蛋白芯片技術(shù)的研究現(xiàn)狀課件

1、蛋白芯片技術(shù)的研究現(xiàn)狀蛋白芯片技術(shù)的研究現(xiàn)狀蛋白芯片技術(shù)的研究現(xiàn)狀為了實(shí)現(xiàn)這個(gè)目的，首先必須通過(guò)一定的方法將蛋白質(zhì)固定于合適的載體上，同時(shí)能夠維持蛋白質(zhì)的天然構(gòu)象，也就是必須防止其變性以維持其原有特定的生物學(xué)活性。另外，由于生物細(xì)胞中蛋白質(zhì)的多樣性和功能的復(fù)雜性，開發(fā)和建立具有多樣品并行處理能力、能夠進(jìn)行快速分析的高通量蛋白芯片技術(shù)將有利于簡(jiǎn)化和加快蛋白質(zhì)功能研究的進(jìn)展。2021/2/42為了實(shí)現(xiàn)這個(gè)目的，首先必須通過(guò)一定的方法將蛋白質(zhì)固定于合適的載體上，同時(shí)能夠維持蛋白質(zhì)的天然構(gòu)象，也就是必須防止其變性以維持其原有特定的生物學(xué)活性。另外，由于生物細(xì)胞中蛋白質(zhì)的多樣性和功能的復(fù)雜性，開發(fā)和建立

2、具有多樣品并行處理能力、能夠進(jìn)行快速分析的高通量蛋白芯片技術(shù)將有利于簡(jiǎn)化和加快蛋白質(zhì)功能研究的進(jìn)展。2021/2/422021/2/432021/2/442021/2/452021/2/462021/2/47蛋白芯片技術(shù)的研究現(xiàn)狀日本學(xué)者Velev利用含有陽(yáng)離子表面活性劑（HTAB）脂質(zhì)體作為載體，通過(guò)戊二醛作用使其與一種鐵蛋白包裹外殼的成分結(jié)合組裝制備成為一種納米水平的裝配體，這種裝配體可以在適當(dāng)?shù)膒H條件下，使鐵蛋白分子進(jìn)入并固定于包裹外殼內(nèi)面，形成蛋白質(zhì)的載體。2021/2/48Adachi等利用某些固體表面或薄膜覆蓋上含有電解質(zhì)的薄膜作為載體，可以將膠體蛋白質(zhì)顆粒成分轉(zhuǎn)移至薄膜上形成蛋

3、白芯片。Uetz等在分析啤酒酵母基因組序列全長(zhǎng)度閱讀框架編碼各種蛋白質(zhì)的相互作用的過(guò)程，使用不同孔數(shù)的平板作為載體，建立了約含有6000個(gè)酵母轉(zhuǎn)化株組成的平板蛋白芯片系統(tǒng)，平板上的每一個(gè)小孔中含有一個(gè)酵母轉(zhuǎn)化株，可以根據(jù)其活性功能區(qū)開放閱讀框架的編碼表達(dá)生成一種蛋白質(zhì)，利用這個(gè)系統(tǒng)可以用于蛋白質(zhì)功能的檢測(cè)和分析。2021/2/49Arenkov等利用聚丙烯酰胺凝膠板作為支持物，將蛋白樣品置于凝膠上，然后經(jīng)過(guò)電泳分離，使其成為蛋白的陣列用于進(jìn)一步的研究。哈佛大學(xué)蛋白芯片研究中心Gavin等利用制備DNA芯片的高精密度機(jī)械手的針狀點(diǎn)樣槍頭在只有顯微鏡載玻片一半大小的玻片上，制備了第一張含有樣品點(diǎn)數(shù)

