HSV1+2IgG知識(shí)分享

1、Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。HSV1+2IgG-產(chǎn)品注冊(cè)證號(hào)：3400298賽潤ELISAclassic單純皰疹病毒1/2型IgG抗體定量檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）說明書德國維潤賽潤研發(fā)有限公司北京代表處北京建國門北大街8號(hào)華潤大廈2503B郵編：100005電話：+86.(0)10.85192070傳真：+86.(0)10.85192071電子郵件：dialog網(wǎng)址：HYPERLINK單純皰疹病毒1/2型IgG抗體定量檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）說明書賽潤ELISAclassic目錄名稱用途診斷意義說明賽潤ELISAclassic-檢

2、測(cè)原理試劑盒組成.檢測(cè)所需物質(zhì)，試劑盒未提供儲(chǔ)存和穩(wěn)定性賽潤ELISAclassic的檢驗(yàn)步驟9.1注意事項(xiàng)9.2樣品準(zhǔn)備和儲(chǔ)存9.3試劑盒反應(yīng)試劑的準(zhǔn)備9.4檢測(cè)程序概要9.5檢測(cè)過程檢測(cè)結(jié)果評(píng)估10.14PL單點(diǎn)定量法10.2檢驗(yàn)有效性標(biāo)準(zhǔn)10.3計(jì)算賽潤ELISAclassic單純皰疹病毒1/2型IgG（定量）10.4檢測(cè)結(jié)果分析性能特性11.1重復(fù)性11.2敏感性和特異性有效期警告13.1警告和安全措施13.2廢料處理參考文獻(xiàn)制造商名稱、地址及聯(lián)系方式單純皰疹病毒1/2型IgG抗體定量檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）賽潤ELISAclassic酶聯(lián)免疫法測(cè)定人體抗體IgM-只限用于體外診斷-1

3、.名稱通用名：單純皰疹病毒1/2型IgG試劑盒(定量)英文名：HerpessimplexVirus1/2IgG(quant.)商品名：賽潤ELISAclassic單純皰疹病毒1/2型IgG抗體定量檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）漢語拼音：SerionELISAclassicdanchunpaozhen1/2xingIgGkangtidingliangjianceshijihe(meilianmianyifa)產(chǎn)品編號(hào):ESR105G檢測(cè)評(píng)估標(biāo)準(zhǔn):DadeBehringBEPIII/BEP2000,DSX,手動(dòng)操作用途用于定量檢測(cè)人血清或血漿中產(chǎn)生的對(duì)抗單純皰疹病毒1/2型IgG的抗體。診斷意義賽潤EL

4、ISAclassic單純皰疹病毒1/2型IgG抗體定量檢測(cè)試劑盒主要用于定量檢測(cè)人血清或血漿中產(chǎn)生的抗單純皰疹病毒IgG的抗體。IgM-ELISA試劑可用于檢測(cè)急性感染，而單純皰疹病毒1/2型IgG-ELISA試劑用于確定免疫狀態(tài)以及在腦脊液檢測(cè)時(shí)發(fā)現(xiàn)鞘內(nèi)所形成的抗體。HSV1型IgG和HSV2型IgG試劑可以區(qū)分人類抗單純皰疹病毒1型和2型，HSV1/2型IgA-ELISA試劑則尤其可用于識(shí)別復(fù)發(fā)感染。單純皰疹病毒1型和2型是一種致病性的DNA病毒，屬于皰疹病毒科。皰疹病毒已在全球范圍內(nèi)傳播。在工業(yè)化國家，10-20歲的人群中皰疹病毒感染的血清檢出率高達(dá)50%，甚至在90%成年人體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了單

5、純皰疹病毒的血清型1，10-15%有單純皰疹病毒的血清型2。初期感染主要是因?yàn)榕c感染病人接觸（包括唾液或生殖器分泌物）、及通過輸血或移植手術(shù)造成的交叉感染或醫(yī)源性感染。初期感染后病毒會(huì)終生寄生在局部的神經(jīng)節(jié)中，并可被激活。在分娩期間，生殖器皰疹的傳播過程沒有明顯的臨床癥狀，但多數(shù)情況下將會(huì)導(dǎo)致局部或擴(kuò)散型膿毒類癥狀。初期感染后，病毒會(huì)以一種特定的天花板格形（潛伏期）持續(xù)存在直至再激活（冬眠期）。病毒的再激活對(duì)免疫力正常的人來說沒有明顯的臨床癥狀，而對(duì)免疫能力低下的人則會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重的臨床并發(fā)癥。潛伏期在2-12天之間，傳染性會(huì)持續(xù)至皮膚或粘膜出現(xiàn)皰疹(約3周時(shí)間)或內(nèi)源性感染復(fù)發(fā)期。1型單純皰疹病

