過(guò)程相關(guān)的數(shù)據(jù)，可以在正常操作過(guò)程中應(yīng)對(duì)環(huán)境進(jìn)行取樣當(dāng)原料存放，或在生產(chǎn)活動(dòng)持續(xù)進(jìn)行進(jìn)行，以及操作人員全部在崗時(shí)時(shí)，應(yīng)對(duì)無(wú)菌生產(chǎn)工藝環(huán)境進(jìn)行微生物取樣。潔凈室、隔離器和RABS的微生物監(jiān)測(cè)應(yīng)當(dāng)包括壓縮氣體、表面、房間、灌裝氣體和其他物料以及設(shè)施等可能產(chǎn)生污染風(fēng)險(xiǎn)的因素。長(zhǎng)久以來(lái)，在無(wú)菌環(huán)境中進(jìn)行污染趨勢(shì)分析的人

16、員都是環(huán)境控制計(jì)劃的一部分。在無(wú)菌生產(chǎn)工藝環(huán)境尤其是ISO5級(jí)環(huán)境中，污染很少被觀察到。在人員污染被很好地排除的隔離器中，更是如此。由于這些環(huán)境的關(guān)鍵性，即使是污染時(shí)間的微小變化也可能是有意義的，生產(chǎn)者應(yīng)經(jīng)常和謹(jǐn)慎地回顧監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)。在非關(guān)鍵區(qū)域，微生物污染可能較高，但是仍應(yīng)注意、調(diào)查和糾正回收率的變化。在傳統(tǒng)的潔凈室中，微生物的隔離回收應(yīng)該被認(rèn)為是正?，F(xiàn)象，通常這表示不需要進(jìn)行特別的糾正，因?yàn)閹缀蹩梢钥隙ㄕ{(diào)查者不能找到一個(gè)被證實(shí)的原因。在傳統(tǒng)的潔凈室內(nèi)，由于樣品本身要求無(wú)菌，任何一個(gè)單獨(dú)的沒(méi)有關(guān)聯(lián)的的污染事件都可能是假陽(yáng)性的。當(dāng)污染回收率超過(guò)制定的水平時(shí)，必須進(jìn)行工藝和操作調(diào)查。調(diào)查將根據(jù)制造的

17、產(chǎn)品和使用隔離器、RABS和潔凈室等類(lèi)型而有所不同。調(diào)查應(yīng)當(dāng)包括區(qū)域保持記錄的回顧，消毒記錄、偏差的發(fā)生、內(nèi)在生理或操作參數(shù)，例如環(huán)境溫度的變化和人員的培訓(xùn)情況。在封閉的RABS和隔離器系統(tǒng)中，手套完整性的缺失和偶然引入未經(jīng)消毒的物質(zhì)是可檢測(cè)到的污染產(chǎn)生的最可能的原因。通過(guò)調(diào)查，必須采取措施糾正或消除可能導(dǎo)致污染的原因。因?yàn)樵诂F(xiàn)代的無(wú)菌設(shè)施中污染相對(duì)稀有，調(diào)查結(jié)果經(jīng)常是無(wú)果的。當(dāng)糾正措施實(shí)施時(shí)，可能包括加強(qiáng)在穿衣、無(wú)菌技術(shù)、環(huán)境微生物控制方面的人員培訓(xùn)。也可能會(huì)采取一些額外的微生物取樣，但是這在無(wú)菌生產(chǎn)工藝中可能并不是合適的，因?yàn)樵黾拥幕蛘呤沁^(guò)度密集的采樣必定使污染的風(fēng)險(xiǎn)變大。只有當(dāng)無(wú)菌工藝模

18、擬研究時(shí)，額外取樣才時(shí)更合適和可取的。其他檢測(cè)方法被認(rèn)為可以更好地控制微生物污染，包括額外的消毒、使用不同的消毒劑和微生物污染和來(lái)源鑒別。在任何一個(gè)傳統(tǒng)或高級(jí)的無(wú)菌環(huán)境中，調(diào)查和由于調(diào)查結(jié)果而采取的措施的原因的推理必須謹(jǐn)慎并記錄。污染控制效果的實(shí)際評(píng)估潔凈環(huán)境應(yīng)當(dāng)按照ISO14644系列中的規(guī)定進(jìn)行驗(yàn)收，以達(dá)到設(shè)計(jì)等級(jí)的要求。設(shè)計(jì)、結(jié)構(gòu)和操作都能使?jié)崈羰野l(fā)生很大改變，所以很難對(duì)參數(shù)如過(guò)濾器完整性、換氣體積、氣體類(lèi)型、換氣和壓差等進(jìn)行概括歸納，特別是關(guān)鍵的應(yīng)用如無(wú)菌工藝結(jié)構(gòu)，接近實(shí)際的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估是比較合適的。LjungquistandReinmuller曾經(jīng)開(kāi)發(fā)了一個(gè)這樣的方法，被稱(chēng)為L(zhǎng)-R方法。