4、為10800的蛋白芯片。這張芯片用已純化的蛋白，按每點(diǎn)為1納升的點(diǎn)樣量點(diǎn)樣10799次，2021/2/410另一次用FRB（FK-BR12- rapamycin binding domain of FKBP-rapamycin-associated protein）點(diǎn)樣。為了確保不同分子量的點(diǎn)樣蛋白質(zhì)都能夠被固定在玻片上，他們首先在玻片表面涂上BSA，然后使用N，N-二琥珀酰胺碳酸 （N，N-disuccinimidyl carbonate）激活BSA表面的賴氨酸、天冬氨酸和谷氨酸殘基成為BSA-NHS玻片，其作用是促進(jìn)BSA與點(diǎn)樣蛋白質(zhì)的結(jié)合而使蛋白質(zhì)被固定于玻片上。2021/2/411在制

5、備芯片過(guò)程中，為了保證被固定在載體上的蛋白質(zhì)依然保持天然的構(gòu)象和生物學(xué)活性，在蛋白質(zhì)點(diǎn)樣的磷酸鹽緩沖液中加入40%的甘油，以防止因汽體的蒸發(fā)而造成的蛋白質(zhì)變性。點(diǎn)樣后再經(jīng)3h的溫浴并將芯片浸泡于含有小牛血清蛋白（BSA）的緩沖液中，使芯片表面含有一層小牛血清蛋白，用于封閉與其他蛋白質(zhì)產(chǎn)生非特異性結(jié)合的部位及在表面未參加反應(yīng)的醛基（封閉）。2021/2/412為了檢測(cè)芯片的應(yīng)用，他們用不同熒光抗體分別標(biāo)記能與蛋白G和FRB特異結(jié)合的IgG和 FKBP12（12Kd FK506-binding protein）并作用于蛋白芯片，觀察這些蛋白質(zhì)與蛋白芯片的相互作用，其結(jié)果清晰地顯示芯片上的蛋白G和單

6、一的FRB點(diǎn)樣分別被標(biāo)上藍(lán)色和紅色熒光。 該實(shí)驗(yàn)研究建立了蛋白質(zhì)樣品微量點(diǎn)樣技術(shù)并使蛋白質(zhì)固定于載體上時(shí)能夠保留原有的構(gòu)象和生物學(xué)活性，這將為今后對(duì)蛋白質(zhì)多樣品的并行研究或快速分析-為制備高通量功能檢測(cè)的蛋白芯片奠定了技術(shù)基礎(chǔ)。2021/2/413蛋白芯片的應(yīng)用研究Holt等利用蛋白芯片技術(shù)篩選能夠相互結(jié)合的特異抗體抗原成分，他們利用12種表達(dá)較強(qiáng)但尚未接觸任何抗原的抗體片段篩選含有27648種人胎腦蛋白的蛋白芯片，從中找出了4組高度特異性的抗原（蛋白）-抗體復(fù)合物，其中有3種抗體結(jié)合的蛋白質(zhì)功能未明，但是由于表達(dá)水平都較低，說(shuō)明這種抗原-抗體的結(jié)合技術(shù)是一種具有較高特異性和敏感性的篩選方法，

7、可以用于高通量篩選分離各種不同的抗體成分，或檢測(cè)基因的表達(dá)和蛋白分子間的相互作用，這將有助于對(duì)某些疾病（包括腫瘤） 的發(fā)病分子機(jī)理的研究，以及協(xié)助尋找疾病診斷和治療的靶分子。根據(jù)蛋白芯片技術(shù)的基本原理，可以將不同的抗體固定于載體上成為抗體蛋白芯片，用于檢測(cè)不同組織產(chǎn)生的蛋白質(zhì)。2021/2/414Ge在蛋白質(zhì)的相互作用的研究中，采用了一種通用的蛋白質(zhì)芯片系統(tǒng)，該系統(tǒng)敏感有效，用途廣泛，可定量測(cè)定及重復(fù)使用， 而且操作簡(jiǎn)易。Gavin等應(yīng)用蛋白芯片技術(shù)觀察代謝過(guò)程有關(guān)作用物和酶的相互作用關(guān)系。他們選擇三對(duì)激酶-作用物系統(tǒng)，即依賴3，5-磷酸蛋白激酶-Kemptide； 蛋白激酶-蛋白質(zhì)磷酸酶抑制