6、毒的初期感染90%沒有明顯的癥狀，有10%左右的病人會(huì)在唇、口或眼角膜及結(jié)膜部位出現(xiàn)特征性的皰疹。這些膿皰性皰疹會(huì)在有濕疹的皮膚上擴(kuò)散，并可能會(huì)危及生命。進(jìn)一步的并發(fā)癥是大腦炎(70%是致命性的)或腦膜炎。12%的2型單純皰疹病毒初期感染會(huì)出現(xiàn)突然性流產(chǎn)、外陰陰道炎或陰莖陰囊皮疹。盡管多數(shù)生殖器的皰疹病毒感染是由2型單純皰疹病毒引起的，但1型單純皰疹病毒引起的感染也有20%。感染初期的癥狀是相同的，但生殖器感染1型單純皰疹病毒后的再激活機(jī)率明顯比2型低。2型單純皰疹病毒對(duì)生殖器感染是1型的4倍，流行更廣且具有顯著的臨床癥狀，而1型單純皰疹病毒生殖器感染的臨床復(fù)發(fā)率通常是很低的。2型單純皰疹病毒

7、生殖器感染可用抑制病毒復(fù)制的抗病毒藥物治療如阿昔洛韋、纈昔洛韋和泛昔洛韋，單純皰疹病毒1型和2型的血清學(xué)及病毒學(xué)差異能夠指導(dǎo)對(duì)疾病的正確預(yù)后和治療。賽潤ELISAclassicHSV1型試劑盒的微孔板由重新聯(lián)合的1型病毒醣蛋白gG1包被，而賽潤ELISAclassicHSV2型試劑盒的微孔板由全病毒純化而得的醣蛋白gG2包被。使用HSV1型和HSV2型的包膜蛋白gG1和gG2可實(shí)現(xiàn)HSV1型和HSV2型的類型特異性抗體應(yīng)答的甄別。賽潤ELISAclassicHSV1/2型IgG/IgM/IgA試劑盒的微孔板由這兩種純化的全病毒抗原的混合物包被。賽潤ELISAclassicHSV1型IgM和HS

8、V2型IgM的微孔板是由相應(yīng)的全病毒抗原包被，可保證直接、敏感地發(fā)現(xiàn)急性感染，因?yàn)榭辊钡鞍譯G1和gG2的抗體很多時(shí)候在初次感染2-3個(gè)月后才能被檢測(cè)到。由于兩種病毒類型的交叉反應(yīng)，在使用HSV1型IgM和HSV2型IgMELISA試劑時(shí)，考慮到個(gè)體免疫狀態(tài)，只有在做平行測(cè)試的情況下才能為區(qū)分病毒特異性抗體應(yīng)答提供證據(jù)。（患者標(biāo)本）在SERIONELISAclassicHSV1型IgM檢測(cè)時(shí)比在SERIONELISAclassicHSV2型IgM檢測(cè)時(shí)得出明顯更高的抗體滴度則表示急性初次感染或者HSV1型病毒復(fù)發(fā)感染。反之，（患者標(biāo)本）在SERIONELISAclassicHSV2型IgM檢測(cè)

9、時(shí)比在SERIONELISAclassicHSV1型IgM檢測(cè)時(shí)得出明顯更高的抗體滴度則表示急性初次感染或者HSV2型病毒復(fù)發(fā)感染。4.說明本說明書除單純皰疹病毒1/2型IgG抗體定量檢測(cè)的內(nèi)容外，還涉及到IgM/IgA抗體的定量檢測(cè)，以及對(duì)結(jié)果的分析等。5.賽潤ELISAclassic-檢驗(yàn)原理用抗原包被微量板孔，制成固相載體。加患者血清到板孔中，其所含的抗體特異性地與固相載體中存在的抗原結(jié)合，形成免疫復(fù)合物。除去多余物質(zhì)后，加入堿性磷酸酶標(biāo)記的IgG、IgA和IgM抗體，使之與上述免疫復(fù)合物反應(yīng)。洗板，除去多余的結(jié)合物，加入底物（對(duì)硝基苯磷酸鹽）。其與酶結(jié)合的免疫復(fù)合物反應(yīng)，產(chǎn)生有顏色產(chǎn)物

10、，顏色強(qiáng)度與特異性抗體含量成正比。6.試劑盒的組成試驗(yàn)成分IgG試劑盒IgM試劑盒IgA試劑盒數(shù)量/劑量微孔條（此微孔條可以拆下單獨(dú)使用，每條有8孔，共96孔，已經(jīng)包被了抗原）1個(gè)微孔條框架包被的抗原為滅活抗原121212標(biāo)準(zhǔn)血清（立即可用）人血清溶于含蛋白的磷酸鹽緩沖液；抗HIV抗體、抗乙肝病毒（HBV）表面抗原和抗丙肝病毒（HCV）抗體均為陰性；防腐劑：0.1%疊氮化鈉染色劑：紫紅色O22毫升22毫升22毫升陰性對(duì)照血清（立即可用）人血清溶于含蛋白的磷酸鹽緩沖液；抗HIV抗體、抗乙肝病毒（HBV）表面抗原和抗丙肝病毒（HCV）抗體均為陰性；防腐劑：0.1%疊氮化鈉染色劑：里沙明綠V12毫升