19、通過(guò)評(píng)價(jià)氣體和環(huán)境稀釋和移除空氣攜帶粒子的能力來(lái)挑戰(zhàn)通風(fēng)系統(tǒng)。在L-R方法中，有一個(gè)發(fā)煙裝置使分析員能夠目視潔凈室或控制環(huán)境中所有區(qū)域的空氣運(yùn)動(dòng)，包括渦流和湍流區(qū)域，可以對(duì)空氣流的類(lèi)型可以進(jìn)行調(diào)整以使不期望的影響降到最小。通過(guò)氣流的優(yōu)化，可以在關(guān)鍵區(qū)域和滅菌場(chǎng)所產(chǎn)生微粒。這種評(píng)估只能在模擬生產(chǎn)但設(shè)備和人員到位的條件下下進(jìn)行。這種測(cè)試同樣也能用在RABS和隔離器的能力評(píng)價(jià)上，尤其是在這些系統(tǒng)中的產(chǎn)品出口附近，以防止污染。潔凈室中的空氣運(yùn)動(dòng)的目視評(píng)價(jià)是一個(gè)主觀的過(guò)程。在有人員和設(shè)備存在的正在運(yùn)行的潔凈室中完全消除湍流是不可能的?？諝獾目梢暬皇莾?yōu)化潔凈室性能的努力中的一步，并不是確切的通過(guò)/失敗測(cè)

20、試，因?yàn)榭山邮芎筒豢山邮艿臈l件還不明確。在執(zhí)行微生物監(jiān)測(cè)程序之前，對(duì)潔凈室、RABS和隔離器的實(shí)際參數(shù)進(jìn)行合適的測(cè)試和優(yōu)化是必要的。確保潔凈室、RABS和隔離器與預(yù)定的工程標(biāo)準(zhǔn)相符為控制生物負(fù)荷的設(shè)備能力和操作實(shí)驗(yàn)提供了可靠保障。非活性微粒被用于預(yù)定用途。在潔凈室和高級(jí)無(wú)菌工藝系統(tǒng)的驗(yàn)收時(shí)應(yīng)當(dāng)重復(fù)這些測(cè)試，并且無(wú)論操作如何改變，如人員流動(dòng)、設(shè)備、操作、物料流動(dòng)、空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)或設(shè)備的布局安排，都被看成是很有意義的。人員培訓(xùn)良好的人員操作在污染控制過(guò)程中發(fā)揮著不可或缺的作用，合適的培訓(xùn)和監(jiān)督是污染控制的核心，無(wú)菌生產(chǎn)的關(guān)鍵活動(dòng)取決于微生物受控的環(huán)境，生產(chǎn)者要努力注意并細(xì)化與之有關(guān)的所有環(huán)節(jié)。嚴(yán)明的

21、紀(jì)律和對(duì)人員嚴(yán)格的監(jiān)督是保證環(huán)境質(zhì)量適用于無(wú)菌工藝的必要要求。對(duì)在控制環(huán)境中工作的所有人員的培訓(xùn)是很關(guān)鍵的，微生物監(jiān)測(cè)計(jì)劃中人員責(zé)任心也是同樣至關(guān)重要，因?yàn)槎谖⑸锶舆^(guò)程中，潔凈工作區(qū)域也可能產(chǎn)生意外的污染。在高度自動(dòng)化的操作過(guò)程中，監(jiān)測(cè)人員應(yīng)是應(yīng)該是最直接接觸操作區(qū)域內(nèi)的關(guān)鍵區(qū)域和表面的人員。微生物取樣時(shí)，不恰當(dāng)?shù)娜蛹夹g(shù)或人員進(jìn)入或接近關(guān)鍵區(qū)域都可能帶來(lái)微生物污染。必須制定一個(gè)培訓(xùn)計(jì)劃以使污染風(fēng)險(xiǎn)降到最低。所有進(jìn)入控制環(huán)境人員的培訓(xùn)都應(yīng)當(dāng)有書(shū)面記錄。雖然干預(yù)不可避免，但監(jiān)測(cè)活動(dòng)要求將干預(yù)降至最低，所以檢測(cè)人員必須盡可能接近完美地掌握無(wú)菌技術(shù)。設(shè)備管理應(yīng)必須保證所有在潔凈室和高級(jí)無(wú)菌工藝

22、環(huán)境操作的人員都要非常熟悉微生物實(shí)驗(yàn)相關(guān)的準(zhǔn)則。培訓(xùn)應(yīng)包括，對(duì)無(wú)菌技術(shù)基本原理的說(shuō)明，還有生產(chǎn)的相關(guān)程序和產(chǎn)生污染的潛在原因的處理程序之間的關(guān)系。進(jìn)行監(jiān)督、審計(jì)和檢查微生物控制與檢測(cè)活動(dòng)的人員必須熟知微生物學(xué)的基本原理、微生物的生理特征、衛(wèi)生與消毒、培養(yǎng)基選擇與制備、分類(lèi)系統(tǒng)級(jí)滅菌知識(shí)。還應(yīng)對(duì)監(jiān)督和測(cè)試人員進(jìn)行微生物或環(huán)境微生物的理論知識(shí)的培訓(xùn)。取樣人員等在潔凈室單獨(dú)工作的人員還應(yīng)牢記將降低微生物污染風(fēng)險(xiǎn)的責(zé)任。進(jìn)行微生物鑒定的人員要按規(guī)定的實(shí)驗(yàn)室方法進(jìn)行特殊的培訓(xùn)。必須對(duì)操作人員提供額外的管理環(huán)境數(shù)據(jù)的收集訓(xùn)練。認(rèn)識(shí)和了解適用的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程是至關(guān)重要的，尤其是當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程中規(guī)定了在環(huán)境條件