8、因子2和p42促有絲分裂激活蛋白（MAP）激酶（ErK2）-E1K1，首先將各系統(tǒng)的作用物按順序固定于三張 BSA-NHS玻片上，分別在有同位素-33P ATP的環(huán)境中，與不同蛋白激酶溫浴，然后，玻片經(jīng)用乳劑處理后可在光鏡下觀察到各種蛋白激酶催化特異的作用物產(chǎn)生磷酸化反應(yīng)。其結(jié)果提示蛋白芯片技術(shù)可以應(yīng)用于作用物與酶相互作用的研究及代謝機(jī)制的分析。2021/2/415Gavin等還在蛋白芯片技術(shù)研究過(guò)程通過(guò)DIG、生物素和合成的六氫吡喧酮胺（即AP1497）等三種具有對(duì)應(yīng)的蛋白受體的小分子特質(zhì)，研究蛋白的受體蛋白按順序固定的相互作用。他們首先將三種小分子物質(zhì)的受體蛋白按順序固定于同一載體上并制備

9、成為相同的四張蛋白芯片，將BSA分別用熒光物質(zhì)（Alexa488、Cy3或Cy5）標(biāo)記，并分與DIG、生物素和AP1497三種小分子物質(zhì)結(jié)合成為探 針，用每一種具有不同熒光標(biāo)記的探針作用芯片，結(jié)果只有能與小分子對(duì)應(yīng)的受體蛋白被標(biāo)上熒光。上述結(jié)果說(shuō)明使用的熒光劑之間沒(méi)有交叉的熒光激發(fā)和發(fā)光 作用，因此，將三種標(biāo)記探針混合后作用于蛋白芯片，則可使三種不同的受體蛋白同時(shí)標(biāo)記上不同的熒光。研究結(jié)果提示蛋白芯片技術(shù)對(duì)于新藥的發(fā)掘是十分有用的，因?yàn)樗鼘?duì)尋找新藥作用的靶點(diǎn)非常方便。2021/2/416存在的問(wèn)題及應(yīng)用前景雖然目前已經(jīng)成功地制出了第一張具有高通量分析作用的蛋白芯片，通過(guò)適當(dāng)?shù)募夹g(shù)處理可以使點(diǎn)樣

10、蛋白保持天然的構(gòu)象和生物學(xué)活性。但是，利用蛋白芯片技術(shù)對(duì)于蛋白質(zhì)功能的研究仍然存在著種種問(wèn)題，例如目前大多數(shù)來(lái)自于cDNA文庫(kù)的克隆體系不能通過(guò)正確的閱讀框架編碼蛋白質(zhì)；或者不能正確表達(dá)產(chǎn)生具有氨基酸全序列的蛋白分子；通過(guò)細(xì)菌表達(dá)的蛋白質(zhì)不能形成正常的空間構(gòu)象等，都將直接影響有關(guān)蛋白質(zhì)功能的研究。另外，為了方便種類繁多的蛋白質(zhì)的功能檢測(cè)和分析，通過(guò)不同途徑或方式獲取并用于制作蛋白芯片的蛋白質(zhì)必須首先經(jīng)過(guò)純化。正常和異常情況下蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間的相互作用的差別都需要我們進(jìn)一步去探索。2021/2/417高通量分析平臺(tái)蛋白芯片技術(shù)的建立將為蛋白質(zhì)功能及其相關(guān)的研究提供快速、高信息量和更為直接的研究

11、方法，與其他的分子生物學(xué)分析方法相比，蛋白芯片技術(shù)具有快速、平行的優(yōu)越性。該方法的建立和應(yīng)用將有助于人類揭示疾病發(fā)生的分子機(jī)制及尋找更為合理有效的治療手段和途徑。2021/2/418蛋白質(zhì)芯片的意義1、蛋白質(zhì)是基因表達(dá)的最終產(chǎn)物，接近生命活動(dòng)的物質(zhì)層面；2、探針蛋白特異性高、親和力強(qiáng), 可簡(jiǎn)化樣品前處理，甚至可直接利用生物材料（血樣、尿樣、細(xì)胞及組織等）進(jìn)行檢測(cè)；3、適合高通量篩選與靶蛋白作用的化合物；4、有助于了解藥物或毒物與其效應(yīng)相關(guān)蛋白質(zhì)的相互作用。2021/2/419蛋白質(zhì)芯片的分類：1、蛋白質(zhì)檢測(cè)芯片；2、蛋白質(zhì)功能芯片。2021/2/420蛋白質(zhì)芯片的制備1、固相載體及其處理（滴定

