藥物分析學課件：第十九章 中藥及其制劑分析概論

1、第十九章 中藥及其制劑分析概論Contents12345中藥及其制劑分析概述中藥的鑒別中藥的檢查項目及方法含量測定與質(zhì)量整體控制中藥體內(nèi)分析及代謝組學研究10版藥典在中藥質(zhì)量標準方面的特點：1. 品種大幅度增加-05版品種為1146種，10版增加了1019種。為10版藥典全部新增總數(shù)的73.5%，為一部收載總數(shù)的88.9%，另修訂了634種。2. 中藥飲片有了定義-藥材經(jīng)過炮制后可直接用于中醫(yī)臨床或制劑生產(chǎn)使用的處方藥品。10版藥典在中藥質(zhì)量標準方面的特點：3. 符合中藥特色（a） 鑒別：完善顯微鑒別，完善薄層色譜鑒別（專屬）。（b） 檢測： 專屬性。由單一指標定性、定量，轉(zhuǎn)向多指標質(zhì)量控制。

2、（c） 指紋圖譜納入標準。4. 應用新技術 增加了LC-MS技術，DNA分子鑒定技術，薄層-生物自顯影技術等。10版藥典在中藥質(zhì)量標準方面的特點：5. 安全性評價更受重視 注射劑增加了重金屬和有害元素限度，對易霉變藥物增加了黃曲霉素的檢測。15版藥典（尚未出版）：安全性控制項目大幅提升 中藥：制定了中藥材及飲片中二氧化硫殘留限度標準，推進建立和完善重金屬及有害元素、黃曲霉素、農(nóng)藥殘留等物質(zhì)檢測限度標準，加強對重金屬以及中藥材的有毒有害物質(zhì)的控制。(15版藥典：化藥，生物藥達到或接近國際標準，中藥主導國際標準)中藥及其制劑的特點中醫(yī)藥理論 指導 多因素影響質(zhì)量 成分復雜多變特有劑型 及輔料 整體

3、觀 君臣佐使 中藥藥性理論 品種繁多,同物異名， 同名異物 生長、采收、加工生產(chǎn)工藝 造成化學成分種類及含量差異 中藥煎煮、炮制及制劑過程中 化學成分質(zhì)和量的變化 不同制劑工藝成分 含量有差異 特有輔料干擾成分測定成分常壓濃縮減壓濃縮逆浸透噴霧大黃酸葡萄糖苷(%)41.151.696.8小檗堿(%)34.537.594.5黃連堿(%)6.312.093.7黃芩苷(%)77.477.698.5三黃瀉心湯千古名方-麻黃桂枝湯Description of the contents杏仁桂枝炙甘草麻黃君：發(fā)汗解表， 宣肺平喘。臣：助麻黃 發(fā)汗解表佐：助麻黃 降肺氣平喘使：調(diào)和諸藥 制約麻、桂， 以免發(fā)汗

4、太過同物異名 同名異物貫眾：30多種（鱗毛蕨科、蹄蓋蕨科、 紫萁科、烏毛蕨科）紫花地丁： 早開堇菜 光瓣堇菜 戟葉堇菜 中藥市場混亂1.Thursday, August 4, 2022同物異名現(xiàn)象嚴重： 重樓為百合科Paris polyphylla Smith. 的根莖又名七葉一枝花、蚤休、草河車 拳參為蓼科Polygonum bistra L.的根莖又名草河車（1）生長環(huán)境差異麻黃 東北西北（-）麻黃堿含量 （+）麻黃堿含量GAP 中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范中藥材質(zhì)量的不穩(wěn)定性2.（道地藥材）六味地黃丸益母草 水蘇堿 營養(yǎng)期含量最高 益母草堿 營養(yǎng)期含量最低薄荷腦 秋季葉變黃時含量最高丹參酮 1

5、1、12月份含量最高(2) 采收季節(jié)差異不同部位人參皂苷的含量 重量比(%) 總皂苷含量(%) 周皮 6.9 2.60韌皮 46.6 3.04木質(zhì)部 46.5 0.31(3) 部位差異取樣要有代表性，均勻合理五倍子 鞣質(zhì)（70%）槐米 蘆丁（20%）長春花 長春新堿（百萬分之一）美登木 美登木堿（千萬分之一）各種有效成分含量相差懸殊3.15 中藥藥效的發(fā)揮是多種成分協(xié)同作用的結果，因此應從整體上來控制中藥的質(zhì)量成分復雜，有效成分尚不十分清楚4.鞣質(zhì) 地榆（止血） 其他（無藥效）有效 無效同一成分在不同藥材中的藥理作用不同5.烘干以黃酒、砂仁、陳皮為輔料，反復蒸曬清熱涼血滋陰補血；益精填髓中藥及