23、達(dá)到某些情況，必須執(zhí)行糾正措施的情況下。理解解污染控制的原理同理解藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（GMPs）樣都是培訓(xùn)計(jì)劃中不可分割的一部分的，其中也應(yīng)包括對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行調(diào)查和分析。人是控制環(huán)境中微生物污染的唯一重要來(lái)源。由于人會(huì)帶來(lái)污染和無(wú)菌工藝的最終目的降低最終用戶(hù)的風(fēng)險(xiǎn)，只有健康的人員才能進(jìn)入控制環(huán)境。即使是在高級(jí)無(wú)菌技術(shù)如隔離器、灌/封/裝系統(tǒng)或封閉的RABS中，生病的人也不允許進(jìn)入無(wú)菌工藝環(huán)境。不能忽略良好的個(gè)人衛(wèi)生和對(duì)無(wú)菌更衣過(guò)程細(xì)節(jié)的關(guān)注的重要性。根據(jù)控制環(huán)境級(jí)別和系統(tǒng)本身標(biāo)準(zhǔn)的不同，更衣程序也有所不同。無(wú)菌工藝環(huán)境要求無(wú)菌衣必須具有最好的濾過(guò)性能。要求盡可能全地覆蓋住皮膚，袖口或帶子在關(guān)鍵的

24、手套-袖子連接處應(yīng)盡可能少地露出。在傳統(tǒng)的潔凈室中，在任何條件下都不能看見(jiàn)暴露的皮膚。，人員和更衣在RABS中與在傳統(tǒng)潔凈室中是同等重要的。當(dāng)員工正確地進(jìn)行更衣后，還必須時(shí)刻小心地維護(hù)手套、口罩和衣服的完整性。隔離器的操作人員不必穿無(wú)菌衣，但在隔離器、RABS和潔凈室中的無(wú)菌操作中，無(wú)菌技術(shù)的缺乏和人員脫落的污染仍然是最基本的危害。手套和袖管組合發(fā)生的泄露可以將微生物從機(jī)器轉(zhuǎn)移到產(chǎn)品中。在隔離器或RABS的手套外面或里面套上第二層手套可以增加手套泄露的安全水平或者作為完整性測(cè)試的措施。同時(shí)，操作人員必須謹(jǐn)記：在隔離器和RABS系統(tǒng)中，無(wú)菌技術(shù)要求所有操作必須在戴手套的情況下進(jìn)行。環(huán)境監(jiān)測(cè)計(jì)劃本

25、身并不能檢測(cè)到無(wú)菌生產(chǎn)過(guò)程中的破壞環(huán)境微生物質(zhì)量的所有事件，因此必須進(jìn)行周期性的培養(yǎng)基灌裝實(shí)驗(yàn)或無(wú)菌工藝模擬研究，以進(jìn)行全面的持續(xù)不斷地監(jiān)督，確保操作控制和培訓(xùn)效果的維持。微生物環(huán)境監(jiān)測(cè)計(jì)劃的設(shè)計(jì)和執(zhí)行中的關(guān)鍵因素綜合的環(huán)境監(jiān)測(cè)計(jì)劃出現(xiàn)以后，它們?cè)诓焕厔?shì)或漂移的確定方便的應(yīng)用就得到了重視。在現(xiàn)在無(wú)菌工藝環(huán)境中，無(wú)論是在隔離器、RABS或傳統(tǒng)的潔凈室中，污染增加變得十分稀有，盡管如此，監(jiān)控計(jì)劃也應(yīng)當(dāng)能檢測(cè)到設(shè)施中驗(yàn)證狀態(tài)的變化，并為實(shí)施適當(dāng)?shù)挠?jì)數(shù)提供信息。環(huán)境監(jiān)測(cè)計(jì)劃應(yīng)根據(jù)特定的設(shè)施和條件進(jìn)行調(diào)整，也必須在數(shù)據(jù)信息方面有助于進(jìn)行全面的規(guī)劃。在無(wú)菌取樣方法存在技術(shù)限制的背景下，某一天一個(gè)單一的不

26、相關(guān)的數(shù)據(jù)可能并沒(méi)有實(shí)質(zhì)意義。培養(yǎng)基的選擇一般的微生物培養(yǎng)基如大豆酪蛋白消化培養(yǎng)基（SCDM）因?yàn)槟苁辜?xì)菌、酵母菌和霉菌生長(zhǎng)，適合大多數(shù)條件下的環(huán)境監(jiān)測(cè)?？梢栽谶@些培養(yǎng)基中加入添加劑使之克服或減少消毒劑或抗生素的影響。生產(chǎn)者應(yīng)該關(guān)注霉菌和酵母菌的檢測(cè)，如有必要，可以使用沙氏、改良沙氏或抑制霉菌瓊脂等普通的真菌培養(yǎng)基。一般來(lái)說(shuō)，對(duì)專(zhuān)性厭氧菌不起作用，因?yàn)檫@些生物在環(huán)境氣體中不可能存活。但是在無(wú)菌工藝中可能觀察到微需氧菌。如果存在缺氧條件（如在無(wú)菌測(cè)試設(shè)施中對(duì)這些微生物的鑒別或無(wú)菌檢查71），應(yīng)能保證微需氧菌和生物體的監(jiān)測(cè)在低氧條件下的生長(zhǎng)。每種用于環(huán)境監(jiān)測(cè)的培養(yǎng)基，包括用于回收特定類(lèi)型微生物的培