12、板、濾膜、凝膠、載玻片）；2、蛋白質(zhì)的預(yù)處理 選擇具有較高純度和完好生物活性的蛋白進(jìn)行溶解；3、點(diǎn)制微陣列 可使用點(diǎn)制基因微陣列的商品化點(diǎn)樣儀或噴墨法等；4、膜為載體：芯片放入濕盒，371h；載玻片為載體：化學(xué)修飾產(chǎn)生醛基固定蛋白；5、微陣列的封閉固定微陣列上的蛋白樣點(diǎn)，主要封閉試劑：BSA或Gly。2021/2/421液相蛋白芯片技術(shù)及其應(yīng)用進(jìn)展液相蛋白芯片技術(shù)由美國(guó)Luminex公司研制開發(fā)并于2O世紀(jì)9O年代中期發(fā)展起來(lái)，是在流式細(xì)胞技術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) (enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)技術(shù)和傳統(tǒng)芯片技術(shù)基礎(chǔ)上開發(fā)的新一代生物芯片技術(shù)和

13、新型蛋白質(zhì)研究平臺(tái)。液相蛋白芯片技術(shù)推動(dòng)了功能基因組時(shí)代的蛋白質(zhì)研究， 相關(guān)的儀器、分析軟件以及試劑盒研發(fā)備受矚目并已形成一定的市場(chǎng)規(guī)模。2021/2/4222021/2/4232021/2/424液相蛋白芯片技術(shù)的基本原理液相芯片技術(shù)在國(guó)際上被稱之為xMAP(flexible MultilyteProfiling)技術(shù)，其核心技術(shù)是乳膠微球包被、熒光編碼以及液相分子雜交。液相芯片體系以聚苯乙烯微球(beads)為基質(zhì)， 微球懸浮于液相體系，每種微球可根據(jù)不同研究目的標(biāo)定上特定抗體或受體探針，可對(duì)同一樣品中多個(gè)不同的分子同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。微球表面可進(jìn)行一系列修飾以適合固定各種蛋白、多肽或核酸等生物

14、分子。xMAP技術(shù)可應(yīng)用于蛋白或核酸的功能及其相互作用研究，分別稱之為液相蛋白芯片技術(shù)和液相基因芯片技術(shù)。2021/2/425液相蛋白芯片體系主要包括微球、蛋白探針?lè)肿?、被檢測(cè)物和報(bào)告分子四種成分。在液相系統(tǒng)中，為了區(qū)分不同的探針，每一種用于標(biāo)記探針的微球都帶有獨(dú)特的色彩編碼，其原理是在微球中摻入不同比例的紅色分類熒光及發(fā)色劑，可產(chǎn)生100種顏色差別的微球，可標(biāo)記上100種探針?lè)肿樱芡瑫r(shí)對(duì)一個(gè)樣品中多達(dá)100種不同目標(biāo)分子進(jìn)行檢測(cè)。反應(yīng)過(guò)程中，探針和報(bào)告分子都分別與目標(biāo)分子特異性結(jié)合。結(jié)合反應(yīng)結(jié)束后，使單個(gè)的微球通過(guò)檢測(cè)通道，使用紅、綠雙色激光同時(shí)對(duì)微球上的紅色分類熒光和報(bào)告分子上的綠色報(bào)告