11、12毫升12毫升酶標(biāo)記的抗人IgG,IgA,IgM（立即可用）羊抗人IgG,IgA,IgM（多克?。?，標(biāo)記堿性磷酸酶后在蛋白穩(wěn)定劑中儲(chǔ)存防腐劑:0.01%甲基異噻唑啉酮0.01%溴化硝基二堊烷13毫升13毫升13毫升濃縮洗液（可稀釋至1000毫升）氯化鈉溶液，含吐溫20和30mMTris防腐劑：0.1%疊氮化鈉133.3毫升133.3毫升133.3毫升稀釋緩沖液磷酸鹽緩沖液，內(nèi)含蛋白和吐溫20防腐劑：0.1%疊氮化鈉0.01克/升的溴酚藍(lán)鈉鹽250毫升250毫升250毫升終止液1.2N氫氧化鈉15毫升15毫升15毫升底物（立即可用）對(duì)硝基苯磷酸鹽，不含其它溶劑的緩沖液防腐劑：0.1%疊氮化鈉（

12、未開封瓶子中的底物可能會(huì)輕微變黃，但不會(huì)影響其質(zhì)量）13毫升13毫升13毫升帶有標(biāo)準(zhǔn)曲線和評(píng)估表的質(zhì)量控制文件（抗體以IU/毫升或U/毫升計(jì)量）1117.其它檢測(cè)所需物質(zhì)-普通實(shí)驗(yàn)室所需的儀器裝置-IgM檢測(cè)：另需賽潤含對(duì)照抗原的類風(fēng)濕因子Rf吸附劑（Rf吸附劑對(duì)照抗原；產(chǎn)品編號(hào)T200/20ml）-分光光度計(jì)，波長405納米，建議參考波長范圍620納米-690納米（例如650納米）-37溫箱-濕盒-蒸餾水。8.儲(chǔ)存及穩(wěn)定性試劑儲(chǔ)存穩(wěn)定性微孔條(包被抗原)開封后放在2-8裝有干燥劑的密封鋁箔袋中。4星期陰性對(duì)照/標(biāo)準(zhǔn)血清開封后保存于2-8。有效期內(nèi)；24個(gè)月酶標(biāo)記抗體立即可用的溶液于2-8儲(chǔ)存

13、。避免污染（使用無菌槍尖）。有效期內(nèi)28個(gè)月稀釋緩沖液開啟后于2-8儲(chǔ)存。有絮狀沉淀時(shí)丟掉未開封24個(gè)月有效期內(nèi)36個(gè)月洗滌液濃縮液開封后保存于2-8。工作液在2-8。工作液在室溫下。盛過工作液的瓶子應(yīng)按常規(guī)方法清洗，并丟棄混濁溶液。有效期內(nèi)2星期1星期底物2-8儲(chǔ)存，避光。避免污染（使用無菌槍尖）。當(dāng)溶液變?yōu)辄S色時(shí)應(yīng)予以丟棄（水作空白，吸光度大于0.25時(shí)）。有效期內(nèi)24個(gè)月終止液開封后保存于室溫下。有效期內(nèi)9.賽潤ELISAclassic的檢驗(yàn)步驟9.1注意事項(xiàng)只有全部使用賽潤ELISAclassic試劑才能保證檢測(cè)效果，因?yàn)樗性噭┒际怯嘘P(guān)聯(lián)的，不能混用其他制造商的產(chǎn)品。尤其是標(biāo)準(zhǔn)血清，

14、對(duì)照血清以及酶標(biāo)記物，必須使用試劑盒配備的，不要使用其它批號(hào)產(chǎn)品。稀釋緩沖液，洗液，終止液和底物溶液可用于所有賽潤ELISAclassic試劑盒。針對(duì)每一個(gè)免疫球蛋白種類都有三個(gè)不同的酶標(biāo)記物濃度：低、中、高。酶標(biāo)記物的分級(jí)通過以下的標(biāo)志在標(biāo)簽上顯示：比如：IgG+低濃度IgG酶標(biāo)記物IgG+中濃度IgG酶標(biāo)記物IgG+高濃度IgG酶標(biāo)記物為了保證我們?cè)噭┖械膽T常質(zhì)量，在極少數(shù)情況下需要使用特殊酶標(biāo)記物。這些試劑盒中的酶標(biāo)記物會(huì)有一個(gè)特殊批號(hào)并且不用“+”標(biāo)志。因此，這些特殊酶標(biāo)記物是不可以和其它酶標(biāo)記物交換使用的。請(qǐng)您每次都注意標(biāo)簽上的標(biāo)注！ELISAclassic試劑盒內(nèi)所有試劑均必須正確

15、地存放。應(yīng)在未開封的情況下，保存于2-8，并在有效期（見標(biāo)簽說明）內(nèi)使用。詳細(xì)的穩(wěn)定性和儲(chǔ)存資料在“8.儲(chǔ)存及穩(wěn)定性”內(nèi)將加以詳述。每一種試劑都是經(jīng)過校準(zhǔn)以保證最佳的檢測(cè)結(jié)果。這些試劑如果未經(jīng)規(guī)定被稀釋或改動(dòng)都會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)的敏感性的降低。在儲(chǔ)存及孵育過程中避免將試劑暴露在強(qiáng)光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染，避免試劑受到微生物污染，因?yàn)榈鞍姿饷傅母蓴_將導(dǎo)致出現(xiàn)錯(cuò)誤的結(jié)果。請(qǐng)從標(biāo)記處剪開密封袋。如果鋁袋破損或者已開啟裝有干燥劑的鋁袋而未以夾子封緊的，則不要繼續(xù)使用微孔條。開始試驗(yàn)前，將所有試劑置于室溫。從試劑管中吸取試劑的時(shí)候，應(yīng)注意使用無菌技術(shù)以防污染。為避免假陽性結(jié)果，吸加酶結(jié)合物時(shí)，