27、養(yǎng)基必須進(jìn)行促生長(zhǎng)能力的評(píng)價(jià)（無(wú)菌檢查71）。培養(yǎng)條件的選擇一旦已選擇了合適的培養(yǎng)基，則要選定合適的培養(yǎng)時(shí)間和溫度。一般來(lái)說(shuō)，對(duì)于一般微生物生長(zhǎng)培養(yǎng)基，如大豆酪蛋白消化培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度在2035C范圍內(nèi)，使用的培養(yǎng)時(shí)間不少于72小時(shí)。當(dāng)已知污染物生長(zhǎng)緩慢時(shí)，可以延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間。上述的溫度范圍并不是絕對(duì)的。一般設(shè)施環(huán)境中常見(jiàn)的嗜溫細(xì)菌和霉菌可以在較寬的溫度范圍內(nèi)生長(zhǎng)。對(duì)于大多數(shù)嗜溫微生物來(lái)說(shuō)，在超過(guò)約20C的溫度范圍下回收是可能的。如果沒(méi)有足夠的保證，一個(gè)碟子微生物可以在較低或較高的溫度下都進(jìn)行培養(yǎng)。首先在低溫下進(jìn)行培養(yǎng)，確保比較重要的與人類(lèi)密切相關(guān)的革蘭氏陽(yáng)性球菌的生長(zhǎng)。培養(yǎng)及制備過(guò)程中的滅菌操

28、作必須進(jìn)行驗(yàn)證。當(dāng)在監(jiān)測(cè)中使用選擇性培養(yǎng)基時(shí)，培養(yǎng)條件必須考慮現(xiàn)有技術(shù)的要求。在采樣過(guò)程中應(yīng)禁止向潔凈室中引入污染，所以嚴(yán)禁使用污染的培養(yǎng)基或設(shè)備。尤其應(yīng)注意的是無(wú)菌采樣培養(yǎng)基的使用。無(wú)論什么情況下，采樣培養(yǎng)基和包裝必須進(jìn)行嚴(yán)格的濕熱、射線(xiàn)或其他合適的方式滅菌。如果必須使用滅菌制備的培養(yǎng)基，分析員必須先進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)，并且在進(jìn)入潔凈室之前目視觀察所有采樣用培養(yǎng)基。如需進(jìn)一步了解有關(guān)微生物實(shí)驗(yàn)室操作和控制的信息，請(qǐng)參考微生物實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范.采樣計(jì)劃和采樣點(diǎn)的評(píng)估在最初啟用或授權(quán)潔凈室或其他控制環(huán)境的同時(shí)，應(yīng)確定空氣采樣和表面采樣的位置。取樣點(diǎn)必須考慮接近接近暴露的產(chǎn)品容器、封口物品和與產(chǎn)品接觸的表面

29、。在無(wú)菌工藝中，產(chǎn)品容器、封口物品和產(chǎn)品暴露的區(qū)域常叫做關(guān)鍵區(qū)域-通常為ISO5級(jí)。為了無(wú)菌操作的需要，整個(gè)關(guān)鍵區(qū)域應(yīng)是無(wú)菌區(qū)域。非滅菌物品，包括潔凈室操作人員戴手套的手或隔離器/RABS中的手套在無(wú)菌操作前或無(wú)菌操作中都不能和滅菌產(chǎn)品、容器封口、灌裝臺(tái)或輸送設(shè)備直接接觸。操作者和環(huán)境監(jiān)測(cè)人員都不能觸摸傳送裝置、灌裝針頭、組裝加料斗或其他任何一個(gè)產(chǎn)品輸送過(guò)程中的設(shè)備。這樣才能保證在無(wú)菌操作結(jié)束時(shí)最完美地進(jìn)行表面監(jiān)測(cè)。采樣頻率取決于在環(huán)境中進(jìn)行的生產(chǎn)工藝?？傮w的生物負(fù)荷水平較低的非無(wú)菌產(chǎn)品生產(chǎn)區(qū)，環(huán)境監(jiān)測(cè)的頻率可相對(duì)較低。實(shí)施封閉操作，如發(fā)酵、無(wú)菌API工藝和化學(xué)操作的環(huán)境的監(jiān)測(cè)點(diǎn)可更少，頻率更

30、低，因?yàn)橹車(chē)h(huán)境導(dǎo)致微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)較低。無(wú)菌工藝生產(chǎn)的環(huán)境監(jiān)測(cè)比最終滅菌之前的產(chǎn)品灌裝環(huán)境監(jiān)測(cè)更加關(guān)鍵。最終滅菌之前的產(chǎn)品灌裝操作的監(jiān)測(cè)數(shù)量取決于受殘留產(chǎn)品影響的程度和微生物污染的繁殖能力。對(duì)隨后的滅菌有影響的微生物鑒別和技術(shù)比對(duì)周?chē)a(chǎn)環(huán)境的微生物監(jiān)控要關(guān)鍵的多。不可能對(duì)每一種生產(chǎn)環(huán)境的微生物控制水平加以建議。例如，一個(gè)ISO7級(jí)環(huán)境已確定的微生物控制水平在另一個(gè)IS07級(jí)環(huán)境下不一定合適，這主要取決于每個(gè)環(huán)境下的生產(chǎn)活動(dòng)。用戶(hù)應(yīng)進(jìn)行預(yù)期風(fēng)險(xiǎn)分析并為每種控制環(huán)境的取樣點(diǎn)和取樣頻率建立依據(jù)。潔凈室的級(jí)別有助于確立控制水平，但并不意味著在同一級(jí)別下所有房間應(yīng)具有相同的控制水平和相同的監(jiān)測(cè)頻率。