15、熒光進(jìn)行檢測(cè)，可確定所結(jié)合的檢測(cè)物的種類和數(shù)量。2021/2/4262021/2/4272021/2/428液相蛋白芯片技術(shù)的特點(diǎn)液相蛋白芯片技術(shù)有機(jī)地整合了微球、激光檢測(cè)技術(shù)、流體動(dòng)力學(xué)、高速的數(shù)字信號(hào)處理系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)運(yùn)算功能，不僅檢測(cè)速度極快，而且在免疫診斷以及蛋白質(zhì)分子相互作用分析方面，其特異性和敏感性往往也超越常規(guī)技術(shù)。2021/2/4291、 反應(yīng)快速，靈敏度高。反應(yīng)環(huán)境為液相、微球上固定的探針與待檢樣品均在溶液中反應(yīng)，其彼此間碰撞幾率與速度相對(duì)于固相芯片或ElISA等反應(yīng)模式，可增加 1O倍以上，因此可提高反應(yīng)速度及靈敏度?？乖豢贵w等蛋白質(zhì)分子相互作用的結(jié)果可在瞬間經(jīng)激光判定后由

16、電腦以數(shù)據(jù)信息的形式記錄下來(lái)，敏感性顯著超越酶聯(lián)信號(hào)或常規(guī)雜交信號(hào)檢測(cè)。2021/2/4302、通量大，可同時(shí)檢測(cè)多種目標(biāo)物，所需成本較低，減少人力消耗，可對(duì)同一樣品中多達(dá)100種分子同時(shí)進(jìn)行分析。液相芯片系統(tǒng)采用96孔板為反應(yīng)容器，在35-60min內(nèi)，可對(duì)96個(gè)不同的樣品進(jìn)行檢測(cè)，所需樣品用量比常規(guī)方法少。3、可進(jìn)行多元化分析，靈活性好，可適用于各種蛋白質(zhì)分析，應(yīng)用廣泛。通過(guò)對(duì)微球表面的修飾，可固定各種抗體或受體分子，從而滿足不同檢測(cè)和功能的研究需要。2021/2/4314、采用接近生物系統(tǒng)內(nèi)部環(huán)境的完全液相反應(yīng)體系，穩(wěn)定性好。液相環(huán)境更有利于保持蛋白質(zhì)的天然構(gòu)象，不僅有利于探針和被檢測(cè)物

17、的反應(yīng)，也更能保證反應(yīng)的特異性和穩(wěn)定性。5、操作簡(jiǎn)便，不需洗滌，耗時(shí)短。常規(guī)ELISA或固相芯片技術(shù)，每一步反應(yīng)之后都需充分洗滌以去除非特異結(jié)合成分，耗時(shí)且易造成污染。而液相芯片技術(shù)可以避免這些過(guò)程和弊端。2021/2/432蛋白芯片在免疫診斷和分析領(lǐng)域的應(yīng)用蛋白芯片系統(tǒng)適用于蛋白質(zhì)組學(xué)研究，臨床研究和藥物研究中的各種蛋白質(zhì)分析，已被應(yīng)用于細(xì)胞因子和激酶的檢測(cè)、抗原決定簇的篩選、多種蛋白質(zhì)過(guò)敏原檢測(cè)、傳染病快速診斷以及與各種抗原、抗體反應(yīng)相關(guān)的檢測(cè)當(dāng)中。在免疫診斷與分析研究應(yīng)用方面，全球已有上百篇公開發(fā)表的論文和研究報(bào)道，主要可歸納為以下幾方面。2021/2/4331、傳染病的快速檢測(cè)和疾病診

18、斷：xMAP液相蛋白芯片免疫診斷方法又稱為微球免疫方法(micro-sphere immunoassay)，國(guó)內(nèi)外已建立多種微球免疫方法用于人和動(dòng)物傳染病快速檢測(cè)以及人類疾病診斷研究。2021/2/434Yan 等建立微球免疫檢測(cè)方法進(jìn)行流感病毒檢測(cè)和分型，并與EusA方法比較，結(jié)果表明微球免疫法對(duì)流感病毒粒子和重組血凝素抗原的檢測(cè)敏感性均提高了10倍。 Wong等建立微球免疫方法快速檢測(cè)西尼羅病毒（WestNilevirus），并能與登革熱病毒感染、圣路易斯腦炎 (StLousisencephalitis)病毒感染以及黃熱病(flavivirus)免疫鑒別開。Biagini等應(yīng)用液相蛋白芯片