6、其制劑的分類及質(zhì)量分析特點中藥材和飲片植物油脂和提取物AB成方和單方制劑C顯微鑒別 大部分為中藥制劑用原料 主要含某一類或某一種成分 分析方法的專屬性 丸劑、散劑 常含有藥材細粉 顯微鑒別 注意蜂蜜等輔料對測定的影響 顆粒劑 常用色譜方法進行含量測定 合劑 防腐劑 一般用有機溶劑提取待測成分再分析 酒劑和酊劑 、煎膏劑、膏藥等 中藥注射劑中藥材有效部位或中間體注射劑指紋圖譜中藥分析用樣品制備方法取樣與保存樣品提取藥材及飲片取樣 取樣前信息核對：品名、 產(chǎn)地、規(guī)格等 取樣數(shù)目及數(shù)量 貴重藥材逐件取樣 分離純化 超聲提取法 回流提取法 連續(xù)回流提取法 萃取法 水蒸氣蒸餾法 超臨界流體萃取法 柱色譜

7、法 (視頻) 固相萃取方法 (視頻)中藥分析用樣品制備方法中藥分析用樣品制備方法 利用溶質(zhì)在兩種互不相溶的溶劑中溶解度的不同，使物質(zhì)從一種溶劑轉(zhuǎn)移到另一種溶劑中，將測定組分提取出來的方法萃取中藥分析用樣品制備方法用于皂苷類正丁醇氯仿乙醚、石油醚醋酸乙酯（1）萃取溶劑的選擇用于生物堿類用于黃酮類用于揮發(fā)油中藥分析用樣品制備方法酸性成分 比其pKa低12個pH單位 比其pKa高12個pH單位 堿性成分（2）水相pH的選擇（4）酒劑和酊劑先揮去乙醇（5）防止和消除乳化（3）儀器和提取次數(shù)儀器：分液漏斗提取次數(shù)： 鑒別-1次 含量測定-3-4次中藥及其制劑的鑒別藥味的選取原則 復方制劑，按君臣佐使選擇

8、藥味。 藥味較多時，首選君藥、臣藥、貴重藥、毒性藥。 凡有原粉入藥者，應做顯微鑒別。 最少要選擇制劑處方中1/3的藥味進行鑒別，將鑒別方法制定在質(zhì)量標準中，未能列入標準的，應在起草說明中說明原因和理由。中藥及其制劑鑒別方法 形狀、大小 色澤、表面特征 質(zhì)地、折斷面特征 氣味 對組織、細胞或內(nèi)含物進行鑒別 顯微特征應明顯、易查見 多來源藥材應選擇其共有的特征顯微鑒別性狀鑒別 制備供試液 色譜條件選擇：獲得清晰、圓整、比移值穩(wěn)定和可重復的色譜圖 對照物選擇 顯色與檢視 鑒別和限度檢查色譜鑒別 多為顏色反應和沉淀反應，易受植物中其他成分干擾 礦物藥及特殊鑒別反應中仍在采用 微量升華法理化鑒別中藥及其

9、制劑鑒別方法中藥的檢查項目與內(nèi)容具有中藥特色 的檢查項目水分總灰分酸不溶性灰分農(nóng)藥殘留量雜質(zhì)重金屬及 有害元素中藥的檢查項目與內(nèi)容雜 質(zhì)來源與規(guī)定相同，但其性狀或部位與規(guī)定不符來源與規(guī)定不同的有機雜質(zhì)和無機雜質(zhì)例：蒲黃中雜質(zhì)檢查方法 取本品10g，稱定重量，置七號篩中，保持水平狀態(tài)過篩，左右往返，邊篩邊輕叩2分鐘。取不能通過七號篩的雜質(zhì)，稱定重量，計算，不得過10%。中藥的檢查項目與內(nèi)容甲苯法烘干法減壓干燥法氣相色譜法水分檢查適用于不含或少含揮發(fā)性成分的藥品利用水與甲苯在69.3共沸蒸出，待分層后由刻度管讀出水的量，適用于含揮發(fā)性成分的藥品。 用無水乙醇浸潤供試品，提出樣品水分，以純化水做標準

10、對照 熱導檢測器 適用于含揮發(fā)性成分 的貴重藥品 P2O5 和無水CaCl2為干燥劑中藥的檢查項目與內(nèi)容總灰分測定什么是總灰分？ 總灰分是指藥材或制劑經(jīng)加熱熾灼灰化后殘留的無機物。除藥物本身所含的無機鹽(生理灰分)外，還包括泥土、砂石等藥材外表黏附的無機雜質(zhì)。酸不溶性灰分？ 取總灰分，加入鹽酸加熱后依法測定，碳酸鹽等生理灰分即能溶解，但泥土、砂石等硅酸鹽則不能溶解，成分酸不溶性灰分，它更能反映出外來雜質(zhì)的量。中藥的檢查項目與內(nèi)容鉛鎘汞砷重金屬限度檢查有機破壞(干法&濕法)銅中藥的檢查項目與內(nèi)容1有機氯類3擬除蟲菊酯類2有機磷類 六六六 滴滴涕 五氯硝基苯 對硫磷 甲基對硫磷 樂果 氧化樂果 甲