16、吸頭應(yīng)確保不接觸孔壁或噴灑于小孔的外面，注意不要蓋錯(cuò)瓶蓋或管蓋。試驗(yàn)中試劑的充分混合，對(duì)于檢測(cè)結(jié)果的重復(fù)性至關(guān)重要。在取用對(duì)照品和酶標(biāo)記物之前應(yīng)搖動(dòng)容器使其充分混勻，加樣前，使用單向振動(dòng)器充分混勻稀釋過的標(biāo)本。小心吸取試劑并嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本/對(duì)照血清，酶結(jié)合物或底物時(shí)，第一個(gè)孔與最后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果長，將會(huì)導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育”時(shí)間，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。只有嚴(yán)格遵守賽潤ELISAclassic試劑的試驗(yàn)說明才會(huì)得到最佳的檢測(cè)結(jié)果。如果實(shí)驗(yàn)中未嚴(yán)格遵守質(zhì)量控制認(rèn)證文件上的有效性特異準(zhǔn)則，則試驗(yàn)結(jié)果無效。洗滌不充分將影響試驗(yàn)結(jié)果：應(yīng)該小心

17、進(jìn)行洗滌。洗滌步驟應(yīng)遵守相關(guān)洗滌器（平底孔，孔直徑7毫米，深10.9毫米）指導(dǎo)手冊(cè)進(jìn)行，所有的孔內(nèi)均應(yīng)加入相同體積的洗滌緩沖液。洗滌結(jié)束時(shí)，應(yīng)將微孔板倒扣于紙巾上并輕輕敲打，以確保所有孔內(nèi)均無洗滌緩沖液。避免產(chǎn)生泡沫！如果使用自動(dòng)洗板機(jī)，注意正確操作。9.2檢驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作和儲(chǔ)存避免使用高血脂、溶血或黃疸的標(biāo)本，盡管在我們的檢測(cè)中沒有發(fā)現(xiàn)有副影響。明顯被污染的標(biāo)本（血清或血漿）不能用于檢測(cè)。依照標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室方法采集血清或血漿標(biāo)本(EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝)標(biāo)本不應(yīng)加熱滅活。9.2.1樣品準(zhǔn)備賽潤ELISAclassic單純皰疹病毒IgG/IgA開始試驗(yàn)前，患者的待測(cè)樣品必須以稀釋緩沖液稀釋如

18、下（V1+V2）：V1+V2=1+100加10微升患者待測(cè)樣品于1000微升稀釋緩沖液稀釋后及加入微孔板前，樣品必須充分混勻。類風(fēng)濕因子的干擾的排除類風(fēng)濕因子抗體是IgM型的自身抗體，可與IgG免疫復(fù)合物結(jié)合。非特異性類風(fēng)濕因子抗體的存在將導(dǎo)致IgM檢測(cè)的假陽性結(jié)果。另外，也存在弱結(jié)合的病原體特異性IgM抗體被強(qiáng)結(jié)合的IgG抗體取代的可能性。在這種情況下，IgM的檢測(cè)將得到假陰性的結(jié)果。因此，在進(jìn)行IgM檢測(cè)前應(yīng)用類風(fēng)濕因子吸附劑對(duì)血清作預(yù)處理。特別類風(fēng)濕因子Rf吸附劑（產(chǎn)品編號(hào)T200,20ml）不僅包含抗人IgG抗體，還含有一定量的對(duì)照抗原。對(duì)照抗原同時(shí)能與類風(fēng)濕因子及可識(shí)別宿主細(xì)胞膜成份

19、的抗體結(jié)合。因此，無須再進(jìn)行微量孔包被對(duì)照抗原的平行試驗(yàn)。在進(jìn)行以下SERIONELISAclassicIgM檢測(cè)時(shí)，此類RF吸附劑需作為附加試劑另行購買：巨細(xì)胞，單純皰疹病毒，麻疹，腮腺炎，風(fēng)疹病毒，剛地弓形蟲，帶狀皰疹病毒首先應(yīng)該使用稀釋緩沖液(V2)對(duì)類風(fēng)濕因子吸附劑(Rf-吸附劑/對(duì)照抗原)(V1)進(jìn)行如下稀釋：V1+V2=1+4加200微升Rf-吸附劑/對(duì)照抗原于800微升稀釋緩沖液中然后將患者的待測(cè)樣品(V1)在此Rf-稀釋緩沖液(V3)中進(jìn)行稀釋：V1+V3=1+100加10微升患者待測(cè)樣品于1000微升Rf-稀釋緩沖液中9.2.2樣品儲(chǔ)存密封的患者樣品可在冰箱中2-8保存7天。