19、技術(shù)檢測(cè)人群血樣中抗炭疽IgG抗體，并與ELISA方法相比較，結(jié)果表明，前者更加敏感和快速，穩(wěn)定性好，樣品用量少，檢測(cè)動(dòng)力學(xué)范圍廣。2021/2/435Biagini等還建立蛋白芯片方法同時(shí)檢測(cè)血清中23種血清型的肺炎球菌莢膜多糖抗體。Pickering等將蛋白芯片檢測(cè)免疫方法應(yīng)用于檢測(cè)破傷風(fēng)(tetanus)、白喉 (diphtheria)以及B型嗜血性流感桿菌(haemophilusinfluenzatypeB)疫苗免疫抗體，并與ELISA方法相比較。對(duì) 81份樣品，兩種方法對(duì)三種疫苗抗體的檢測(cè)符合率可達(dá)91%-96%，而蛋白芯片方法能減少人力和試劑消耗，并縮短檢測(cè)時(shí)間。2021/2/43

20、6在定量檢測(cè)方面，國(guó)外也有報(bào)道。Dias等建立蛋白芯片方法，用于定量檢測(cè)抗人乳頭瘤病毒6、11、16和18型中和抗原的抗體，并根據(jù)檢測(cè)結(jié)果確定用于臨床診斷判定的抗體閾值。Lal等建立蛋白芯片免疫檢測(cè)方法，用于同時(shí)定量檢測(cè)抗9種血清型肺炎鏈球菌的IgG抗體，研究表明，蛋白芯片方法可用于肺炎鏈球菌疫苗免疫效果的評(píng)估。2021/2/437國(guó)外還有報(bào)道建立蛋白芯片方法用于檢測(cè)艾滋病病毒抗體、皰疹病毒抗體、麻疹和腮腺炎抗體、弓形蟲抗體、呼吸道合胞病毒抗體、類風(fēng)濕因子等以及一種人類醫(yī)學(xué)紊亂癥-乳糜瀉(celiacdiseases)的診斷。2021/2/4382、細(xì)胞因子檢測(cè)與研究：應(yīng)用蛋白芯片技術(shù)可對(duì)微量

21、樣品同時(shí)定量檢測(cè)多種細(xì)胞因子。在人細(xì)胞因子的檢測(cè)和研究方面，蛋白芯片技術(shù)的應(yīng)用目前已有多篇報(bào)道。2021/2/439Skogstrand 等應(yīng)用蛋白芯片技術(shù)同時(shí)檢測(cè)新生兒干血點(diǎn)樣品(dried blood spot samples，DBSS)中25種細(xì)胞因子。新生兒炎癥反應(yīng)可能與腦癱、自閉癥和糖尿病等一些遲發(fā)的疾病有關(guān)，對(duì)新生兒進(jìn)行炎癥因子檢測(cè)將有助于上述疾病的病原學(xué)研究。通常采用DBSS（Diluting buffer solution for serum）樣品進(jìn)行檢測(cè)，由于樣品量少，采用常規(guī)免疫學(xué)方法對(duì)一份樣品難以檢測(cè)多種因子。而蛋白芯片方法可解決這個(gè)問(wèn)題。采用蛋白芯片對(duì)儲(chǔ)存20年以上的樣