31、監(jiān)測(cè)應(yīng)能反映生產(chǎn)或工藝活動(dòng)中的微生物控制的要求。正式的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估技術(shù)可以形成一個(gè)科學(xué)有效的污染控制程序。表2給出了頻率漸減的、與重要性或取樣取產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)的采樣頻率。這個(gè)表格對(duì)人員無(wú)菌更衣的無(wú)菌工藝環(huán)境和不需無(wú)菌更衣的環(huán)境進(jìn)行了區(qū)別。環(huán)境監(jiān)測(cè)計(jì)劃的檢測(cè)頻率應(yīng)是靈活的，取樣點(diǎn)應(yīng)根據(jù)觀測(cè)到污染數(shù)和持續(xù)的風(fēng)險(xiǎn)分析進(jìn)行調(diào)整。在長(zhǎng)期觀測(cè)的基礎(chǔ)上，生產(chǎn)者可以增加或減少預(yù)定的取樣點(diǎn)或者是取消一個(gè)采樣點(diǎn)。過(guò)度采樣和采樣過(guò)疏對(duì)污染控制都是不利的，謹(jǐn)慎地考慮風(fēng)險(xiǎn)和減少污染源都可以指導(dǎo)采樣密集度。表2：無(wú)菌工藝區(qū)的建議采樣頻率采樣區(qū)域/采樣點(diǎn)潔凈室關(guān)鍵區(qū)域（IS05級(jí)或更好區(qū)域）氣體采樣表面監(jiān)測(cè)關(guān)鍵區(qū)域的鄰近區(qū)域所有

32、采樣其他非鄰近區(qū)域的無(wú)菌區(qū)所有采樣隔離關(guān)鍵區(qū)域（IS05級(jí)或更好區(qū)域）氣體采樣表面監(jiān)測(cè)隔離器周?chē)姆菬o(wú)菌區(qū)所有采樣在這些環(huán)境中的操作人員均應(yīng)進(jìn)行無(wú)菌更衣（無(wú)菌產(chǎn)品的生產(chǎn)區(qū)域或其他不需要完全無(wú)菌更采樣頻率/RABS每次運(yùn)轉(zhuǎn)輪換時(shí)操作結(jié)束時(shí)每次運(yùn)轉(zhuǎn)輪換時(shí)每天次普器每天次活動(dòng)結(jié)束時(shí)每月一次隔離器周?chē)h(huán)境除外）。這些推薦值不適用于衣的控制環(huán)境。潔凈室和無(wú)菌工藝區(qū)采樣點(diǎn)的選擇ISO14644給出了一個(gè)的潔凈區(qū)微?？諝夥旨?jí)的表格。這個(gè)方法適用于確定總體的空氣微粒指標(biāo)是否達(dá)到了設(shè)計(jì)要求。雖然，一般來(lái)講，這個(gè)沒(méi)有人活動(dòng)的表格值可能具有一定的污染風(fēng)險(xiǎn)，但在進(jìn)行微生物污染風(fēng)險(xiǎn)分析時(shí)也有一定的價(jià)值。微生物污染與操作

33、人員密切相關(guān)，所以無(wú)人環(huán)境的微生物監(jiān)測(cè)的價(jià)值有限。微生物采樣點(diǎn)的選擇需要考慮生產(chǎn)操作過(guò)程中人員的活動(dòng)。在潔凈室評(píng)定階段的觀測(cè)和繪圖可以提供活動(dòng)和人員位置的有效信息。這些觀測(cè)也可以得到頻繁的熟練操作和干預(yù)的重要信息。潔凈室內(nèi)人員的位置和活動(dòng)與對(duì)環(huán)境和環(huán)境中的生產(chǎn)操作的污染風(fēng)險(xiǎn)有相關(guān)性。應(yīng)選擇合適的取樣點(diǎn)，因此應(yīng)評(píng)價(jià)區(qū)域內(nèi)的人員活動(dòng)和工作的影響，尤其是在關(guān)鍵區(qū)域內(nèi)的干預(yù)和操作。最可能的污染路線(xiàn)是空氣攜帶，因此，在風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中，與暴露的滅菌物料附近的空氣攜帶污染有關(guān)的樣品是最關(guān)鍵的。其他需要考慮別的區(qū)域是設(shè)備和物料從較低級(jí)別向較高級(jí)別傳遞點(diǎn)。門(mén)和氣鎖的周?chē)皟?nèi)部也應(yīng)包含在監(jiān)測(cè)日程內(nèi)。習(xí)慣上對(duì)墻壁、地面