20、-20可保存更久。避免樣品反復(fù)凍融。已稀釋的樣品可在2-8保存一星期。9.3試劑盒反應(yīng)試劑的準(zhǔn)備工作9.3.1微孔條微孔條排列于板中，并與干燥劑一同封于鋁袋內(nèi)。未使用的微孔條重新放入鋁袋，密封好，確保鋁袋的密封性。7.3.2對(duì)照血清/標(biāo)準(zhǔn)血清對(duì)照和標(biāo)準(zhǔn)血清可直接使用，不必進(jìn)一步稀釋每次試驗(yàn)或是試驗(yàn)體系，無論檢測(cè)用的微孔板數(shù)目多少，均應(yīng)包括空白對(duì)照孔，陰性對(duì)照孔和標(biāo)準(zhǔn)血清孔，且標(biāo)準(zhǔn)血清應(yīng)加兩孔。不要用RF吸附劑處理對(duì)照血清！9.3.3抗人IgG、IgA或IgM抗體，用AP標(biāo)記（備用）禁止將不同試劑盒的酶標(biāo)抗體混合使用。同一試劑盒才能達(dá)到最佳檢測(cè)效果。為了避免酶標(biāo)記物的污染（請(qǐng)使用時(shí)先一次性取出實(shí)

21、驗(yàn)所需量置于一容器中，避免反復(fù)從試劑瓶中吸取試劑。）9.3.4洗液以1：30稀釋濃縮洗滌緩沖液（V1）至終體積V2。例如：濃縮緩沖液（V1）終體積（V2）33.3毫升1000毫升1.0毫升30毫升9.3.5樣品的稀釋緩沖液（即用）9.3.6底物（即用）試驗(yàn)時(shí)戴手套以避免污染。必須以無菌槍尖吸取底物溶液。9.3.7終止液（即用）9.4檢測(cè)程序概要單純皰疹病毒1/2型IgG/IgA/IgM定量進(jìn)行IgM檢測(cè)時(shí)先用類風(fēng)濕因子吸附劑預(yù)處理血清室溫孵育15分鐘或4過夜樣品稀釋液（病人血清）1+100將稀釋的樣本，和立即可用的對(duì)照血清/標(biāo)準(zhǔn)血清，加到微量孔內(nèi)（100微升）孵育60分鐘/37濕盒中洗滌加入立

22、即可用的酶標(biāo)記抗體溶液（100微升）再孵育30分鐘/37濕盒中洗滌加入底物溶液（100微升）再孵育30分鐘/37濕盒中加入終止液（100微升）在405納米處讀數(shù)9.5檢測(cè)過程9.5.1將檢測(cè)所需數(shù)目的微孔條放到微孔板框上并準(zhǔn)備好一張草簽。9.5.2在微量孔內(nèi)分別加入100微升的已稀釋樣本或立即可用的對(duì)照血清。留一個(gè)孔為底物空白使用，例如：定量的IgG/IgA/IgM微量孔孔A1孔B1孔C1孔D1孔E1底物空白陰性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)血清標(biāo)準(zhǔn)血清標(biāo)本1.9.5.3將樣品于濕盒內(nèi)37（1）孵育60分鐘（5分鐘)。9.5.4孵育后以洗液緩沖液洗滌板孔（使用自動(dòng)洗板機(jī)或手工洗板）：-吸去或甩去洗液-每孔內(nèi)加入30

23、0微升洗液-吸去或甩去洗液-重付息滌過程3次（共4次?。?將微孔板翻轉(zhuǎn)過來在紙巾上拍打，使微孔中不再含有液體9.5.5加入酶標(biāo)記抗體。于適當(dāng)孔內(nèi)（底物空白除外）加入100微升IgG/IgA/IgM酶標(biāo)記抗體9.5.6濕盒內(nèi)37（1）孵育30分鐘（1分鐘）注意：根據(jù)各實(shí)驗(yàn)室條件的特殊性，有必要對(duì)孵育時(shí)間進(jìn)行調(diào)整。9.5.7孵育后，以洗液清洗板孔（洗滌見上）9.5.8加入底物于每孔內(nèi)加入100微升底物溶液（包括底物空白孔）9.5.9濕盒內(nèi)37（1）孵育30分鐘（1分鐘）。9.5.10終止反應(yīng)每孔內(nèi)加入100微升終止液，輕微振蕩微孔板以混合溶液。9.5.11讀取消光度以底物空白為空白對(duì)照液，60分鐘

24、內(nèi)讀取405納米的OD值，建議參考波長范圍為620納米-690納米（例如650納米）。10檢測(cè)結(jié)果評(píng)估：賽潤ELISAclassic單純皰疹病毒1/2型lgG/IgA/IgM（定量）10.14PL單點(diǎn)定量法通過利用非線性方程，可以保證根據(jù)消光信號(hào)的定量數(shù)值精確計(jì)算出抗體活性，該方程可在不對(duì)OD值進(jìn)行轉(zhuǎn)換的情況下調(diào)整S型曲線。用賽潤ELISAclassic試劑檢測(cè)，抗體濃度可通過邏輯對(duì)數(shù)模型（4PL,4個(gè)參數(shù)）來計(jì)算，該模型對(duì)濃度曲線有很精確的適用性。計(jì)算公式如下：OD=A+D-A1+eB(C-lnconc.)參數(shù)A、B、C和D能夠反映曲線的精確形狀。1.下端漸進(jìn)線參數(shù)A2.曲線斜率參數(shù)B3.轉(zhuǎn)