22、品進(jìn)行檢測(cè)，仍能檢測(cè)到大多數(shù)細(xì)胞因子。研究表明，蛋白芯片應(yīng)用于檢測(cè)DBSS樣品中的細(xì)胞因子是可靠的，在新生兒疾病篩查方面應(yīng)用潛力大。2021/2/440Gorelik 等應(yīng)用蛋白芯片檢測(cè)人體中24種細(xì)胞因子的濃度水平，以研究細(xì)胞因子水平與卵巢癌早期診斷的關(guān)系。研究人員對(duì)卵巢癌早期患者、健康人群和良性骨腫瘤患者的 血樣，同時(shí)檢測(cè)多種細(xì)胞因子和癌癥抗原(CA-125)并比較其濃度水平。結(jié)果顯示，CA-125以及白細(xì)胞介素IL-6、IL-8等6種標(biāo)記物的濃度水平在卵巢癌早期患者和健康人血樣中有顯著差異。研究表明，應(yīng)用蛋白芯片檢測(cè)上述標(biāo)記物的濃度變化可作為卵巢癌早期診斷的手段。2021/2/441Jo

23、hannisson等應(yīng)用蛋白芯片方法檢測(cè)豬促炎癥細(xì)胞因子（proinflammatory cytokines），靈敏度可達(dá)0.18-12ngml。這是首次報(bào)道采用蛋白芯片技術(shù)檢測(cè)動(dòng)物體內(nèi)細(xì)胞因子。2021/2/4423、 抗核抗體、抗多肽抗體檢測(cè)、抗體應(yīng)答等免疫分析研究：Rouquette等應(yīng)用蛋白芯片檢測(cè)試劑盒定量檢測(cè)了9種抗核抗體(antinuclear antibodies)，并與常規(guī)ELISA和免疫熒光試劑盒相比較，對(duì)222例血清樣品的檢測(cè)結(jié)果表明，蛋白芯片方法與常規(guī)方法的檢測(cè)符合率介于 99.1%-100.0%。Komatsu等建立蛋白芯片方法，用于檢測(cè)抗多肽抗體，以監(jiān)測(cè)多肽疫苗的免

24、疫應(yīng)答情況；檢測(cè)表明，蛋白芯片方法的敏感度與商品化ELISA試劑盒相當(dāng)，但前者所需樣品量少，檢測(cè)時(shí)間縮短，成本較低。2021/2/443Khan等建立蛋白芯片方法，用于進(jìn)行淋巴細(xì)胞胞內(nèi)信號(hào) 通道研究。該方法可以檢測(cè)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中T細(xì)胞和B細(xì)胞胞內(nèi)發(fā)生的信號(hào)蛋白磷酸化動(dòng)力學(xué)變化，從而可揭示淋巴細(xì)胞信號(hào)通道的作用機(jī)制。試驗(yàn)表明，蛋白芯片方法可同時(shí)檢測(cè)多種信號(hào)蛋白的動(dòng)力學(xué)動(dòng)態(tài)變化過(guò)程。Williams等應(yīng)用蛋白芯片方法檢測(cè)患者血樣中多種異嗜性抗體 (heterophilantibodies)，分析了艾滋病免疫檢測(cè)中假陽(yáng)性反應(yīng)產(chǎn)生的原因，為排除假陽(yáng)性反應(yīng)提供了解決方法。2021/2/444研究人員建立

25、了同時(shí)檢測(cè)抗牛、羊、鼠以及牛血清白蛋白IgG抗體的蛋白芯片方法，對(duì)多例患者血清進(jìn)行檢測(cè)試驗(yàn)，結(jié)果表明，在常規(guī)檢測(cè)中出現(xiàn)非特異性染色反應(yīng)的樣品，均不同程度存在上述異嗜性抗體。將樣品事先與上述抗體孵育后再進(jìn)行蛋白芯片檢測(cè)或ELISA常規(guī)檢測(cè)，可以排除非特異反應(yīng)。2021/2/445細(xì)胞芯片細(xì)胞芯片為醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)提供了一種高通量、大樣本以及快速的細(xì)胞分子水平的分析工具。它克服了傳統(tǒng)細(xì)胞學(xué)方法和基因芯片、蛋白芯片技術(shù)中存在的某些缺陷，使人類可有效利用成百上千個(gè)自然或處于特定狀態(tài)下的細(xì)胞株或細(xì)胞系來(lái)研究特定基因及其所表達(dá)的蛋白質(zhì)與疾病之間的相互關(guān)系，對(duì)于科研、開發(fā)、疾病的分子診斷、預(yù)后分析、藥物治療靶