11、胺磷 敵敵畏 氯氰菊酯 氰戊菊酯 溴氰菊酯 氧化樂果 除另有規(guī)定外，均采用GC測定有關農(nóng)藥殘留量。銀杏酸土大黃苷莨菪堿雙黃連注射液雙酯型生物堿可引起多種不良反應臨床出現(xiàn)皮疹、過敏性休克等不良反應附子中的效毒成分有關物質(zhì)檢查例證 銀杏葉及其提取物、制劑中的主要毒性物質(zhì) 偽品大黃的特征性成分中國藥典多采用TLC對有關物質(zhì)進行限量檢查 中藥注射劑檢查pH、蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、樹脂、草酸鹽、砷鹽等其他檢查項目黃曲霉素測定乙醇量測定膨脹度測定酸敗度度測定中藥及其制劑中成分的含量測定指標成分的選擇原則1. 首選君藥及貴重藥建立含量測定方法。2. 中藥和化學藥品組成的復方制劑，除建立君藥的測定項目外，所含化學藥品

12、必須建立含量測定項目。3. 有毒藥物必須建立含量測定項目，無法測定時，需規(guī)定限度檢查或含量限度范圍。4. 測定成分應盡量與中醫(yī)理論、用藥的功能主治相近。5. 測定成分需考慮與生產(chǎn)工藝的關系。6. 測定成分應歸屬于某一單一藥味。7. 若確實無法進行含量測定的，可測定藥物的總固體量。指標成分的選擇原則中藥及其制劑中成分的含量測定HPLCGCTLCS其他方法方法 主要用于測定揮發(fā)油及其他揮發(fā)性組分的含量 內(nèi)標法、外標法、 歸一化法等分光光度法化學分析法高效毛細管電泳法電化學方法含量測定的主要方法 多采用RP-HPLC 酸堿性化合物的 流動相系統(tǒng) 梯度洗脫&波長梯度 薄層吸收掃描法&薄層熒光掃描法 反

13、射法&透射法 直線式掃描&鋸齒狀掃描 主要采用外標法定量中藥及其制劑多指標成分的含量測定背景 中藥及其制劑中含有眾多成分，僅以單一成分作為質(zhì)量控制的指標不能全面反映藥材質(zhì)量，更不能保證藥效。 待測成分標準品可得多指標成分 待測成分標準品難得 同建立單一成分測定的步驟類似，常采用梯度洗脫的方法以使個待測成分達到滿意的分離效果。 一測多評 原理是在一定的線性范圍內(nèi)，成分的量與檢測器相應成正比 需在大量實驗基礎上，計算出各成分吸收系數(shù)間穩(wěn)定的相關數(shù)值中藥指紋圖譜含義：系指藥材、飲片、提取物或中藥制劑等經(jīng)適當處后， 采取一定的分析技術和方法得到的能夠標示其化學的、 生物學的或其他特征的圖譜。研究意義理

14、想的指紋圖譜不僅能用于定性鑒別，還可用于定量分析 它是對中藥質(zhì)量標準的補充和提高。2. 有利于控制中間體、成品的一致性，減少批間差異。3. 指紋圖譜定性和指標成分定量相結合的質(zhì)控模式，提供質(zhì)量優(yōu)良、均一和特異的中藥用于臨床。中藥指紋圖譜的類別和特點分 類中藥化學指紋圖譜中藥生物指紋圖譜 采用光譜、色譜和其他分析方法建立的用以表征中藥化學成分特征的指紋圖譜。 中藥DNA指紋圖譜、中藥基因組學指紋圖譜 中藥蛋白組學指紋圖譜按應用對象分中藥材指紋圖譜中藥原料藥(飲片、配伍顆粒)指紋圖譜生產(chǎn)工藝過程中間產(chǎn)物指紋圖譜中藥制劑指紋圖譜中藥指紋圖譜研究的技術關鍵確定研究對象選擇收集樣品制備供試品方法選擇和驗

15、證參照物的選擇調(diào)研文獻、新藥申報資料(質(zhì)量和工藝部分)等，找出分析檢測目標 真實性 代表性確保盡可能多的成分在指紋圖譜中反映出來 優(yōu)先考慮色譜方法 進行系統(tǒng)的方法學驗證 以供試品中不含有的化合物作為參照物 以供試品中某一化合物作為參照物指紋特征的選擇 共有峰的標定 共有峰面積比值 非共有峰面積 特征指紋圖譜 相似度評價中藥藥代動力學研究 中藥有效成分 單味中藥 中藥復方制劑中藥藥代動力學研究示例 清開靈注射液大鼠代謝物的LC-MS/MS分析 清開靈注射液是從古方安宮牛黃丸拆方改制而成的一種中藥注射液，由牛黃、珍珠母、板藍根、水牛角、黃芩、梔子、金銀花七味藥組成，具有保護肝臟，促進損傷肝細胞的修復，清熱解毒，鎮(zhèn)靜安神等作用。 以大鼠為受試對象，對中藥方劑在體內(nèi)的代謝產(chǎn)物的識別和鑒定進行了初步探索, 使用結構鑒定能力較強的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜作為分析