25、折點(diǎn)參數(shù)C4.上端漸進(jìn)線參數(shù)D標(biāo)準(zhǔn)曲線是由德國維潤賽潤研發(fā)有限公司（維爾茨堡市）在嚴(yán)格條件下經(jīng)過多次試驗(yàn)制定的。使用者無需花費(fèi)大量的時(shí)間和使用昂貴的儀器來制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。每一個(gè)試劑盒內(nèi)均附有專用的標(biāo)準(zhǔn)曲線和評(píng)估表用來計(jì)算抗體濃度。如有需要也可取得相關(guān)的評(píng)估軟件。為了校正正常試驗(yàn)偏差和建立試驗(yàn)對(duì)照，每輪試驗(yàn)均需使用標(biāo)準(zhǔn)血清作為對(duì)照。該對(duì)照血清的有效范圍參考值是由廠商的質(zhì)量控制部門確定的，在此范圍內(nèi)可保證抗體濃度測(cè)定的正確性。標(biāo)準(zhǔn)血清不一定是陽性對(duì)照，且在某些ELISA試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)血清數(shù)值可能是臨界值或陰性結(jié)果。10.2有效性標(biāo)準(zhǔn)-底物空白的OD30U/ml臨界值結(jié)果:20-30U/ml陰性結(jié)果:20

26、U/ml針對(duì)臨界值結(jié)果的樣品，應(yīng)在1-2周后對(duì)相應(yīng)的病人再進(jìn)行取樣，重新檢測(cè)。10.3.2利用SERIONeasybase4PL軟件/SERION評(píng)估軟件進(jìn)行自動(dòng)檢測(cè)輸入四個(gè)參數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)血清參考值之后，聯(lián)機(jī)軟件就會(huì)計(jì)算出抗體活性。如果標(biāo)準(zhǔn)血清的消光值超出有效范圍，SERIONeasybase4PL軟件就會(huì)顯示如下信息：“標(biāo)準(zhǔn)已超出允許范圍”和/或“標(biāo)準(zhǔn)差異大于20%”。SERION評(píng)估軟件只用英語顯示：Standardvaluesoutofrangesinfollowinggroups:Group1-24.Standardvaluediffermorethan20%infollowinggrou

27、ps:Group1-24.”（“以下組樣品標(biāo)準(zhǔn)值超出范圍：組1-24。以下組樣品標(biāo)準(zhǔn)值差異大于20%：組1-24?！保┰谶@種情況下，此輪試驗(yàn)無效，需重做。只有更換批號(hào)時(shí)，參數(shù)和參數(shù)值才需要改變（評(píng)估表中標(biāo)有參數(shù)與參考值）。組別特異性數(shù)據(jù)的正確輸入與否可以以標(biāo)準(zhǔn)血清的IU/ml或U/ml值為基礎(chǔ)進(jìn)行檢驗(yàn)。計(jì)算出的平均單位值需與組別特異性認(rèn)證書所示的單位值相對(duì)應(yīng)?？勺詣?dòng)校正測(cè)定值。使用標(biāo)準(zhǔn)版本打印機(jī)會(huì)顯示如下內(nèi)容：樣品編號(hào)OD值IU/ml或U/ml結(jié)果說明10.4檢測(cè)結(jié)果分析在1型或2型單純皰疹病毒初期感染發(fā)病后，一般可檢測(cè)到抗體的存在。IgM抗體和IgG抗體的血清轉(zhuǎn)化都能說明是處于初期感染階段，

28、同時(shí)也可檢測(cè)到IgA抗體，IgM、IgA抗體和IgG的血清轉(zhuǎn)化可平行出現(xiàn)。IgM、IgA抗體在幾周或幾個(gè)月后的后期感染中會(huì)消失，這時(shí)很少能檢測(cè)到它們的存在。而病毒特異性的IgG抗體會(huì)終生在機(jī)體內(nèi)存在，只有極少數(shù)例外（見圖la）。病毒的再感染和病毒在體內(nèi)再激活則表現(xiàn)出不同的血清學(xué)特征（見圖lb），對(duì)一個(gè)病人相差7-10天的兩份血樣進(jìn)行檢測(cè)可發(fā)現(xiàn)IgG濃度明顯的上升趨勢(shì)，而另一個(gè)病毒特異性IgM抗體則很少被檢測(cè)到。與初期感染相比，IgA的第二次血清轉(zhuǎn)化和IgG抗體濃度的增加都是單純皰疹病毒在體內(nèi)再激活的血清學(xué)標(biāo)志。圖la圖lb對(duì)于ELISA試驗(yàn)結(jié)果的說明應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：單純皰疹病毒初次感染后，在幾