26、點(diǎn)的篩選、組織分布、細(xì)胞定位、抗體藥和新藥的篩選等方面均有十分廣泛的實(shí)用價(jià)值。它的出現(xiàn)，將從根本上改變臨床檢測(cè)的觀念和效率，并為創(chuàng)建新的腫瘤早期檢測(cè)方法提供參考方向。 2021/2/446細(xì)胞芯片用途： 1免疫細(xì)胞化學(xué) 2原位雜交與原位PCR 3基因與蛋白的表達(dá)和調(diào)控 4單抗的篩選與鑒定 5藥物的篩選與鑒定 6腫瘤的研究 2021/2/447細(xì)胞芯片特點(diǎn)：1,特異性及靈敏度高2,高通量3,適用范圍廣4,操作簡(jiǎn)便靈活5,結(jié)果可靠6,便于設(shè)計(jì)各種試驗(yàn)對(duì)照7,可以進(jìn)行自動(dòng)化分析2021/2/448細(xì)胞芯片可以廣泛的與核酸，蛋白質(zhì)，細(xì)胞，組織，微生物技術(shù)相結(jié)合，分別在基因，轉(zhuǎn)錄和表達(dá)產(chǎn)物的這三個(gè)水平進(jìn)

27、行生物學(xué)功能研究。結(jié)合顯微鏡技術(shù)檢測(cè)探針?lè)肿与s交信號(hào)的強(qiáng)度，利用計(jì)算機(jī)綜合分析后，可獲得樣本中特定基因及相關(guān)蛋白的表達(dá)信息。2021/2/4492021/2/4502021/2/4512021/2/4522021/2/4532021/2/4542021/2/4552021/2/4562021/2/4572021/2/458血細(xì)胞免疫分型細(xì)胞芯片免疫分型細(xì)胞芯片，用于檢測(cè)細(xì)胞表面CD（Cluster of differentiation）抗原，又稱作細(xì)胞膜表面的分化抗原群/分化抗原簇，近來(lái)，他又被稱作人類細(xì)胞分化分子(HCDM)?？纱笾聞澐譃門細(xì)胞、B細(xì)胞、髓細(xì)胞、NK細(xì)胞、血小板、粘附分子、內(nèi)

28、皮細(xì)胞、細(xì)胞因子受體、激活抗原、碳水化合物半抗原、樹突狀細(xì)胞、干細(xì)胞祖細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞和紅細(xì)胞14個(gè)組。檢測(cè)CD 抗原是實(shí)驗(yàn)室識(shí)別細(xì)胞及不同分化階段細(xì)胞或細(xì)胞亞群最主要的方法。2021/2/4592021/2/460細(xì)胞芯片CD13陽(yáng)性掃描及流式細(xì)胞圖2021/2/461細(xì)胞芯片CD19陽(yáng)性掃描及流式細(xì)胞圖2021/2/4622021/2/463分化抗原參與機(jī)體重要的生理和病理過(guò)程：免疫應(yīng)答過(guò)程中免疫細(xì)胞的相互識(shí)別，免疫細(xì)胞抗原識(shí)別、活化、增殖和分化，免疫效應(yīng)功能的發(fā)揮；造血細(xì)胞的分化和造血過(guò)程的調(diào)控；參與炎癥反應(yīng)、血栓形成和組織修復(fù)；參與細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、遷移，及腫瘤的惡化和轉(zhuǎn)移。2021/2/464基礎(chǔ)免疫學(xué)研究中主要應(yīng)用于：CD抗原的基因克隆，新CD抗原及新配體的發(fā)現(xiàn)；CD抗原結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系；細(xì)胞激活途徑和膜信號(hào)的傳導(dǎo)；細(xì)胞分化過(guò)程中的調(diào)控；細(xì)胞亞群的功能。2021/2/465CD在臨床免疫學(xué)研究中主要