34、進(jìn)行取樣，在這些位置的真實(shí)的取樣可以提供消毒計(jì)劃的有效性的信息。在這些位置的取樣可以相對(duì)地不經(jīng)常進(jìn)行，因?yàn)檫@里的污染不可能影響產(chǎn)品。操作人員應(yīng)禁止觸摸地面和墻壁，從這些表面至產(chǎn)品暴露的關(guān)鍵區(qū)域內(nèi)的機(jī)械傳輸污染不應(yīng)發(fā)生。生產(chǎn)者通常進(jìn)行的關(guān)鍵區(qū)域內(nèi)的表面監(jiān)測(cè)應(yīng)在操作結(jié)束時(shí)進(jìn)行。應(yīng)當(dāng)避免培養(yǎng)基和濕拭子上的稀釋液在表面上的殘留，因?yàn)樗鼈兡軐?dǎo)致微生物的繁殖。清潔表面上的稀釋液或培養(yǎng)基需要人為的干預(yù)和活動(dòng)，這可能會(huì)將微生物污染帶至關(guān)鍵區(qū)域，也可能擾亂氣流。潔凈室、隔離器和RABS的微生物控制參數(shù)自從20世紀(jì)80年代早期，生產(chǎn)者們便確立了警戒限和行動(dòng)限的環(huán)境監(jiān)測(cè)水平。近年來(lái)，警戒限和行動(dòng)限的數(shù)值差異已經(jīng)變得

35、很小，尤其是在IS05級(jí)環(huán)境下。微生物試驗(yàn)中的生長(zhǎng)和回收在土O.5log10之間小幅變動(dòng)。實(shí)際上。對(duì)微生物氣體取樣器的研究顯示通常的氣體采樣設(shè)備能產(chǎn)生10倍的差異。因?yàn)檫@些內(nèi)在差異和不可控的取樣錯(cuò)誤，設(shè)定的的警戒限例如為1cfu和行動(dòng)限為3cfu并不具有分析意義。數(shù)值的變化并不是符合科學(xué)邏輯的，也不一定是人為活動(dòng)影響的結(jié)果，可以將正常變化范圍的變化看成是預(yù)期以?xún)?nèi)的變化。實(shí)際上，變化值達(dá)到5-10倍時(shí)，可以看做是有意義的變化。因?yàn)槲⑸锷L(zhǎng)的準(zhǔn)確度和精密度與回收試驗(yàn)的局限性，分析員可以考慮污染檢測(cè)到的頻率，而不是某個(gè)樣品中檢測(cè)到的cfu數(shù)。這也不是簡(jiǎn)單地微生物直接計(jì)數(shù)，而是對(duì)可能由一簇微生物引入

36、的污染的檢測(cè)。應(yīng)對(duì)確定每個(gè)潔凈室環(huán)境的污染回收率，一個(gè)點(diǎn)和房間的污染回收率發(fā)生變化表明需要采取糾正措施。ISO5級(jí)的關(guān)鍵區(qū)域的空氣攜帶或表面污染的回收率在現(xiàn)有方法水平下應(yīng)達(dá)到1%或更低。在已有的監(jiān)測(cè)方法的基礎(chǔ)上，封閉的RABS和隔離器的污染回收率應(yīng)明顯更低,并檢測(cè)到小于1%。同一采樣周期內(nèi)一個(gè)環(huán)境內(nèi)多個(gè)點(diǎn)觀測(cè)到污染表明產(chǎn)品的污染風(fēng)險(xiǎn)增加，并應(yīng)謹(jǐn)慎地評(píng)估。多個(gè)點(diǎn)幾乎同時(shí)出現(xiàn)污染也可能是來(lái)源于低劣的取樣技術(shù)，因此在做出關(guān)于失控趨勢(shì)的分析前應(yīng)謹(jǐn)慎地進(jìn)行回顧。在污染后對(duì)一個(gè)環(huán)境重新取樣幾天不具有什么價(jià)值，因?yàn)橐淮稳雍土硪淮稳舆M(jìn)行時(shí)的條件并不完全一致。無(wú)菌衣也能產(chǎn)生表面樣品。必須重視操作時(shí)的人員取樣

37、，為了避免其他污染，最好是在生產(chǎn)結(jié)束時(shí)進(jìn)行。這些取樣點(diǎn)的平均值應(yīng)小于1%。封閉的rabs和隔離器的手套應(yīng)達(dá)到比污染回收率0.1%更嚴(yán)格的要求。由于微生物取樣方法的內(nèi)在差異，污染回收率是一個(gè)在趨勢(shì)結(jié)果方面比關(guān)注某個(gè)取樣點(diǎn)的數(shù)值變化方面更有用的參數(shù)。表3列出了無(wú)菌工藝環(huán)境推薦的污染回收率。事件率是指環(huán)境樣品發(fā)現(xiàn)微生物污染的比率。如，事件率為1%意味著1%的樣品發(fā)現(xiàn)了污染，而不管這個(gè)污染是不是菌落。也就是，99%的樣品是完全沒(méi)有污染的。在進(jìn)行低風(fēng)險(xiǎn)活動(dòng)的相似房間，污染回收率比表3中的推薦值高也是可以接受的。當(dāng)污染回收率趨勢(shì)在持續(xù)一段時(shí)間內(nèi)高于推薦值，應(yīng)該采取一定的行動(dòng)。表3推薦的無(wú)菌環(huán)境初始污染回收