29、個(gè)月后仍能檢測(cè)到部分IgM抗體持續(xù)存在。檢測(cè)到單純皰疹病毒IgM抗體可能是由于出現(xiàn)其它皰疹病毒屬（如水痘-帶狀皰疹病毒，巨細(xì)胞病毒和EB病毒）而發(fā)生交叉感應(yīng)所造成的。計(jì)算得出高IgG抗體滴度不能提供支持臨床表現(xiàn)的證據(jù)。血清陽性健康人和病人的IgG抗體濃度在較大范圍內(nèi)重疊，基于這一事實(shí)，單個(gè)血清樣品IgG抗體濃度的測(cè)定不能為疾病狀態(tài)提供診斷依據(jù)。對(duì)于可疑感染的人有必要檢測(cè)血清對(duì)的滴度升高情況。對(duì)不同血清學(xué)狀態(tài)的分析HSVIgMHSVIgGHSVIgA說明-血清反應(yīng)陰性狀態(tài)+-+/-+抗HSVIgA抗體可能存在，也可能還缺失。急性初期感染-+-繼往感染、血清反應(yīng)陽性狀態(tài)、病毒潛伏期+/-+病毒再激

30、活時(shí)的血清學(xué)狀態(tài)11.性能特征11.1重復(fù)性檢測(cè)內(nèi)結(jié)果的重復(fù)性通過在同一批試驗(yàn)中檢測(cè)20次不同反應(yīng)的血清來判斷，而檢測(cè)間結(jié)果的重復(fù)性通過分別在5天進(jìn)行10次獨(dú)立的血清檢測(cè)分析來判斷。變異系數(shù)(CV)=標(biāo)準(zhǔn)差100平均值賽潤ELISAclassic單純皰疹病毒1IgG:平均消光值(OD)檢測(cè)內(nèi)分析(CV%)平均消光值(OD)檢測(cè)間分析(CV%)樣品弱陽性陽性強(qiáng)陽性0.3710.8971.8945.703.501.300.3580.9041.8354.305.102.50賽潤ELISAclassic單純皰疹病毒1IgM:平均消光值(OD)檢測(cè)內(nèi)分析(CV%)平均消光值(OD)檢測(cè)間分析(CV%)樣

31、品弱陽性0,4483,90,4679,2陽性0,9403,00,91810,5強(qiáng)陽1,4582,11,48711,5賽潤ELISAclassic單純皰疹病毒2IgG:平均消光值(OD)檢測(cè)內(nèi)分析(CV%)平均消光值(OD)檢測(cè)間分析(CV%)樣品弱陽性陽性強(qiáng)陽性0.3480.7001.4405.104.003.100.4280.6831.7535.208.903.20賽潤ELISAclassic單純皰疹病毒2IgM:平均消光值(OD)檢測(cè)內(nèi)分析(CV%)平均消光值(OD)檢測(cè)間分析(CV%)樣品弱陽性0,5836,40,6796,7陽性1,0814,81,1706,4強(qiáng)陽1,4922,81,7

32、875,4賽潤ELISAclassic單純皰疹病毒1/2IgA:平均消光值(OD)檢測(cè)內(nèi)分析(CV%)平均消光值(OD)檢測(cè)間分析(CV%)樣品弱陽性陽性強(qiáng)陽性0.5370.9662.4536.207103.200.5420.9201.6849.005.809.70賽潤ELISAclassic單純皰疹病毒1/2IgG:平均消光值(OD)檢測(cè)內(nèi)分析(CV%)平均消光值(OD)檢測(cè)間分析(CV%)樣品弱陽性0,3912,70,4356,7陽性1,1382,21,1793,5強(qiáng)陽1,7732,21,8412,3賽潤ELISAclassic單純皰疹病毒1/2IgM:平均消光值(OD)檢測(cè)內(nèi)分析(CV%

33、)平均消光值(OD)檢測(cè)間分析(CV%)樣品弱陽性陽性強(qiáng)陽性0.9241.1782.2723.702.801.900.9701.1462.0775.906.005.8011.2敏感性與特異性HSV1IgG:檢測(cè)97份陽性的和54份陰性的獻(xiàn)血者血清，進(jìn)行檢測(cè)內(nèi)分析。用一家在歐洲技術(shù)領(lǐng)先的公司生產(chǎn)的酶聯(lián)免疫試劑做對(duì)照。對(duì)照試驗(yàn)中檢測(cè)出97份血清為陽性，52份陰性，兩份血清得出臨界值結(jié)果。HSV2IgG：檢測(cè)139份血清，用一家在歐洲技術(shù)領(lǐng)先的公司生產(chǎn)的酶聯(lián)免疫試劑做對(duì)照。42份血清在維潤ELISA試劑檢測(cè)中呈陽性、96份呈陰性，1份臨界值。對(duì)照試劑試驗(yàn)顯示42份被檢測(cè)血清為陽性、97份陰性。所檢測(cè)

34、血清中37份為孕婦血清。其中兩份血清為HSV2陽性（單純皰疹1型維潤和對(duì)照試劑均檢測(cè)出）。賽潤ELISAclassicIgG-檢測(cè)單純皰疹1型單純皰疹2型敏感性98,7%100%特異性100%100%HSV1/2IgG:檢測(cè)111份陽性的和51份陰性的獻(xiàn)血者血清，進(jìn)行檢測(cè)內(nèi)分析。用一家在歐洲技術(shù)領(lǐng)先的公司生產(chǎn)的酶聯(lián)免疫試劑做對(duì)照。所有陽性血清反應(yīng)均為陽性。對(duì)照試驗(yàn)中檢測(cè)出97份血清為陽性，52份陰性，兩份血清得出臨界值結(jié)果51份在對(duì)照試劑中檢測(cè)為陰性的血清，其中有1份在賽潤ELISAclassicHSV1/2型IgG試劑中反應(yīng)為陽性，而將這份血清用一個(gè)由北美一家技術(shù)領(lǐng)先的廠家生產(chǎn)的試劑進(jìn)行檢測(cè)

35、也得出陽性。這份血清在計(jì)算特異性時(shí)按照陽性考慮。.HSV1/2IgM:通過對(duì)50份血清進(jìn)行檢測(cè)內(nèi)分析可以計(jì)算出敏感性，用一家在歐洲技術(shù)領(lǐng)先的公司生產(chǎn)的單純皰疹病毒IgMELISA對(duì)這50份血清進(jìn)行篩查，結(jié)果均為陽性。在使用賽潤ELISA單純皰疹病毒IgM檢測(cè)時(shí)，有8份血清反應(yīng)成陰性。另外，在一所專門的單純皰疹病毒實(shí)驗(yàn)室中利用免疫熒光法對(duì)這8份血清進(jìn)行再次檢測(cè)，其中有5份反應(yīng)結(jié)果為陰性（滴度在1:20至1:40之間，帶有無細(xì)胞抗體）。在3個(gè)呈陽性反應(yīng)的血清中有兩個(gè)是長期持續(xù)存在的IgM抗體，因此不在考慮之列。參考試驗(yàn)中呈弱陽性的血清，在賽潤ELISAclassic單純皰疹病毒IgM檢測(cè)中沒有檢測(cè)

36、出陽性。通過對(duì)343份健康孕婦血清進(jìn)行檢測(cè)內(nèi)分析可以對(duì)特異性進(jìn)行評(píng)估。在此觀察到：約10%的血清用所建議的（20-30U/ml）臨界值范圍反應(yīng)為陽性或者臨界值結(jié)果。通過使用提高的臨界值范圍（60-70U/ml）則陽性率降低到不到3%。因?yàn)樵趹言衅陂g病毒在激活出現(xiàn)頻繁，從而導(dǎo)致使用所建議的（20-30U/ml）臨界值范圍使得所觀察到的陽性結(jié)果數(shù)量增加。使用提高后的臨界值范圍（60-70U/ml）避免了檢測(cè)到再激活，但同時(shí)的不利方面是縮小了檢測(cè)窗口而不能及早地識(shí)別早期感染。HSV1/2IgA:用單純皰疹病毒IgA抗體檢測(cè)124份血清，檢測(cè)前已預(yù)知70份為陽性，54份為陰性。并使用德國一所大學(xué)所采用

37、的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)單純皰疹病毒IgAELISA作為對(duì)比試驗(yàn)，進(jìn)行外部特性評(píng)估研究。賽潤ELISAclassic單純皰疹病毒1/2IgA檢測(cè)IgG檢測(cè)IgM檢測(cè)敏感性94.3%100%98%特異性92.6%100%98%12.有效期2-8貯存，有效期詳見試劑盒包裝，具體各部分有效期在“8.儲(chǔ)存和穩(wěn)定性”中詳述。13.警告13.1警告和安全措施賽潤ELISAclassic試劑盒是針對(duì)熟悉實(shí)驗(yàn)室操作人員所設(shè)計(jì)使用的。所有試劑盒試劑及人類標(biāo)本必須采用已有的良好實(shí)驗(yàn)技術(shù)，小心處理：-此試劑盒內(nèi)含人血成分。盡管所有的對(duì)照及定點(diǎn)對(duì)照都已經(jīng)過試驗(yàn)驗(yàn)證并且發(fā)現(xiàn)對(duì)于乙型肝炎表面抗原，丙型肝炎抗體，HIV抗體均為陰性；但仍認(rèn)為它們具有潛在的感染性。-移液過程禁止用口。-在處理試劑和標(biāo)本的地方禁止吸煙，飲食。-使用試劑盒和標(biāo)本時(shí)，必須戴一次性手套，穿試驗(yàn)服，戴安全鏡。使用后請(qǐng)徹底洗手清潔。-患者樣本及其他潛在感染材料試驗(yàn)后應(yīng)予以消毒。-試劑應(yīng)保存在安全的地方，禁止兒童接觸。-終止液：具有腐蝕性（C）；發(fā)生酸燒傷（R34）；因此在操作時(shí)應(yīng)穿戴防護(hù)鏡，手套和試驗(yàn)服。13.2廢料處理請(qǐng)注意