38、率房間級(jí)別動(dòng)態(tài)空氣樣品（%）沉降碟（9cm）/暴露4小時(shí)（）接觸碟（）手套或衣服（）隔離器/封閉的RABS（IS05或更好）0.10.10.1IS051111IS063333IS075555IS0810101010在這些環(huán)境中的操作人員均應(yīng)進(jìn)行無(wú)菌更衣（隔離器周?chē)h(huán)境除外）。這些推薦值不適用于無(wú)菌產(chǎn)品的生產(chǎn)區(qū)域或其他不需要完全無(wú)菌更衣的控制環(huán)境。檢出頻率的制定應(yīng)根據(jù)實(shí)際的監(jiān)控?cái)?shù)據(jù)制定，并每月進(jìn)行評(píng)估。行動(dòng)限應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)操作能力制定。如果檢出頻率超過(guò)了表3的推薦值或者超出了確定的生產(chǎn)能力，應(yīng)實(shí)施糾正措施糾正措施包括但不限于下列內(nèi)容：回顧消毒計(jì)劃，包括抑菌劑的選擇、使用方法和頻率。增加人員操作的監(jiān)視

39、，可能包括無(wú)菌方法和技術(shù)的書(shū)面評(píng)價(jià)?；仡櫸⑸锶臃椒ê图夹g(shù)。當(dāng)手套和無(wú)菌衣的污染回收水平高出正常水平時(shí)，糾正措施還應(yīng)包括對(duì)更衣操作的額外培訓(xùn)。有效的短暫偏離一個(gè)IS05環(huán)境的樣品在15cfu以上的偏離，無(wú)論是空氣、表面或人員都應(yīng)當(dāng)極少發(fā)生。在這些偏離在ISO5的接近產(chǎn)品和組分的關(guān)鍵區(qū)域內(nèi)發(fā)生時(shí)，都表明嚴(yán)重的失控。因此所有ISO5中15cfu的偏離都應(yīng)進(jìn)行細(xì)心而全面的調(diào)查。應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注回收菌落的非常高的數(shù)值，無(wú)論它是單獨(dú)存在或與其他回收菌落相關(guān)聯(lián)存在。微生物檢測(cè)人員應(yīng)回顧非常高的數(shù)值發(fā)生前至少兩周的回收率，才能發(fā)現(xiàn)其他表現(xiàn)不正常的回收。微生物檢測(cè)人員應(yīng)謹(jǐn)慎地考慮所有的回收率，包括通常在1-5cf

40、u之間的回收。在執(zhí)行調(diào)查時(shí)，微生物鑒別是一項(xiàng)重要因素。由于獨(dú)立的一個(gè)偏離幾乎不可能指向一個(gè)確定的原因，只能考慮總體相關(guān)測(cè)試。當(dāng)沒(méi)有明確的科學(xué)數(shù)據(jù)時(shí)，要給出一個(gè)根本原因是不明智的。同時(shí)，也要了解微生物分析的多變性實(shí)際上，沒(méi)有一個(gè)科學(xué)的原因能將25cfu和15cfu進(jìn)行區(qū)別。在無(wú)菌生產(chǎn)工藝中，不應(yīng)將15cfu作為一個(gè)有意義的數(shù)值，因?yàn)閷?shí)際上它和14cfu沒(méi)什么區(qū)別。微生物檢測(cè)人員應(yīng)用他們的方式對(duì)偏離進(jìn)行實(shí)際的科學(xué)的判斷。數(shù)據(jù)解釋的進(jìn)一步思考在高質(zhì)量的無(wú)菌工藝環(huán)境中，檢出頻率通常應(yīng)當(dāng)很低?？梢杂斜?的推薦回收率看出，無(wú)菌工藝中的多數(shù)樣品可能得到的污染回收率為0。在無(wú)菌工藝操作的最關(guān)鍵區(qū)域，希望得到回

41、收污染物的樣品比1%更少。在大多數(shù)使用分離技術(shù)的高級(jí)現(xiàn)代無(wú)菌工藝中，如隔離器和封閉的RABS，所有的回收率可能都是0.對(duì)環(huán)境控制和滅菌保證負(fù)責(zé)的微生物檢測(cè)人員不應(yīng)當(dāng)將此認(rèn)為環(huán)境質(zhì)量已達(dá)到滅菌狀態(tài)。微生物取樣系統(tǒng)在所有項(xiàng)目的靈敏度是未知的。在環(huán)境監(jiān)測(cè)中，0的結(jié)果只意味著結(jié)果在檢測(cè)系統(tǒng)的檢測(cè)線(xiàn)以下。不應(yīng)當(dāng)從無(wú)菌工藝的污染回收的頻率低得到錯(cuò)誤的安全意識(shí)。滅菌保證是通過(guò)關(guān)注人類(lèi)攜帶的污染和最大限度地減少這些污染的設(shè)備設(shè)計(jì)特征來(lái)最好的實(shí)現(xiàn)的。通過(guò)合適的設(shè)備設(shè)計(jì)和為設(shè)施中的人提供充足的換氣次數(shù)來(lái)減少或消除人類(lèi)的干預(yù)可以最大限度地減少風(fēng)險(xiǎn)。其他的風(fēng)險(xiǎn)降低因素包括有效的人員和物料活動(dòng)、對(duì)溫濕度的合理控制；其次

42、還有清潔和消毒。預(yù)先分析工藝，通過(guò)減少操作干預(yù)降低人類(lèi)污染風(fēng)險(xiǎn)的風(fēng)險(xiǎn)分析模式是一個(gè)在滅菌保證方便比監(jiān)測(cè)方面更有力的工具。環(huán)境監(jiān)測(cè)不能證明一批產(chǎn)品的所有方面都是無(wú)菌的，也也不能證明是非無(wú)菌的。環(huán)境監(jiān)測(cè)只能保證在這個(gè)工藝中生產(chǎn)系統(tǒng)處于一個(gè)持續(xù)、有效的控制狀態(tài)。應(yīng)注意避免通過(guò)監(jiān)測(cè)結(jié)果得到錯(cuò)誤的結(jié)論。空氣微生物采樣最常用的監(jiān)測(cè)無(wú)菌環(huán)境的工具是撞擊取樣器和離心取樣器。下面列出了一系列常見(jiàn)取樣器，以供參考。選擇、實(shí)用性和正確地使用一種特定的取樣器是使用者的職責(zé)。狹縫-瓊脂空氣采樣器（STA）-這個(gè)裝置由一個(gè)相連的真空源提供動(dòng)力。采集的空氣通過(guò)一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)狹縫，達(dá)到底部緩慢旋轉(zhuǎn)的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)皿上?？諝鈹y帶的微粒

43、具有足夠的質(zhì)量撞擊瓊脂表面，并且可培養(yǎng)的微生物在上面生長(zhǎng)。一個(gè)長(zhǎng)的空氣吸氣管用來(lái)降低對(duì)不定向氣流的擾亂。篩網(wǎng)撞擊式取樣器-裝置由一個(gè)盛有營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)皿的容器組成。單元蓋子是鑿孔的，帶有預(yù)定尺寸的穿孔。真空泵通過(guò)蓋子采集一定體積的空氣，空氣中包含微生物的粒子撞擊皮氏培養(yǎng)皿中的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。一些采樣器具有一系列篩網(wǎng)，不同級(jí)的篩網(wǎng)上的孔徑尺寸漸減。這些單元可以根據(jù)微粒通過(guò)不同孔徑的小孔落到瓊脂平面來(lái)測(cè)定包含可觀測(cè)微生物的空氣粒子的粒徑分布。離心采樣器-這種裝置包括一個(gè)螺旋推進(jìn)器或渦輪機(jī)，將一定體積的空氣推進(jìn)，然后推進(jìn)空氣切向撞擊放置在活動(dòng)塑料平板上的營(yíng)養(yǎng)瓊脂條。滅菌微生物腔-這是一種單級(jí)篩網(wǎng)撞擊采

44、樣器的改良裝置。單元蓋上有特殊分布的約0.25英寸大小的孔。裝置底部有一個(gè)含有營(yíng)養(yǎng)瓊脂的培養(yǎng)皿。真空泵控制空氣運(yùn)動(dòng)通過(guò)采樣單元。也有使用集成采樣單元和遠(yuǎn)程采樣探針的。表面空氣系統(tǒng)采樣器-整個(gè)單元包括盛有瓊脂接觸平皿的進(jìn)樣部分，緊挨著平皿下是一個(gè)發(fā)動(dòng)機(jī)和渦輪機(jī)推動(dòng)氣體通過(guò)打孔的蓋子到達(dá)瓊脂接觸平皿，并通過(guò)發(fā)動(dòng)機(jī)排出。也有集成形式的裝置。明膠濾鏡采樣器-在濾鏡底座上一個(gè)具有延伸軟管終端的真空泵可以到達(dá)關(guān)鍵區(qū)域的角落。濾鏡包括能夠截留空氣微生物的隨機(jī)光纖。經(jīng)過(guò)一定的暴露時(shí)間后，過(guò)濾器被在無(wú)菌條件下轉(zhuǎn)移并在合適的溶劑中溶解，然后置于合適的瓊脂培養(yǎng)基上評(píng)估微生物效力。沉降碟-這個(gè)方法被廣泛用作取樣，和作為通過(guò)延長(zhǎng)暴露時(shí)間定性評(píng)價(jià)環(huán)境的一種廉價(jià)方式。有報(bào)道數(shù)據(jù)表明沉降碟在暴露4-5小時(shí)后可以提供一個(gè)適合評(píng)價(jià)無(wú)菌環(huán)境的檢測(cè)限度。沉降碟可能對(duì)關(guān)鍵區(qū)域尤為有效，因?yàn)閯?dòng)態(tài)取樣和無(wú)菌操作可能干擾并對(duì)環(huán)境造成危害。機(jī)械空氣取樣的一個(gè)主要缺點(diǎn)是用于測(cè)試的有限的取樣體積。當(dāng)控制環(huán)境的空氣微生物水平希望達(dá)到每單位體積的污染水平極低時(shí)，至少應(yīng)測(cè)試1立方米空氣以達(dá)到最大靈敏度。通常，狹縫-凝膠采樣器具有80L/min的采樣能力（表面空氣系統(tǒng)的采樣能力稍高）。如